Potencial cepiv na osnovi dendritičnih celic za modulacijo populacij prirojenih limfoidnih celic tipa 3

Povzetek:

Cepiva z dendritičnimi celicami (DC) so vrsta imunoterapije, ki temelji na komunikaciji DC z drugimi vidiki imunskega sistema. DC so močne celice, ki predstavljajo antigene in sodelujejo pri aktivaciji prirojenih imunskih odzivov in izobraževanju adaptivne imunosti, zaradi česar so idealne tarče za imunoterapije. Prirojene limfoidne celice (ILC) so relativno na novo identificirane na področju imunologije in imajo pomembno vlogo pri zdravju in boleznih. Tukaj opisane študije so raziskovale komunikacije med ILC tipa 3 (ILC3) in DC z uporabo mišjega modela cepljenja na osnovi DC. Opazili so lokalne in sistemske spremembe v populacijah ILC3 po dajanju DC cepiva in po izzivu s celicami melanoma B16F10 so opazili spremembe v populacijah ILC3 v pljučih. Interakcije med DC in ILC3 je treba nadalje raziskati, da bi ugotovili potencial, ki bi ga lahko imela njihova komunikacija pri zdravju, boleznih in razvoju imunoterapij.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Ključne besede:

dendritična celica (DC); prirojena limfoidna celica tipa 3 (ILC3); prirojeno; komunikacije

1. Uvod

Prirojene limfoidne celice (ILC) so heterogena skupina levkocitov, pridobljenih iz običajnih limfoidnih matičnih celic, ki imajo ključne funkcije pri razvoju, popravljanju in homeostazi tkiva. ILC so bili povezani z različnimi vnetnimi boleznimi, vključno z vnetno črevesno boleznijo, luskavico, astmo in različnimi avtoimunskimi boleznimi [1]. Običajno so ločeni v tri glavne skupine, tip 1 (ILC1), tip 2 (ILC2) in tip 3 (ILC3), ki temeljijo na izražanju transkripcijskih faktorjev, profilih citokinov in specifičnih fenotipskih označevalcih [2]. Celice naravne ubijalke (NK) so zaradi podobnosti včasih združene v podmnožico ILC1; vendar se je izkazalo, da imajo celice NK različne značilnosti od ILC1, kot so izražanje transkripcijskih faktorjev in citolitična aktivnost, zaradi česar so jih ločile kot svoj podtip ILC [3]. Vendar mnogi še vedno menijo, da so NK celice podmnožica ILC1 [4]. Zaradi podobnih profilov citokinov, transkripcijskih faktorjev in imunoloških funkcij velja, da so ILC (celice NK, ILC1, ILC2 in ILC3) prirojene protipostavke komponent adaptivnega imunskega sistema, ki odražajo citotoksične limfocite T, Th1, Th2 in Th17. odgovorov [4]. Vendar pa za razliko od celic T nimajo antigen specifičnih receptorjev [5].

DC so prirojeni levkociti, ki so kritični pri indukciji imunskih odzivov in tolerance. Imajo receptorje za prepoznavanje vzorcev, ki prepoznajo molekularne vzorce, povezane s patogeni in/ali poškodbami, in so najučinkovitejše celice, ki predstavljajo antigen [6]. S predstavitvijo antigena in izločanjem citokinov lahko DC narekujejo usodo naivnih celic T in povzročijo vnetne odzive ali imunosupresijo. Celice T je mogoče naučiti, da antigen prepoznajo kot nevarnega in ga napadejo ali kot nenevarnega in prevzamejo tolerogeni fenotip [6]. DC so vključeni tudi v aktivacijo prirojene imunosti kot tudi v izobraževanje adaptivne imunosti. Z neposrednim stikom ali proizvodnjo različnih citokinov in topnih faktorjev lahko DC aktivirajo druge prirojene levkocite in spodbujajo prirojene imunske odzive [7].

Moč DC je bila uporabljena v imunoterapijah, kot so DC cepiva. DC cepiva se pripravijo z izolacijo DC iz pacienta ali izolacijo prekurzorjev DC in izpeljavo DC. S temi DC-ji se manipulira ex vivo, kar vključuje zorenje DC-jev na imunogen način. DC-ji so obremenjeni tudi s specifičnimi antigeni, kar bo cilj cepiva za razvoj usmerjenih imunogenih odzivov [8]. DC cepiva so imunoterapevtska platforma, ki izkorišča sposobnost DC, da izobražujejo prilagodljivi imunski sistem, da inducira antigen-specifične odzive, zlasti antigen-specifične citotoksične celice T. Zato se je večina raziskav DC cepiva osredotočila na sposobnost DC za izobraževanje prilagodljivega imunskega sistema. Vendar se je v zadnjih letih izkazalo, da ima razmerje med DC in NK celicami močan vpliv na protitumorsko imunost, ki je ključnega pomena za učinkovitost cepljenja z DC [9–11]. To dokazuje pomembno potrebo po raziskovanju drugih odnosov med DC in različnimi prirojenimi levkociti ter vpliv, ki ga lahko imajo te komunikacije na učinkovitost DC cepiv. Ker so NK celice del družine ILC in zaradi velike podobnosti ILC celicam T [5], je bil cilj tukaj predstavljenih študij raziskati potencialno razmerje med DC in drugim članom družine ILC, ILC3s. Uporabili smo platformo cepiva DC (moDC), pridobljenega iz monocitov, kjer so bili DC ustvarjeni ex vivo iz prekurzorskih celic mišjega kostnega mozga. Cepiva MoDC so najpogostejša oblika cepiv DC, saj jih je bilo v preteklosti najlažje proizvesti [12].

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

ILC3 imajo pomembne funkcije pri črevesni homeostazi, imunosti proti zunajceličnim bakterijam in razvoju limfoidnega tkiva [5]. ILC3 je mogoče razdeliti v skupine, ki se razlikujejo po izražanju površinskih markerjev in proizvodnji citokinov. Vendar pa vsi ILC3 izražajo ROR t [13]. Ena podskupina ILC3 so celice induktorji limfoidnega tkiva ILC3-, ki so pomembne pri organogenezi [14]. ILC3 je mogoče razdeliti tudi na podlagi ekspresije naravnega citotoksičnega receptorja (NCR), ki je pri miših ekspresija NKp46 [15,16], pri ljudeh pa NKp44 [17,18]. Zato obstajajo NCR+ in NCR-ILC3, ki imajo razlike v svojih funkcionalnih zmogljivostih in fenotipskih značilnostih. Predlagano je bilo na primer, da NCR+ ILC3 proizvajajo IL-22, ne pa IL-17, medtem ko lahko NCR− ILC3 proizvaja oba citokina [19]. Vendar pa je v nedavni študiji Fiancette et al. dokazano, da NCR+ ILC3 lahko proizvedejo nizko količino IL-17 [20]. Rankin et al. je pri miših dokazal, da NCR+ ILC3 potrebujejo transkripcijski faktor T-bet. Zato je mogoče NCR+/- ILC3 razlikovati na podlagi izražanja NKp46 in T-bet. V tukaj opisanih študijah so bili mišji ILC3 opredeljeni z linijo−CD45+DX5−ROR t +, pri čemer so NCR+ ILC3 prav tako T-bet+NKp46+ in NCR−ILC3 T-bet−NKp46 − (tabela 1 in slike A1–A3 v dodatku A).

Tabela 1. Podskupine ILC3, opredeljene z analizo pretočne citometrije.

Cilj te raziskave je bil pomagati razjasniti, ali obstajajo komunikacije med cepivi DC in ILC3 ter potencial, ki bi ga lahko imele njihove interakcije pri imunoterapijah DC. Dokazano je, da imajo ILC3 vlogo pri različnih boleznih in rakih in imajo zato potencial v različnih kontekstih imunoterapije. ILC3 so razmeroma novi na prizorišču imunologije in posledično so bili njihovi vplivi na bolezni in zdravljenja omejeno raziskani. ILC3 se odzivajo na zunanje dražljaje, ki bodo narekovali njihove dejavnosti in ali spodbujajo napredovanje ali zatiranje tumorjev [21, 22]. Podobno kot celice Th17 imajo ILC3 transkripcijski faktor ROR t in proizvajajo odzivne citokine Th17, kot sta IL-17 in IL-22. IL-22 je pomemben za nadzor bakterijskih okužb v črevesju [16]. Vendar pa je bilo v modelu z bakterijami povzročenega raka debelega črevesa dokazano, da sta IL-17 in IL-22 iz ILC v debelem črevesu prispevala k razvoju raka debelega črevesa [23]. Poleg tega so bili ILC3 povezani z negativnimi rezultati pri raku dojke [24]. Nasprotno pa so opazili povezavo med NCR+ ILC3 in terciarnimi limfoidnimi strukturami (TLS) ter boljšimi kliničnimi rezultati pri nedrobnoceličnem pljučnem raku [18]. Poleg tega je nedavna študija preučevala ILC3 pri kolorektalnem raku. Študija je opazila povečanje ILC1s in zmanjšanje ILC3s v vzorcih bolnikov z reseciranimi kolorektalnimi tumorji v primerjavi z ustreznimi nemalignimi sosednjimi tkivi. Sekvenciranje RNA in transkripcijsko profiliranje sta pokazala, da imajo ILC3 povečano plastičnost in različne funkcionalne zmogljivosti znotraj kolorektalnih tumorjev v primerjavi z nemalignimi tkivi. Zanimivo je, da je sekvenciranje RNA tudi nakazovalo, da so ILC3, ki infiltrirajo tumor, povečali plastičnost, da bi se premaknili na fenotip ILC1. Študija je ugotovila, da interakcije ILC3 s celicami T podpirajo imunost tipa I, pri kolorektalnem raku pa so te interakcije omejene, kar ovira protitumorske odzive. To podpira pomembno funkcijo ILC3 pri protitumorski imunosti. Na splošno je dokument pokazal pomembno vlogo, ki jo imajo ILC3 pri uravnavanju imunološke homeostaze in kolorektalnega raka [25]. Zato velja, da imajo ILC3 dvojno vlogo pri zdravju in bolezni. Lahko spodbujajo napredovanje raka [23,24,26], lahko pa prispevajo tudi k protitumorskim odzivom [18,25,27,28]. Zdi se, da so njihov fenotip in prispevki k raku kontekstualni, kar kaže na možnost manipulacije ILC3 z imunoterapijo, da bi dobili fenotip, ki pomaga pri odzivih proti raku, namesto da podpira napredovanje tumorja. Tako cepiva na osnovi DC predstavljajo možno metodo za vplivanje na tumorsko mikrookolje z manipulacijo fenotipov ILC in njihove proizvodnje citokinov, kar bi omogočilo prilagajanje imunskega odziva glede na okoliščine in bi lahko bilo koristno pri raziskavah raka.

Ker je bilo raziskav o komunikaciji med DC in ILC3 omejeno, zlasti v kontekstu cepljenja z DC, so tukaj opisane študije preučevale spremembe v populacijah ILC3 po dajanju cepiva na osnovi DC mišim. V tem prispevku so opazili komunikacijo med cepivom na osnovi DC in ILC3, kar se je pokazalo s trajnim vplivom cepiva na odzive ILC3 vsaj 10 dni po imunizaciji.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

2. Rezultati

2.1. Število NCR+ in NCR− ILC3 se je povečalo v lokalni drenažni bezgavki po dajanju DC cepiv 

Cepivo DC je bilo pripravljeno z razlikovanjem DC iz celic, pridobljenih iz mišjega kostnega mozga ex vivo. Ti DC-ji so bili stimulirani za spodbujanje njihovega zorenja, da bi pridobili imunogeni fenotip. DC so nato naložili s peptidom. Ker se ta študija osredotoča na naravo komunikacije med dvema prirojenima levkocitoma, DC in ILC3, je bil peptid, izbran za proizvodnjo cepiva, namenoma nepomemben za naš biološki model, da bi preprečili, da bi antigen-specifične T celice postale moteča spremenljivka. Zato je bilo DC cepivo naloženo s peptidom, pridobljenim iz piščančjega ovalbumina.

Da bi začeli raziskovati, ali cepljenje z DC vpliva na populacije ILC3, smo najprej ocenili, ali obstajajo razlike v celičnosti proksimalno od mesta cepljenja. Po cepljenju z DC je prišlo do sprememb v lokalni drenažni bezgavki, ki je vključevala povečanje števila ILC3 (slika 1). Kinetika povečanja ILC3 je pokazala, da so se ILC3 postopoma povečevale po cepljenju z DC (slika 1b, c). Ocenjeno je bilo število NCR+ in NCR− ILC3 v lokalni drenažni bezgavki in obe podpopulaciji sta se povečali po dajanju DC cepiva. Čeprav sta populaciji NCR+ in NCR− ILC3 dosegli vrh tri dni po cepljenju z DC, so se NCR− ILC3 vrnili na homeostatsko število sedem dni po imunizaciji, medtem ko je število NCR+ ILC3 ostalo bistveno višje v primerjavi z lažno zdravljenimi kontrolnimi mišmi.

Slika 1. Število naravnih citotoksičnih receptorjev (NCR)+ in NCR− tipa 3 prirojenih limfoidnih celic (ILC3s) se je povečalo v lokalni odtočni bezgavki po imunizaciji z DC. Samice miši C57BL/6 so bile cepljene s cepivi DC z injekcijami v zadnje tačke. Poplitealne bezgavke so pregledali za populacije ILC3. (a) Določeno je bilo skupno število celic v bezgavki. Kopičenje (b) NCR− ILC3 in (c) NCR+ ILC3 v bezgavki in odstotek celic CD{{10}} v bezgavki, ki so bile (d) NCR− ILC3 in (e) NCR+ ILC3s. Vsaka vrstica predstavlja podatke iz štirih poplitealnih bezgavk. Studentov t-test je bil uporabljen ob vsaki časovni točki za določitev pomembnih razlik med kontrolnimi mišmi, cepljenimi s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS), in mišmi, cepljenimi s cepivom DC (vrednosti p * < 0.{{ 21}}5, ** < 0,005, *** < 0,0005 in **** < 0,0001). Reprezentativni pikčasti grafikoni, ki prikazujejo povprečno število (f) NCR− ILC3 in (g) NCR+ ILC3 v drenažni poplitealni bezgavki. Grafi prikazujejo povprečje s standardnim odklonom.

2.2. Cepiva DC so povečala proizvodnjo citokinov ILC3 v vranici, ne da bi spremenila skupno število vraničnih ILC3

Nato smo pregledali sistemske spremembe v populacijah ILC3 z ocenjevanjem vranice, ki je največji sekundarni limfoidni organ [29], en teden po cepljenju z DC, kar je standardna časovna točka našega laboratorija za sistemsko ocenjevanje sprememb v levkocitih. V skupnem številu NCR+ ali NCR− ILC3 v vranici niso opazili pomembne razlike (slika 2).

Slika 2. Po imunizaciji z DC ni bilo sprememb v številu ILC3 vranice. Samice miši C57BL/6 (n=8 [PBS] ali 10 [DC]) so bile inokulirane s cepivi DC z injekcijami v zadnjo tačko. Vranice so bile pobrane en teden po inokulaciji in pregledane za populacije ILC3. Skupno število (a) NCR− ILC3 in (b) NCR+ ILC3 v vranici (in geometrično povprečno fluorescenčno intenzivnost T-bet za NCR+ ILC3) in odstotek celic CD45+ vranice, ki so bile (c) NCR− ILC3 in (d) NCR+ ILC3 so spremljali in kvantificirali z analizo pretočne citometrije. Uporabili smo Studentov t-test za določitev pomembnosti med populacijami pri kontrolnih miših, inokuliranih s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS), in miših, inokuliranih z DC. Sredstva niso bila bistveno drugačna. Reprezentativni pikčasti grafikoni, ki prikazujejo povprečno število vraničnih (e) NCR− ILC3 in NCR+ ILC3. Standardni odklon in povprečje sta predstavljena s stolpci grafa in stolpci napak.

Ker lahko na profile citokinov ILC3 vplivajo okoljski dejavniki, je bila proizvodnja ILC3 IL-22 in IL-17 v vranici izmerjena en teden po cepljenju z DC. Pri miših, zdravljenih s cepivi DC, se je povečalo število ILC3, ki proizvajajo IL-17 ali IL-22 ali oba citokina, v primerjavi s kontrolnimi mišmi (slika 3).

Slika 3. Po imunizaciji z DC je prišlo do povečanja vraničnih ILC3, ki proizvajajo IL-17 in IL-22. Samice miši C57BL/6 (n=12–18) so bile cepljene s cepivi DC z injekcijo v zadnjo tačko. Kontrolne miši so bile zdravljene s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS). En teden po imunizaciji so vranice pobrali in pregledali na ILC, ki proizvajajo IL-17- in IL{{10}}. Število celic linije-CD127+DX5−, ki proizvajajo (a) IL-17, (b) IL-22 in (c) oba IL-17 in IL{{ 16}} in njihove ustrezne geometrične srednje fluorescenčne intenzitete so bile določene z barvanjem znotrajceličnih citokinov in pretočno citometrijo. Podatki so bili analizirani z dvosmernim testom ANOVA (p-vrednosti * < 0.05, ** < 0.005). (d) Reprezentativni pikčasti grafikoni prikazujejo povprečno število vraničnih CD45+ linij-CD127+DX5- celic, ki proizvajajo IL-17 in/ali IL-22. Grafi prikazujejo povprečje s standardnim odklonom.

2.3. Subpopulacije ILC3 po DC imunizaciji in izzivu z B16F10 melanomskimi celicami

ILC3 imajo lahko dvojno vlogo pri napredovanju raka, tako da prispevajo k pro- in protitumorskim odzivom [22]. Zato je bil raziskan vpliv DC cepljenja na odzive ILC3 v kontekstu raka. Miši so bile zdravljene z DC cepivi in ​​en teden kasneje so bile intravensko okužene s celicami melanoma B16F10, kar je povzročilo zasejanje pljuč. Kot že omenjeno, ker so bile ocenjene samo komponente prirojene imunosti, antigen-specifične tvorbe s cepivom v naših poskusih ni bilo ocenjevati, zato uporabljeni model melanoma ni izražal ovalbumina, zaradi česar je bil peptid naložen na DC. nepomemben. Kinetični poskus (slika 1) je pokazal, da je lokalne odzive ILC3 mogoče opaziti v treh dneh. Zato so tri dni po izzivu v vranici in pljučih pregledali število subpopulacij ILC3 in njihovo sposobnost proizvajanja citokinov. Podobno kot so opazili v vranicah naivnih miši, ni bilo pomembne razlike v skupnem številu vraničnih NCR+ in NCR− ILC3 med kontrolno skupino in skupino, imunizirano z DC (slika 4). Vendar pa za razliko od naivnega modela v vranici ni bilo več sprememb v proizvodnji IL-17 in/ali IL-22 (slika 5).

Slika 4. Po cepljenju z DC in okužbi s celicami melanoma B16F10 ni bilo sprememb v skupnem številu ILC3 vranice. Samice miši C57BL/6 (n=10) so bile inokulirane s cepivi DC z injiciranjem v zadnjo tačko in en teden kasneje so miši z injekcijo v repno veno aplicirali 3 × 105 celic B16F10. Vranice so bile pobrane in pregledane glede kopičenja populacij ILC3 tri dni po dajanju B16F10. Število vraničnih (a) NCR− ILC3 in (b) NCR+ ILC3 (in geometrično povprečno fluorescentno intenzivnost T-bet za NCR+ ILC3) in odstotek vraničnih CD45+ celic, ki so bile (c) NCR− ILC3 in (d) NCR+ ILC3 so spremljali in kvantificirali s pretočno citometrijo. Studentov t-test je bil uporabljen za določitev pomembnosti med populacijami pri kontrolnih miših, zdravljenih s fosfatnim pufrom fiziološke raztopine (PBS), in miših, inokuliranih z DC. Sredstva niso bila bistveno drugačna. Reprezentativni pikčasti grafikoni prikazujejo povprečno število vraničnih (e) NCR− ILC3 in NCR+ ILC3. Srednja in standardna deviacija sta predstavljena s stolpčnimi grafikoni in vrsticami napak.

Slika 5. Po cepljenju z DC in okužbi s celicami melanoma B16F10 ni bilo sprememb v številu vraničnih IL-17 in/ali IL-22-, ki proizvajajo ILC. Samice miši C57BL/6 (n=10) so bile inokulirane s cepivi DC z injekcijo v zadnjo tačko in en teden kasneje so bile intravensko aplicirane 3 × 105 celic B16F10. Tri dni kasneje so vranice pobrali in pregledali za proizvodnjo citokinov ILC3. Število celic linije CD127+DX5-, ki proizvajajo (a) IL-17, (b) IL-22 in (c) oba IL-17 in IL-22 in njihove ustrezne geometrične srednje fluorescenčne intenzitete so bile določene z barvanjem znotrajceličnih citokinov in pretočno citometrijo. Podatki so bili analizirani z uporabo dvosmernega testa ANOVA in niso odkrili pomembne razlike med mišmi, cepljenimi z DC, in kontrolami, zdravljenimi s fosfatnim pufrom (PBS). (d) Reprezentativni pikčasti grafikoni prikazujejo povprečno število celic CD45+linije CD127+DX5- vranice, ki proizvajajo IL-17 in/ali IL-22.

Intravenska injekcija celic B16F10 preko repne vene je običajen mišji model metastaz sintetičnega melanoma v pljučih [30]. Zato so bila pregledana tudi pljuča, da bi določili število subpopulacij ILC3 in ocenili njihovo proizvodnjo citokinov.

Zmanjšalo se je število NCR− ILC3 s sočasnim povečanjem števila NCR+ ILC3 (slika 6). Vendar pa niso opazili nobenega učinka cepljenja z DC na ILC3-posredovano proizvodnjo citokinov v pljučih (slika 7).

Slika 6. Po imunizaciji z DC in izzivu s celicami B16F10 je prišlo do številčnih sprememb subpopulacij ILC3 v pljučih. Samice miši C57BL/6 (n=10) so prejele DC cepiva z injekcijo v zadnjo tačko in en teden kasneje so bile intravensko aplicirane 3 × 105 celic B16F10. Tri dni po izzivu so bila pljuča pregledana s pretočno citometrijo za število (a) NCR− ILC3 in (b) NCR+ ILC3 (in geometrično srednjo fluorescentno intenzivnost T-bet za NCR+ ILC3) in odstotek CD{ {18}} celic, ki so bile (c) NCR- ILC3 in (d) NCR+ ILC3. Studentov t-test je bil uporabljen za določitev pomembnosti med subpopulacijami pri kontrolnih miših, zdravljenih s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS), in miših, inokuliranih z DC (vrednosti p *<0.05, *** <0.0005, and **** < 0.0001). Representative dot plots showing the average number of pulmonary (e) NCR− ILC3s and NCR+ ILC3s. The graphs display the mean with the standard deviation.

Slika 7.Ni bilo sprememb v številu ILC3, ki proizvajajo IL-17 in/ali IL-22 v pljučih po cepljenju z DC in izzivu s celicami melanoma B16F10. Samice miši C57BL/6 (n=10) so bile inokulirane s cepivi DC z injekcijo v zadnjo tačko in en teden kasneje so jim intravensko dali 3 × 105 celic B16F10. Tri dni kasneje so pljuča pobrali in pregledali glede proizvodnje citokinov, posredovane z ILC3-. Število celic lineage-CD127+DX5−, ki proizvajajo (a) IL-17, (b) IL-22 in (c) oba IL{{0}} in IL-22 ter njuni ustrezni geometrični srednji fluorescentni intenziteti sta bili določeni z barvanjem znotrajceličnih citokinov in pretočno citometrijo. Podatke smo analizirali z dvosmernim testom ANOVA (p-vrednosti *** < 0,0005). Ni bilo bistvene razlike v skupnem številu IL-22-proizvajalcev, IL-17-proizvajalcev ter IL-22 in IL-17 večcitokinskih proizvajalcev linij-CD{{ 12}}DX5− celice. (d) Reprezentativni pikčasti grafikoni, ki prikazujejo povprečno število celic pljučne linije CD45+–CD127+DX5−, ki proizvajajo IL-17 in/ali IL-22. Standardni odklon in povprečje sta predstavljena s stolpci grafa in stolpci napak.

3. Razprava

Tukaj opisane študije so skušale raziskati potencialno komunikacijo med ILC3 in DC v kontekstu DC cepiva. Po cepljenju z DC je prišlo do povečanja števila subpopulacij NCR+ in NCR− ILC3 v drenažnih bezgavkah (slika 1), kar je nakazovalo na lokalno komunikacijo med cepivom DC in subpopulacijami ILC3. Vendar je imela komunikacija med DC-ji in NCR+ ILC3 dolgotrajnejši vpliv na skupno število NCR+ ILC3 kot tista, opažena med DC-ji in NCR- ILC3. To je pokazalo, da imajo lahko DC edinstvene interakcije z ILC3, odvisno od njihovega izražanja NCR. V številu subpopulacij ILC3 v vranici sedem dni po cepljenju z DC (slika 2) ali deset dni po cepljenju z DC in tri dni po izzivu celic melanoma B16F10 niso opazili nobene spremembe (slika 4). Naše metode za testiranje ILC3 za njihovo proizvodnjo IL-17 in IL-22 imajo omejitev, ker kažejo tako translacijske kot transkripcijske odzive zaradi ponovne stimulacije celic in vitro. Vendar smo dodali eksperimentalno kontrolo v vseh poskusih, ki bi bilo zdravljenje brez stimulacije in vitro, da bi odkrili, kaj ILC3 proizvajajo kot odgovor na signal, prejet in vivo. Kot je prikazano na slikah 3d, 5d in 7d, so celice, ki niso prejele in vitro stimulacije, proizvedle IL-17 in IL-22. Poleg tega, čeprav se število celic ILC3 v vranici ni spremenilo (slika 2), je bila proizvodnja citokinov s subpopulacijami ILC3 drugačna sedem dni po cepljenju z DC (slika 3). To je nakazovalo, da bi lahko cepljenje z DC vplivalo na funkcionalnost odzivov ILC3, ne da bi nanje vplivalo številčno. Ker so ILC3 sestavni del prirojenega imunskega sistema, bi lahko prišlo do trgovine z ILC3 v tkivih in iz njih v nekaj dneh, kar bi preprečilo odkrivanje numeričnih razlik, moduliranih z zdravljenjem, sedem do deset dni po cepljenju z DC. Dokaze za to so opazili v limfnem vozlu, ki je odvajal DC-cepivo, kjer se je število ILC3 v treh dneh povečalo in nato začelo upadati (slika 1). Tako je morda prišlo do številčnih sprememb v subpopulacijah ILC3 v vranici, ki so bile zgrešene, ker so se vrnile na homeostatske številke po imunizaciji sedmi dan po DC. Kljub temu so bile študije osredotočene na dolgotrajnejše odzive v nasprotju s kratkoročnimi prehodnimi odzivi in ​​zato te poti niso dodatno raziskovale. Zanimivo je, da čeprav se število vraničnih subpopulacij ILC3 ni razlikovalo od kontrolnih skupin, so bili njihovi citokinski profili spremenjeni (slika 3). Proizvodnja IL-22 in IL-17 je bila povečana v ILC3 v vranici, kar dokazuje, da je imelo cepljenje z DC sistemski učinek na ILC3. Če povzamemo, cepljenje z DC ni vplivalo na količino ILC3 vranice, vendar je vplivalo na njihovo funkcionalnost.

Čeprav je obstajal trajen učinek na proizvodnjo citokinov, pridobljenih iz ILC3-, sedem dni po imunizaciji z DC v vranicah miši brez tumorja, tega vpliva na ILC3 v vranici ni bilo mogoče zaznati tri dni po intravenskem izzivu s celicami melanoma B16F10 ( Slika 5). Zdi se, da je cepivo DC spodbudilo populacije ILC3 v modelu brez tumorja, ki je bil zavrnjen ob izzivu tumorja. Ker na ILC močno vpliva njihovo okolje, bi to lahko nakazovalo, da je bila komunikacija med DC v cepivu in ILC3 omejena na model brez tumorja. Nasprotno pa je to lahko tudi posledica mobilizacije pripravljenih ILC3 na druge lokacije v telesu, kjer so se B16F10 morda zbrali in vzpostavili mikrookolje, ki je povzročilo rekrutacijo levkocitov.

V pljučih so opazili premik v subpopulacijah ILC3 deset dni po cepljenju z DC in tri dni po izzivu celic B16F10 v primerjavi s kontrolnimi mišmi, ki niso bile cepljene z DC in so prejele samo celice B16F10. Natančneje, prišlo je do povečanja števila NCR+ ILC3 in zmanjšanja NCR− ILC3 v pljučih (slika 6). T-bet je transkripcijski faktor, ki je povezan z odzivi Th1 [31]. Zato je povečanje NCR+ ILC3, ki izražajo T-bet, pokazalo potencialno spodbujanje imunosti tipa 1. To bi lahko bil koristen odziv ILC3 v kontekstu raka, kjer so običajno zaželeni imunski odzivi tipa 1.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Dokazano je bilo, da lahko NCR+ ILC3 izhajajo iz podmnožice NCR- ILC3 [16]. Zato bi lahko povečanje NCR+ ILC3 in zmanjšanje NCR- ILC3 pripisali stimulaciji, ki je povzročila preklop NCR- ILC3 v NCR+ ILC3. Če so bili ILC3 podvrženi fenotipskemu preklopu iz NCR− v NCR+, morda niso mogli proizvesti citokinov med ali kmalu po preklopu in med prilagajanjem okolici in svojemu novemu fenotipu. Zato je bila njihova proizvodnja citokinov morda zaustavljena ali zakasnjena, medtem ko je prišlo do zamenjave fenotipa, kar bi lahko pojasnilo, zakaj ni prišlo do sprememb v proizvodnji IL-17 in/ali IL-22, ki jo posreduje ILC3- pljuča (slika 7). Vendar pa je možno tudi, da cepljenje z DC preprosto ni vplivalo na proizvodnjo citokinov z ILC3 v pljučih v tem trenutku.

4. Materiali in metode

Etična odobritev

Vse študije na miših so bile izvedene po protokolu uporabe živali št. 3807 pod nadzorom osebja za nego živali na Univerzi Guelph.

Miši

Iz Charles River Laboratories so prejeli mišje samice C57BL6, stare pet do osem tednov. Miši so bile nameščene v nadzorovanem okolju v enoti za izolacijo živali Univerze v Guelphu in jim dali en teden, da se aklimatizirajo pred začetkom poskusov. Miši smo hranili in jim dali vodo ad libitum.

Kulture dendritičnih celic

Stegnenice in golenice mišjih samic C57BL6 so bile pobrane in konci kosti so bili odrezani. S pomočjo brizge smo kostni mozeg golenic in stegnenic splaknili s PBS v petrijevko. Kostni mozeg smo resuspendirali v enocelično suspenzijo in prešteli z uporabo hemocitometra. Celice smo nato resuspendirali v mediju (RPMI [HyClone Cat# SH30027.01] z 2-merkaptoetanolom [Gibco Ref# 21985-023], 1 % penicilina/streptomicina [HyClone Cat# SV30010] in 10 % fetalni goveji serum [VWR Cat#97068-085]) do koncentracije 1,25 × 106 celic na ml, dopolnjen z 20 ng/ml granulocitno-makrofagnega kolonije stimulirajočega faktorja (GM-CSF) (Biolegend Cat#576308) in alikvotiramo v 25 cm2 bučke za kulturo, 5 ml na bučko. Kulture smo dali v vlažne inkubatorje pri 37 ◦C s 5% CO2 in pustili rasti 7 dni. Drugi dan kulture smo dodali 5 ml svežega medija z 20 ng/mL GM-CSF. Peti dan smo centrifugirali 5 mL vsake kulture in supernatant odstranili. Celice smo resuspendirali v 5 mL svežega medija z 20 ng/mL GM-CSF in ponovno dodali v bučke za kulturo. Kulture so bile pobrane 7. dan in pripravljene za cepljenje.

Pripravek za cepljenje dendritičnih celic

Kulture dendritičnih celic (DC) smo prenesli v 50 ml konično epruveto in jih prešteli s hemocitometrom. Celice smo stimulirali s 100 ng/mL lipopolisaharida (LPS) iz Escherichia coli O55:B5 (Sigma Cat#L2880) in 1 µg/mL piščančjega ovalbumina (OVA) 257–264 (SIIN) (PepScan Systems, Lelystad, Nizozemska) 1 uro v inkubatorju pri 37 ◦C s 5 % CO2. Celice smo nato trikrat sprali s PBS in resuspendirali do koncentracije 5 × 105 celic na 30 µL. Cepiva so bila dajana v odmerkih 5 × 105 celic na 30 µL PBS.

Predelava tkiv

Bezgavke in vranice smo pobrali in dali v petrijevke z 2 mL Hanksove pufrirane slane raztopine (HBSS). Stisnjeni so bili v enocelične suspenzije z uporabo hrbtne strani 3 ml zamaška brizge. Enocelične suspenzije so bile filtrirane v 50 ml konično epruveto z uporabo celičnega cedila z velikostjo por 70 µm. Bezgavke smo prešteli s hemocitometrom. Vranice smo centrifugirali, supernatant odstranili in celice resuspendirali v pufru za lizo ACK (8,29 g NH4Cl [0.15 M], 1 g KHCO3 [10,0 mM], 37,2 mg Na2EDTA [0,1 mM] v 1 ml vode Milli Q) in pustite stati pet minut, da se eritrociti lizirajo. Celice smo dvakrat sprali s HBSS, preden smo jih resuspendirali v mediju in prešteli z uporabo hemocitometra.

Pljuča smo pobrali in stehtali, preden smo jih dali v epruveto gentleMACSTM, ki je vsebovala 1 mg/mL kolagenaze IV (Gibco Ref#17104-019) in 5 µg/mL DNaze I (Roche Ref#11284932001) v HBSS. Z uporabo disociatorja gentleMACSTM smo vzorce spustili skozi pljučni protokol A in jih nato inkubirali 20 minut v inkubatorju pri 37 ◦C s 5 % CO2. Vzorce smo nato spustili skozi pljučni protokol B na disociatorju gentleMACSTM. Vzorcem smo dodali dvakratni volumen vzorca HBSS, da nevtraliziramo encimsko reakcijo. Vzorci so bili filtrirani v 50 ml konično cev skozi celično cedilo z velikostjo por 70 µm. Celice smo nato dvakrat sprali s HBSS in resuspendirali v pufru za lizo ACK. Po petih minutah v pufru za lizo ACK smo celice dvakrat sprali s HBSS in resuspendirali v mediju.

Test citokinskega odziva

Enocelične suspenzije iz vzorcev tkiv so bile zasejane v 96-plošče z vdolbinicami v dvojnikih, kjer je bila ena vdolbinica obravnavana kot kontrola brez stimulacije, druga vdolbinica pa je bila obdelana s stimulansom. Nestimuliranim vdolbinicam so dali samo medij, vdolbinice, obdelane s stimulansom, pa so prejele 10 ng/mL forbol miristat acetata (PMA) in 1500 ng/mL ionomicina v mediju. Celice smo za eno uro postavili v inkubator pri 37 ◦C s 5 % CO2. Nato smo v vse vdolbinice z vzorcem dodali Brefeldin A (GolgiPlug, Biolegend Cat#420601) (razredčitev × 100) in ploščo postavili nazaj v inkubator za dodatne štiri ure. Celice smo nato dvakrat sprali s PBS in obarvali za analizo s pretočno citometrijo.

Celice melanoma B16F10

Celice B16F10 so bile odmrznjene iz tekočega dušika in preštete s hemocitometrom. Celice smo nato resuspendirali v gojiščih (Dulbeccov medij Eagles, modificiran z visoko vsebnostjo glukoze [HyClone Cat#SH3002201] z 1 % penicilina/streptomicina [HyClone Cat# SV30010] in 10 % govejega telečjega seruma [VWR Cat#10158-358]), da koncentracija 1 × 105 celic na ml. Celice B16F10 smo nato alikvotirali v steklenice za kulturo in jih dali v inkubator pri 37 °C s 5 % CO2. Za pripravo celic B16F10 za dajanje smo celice prenesli iz bučk za kulturo v 50 ml konično epruveto, sprali s PBS in nato resuspendirali v PBS. Celice smo prešteli s hemocitometrom in resuspendirali v PBS, da smo dobili odmerke 3 × 105 celic na 200 µL.

Intracelularno barvanje citokinskih protiteles

Celice so bile posejane v {{0}}plošče z vdolbinicami in resuspendirane v Fc bloku (anti-CD16/CD32, BioLegend Cat#101320) ter inkubirane pri 4 ◦C 15 minut. Celice smo dvakrat sprali s fosfatno pufrano fiziološko raztopino, ki je vsebovala 0,5 % govejega serumskega albumina (pufer FACS), nato pa ponovno suspendirali v glavni mešanici protiteles, ki obarvajo celično površino (CD45, BioLegend Cat#103132; NKp46, BioLegend Cat#137617; DX5, BioLegend Cat#108919; CD127, BioLegend Cat#135007; Lineage Cocktail, BioLegend Cat#133311) in inkubirali pri 4 stopinjah 20 minut. Celice smo dvakrat sprali s fosfatno pufrano fiziološko raztopino in resuspendirali v Zombie Aqua Fixable viability dye (FVD) (BioLegend Cat#423101) in inkubirali pri 4 °C 30 minut. Za dvakratno spiranje celic pred resuspendiranjem v fiksacijskem pufru smo uporabili fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (BioLegend Cat#420801). Celice smo inkubirali pri 4 ◦C 20 minut. Po fiksaciji smo celice dvakrat sprali s permeabilizacijskim pufrom (BioLegend Cat#421002). Celice smo resuspendirali v glavni mešanici intracelularno obarvanih protiteles (IL-22, BioLegend Cat#516404; IL-17A, eBioscience Cat# 17-7177-81) in inkubirali pri 4 ◦C za 20 min. Celice smo dvakrat sprali s permeabilizacijskim pufrom, nato resuspendirali v pufru FACs in nato obdelali s pretočnim citometrom BD FACSCantoTM II ter analizirali s programsko opremo BD FACSDivaTM.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Barvanje protiteles s transkripcijskim faktorjem

Celice so bile posejane v {{0}}plošče z vdolbinicami in resuspendirane v FC bloku (anti-CD16/CD32 BioLegend Cat # 101320) in inkubirane pri 4 ◦C 15 minut. Celice smo dvakrat sprali s pufrom FACs (0,5 % v govejem serumskem albuminu [HyClone Cat# SH30574.02] v PBS), nato ponovno suspendirali v glavni mešanici protiteles, ki obarvajo celično površino (CD45, BioLegend Cat#103132; NKp46 , BioLegend Cat#137617; DX5, BioLegend Cat#108919; CD127, BioLegend Cat#135007; Lineage Cocktail, BioLegend Cat#133311), in inkubirali pri 4 ◦C 20 minut. Celice smo nato sprali s fosfatno pufrano slanico, dvakrat resuspendirano v FVD (BioLegend Cat#423101) in inkubirali pri 4 °C 20 minut. Celice smo dvakrat sprali s fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom in resuspendirali v mišjem fiksacijskem pufru FoxP3 (BD ​​Pharmingen BD Sciences Cat#51-9006124) ter 30 minut inkubirali pri 4 °C. Po fiksaciji smo celice sprali z mišjim permeabilizacijskim pufrom FoxP3 (BD ​​Pharmingen BD Sciences Cat# 51-9006125), resuspendiranim v permeabilizacijskem pufru FoxP3, in 30 minut inkubirali pri 37 ◦C. Celice smo resuspendirali v protitelesih transkripcijskega faktorja (ROR gama(t), eBioscience Cat#17-6988-82; T-bet, eBioscience Cat# 12-5825-82) in inkubirali pri 4 ◦C 20 minut. Celice smo dvakrat sprali s permeabilizacijskim pufrom, nato resuspendirali v pufru FACs in analizirali s pretočnim citometrom BD FACSCantoTM II in programsko opremo BD FACSDivaTM.

Statistična analiza

Vranične in pljučne populacije NCR+ in NCR− ILC3 so analizirali z uporabo neparnih t-testov. Analizo populacije kinetičnega poskusa smo primerjali z uporabo navadne enosmerne analize variance (ANOVA) in Tukeyjevega testa večkratne primerjave. Analizo citokinov v vranici in pljučih so pregledali z dvosmerno ANOVA in Šídákovim testom večkratnih primerjav. Povprečja za terapevtske skupine so bila opredeljena kot pomembno drugačna s p-vrednostjo < 0.05.

Gating strategija

Najprej so bili limfociti zaprti z uporabo sprednjega razpršenega območja (FSC-A) in stranskega razpršenega območja (SSC-A). Nato so bile dubletne celice izključene z uporabo FSC-A in FSC-višine (FSC-H). Žive celice so bile vgrajene tako, da so bile celice negativne za FVD. Nato so bile vzete CD127+ in koktajl celice linije, da se zoži ILC. Celice CD45+ so bile nato zaprte. Da bi zagotovili, da so bile vse NK celice izključene, je bil DX5− nato vklopljen. Za identifikacijo transkripcijskih faktorjev ILC3 so bile celice ROR t + nato vključene in iz teh celic so bili NCR+ ILC3 T-bet+ in NKp46+ ter NCR− ILC3 T-bet− in NKp46. Za identifikacijo citokinov so po prehodu na limfocite, posamezne celice, žive celice in CD127+ linijo-CD45+, IL-17 in IL-22 nato vključili kot ki jih proizvajajo ILC3, saj bi bile ILC3 edine celice v teh zadnjih vratih, ki bi lahko proizvajale IL-22 in IL-17.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

5. Sklepi

Čeprav je bila povečana proizvodnja IL-17 in IL-22, ki izhaja iz ILC3-, v vranici, opažena v modelu brez tumorja, izgubljena v modelu izzivanja tumorja, je prišlo do nasprotnega premika pri NCR+ in Populacije NCR− ILC3 v pljučih. To nakazuje, da bi lahko cepljenje z DC vplivalo na ILC3 v modelu tumorskega izziva kot tudi pri miših brez tumorja. Vendar učinek tega razmerja med DC v cepivu in ILC3 na protitumorske odzive ostaja neznan in je prihodnja smer raziskav. Tako tukaj opisane študije dokazujejo, da obstajajo komunikacije med cepivi na osnovi DC in subpopulacijami ILC3, tako pri miših brez tumorja kot pri miših s tumorjem. Zdi se, da so te komunikacije in njihovi kasnejši vplivi na imunski odziv zapleteni. Ta opažanja prispevajo k literaturi, ki želi razvozlati razmerje med cepivi DC in ILC3 v prizadevanju za razvoj izboljšanih strategij cepljenja proti DC. Priporočamo nadaljnje študije, ki raziskujejo potencial za oblikovanje strategij cepljenja, ki lahko modulirajo te komunikacije za optimizacijo odzivov ILC3 za pomoč pri protitumorskih odzivih in omejitev podpore protitumorskim odzivom.

Reference

1. Crinier, A.; Vivier, E.; Bléry, M. Pomočnikom podobne prirojene limfoidne celice in imunoterapija raka. Semin. Immunol. 2019, 41, 101274. [CrossRef] [PubMed]

2. Salimi, M.; Wang, R.; Yao, X.; Li, X.; Wang, X.; Hu, Y.; Chang, X.; Fan, P.; Dong, T.; Ogg, G. Aktivirane prirojene populacije limfoidnih celic se kopičijo v človeških tumorskih tkivih. BMC Cancer 2018, 18, 341. [CrossRef] [PubMed]

3. Spits, H.; Bernink, JH; Lanier, L. NK celice in prirojene limfoidne celice tipa 1: partnerji pri obrambi gostitelja. Nat. Immunol. 2016, 17, 758–764. [CrossRef] [PubMed]

4. Bruchard, M.; Ghiringhelli, F. Dešifriranje vlog prirojenih limfoidnih celic pri raku. Spredaj. Immunol. 2019, 10, 656. [CrossRef]

5. Mazzurana, L.; Rao, A.; Van Acker, A.; Mjösberg, J. Vloge prirojenih limfoidnih celic v človeškem imunskem sistemu. Semin. Immunopathol. 2018, 40, 407–419. [CrossRef]

6. Solano-Gálvez, SG; Tovar-Torres, SM; Tron-Gómez, MS; Weiser-Smeke, AE; Álvarez-Hernández, DA; Franyuti-Kelly, GA; Tapia-Moreno, M.; Ibarra, A.; Gutiérrez-Kobeh, L.; Vázquez-López, R. Človeške dendritične celice: Ontogenija in njihove podskupine v zdravju in boleznih. med. Sci. 2018, 6, 88. [CrossRef]

7. Steinman, RM; Hemmi, H. Dendritične celice: prevajanje prirojene v adaptivno imunost. Curr. Vrh. Microbiol. Immunol. 2006, 311, 17–58. [CrossRef]

8. Fu, C.; Ma, T.; Zhou, L.; Mi, QS; Jiang, A. Cepiva proti raku na osnovi dendritičnih celic: izzivi, napredek in prihodnje priložnosti. Immunol. Raziskati. 2022, 51, 2133–2158. [CrossRef]

9. Karimi, K.; Boudreau, JE; Fraser, K.; Liu, H.; Delanghe, J.; Gauldie, J.; Xing, Z.; Bramson, JL; Wan, Y. Izboljšana protitumorska imunost, ki jo izzovejo cepiva z dendritičnimi celicami, je rezultat njihove sposobnosti, da vključijo NK celice, ki proizvajajo CTL in IFN. Mol. Ther. 2008, 16, 411–418. [CrossRef]

10. Bouwer, AL; Saunderson, SC; Caldwell, FJ; Damani, TT; Pelham, SJ; Dunn, AC; Jack, RW; Stoitzner, P.; McLellan, AD NK celice so potrebne za imunoterapijo na osnovi dendritičnih celic v času izziva tumorja. J. Immunol. 2014, 192, 2514–2521. [CrossRef]

11. Pampena, MB; Levy, EM Naravne celice ubijalke kot celice pomočnice v cepivih proti raku dendritičnih celic. Spredaj. Immunol. 2015, 6, 13. [CrossRef] [PubMed]

12. Gardner, A.; de Mingo Pulido, Á.; Ruffell, B. Dendritične celice in njihova vloga v imunoterapiji. Spredaj. Immunol. 2020, 11, 924. [CrossRef] [PubMed]

13. Cortez, VS; Robinette, ML; Colonna, M. Prirojene limfoidne celice: novi vpogled v delovanje in razvoj. Curr. Opin. Immunol. 2015, 32, 71–77. [CrossRef] [PubMed]

14. Montaldo, E.; Juelke, K.; Romagnani, C. Prirojene limfoidne celice skupine 3 (ILC3): izvor, diferenciacija in plastičnost pri ljudeh in miših. EUR. J. Immunol. 2015, 45, 2171–2182. [CrossRef]

15. Vacca, P.; Chiossone, L.; Mingari, MC; Moretta, L. Heterogenost NK celic in drugih prirojenih limfoidnih celic v človeški in mišji decidui. Spredaj. Immunol. 2019, 10, 170. [CrossRef] [PubMed]

16. Rankin, LC; Girard-Madoux, MJ; Seillet, C.; Mielke, LA; Kerdiles, Y.; Fenis, A.; Wieduwild, E.; Putoczki, T.; Mondot, S.; Lantz, O.; et al. Komplementarnost in redundanca prirojenih limfoidnih celic, ki proizvajajo IL-22-. Nat. Immunol. 2016, 17, 179–186. [CrossRef] [PubMed]

17. Hoorweg, K.; Peters, CP; Cornelissen, F.; Aparicio-Domingo, P.; Papazian, N.; Kazemier, G.; Mjösberg, JM; Spits, H.; Cupedo, T. Funkcionalne razlike med človeškimi NKp44(-) in NKp44(+) RORC(+) prirojenimi limfoidnimi celicami. Spredaj. Immunol. 2012, 3, 72. [CrossRef]

18. Carrega, P.; Loiacono, F.; Di Carlo, E.; Scaramuccia, A.; Mora, M.; Conte, R.; Benelli, R.; Spaggiari, GM; Cantoni, C.; Campana, S.; et al. NCR(+)ILC3 se osredotoča na človeški pljučni rak in je povezan z intratumoralnimi limfoidnimi strukturami. Nat. Komun. 2015, 6, 8280. [CrossRef]

19. Spits, H.; Artis, D.; Colonna, M.; Diefenbach, A.; Di Santo, JP; Eberl, G.; Koyasu, S.; Locksley, RM; McKenzie, AN; Mebius, RE; et al. Prirojene limfoidne celice – predlog za enotno nomenklaturo. Nat. Rev. Immunol. 2013, 13, 145–149. [CrossRef]

20. Zaročenka, R.; Finlay, CM; Willis, C.; Bevington, SL; Soley, J.; Ng, STH; Baker, SM; Andrews, S.; Hepworth, MR; Withers, DR Vzajemna omrežja transkripcijskih faktorjev urejajo funkcijo in identiteto podmnožice ILC3, ki prebiva v tkivu. Nat. Immunol. 2021, 22, 1245–1255. [CrossRef]

21. van Beek, JJP; Martens, AWJ; Bakdash, G.; de Vries, IJM prirojene limfoidne celice v tumorski imunosti. Biomedicines 2016, 4, 7. [CrossRef] [PubMed]

22. Mattner, J.; Wirtz, S. Prijatelj ali sovražnik? Dvoumna vloga prirojenih limfoidnih celic pri razvoju raka. Trendi Immunol. 2017, 38, 29–38. [CrossRef]

23. Kirchberger, S.; Royston, DJ; Boulard, O.; Thornton, E.; Franchini, F.; Szabady, RL; Harrison, O.; Powrie, F. Prirojene limfoidne celice podpirajo raka debelega črevesa s proizvodnjo interlevkina-22 v mišjem modelu. J. Exp. med. 2013, 210, 917–931. [CrossRef] [PubMed]

24. Irshad, S.; Flores-Borja, F.; Lawler, K.; Monypenny, J.; Evans, R.; Samec, V.; Gordon, P.; Cheung, A.; Gazinska, P.; Noor, F.; et al. RORgammat(+) prirojene limfoidne celice spodbujajo metastaze raka dojke v bezgavkah. Cancer Res. 2017, 77, 1083–1096. [CrossRef] [PubMed]

25. Goc, J.; Lv, M.; Bessman, NJ; Flamar, AL; Sahota, S.; Suzuki, H.; Teng, F.; Putzel, GG; Eberl, G.; Withers, DR; et al. Disregulacija ILC3s sproži napredovanje in imunoterapevtsko odpornost pri raku debelega črevesa. Cell 2021, 184, 5015–5030.e16. [CrossRef]

26. Liu, Y.; Pesem, Y.; Lin, D.; Lei, L.; Mei, Y.; Jin, Z.; Gong, H.; Zhu, Y.; Hu, B.; Zhang, Y.; et al. NCR(-) prirojene limfoidne celice skupine 3 orkestrirajo os IL-23/IL-17 za spodbujanje razvoja hepatocelularnega karcinoma. EBioMedicine 2019, 41, 333–344. [CrossRef] [PubMed]

27. Bruchard, M.; Geindreau, M.; Perrichet, A.; Truntzer, C.; Ballot, E.; Boidot, R.; Racoeur, C.; Barsac, E.; Chalmin, F.; Hibos, C.; et al. Rekrutacija in aktivacija prirojenih limfoidnih celic tipa 3 spodbuja protitumorske imunske odzive. Nat. Immunol. 2022, 23, 262–274. [CrossRef]

28. Rethacker, L.; Fant, M.; Bisio, V.; Roussin, F.; Denizeau, J.; Vincent-Salomon, A.; Borcoman, E.; Sedlik, C.; Piaggio, E.; Toubert, A.; et al. Prirojene limfoidne celice: NK in citotoksične podskupine ILC3 infiltrirajo metastatske bezgavke raka dojke. Oncoimunology 2022, 11, 2057396. [CrossRef]

29. Cesta, MF Normalna struktura, funkcija in histologija vranice. Toxicol. Pathol. 2006, 34, 455–465. [CrossRef]

30. Ishiguro, T.; Nakajima, M.; Naito, M.; Muto, T.; Tsuruo, T. Identifikacija genov, različno izraženih v sublinijah mišjega melanoma B16 z različnimi metastatskimi potenciali. Cancer Res. 1996, 56, 875–879.

32. Szabo, SJ; Kim, ST; Costa, GL; Zhang, X.; Fathman, CG; Glimcher, LH Nov transkripcijski faktor, T-bet, usmerja predanost rodu Th1. Cell 2000, 100, 655–669. [CrossRef] [PubMed]