Čitalnik RNA M6 A YTHDF2 nadzoruje protitumorsko in protivirusno imunost NK celic 2. del

YTHDF2 je potreben za protivirusno delovanje celic NK

Da bi ugotovili, ali pomanjkanje Ythdf2 vpliva na protivirusno aktivnost NK celic, smo injicirali 2, 5 × 104 PFU MCMV v miši Ythdf2WT in miši Ythdf2ΔNK.

Protivirusna aktivnost in imunost sta neločljivi in ​​tesno povezani. Virusi so zelo majhni mikroorganizmi, vendar lahko povzročijo številne bolezni in v hujših primerih celo smrt.

Protivirusno delovanje se nanaša na sposobnost telesa za boj proti virusom. Ljudje z visoko stopnjo protivirusnega delovanja lahko hitreje očistijo viruse in se učinkoviteje uprejo nastanku bolezni. Imuniteta se nanaša na obrambne snovi, ki jih telo proizvede po obdobju prilagajanja in lahko odstranijo škodljive snovi iz telesa.

Dovolj spanja, zdrava prehrana in vadba so izjemno pomembni za ohranjanje dobrega zdravja. Ti dejavniki lahko izboljšajo človeško imunost in s tem okrepijo protivirusno aktivnost telesa. Zlasti v tem času pandemije COVID-19 je pomembno, da ostanemo zdravi.

Poleg tega ima stabilno razpoloženje velik vpliv tudi na imuniteto. Optimističen odnos lahko povzroči, da se ljudje počutijo fizično in duševno udobno, s čimer se izboljša imunost in protivirusno delovanje. Nasprotno, pesimistična čustva bodo zmanjšala odpornost telesa in naredila telo bolj ranljivo za napade virusov.

Skratka, protivirusna aktivnost in imunost sta medsebojno povezani, zato moramo biti pozorni na izboljšanje telesne imunosti in protivirusne aktivnosti na različne načine, da zagotovimo fizično zdravje in zdrav življenjski slog. Vidimo lahko, da moramo izboljšati spomin, in Cistanche deserticola lahko bistveno izboljša spomin, saj ima Cistanche deserticola antioksidativne, protivnetne in anti-aging učinke, ki lahko pomagajo zmanjšati oksidacijo in vnetne reakcije v možganih, s čimer ščitijo zdravje živčnega sistema. Poleg tega lahko Cistanche deserticola spodbuja tudi rast in popravilo živčnih celic ter tako izboljša povezljivost in delovanje nevronskih mrež. Ti učinki lahko pomagajo izboljšati spomin, učenje in hitrost razmišljanja ter lahko tudi preprečijo razvoj kognitivnih motenj in nevrodegenerativnih bolezni.

Kliknite poznajte dodatke za povečanje spomina

Rezultati so pokazali, da so bile miši Ythdf2ΔNK bolj dovzetne za okužbo z MCMV, kar je prikazano v znatni izgubi teže in povečanih virusnih titrih v krvi, vranici in jetrih v primerjavi z mišmi Ythdf2WT (sl. 3, A in B; in sl. S2, A in B) .

Opazili smo tudi znatno zmanjšanje odstotka in absolutnega števila skupnih celic NK v vranici in krvi miši Ythdf2ΔNK v primerjavi s tistimi pri miših Ythdf2WT po okužbi (slika 3, C in D; in slika S2, C in D). Nadaljnja analiza je pokazala, da so imele NK celice iz miši Ythdf2ΔNK znatno nižjo ekspresijo Ki67 kot miši Ythdf2WT (slika 3, E–G).

Vendar je bila sposobnost preživetja NK celic podobna med mišmi Ythdf2WT in mišmi Ythdf2ΔNK, kot je prikazano z barvanjem z aneksinom V (slika S2 E). Ti podatki kažejo, da pomanjkanje YTHDF2 v celicah NK povzroči okvaro v celični proliferaciji in ne preživetje celic med virusno okužbo.

Celice NK zavirajo okužbo z MCMV prek aktivacijskih receptorjev Ly49H in Ly49D, za proces pa je značilen protivirusni odziv, posredovan s perforinom ali IFN (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al. sod., 2010; Sumaria in sod., 2009). Ugotovili smo, da so imele miši Ythdf2ΔNK znatno zmanjšane celice Ly49H+ in Ly49D+ NK v vranici in krvi v primerjavi z mišmi Ythdf2WT po okužbi (slika 3, H–J; in slika S2, F–K).

Nadaljnja analiza je pokazala, da čeprav glede na odstotek le celice Ly49D+Ly49H+ kažejo razliko pri miših Ythdf2ΔNK v primerjavi z mišmi Ythdf2WT, absolutno število celic Ly49D−Ly49H+ NK celic, Ly49D+Ly49H− NK celic in Ly49D+Ly49H+ NK celic v vranica in kri so se po okužbi znatno zmanjšale pri miših Ythdf2ΔNK v primerjavi z mišmi Ythdf2WT (slika S2, L–W).

Naši podatki kažejo, da se zdi, da nadzor okužbe z MCMV z YTHDF2 v glavnem posredujejo celice Ly49D+Ly49H+ NK. Proizvodnja grancima B in IFN s celicami NK pri miših Ythdf2ΔNK je bila primerljiva s proizvodnjo miši Ythdf2WT (slika S2, X in Y).

Ugotovili smo znatno zmanjšano proizvodnjo perforina pri miših Ythdf2ΔNK v primerjavi s proizvodnjo miši Ythdf2WT v vranici in krvi 7 dni po okužbi (slika 3, K–M), kar kaže, da YTHDF2 vpliva predvsem na protivirusno aktivnost, ki jo povzroča sperforin, proti MCMV v celicah NK. Ti podatki kažejo, da je YTHDF2 kritičen za ekspanzijo celic NK in efektorsko funkcijo med okužbo z MCMV.

YTHDF2 nadzoruje homeostazo NK celic in končno zorenje v stanju dinamičnega ravnovesja

Zgornje ugotovitve, da je pomanjkanje Ythdf2 v celicah NK povečalo tumorske metastaze in oslabilo sposobnost celic NK za nadzor okužbe z MCMV, so nas spodbudile, da raziščemo, ali je YTHDF2 potreben za vzdrževanje celic NK v stanju dinamičnega ravnovesja.

Kot je prikazano na sliki 4 A, sta se pogostost in absolutno število NK celic znatno zmanjšala v periferni krvi, vranici, jetrih in pljučih, vendar ne v kostnem mozgu (BM) miši Ythdf2ΔNK v primerjavi z mišmi Ythdf2WT.

Vendar ni bilo pomembnih sprememb med skupnim limfoidnim progenitorjem, pred-NK celičnim progenitorjem in rafiniranim NK celičnim progenitorjem (NKP) v BM (Fathman et al., 2011) med mišmi Ythdf2WT in Ythdf2ΔNK (slika S3 A), kar kaže, da YTHDF2 morda ne bo vplival na zgodnji razvoj celic NK v našem modelu. Da bi raziskali potencialne mehanizme, ki so odgovorni za zmanjšanje NK celic pri miših Ythdf2ΔNK, smo raziskali celično proliferacijo, sposobnost preživetja in zmožnost trgovanja NK celic po izbrisu Ythdf2 v stanju dinamičnega ravnovesja.

Odstotek proliferirajočih celic NK je bil primerljiv med mišmi Ythdf2WT in Ythdf2ΔNK, kar dokazuje obarvanje Ki67 (slika S3 B). Sposobnost preživetja NKcelic je bila enakovredna tudi med mišmi Ythdf2WT in Ythdf2ΔNK, kot je prikazano z barvanjem z aneksinom V (slika S3 C).

Da bi preverili, ali YTHDF2 vpliva na izstop celic NK iz BM na periferijo, so miši Ythdf2WT in Ythdf2ΔNK injicirali iv protitelo proti CD45 za označevanje imunskih celic in žrtvovali po 2 minutah, njihove celice BM pa analizirali. To nam je omogočilo, da smo količinsko opredelili število NK celic v sinusoidnih in parenhimskih regijah BM, kar je pokazatelj prometa NK celic iz BM v periferno kri v stanju dinamičnega ravnovesja (Leong et al., 2015).

Rezultati so pokazali znatno zmanjšanje pogostnosti celic NK CD45+ pri miših Ythdf2ΔNK v primerjavi z mišmi Ythdf2WT v sinusoidih (slika 4 B), kar kaže, da pomanjkanje Ythdf2 ovira izstop celic NK iz BM v cirkulacijski sistem in vivo .Imunske celice so podvržene homeostatski proliferaciji med limfopenijo, ki jo povzročijo nekatere virusne okužbe ali povzroči kemoterapija (Sun et al., 2011).

Čeprav smo ugotovili, da je YTHDF2 nepogrešljiv za proliferacijo celic NK v stanju dinamičnega ravnovesja, smo opazili znatno zmanjšanje celične proliferacije med okužbo z MCMV (slika 3, E–G). Zato smo raziskali vlogo YTHDF2 pri uravnavanju homeostatske proliferacije NK celic v limfopeničnem okolju in vivo. Enako število vraničnih NK celic smo prenesli iz miši CD45.2 Ythdf2ΔNK ali kongenih miši CD45.1 v miši Rag2-/-Il2rg-/- s pomanjkanjem limfocitov.

Rezultati so pokazali, da je bil večji delež NK celic pridobljen iz kontrolnih miši CD45.1WT kot iz miši CD45.2 Ythdf2ΔNK na dan 3 po prenosu celic (slika S3 D). Nadaljnja analiza je pokazala, da je bilo zmanjšanje NK celic iz miši Ythdf2ΔNK posledica oslabljene celične proliferacije (slika S3 E), ne pa celične apoptoze (slika S3 F), kar kaže, da YTHDF2 poganja homeostatsko proliferacijo NK celic in vivo v limfopeničnih pogojih.

Nadaljnjo diferenciacijo mišjih NK celic lahko razvrstimo v nezrele (CD11b-CD27+), vmesne zrele (CD11b+CD27+) in terminalne zrele (CD11b+CD27-) stopnje na podlagi ravni CD11b in CD27 ( Chiossone et al., 2009; Geiger in Sun, 2016).

Ugotovili smo, da se izražanje Ythdf2 povečuje z zorenjem in da CD11b−CD27+, CD11b+CD27+ in CD11b+CD27− prikazujejo najnižjo, vmesno oziroma najvišjo raven izražanja Ythdf2 (slika S3 G). ), kar kaže, da je YTHDF2 lahko vključen v zorenje celic NK. Zato smo raziskali vlogo YTHDF2 pri zorenju celic NK, ki jo definirata označevalca celične površine CD11b in CD27.

Ugotovili smo, da je izguba Ythdf2 v celicah NK povzročila znatno zmanjšanje pogostnosti terminalnih zrelih celic NK in/ali povečanje nezrelih in vmesnih zrelih celic NK v vranici, jetrih, pljučih in krvi, ne pa tudi v BM (slika 4 C in Sl. S3 H), kar kaže, da YTHDF2 pozitivno uravnava terminalno zorenje NK celic. V skladu s temi podatki so bile ravni KLRG1, ki je aterminalni marker zorenja NK celic, znatno nižje pri miših Ythdf2ΔNK v vranici, jetrih in pljučih, ne pa tudi v BM v primerjavi z miši Ythdf2WT v ustreznih predelih organov ali tkiv (slika 4 D).

Da bi ugotovili, ali je zmanjšano število zrelih celic NK zaradi pomanjkanja Ythdf2 celično intrinzično, smo ustvarili himere v miših Rag2−/−Il2rg−/− z injiciranjem celic BM iz miši CD45.1 WT in CD45.2 Ythdf2ΔNK, pomešanih v razmerju 1:1 razmerje.

Kot je pokazala pretočna citometrija 8 tednov po presaditvi, je bil zmanjšan delež končnih zrelih celic NK pridobljen iz celic CD45.2 Ythdf2ΔNK BM kot tistih iz kontrolnih celic CD45.1 WT (slika 4 E), kar kaže na to, da zorenje konca celic NK nadzira YTHDF2 transkripcijski faktorji T-box Eomes in Tbet so kritični za zorenje celic NK (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012).

Znotrajcelično obarvanje je pokazalo znatno zmanjšanje ravni beljakovin Eomes v NK celicah miši Ythdf2ΔNK v primerjavi z mišmi Ythdf2WT (slika S3 I). Poleg tega smo ugotovili, da se je zmanjšanje ravni beljakovin in mRNA Eomes posebej zgodilo v terminalnih zrelih (CD11b + CD27-) NK celicah (sl. S3, J–L).

Vendar pa je bila v nasprotju z Eomes ekspresija Tbet enaka v celicah NK med mišmi Ythdf2ΔNK in Ythdf2WT (sl. S3, I in K), kar kaže, da YTHDF2 morda uravnava terminalno zorenje NKcelic s ciljanjem na Eomes.

YTHDF2 spodbuja delovanje efektorja celic NK

Naša ugotovitev, da je pomanjkanje Ythdf2 oviralo homeostazo in zorenje celic NK, nas je motiviralo, da ugotovimo, ali je YTHDF2 zaviral tudi efektorsko funkcijo celic NK. Glavni mehanizem, ki uravnava delovanje celic NK, je relativni prispevek inhibitornih in aktivacijskih receptorjev (Chan et al., 2014).

Nato smo preverili nivoje izražanja molekul, povezanih z aktivacijo ali inhibicijo NKcelic. Ugotovili smo, da so bile ravni izražanja aktivacijskih receptorjev CD226 in NKG2D, ne pa tudi CD69, zmanjšane v celicah NK vranice miši Ythdf2ΔNK v primerjavi s tistimi miši Ythdf2WT (slika 5 A), medtem ko so inhibitorni receptorji NKG2A, TIGIT in PD{{ 7}} so bile podobne med mišmi Ythdf2ΔNK in mišmi Ythdf2WT (sl. 5 A in sl. S3 M).

Poleg tega so celice NK Ythdf2ΔNK proizvedle bistveno manj IFN- kot celice NK Ythdf2WT, kadar so bile stimulirane z IL-12plus IL-18 ali YAC-1 celicami mišjega limfoma (sl. 5, B in C ).

Nato smo testirali citotoksično sposobnost Ythdf2ΔNK NK celic. Ugotovili smo, da so imele NK celice Ythdf2ΔNK znatno zmanjšano citotoksičnost proti celicam mišjega limfoma RMA-S s pomanjkanjem MHC razreda I (slika 5 D), vendar so pokazale podobno citotoksičnost proti celicam RMA z zadostno količino MHC razreda I (slika S3 N), kot je prikazano s 51Crassay . Te ugotovitve skupaj kažejo, da je YTHDF2 bistven za delovanje efektorja celic NK.

For more information:1950477648nn@gmail.com