Znanstvena osnova za novo uporabo Cistanche
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2
(1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)
POVZETEK: Vzpostavljen je bil začetni model hiperplazije prostate (BPH) pri podganah in tri skupine odmerkov akteozida so bile peroralno dajane 4 tedne, da bi preučili učinek akteozida, destiliranega izCistanche tubulosana apoptozo in ultra mikrostrukturo prostate pri podganah z BPH. Ultrastrukturno spremembo prostate smo opazovali s transmisijsko elektronsko mikroskopijo. Rezultati so pokazali, da apoptoza normalne prostate pri podganah ni bila očitna, bila je nizka
stopnja apoptoze prostate v modelni skupini pri visokih odmerkih akteozida izCistanche tubulosapri zdravljenju je bila apoptoza prostate pri podganah bistveno večja kot pri modelu.
KLJUČNE BESEDE:Cistanche, Cistanche tubulosa, akteozid; podgana; začetek hiperplazije prostate; apoptoza; ultrastrukturni
V procesu benigne hiperplazije prostate (BPH) je celična apoptoza eden od mehanizmov, ki trenutno pritegne pozornost. Gensko kodiranje ga določa in omogoča celicam nadzor programirane celične smrti z odzivom na specifične signale.
Ko se prostata razvije do velikosti odrasle osebe, se stopnja proliferacije celic prostate vzdržuje pri 1 do 2 odstotkih zaradi ravnovesja povprečne stopnje apoptoze. Ko je ravnotežje porušeno, velja, da je vzrok za BPH. V normalnih pogojih so ravni estrogena in androgena ter normalna cirkulacija v prostati nekakšno stanje samoravnovesja, ki obstaja v procesu proliferacije in apoptoze. Ko ravnovesje med proliferacijo in apoptozo ni v ravnovesju, bo to povzročilo nadaljnjo rast in širjenje žleze, kar v glavnem povzroči širjenje predela epitelijskih celic [1].
V tem poskusu smo vzpostavili model hiperplazije prostate pri podganah, da bi opazovali in analizirali učinek akteozida (koakciji podobnega glikozida), ene od kemičnih sestavinCistancheo apoptozi in ultrastrukturnih spremembah celic prostate podgan, da bi ocenili učinek akteozida. Učinek zaviranja hiperplazije prostate zagotavlja znanstveno osnovo za razvoj in uporabo novih uporab kitajske medicine Cistanche.
Cistancheekstrakt
1 Material in metode
1. 1 poskusna žival
Petdeset podganjih samcev SD, starih 6-7 tednov, čiste stopnje, težkih 80-100 g, je zagotovil Center za primerjalno medicino Univerze Yangzhou.
1. 2 Reagenti in zdravila
Injekcija testosteron propionata je iz Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., specifikacija je 25 mg·mL-1, številka serije pa je 060708. Raztopina barvila PI je iz Centra za testiranje univerze Yangzhou. Vsebnost Aktisida je 945 g·kg-1, ki ga je pripravil Oddelek za analizo kitajske medicine Kitajske farmacevtske univerze.
1. 3 Eksperimentalna oprema
Transmisijski elektronski mikroskop Philips Tecnai 12 je iz Philipsa na Nizozemskem; FACSAria pretočni citometer je iz BD v Združenih državah Amerike.
1. 4 Združevanje in modeliranje
Po kastraciji po metodi iz literature [3] so podgane injicirali 5 mg·(kg·d)-1testosteron propionata na hrbtu podgan 4 tedne, da bi vzpostavili model hiperplazije prostate. Modelne podgane so bile naključno razdeljene v modelne skupine: model plus skupina z visokim odmerkom akteozida, model plus skupina s srednjim odmerkom akteozida, model plus skupina z nizkim odmerkom akteozida, deset podgan v vsaki skupini; drugih deset normalnih podgan je bilo kontrolna skupina.
1. 5 Način uporabe
En teden po modeliranju so skupine z visokim, srednjim in nizkim odmerkom akteozida prejele 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 z gavažo. Modelni skupini in kontrolni skupini sta štiri tedne enkrat na dan dajali enako količino fiziološke raztopine, enkrat na teden stehtali in prilagodili odmerek glede na telesno težo.
1. 6 Odvzem in obdelava vzorcev
1) Priprava materiala in vzorca: 24 ur po zadnjem dajanju stehtajte podgane na tešče in jih žrtvujte z izpahom materničnega vratu. Takoj odprite spodnji del trebuha, odlepite tkiva okoli prostate, osvobodite prostato in vzemite del prostate za uporabo v ledeni kopeli. Homogenizator tkiva homogeniziral, pripravil suspenzijo enocelične prostate in obarval s propidijevim jodidom v enem koraku [4]; drugi del tkiva prostate smo fiksirali v 25 g·L-1 glutaraldehida, da smo pripravili ultra tanke dele.
2) Pripravite suspenzijo ene celice: V aseptičnih pogojih popolnoma odstranite prostato podgane in jo premaknite v petrijevko, sperite kri in krvne strdke na površini tkiva prostate s PBS in odstranite okoliško maščobo, odvečna vlakna, in celične membrane. Iz iste podganje prostate, sveže tkivo prostate velikosti približno 0,5 cm3vzeli in razrezali na kose za pripravo suspenzije celic prostate [5]. Blok tkiva prostate postavite v petrijevko in dodajte majhno količino PBS; z oftalmološkimi škarjami prerežite tkivo v ledeni kopeli, homogenizator zdrobite v suspenzijo, dodajte 1 0 mL PBS, odpipetirajte tkivni homogenat in uporabite najlonsko mrežico z velikostjo por 0,074 mm, filtrirajte v epruveto, centrifugirajte pri 1 500 r min-13 minute in oborino trikrat speremo s PBS, vsakič pri 500 r/min-1kratkotrajno centrifugiranje pri nizki hitrosti za odstranitev celičnih ostankov do 0.037 mm najlonskega mrežnega filtra z velikostjo por za odstranjevanje celičnih grudic. Preštejte celice in prilagodite koncentracijo celic na 2 × 109 celic·l-1. Obarvajte z 1 ml raztopine za barvanje PI, zaščitite pred svetlobo pri 4 stopinjah 10 minut.
3) Priprava ultratankih rezov: Za pripravo ultratankih rezov glejte literaturo [6].
2 Rezultati in analiza
Slika 1 Apoptoza modela BPH pri podganah in inducirano delovanje akteozida
a. Normalna skupina; b. Modelna skupina; c. Skupina visokih odmerkov akteozida; d. Skupina nizkih odmerkov akteozida
2. 1 Učinek akteozida na apoptozo prostate podgan
Slika 1 prikazuje vrh apoptoze, odkrit s pretočno citometrijo, ki kaže, da ima akteozid pro-apoptotični učinek. Statistična analiza rezultatov celične apoptoze je pokazala, da se je stopnja apoptoze podganjih celic znatno povečala (24,7±1,85) odstotkov in (16,1±1.04) odstotkov po zdravljenju z visokimi, srednjimi in nizkimi odmerki akteozid. , (14,5±0.68) odstotkov, in normalna skupina (1,1±{{20}.06) odstotkov, modelna skupina (9,5±0,5) odstotkov, pozitivna skupina (9,83± 0,76) Razlika v odstotni primerjavi je pomembna (str<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Slika 2 Radio apoptoze v modelu BHP pri podganah in učinek akteozida
2.2 Vpliv akteozida na ultrastrukturo celic hiperplazije prostate.
Opazovanja z elektronsko mikroskopijo kažejo, da ima normalna podganja prostata popolna jedra, očitno nukleole, in enotno porazdelitev jedrnega kromatina; hrapavi endoplazmatski retikulum ima enako velikost, je lepo urejen in nima vakuolacije. Na površini epitelija ni prstastih mikrovilov, mitohondrijev ni nabreklih, v votlini pa je malo izločkov. Jedra celic prostate v modelni skupini so bila deformirana in skrčena, citoplazme pa je bilo v izobilju. Grobi endoplazmatski retikulum je bil razširjen v obliki ciste, cista pa je bila napolnjena z beljakovinskimi delci visoke gostote. Mitohondriji so rahlo nabrekli (prisotne so bile tudi vakuole), v votlini so izločki srednje gostote, v nekaterih celicah so bila najdena gosta okrogla zrnca izločkov. Pri podganah, zdravljenih z akteozidom, je bilo jedro nedotaknjeno v primerjavi z modelno skupino. Jedro je bilo koncentrirano, gostota jedra je bila povečana, heterokromatin se je kopičil, citoplazma je imela vakuole, hrapave vakuole endoplazmatskega retikuluma pa so bile zmanjšane. Skupina z nizkimi odmerki akteozida je imela rahlo nagubana jedra, krčenje, nepravilno, bogatejšo citoplazmo in zmanjšan hrapav endoplazmatski retikulum (slika 3).
Koristi cistanche: protiApoptoza
3 Razprava
Apoptoza je proces programirane celične smrti v večceličnih organizmih, ki uravnava razvoj telesa in ohranja stabilnost notranjega okolja, določajo pa ga genetske kode.
Apoptotične celice imajo svoje edinstvene morfološke in biološke značilnosti: krčenje jedrskega kromatina, obsežno razgradnjo in fragmentacijo DNA, skrčenje celic v polnem obsegu, krčenje celičnih membran in zunanjih izboklin, ki prekrivajo organele (kot so mitohondriji in ribosomi), in tvorbo značilnih jedrskih celic. fragmenti Apoptotična telesca, apoptotične celice ne samo da ohranijo celotno strukturo in delovanje celične membrane, ampak imajo tudi popolno strukturo organelov, ki se razlikuje od celične nekroze.
Molekularni mehanizem celične apoptoze še ni povsem pojasnjen. Študije [7] so pokazale, da je veliko genov vključenih v gensko regulacijo celične apoptoze.
Apoptoza je proces BPH, ki trenutno pritegne več pozornosti. Določen je s kodiranjem genov in omogoča celicam nadzor celične smrti z odzivom na specifične signale [1]. Ko se prostata razvije do velikosti odrasle osebe, se stopnja proliferacije celic prostate vzdržuje pri 1 do 2 odstotkih zaradi ravnovesja stopnje apoptoze. Porušitev tega ravnovesja je bila vedno obravnavana kot vzrok BPH [8]. V normalnih pogojih sta raven estrogena in androgena ter redna cirkulacija v prostati nekakšno stanje samoravnovesja, ki obstaja v procesu proliferacije in apoptoze. Ko sta proliferacija in apoptoza v neravnovesju, bo to povzročilo rast in nadaljnjo širitev žlez, predvsem zaradi širjenja predela epitelijskih celic [9]. Prekinitev tega ravnovesja je lahko posledica sprememb ravni ali funkcij androgena; lahko je tudi posledica kakršnega koli odziva, ki ga povzroči AR stimulacija DHT, ali sprememb ravni rastnega faktorja, ki jo posreduje DHT [2]. V tej študiji je FCM odkril apoptozo celic in ugotovil, da se je stopnja apoptoze celic prostate pri podganah, ki so prejemale visoke odmerke akteozida, znatno povečala. Rezultati elektronske mikroskopije so pokazali, da so bila jedra celic prostate v modelni skupini deformirana, hrapav endoplazmatski retikulum je bil močno razširjen v obliki ciste, cista pa je bila napolnjena z beljakovinskimi delci visoke gostote in ugotovljena je bila vakuolizacija. Mitohondriji so bili rahlo otečeni in sorodne študije [ 10-11 ] Poročilo je dosledno.
Po posegu z akteozidom je bila stopnja hiperplazije prostate pri podganah nižja. Skupina z velikimi odmerki je pokazala tudi zgodnje znake apoptoze: jedro celic prostate je ostalo nedotaknjeno, vakuole endoplazmatskega retikuluma pa so bile bistveno nižje. Kondenzacija jeder, povečana jedrska gostota, kopičenje heterokromatina, podobno karakterizaciji celic tkiva prostate pri podganah po kastraciji [12-13]. Kaže, da akteozid izcistanchelahko inducira apoptozo celic pri podganah s hiperplazijo prostate, uravnava in obnavlja ravnovesje apoptoze in proliferacije celic prostate ter igra vlogo pri zaviranju proliferacije celic prostate. Rezultati te študije in prejšnjih študij [14] kažejo, da je zaviralni učinek akteozida, kemične sestavineCistanche tubulosa, na hiperplazijo prostate je lahko povezana z njenim spodbujanjem celične apoptoze, zmanjšanjem prekomerne ekspresije AR in TGF-UR1. Podroben mehanizem delovanja je treba še dodatno preučiti.
Koristi Cistanche: izboljšanje imunosti
Reference:
[1] Giacomo N, Antonio G, Ra fa el BB, et al. Vnetje, apoptoza in BPH, kaj so dokazi [J]. European Urology Supplements, 2006(5): 401-408.
[2] Carson IC, Rittmaster R. Vloga dihidrotestosterona pri benigni hiperplaziji prostate [J]. Urologija, 2003, 61: 2-7.
[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Metodologija farmakološkega eksperimenta [M]. 3. izdaja. Peking: Ljudska medicinska založba, 2002: 1552-1553.
[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda et al. Uporaba tet-off inducibilnega ekspresijskega sistema za preučevanje delovanja Akt[J]. Kitajski znanstveni bilten, 2000, 45(16): 1738-1741.
[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen et al. Primerjalna študija o metodah priprave enocelične suspenzije ledvičnega tkiva [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24(1):50-53.
[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei et al. Spremembe ultrastrukture pljuč pri eksperimentalnih starajočih se miših in učinek polisaharida Cistanche deserticola [J]. Kitajski farmakološki bilten, 2002, 18(1): 84-87.
[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Napredek raziskav v patogenezi celične proliferacije in apoptoze benigne hiperplazije prostate [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23(2): 141-143.
[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG, et al. Izražanje survivina in apoptotičnih biomarkerjev v benigni hiperplazmi prostate [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.
[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Benigna hiperplazija prostate: s starostjo povezano preoblikovanje tkiva [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.
[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Zaviralni učinek hidroklorida na hiperplazijo prostate pri podganah [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.
[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. Morfološke spremembe benigne hiperplazije prostate in razlika v izražanju ARmRN A [J]. Journal of Xi'an Medical University, 1999, 20 (2): 145-149.
[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen et al. Dinamične patološke spremembe pasje prostate po kastraciji [J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19(7): 429-433.
[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng et al. Dinamične spremembe v mikrostrukturi ventralne prostate podgane po kastraciji [J]. Chinese Journal of Urology, 2001, 22(8): 468-472.
[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun yun. Zaviralni učinek zdravila Aktiside na eksperimentalni model benigne hiperplazije prostate [J]. Journal of Yangzhou University: Agriculture and Life Sciences
Izdaja, 2008, 29(3): 55-58.