Vrednotenje toksičnosti izvlečka cvetov Dolichandrone Serrulata (DSF) na delovanje ledvic in jeter

za več informacij:ali.ma@wecistanche.com

Ocena toksičnosti izvlečka cvetov Dolichandrone serrulata na vitalne in reproduktivne organe pri odraslih samcih podgan

C. Chaimontria in S. Iamsaard

Povzetek

čepravCvet Dolichandrone serrulataIzkazalo se je, da ima vodni ekstrakt (DSF) farmakološke lastnosti, njegovo sistemsko toksičnost pa je treba še oceniti. Namen te študije je bil raziskati učinek subkronične toksičnosti DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček o biokemičnih parametrih in histoloških strukturahjetra, ledvica, testis. in epididimis plus vas deferens. Odraslim podganjim samcem so dajali DSF (Cvet Dolichandrone serrulata) pri 100, 300 in 600 mg/kg telesne mase z oralno sondo 48 zaporednih dni, medtem ko je kontrola prejemala destilirano vodo. Na koncu poskusa kri.jetra, ledvica, testisa in epididimisa ter vzorce semenovoda so bili zbrani za določitev morebitnih sprememb serumskih biokemičnih komponent, vključno z ravnmi ALT, ALP in kreatinina ter histološkimi strukturami. Rezultati niso pokazali pomembne razlike v telesni teži in porabi hrane ali vode med kontrolo in DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)-zdravljene skupine. Ugotovljeno je bilo, da DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)znatno poveča težo epididimisa in semenovoda, medtem koledvicainjetrapokazala zmanjšanje v skupini z velikimi odmerki (vrednost P< 0.05).="" histological="" changes="" in="" these="" vital="" and="" reproductive="" tissues="" including="" fibrosis="" were="" not="" observed="" after="" administration="" but="" alt,="" alp,="" and="" creatinine="" levels="" were="" significantly="" altered="" in="" the="" treated="" groups(pwlue="" <="" 0.051.="" these="" altered="" levels.="" however,="" were="" still="" within="" normal="" ranges="" in="" conclusion,="" these="" findings="" demonstrated="" that="" d.serulata="" flower="" extract="" had="" no="" sub-chronic="" toxicity="" on="" vital="" and="" reproductive="" structures="" but="" slightly="" altered="" some="">delovanje jeter in ledvic.

Kliknite na Cistanches in Cistanche za ledvično bolezen

Ključne besede:Dolichandroneserrulata, jetra, ledvica, testis, epididimis.

1. Uvod

Uporaba zelišč za zdravljenje bolezni je dolgoletna tradicija. Potencialne zdravilne lastnosti rastlin so odvisne od vrste in količine njihovih kemičnih spojin. Znano je, da ima vsak del posamezne zdravilne rastline različne spojine. Poleg tega se lahko vrsta in količina snovi razlikujeta glede na druge dejavnike, kot so vrsta zelišč, okolje sajenja in obdobje nabiranja (Sringeunyuan in Hongwiset, 1990). Trenutno tajska vlada spodbuja uporabo zdravilnih rastlin in zelišč, ki veljajo za medicinske alternative sodobni zdravstveni oskrbi (Sringeunyuan in Hongwiset., 1990), glede na to, da rastlinski proizvodi večinoma niso strupeni. Poleg tega zdravljenje z zelišči izhaja iz lokalnega znanja tajske tradicionalne medicine. Khae Na ozDolichandrone serrulata(ozD.serrulata cvet(DSF)) je starodavna zdravilna rastlina, za katero se tradicionalno verjame, da ima številne farmakološke lastnosti (Sriprasert, 2016). Večina delov (cvet, strok, lubje in koren) te rastline je uporabnih in se zaužijejo zaradi številnih farmakoloških lastnosti (Sriprasert, 2016; Kiratipaiboon et al., 2012). Trenutna študija je razkrila zaščitni učinek DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)proti reproduktivnim poškodbam pri diabetičnih podganah (Yannasithinon et al., 2021). Biološke študije metanolnega ekstrakta DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)dokazal svoje obetajoče antioksidativne aktivnosti (Phanthong et al., 2015). Ugotovljeno je bilo, da DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvlečki so vsebovali šest spojin, vključno s haleronom, protokatehuinsko kislino, rengiolonom, kleroindicinom B in izomaltozo (Phanthong et al, 2015). Poleg tega je prejšnja študija ocenila fitokemične profile in biološke aktivnosti DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)etanolnih izvlečkov (Sriprasert, 2016). Fitokemijske študije etanolnih izvlečkov iz te rastline so pokazale sekundarne metabolite, kot so flavonoidi, kumarini, saponini, tanini, terpenoidi, steroidi in srčni glikozidi (Sriprasert, 2016). V zadnjem času vodni izvleček DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)Poročali so, da ima antioksidativno zmogljivost in monoterpenoide, kot sta rengiolon in kleroindicin B (Chaimontriet al., 2021). Vendar se je izkazalo, da so nekatere rastline, sorodne tej D. serrulata, strupene za vitalne in reproduktivne organe. Na primer, vodni ekstrakt P.alliaceum, ekstrahiran z etanolom v študiji akutne toksičnosti, je zmanjšal sposobnost belih krvnih celic (Granados-Echegoyenet al., 2015). Prej sta Aba in Amadi (2019) poročala, da lahko izvleček sadja A. carambola poškoduje jetrno in ledvično tkivo. Poleg tega je bilo ugotovljeno, da lahko sončni ginseng spremeni parametre krvnega seruma, vključno z ravnmi ALT, ALP in kreatinina, kar kažemotnje delovanja jeter in ledvic(Kim et al. 2013). Še več, Azu et al. (2010) so poročali, da bi lahko visoki odmerki izvlečka sadja K. Africana zavirali spermatogenezo. Ugotovljeno je bilo, da lahko neprekinjeno uživanje nedavnih rastlinskih proizvodov v daljšem obdobju poškoduje vitalne in reproduktivne organe (Kiratipaiboon et al, 2012; Freitas et al, 2013; Joshi et al, 2011; Karnati et al, 2013; Lee et al, 2012). Čeprav DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)je bil zaužit že dolgo časa, toksični učinki njegovega vodnega izvlečka najetra, ledvica, moda in epididimis je treba še oceniti. Da bi izboljšali naše razumevanje tega vprašanja, je ta študija poskušala raziskati subkronično toksičnost DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvlečki na vitalnih in reproduktivnih organih, da bi ugotovili možnost varnega uživanja te snovi v daljšem obdobju.

Cvet Dolichandrone serrulata(DSF)

2. Materiali in metode

2.1.Živali

Štirideset odraslih samcev podgan Sprague-Dawley (120-150g) je bilo kupljenih pri Nomura Siam International, Bangkok, Tajska. Živali so bile v kletkah iz nerjavečega jekla v pogojih eksperimentalne sobe (12-urni cikel svetlobe/teme, temperatura 23±2 stopinje, vlažnost 40-60 odstotkov, zvok<85 decibels,="" and="" light="" intensity="" approximately="" 350-400="" lux)in="" the="" northeast="" laboratory="" animal="" center,="" khon="" kaen="" university,="" thailand.="" this="" experimental="" study="" was="" approved="" by="" the="" animal="" ethics="" committee="" research="" of="" northeast="" laboratory="" animal="" center="" khon="" kaen="" university.="" the="" code="" of="" this="" animal="" ethic="" is="">

2.2. Nabiranje in priprava cveta D.serrulata

Rastlinski vzorci svežega Khae Na so bili zbrani v podokrožju Ban Thum, okrožje Mueang, provinca Khon Kaen, Tajska, in jih potrdil asist. Prof. dr. Pimwadee Pornpongrungrueng, Oddelek za biologijo, Fakulteta za naravoslovje, Univerza Khon Kaen (vzorci bonov za D.serrulata, shranjeni v herbariju KKU s številnimi S.lamsaard02). Pri ekstrakciji je posušen DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)je bil narezan na majhne koščke, preden je bil namočen in kuhan v destilirani vodi pri 90-95 stopinjah stopinj 40 minut. Vodni DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček je bil liofiliziran z uporabo liofilizatorja (M-00359-1/57,13-1011-18-2019, Labconco, Becthai Scientific Industry, Tajska). Odstotni izkoristek surovega ekstrakta DSF je bil 40,78 odstotka. Ta izvleček je bil pridobljen od dr. Sitthichaija lamsaarda, kot je predhodno opisano v podrobnostih ekstrakcije (Chaimontri et al., 2021; Yannasithinon et al, 2021).

2.3. Eksperimentalna zasnova

Po 7-dnevni aklimatizaciji so podganje samce naključno razdelili v 4 skupine (10 podgan na skupino), vključno s kontrolo, DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)100, DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)300 in DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)600 skupin oz. DSF (Cvet Dolichandrone serrulata) odmerki ekstrakta so bili izračunani na podlagi največjega zaužitega odmerka DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)pri osebi s povprečno težo 60 kg. Na kratko, odmerek 600 mg/kg telesne mase je bil izračunan iz zmožnosti uživanja 40 cvetov/dan/osebo. Proporcionalna razmerja srednjega (300 mg) in najnižjega (100 mg) odmerka so bila izračunana iz 600 mg. Za DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)zdravljenih skupinah so bile podgane zdravljene z DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)-izvleček, raztopljen v destilirani vodi (DW) v odmerkih 100, 300 oziroma 600 mg/kg telesne mase, z oralno sondo. Živali v kontrolni skupini so dobile samo DW. Njihovo telesno težo so dnevno beležili med dajanjem 48 zaporednih dni.

2.4. Biokemična analiza

Na koncu poskusa so vse podgane pred evtanazijo z izpahom materničnega vratu anestezirali s tiopental natrijem (60 mg/kg telesne mase preko ip). Po odprtju torakalne stene smo zbrali kri s srčno punkcijo in centrifugirali pri 12,000 r/minuto 10 minut pri 4 stopinjah z uporabo mikrocentrifuge (Microfuge 22R Centrifuge, Beckman Coulter TM, ZDA) za ločevanje krvnih celic iz seruma. Krvni serum je bil takoj poslan v imunološko enoto, bolnišnica Srinagarind, Medicinska fakulteta, Univerza Khon Kaen, Tajska za določitev dušika sečnine v krvi (BUN) in kreatinina (zaledvicafunkcije)in albumin, aspartat aminotransferazo (AST), alanin aminotransferazo (ALT) in alkalno fosfatazo (ALP) (za delovanje jeter). Biokemične ravni so bile določene z uporabo elektrokemiluminescenčnega imunskega testa (Roche Diagnostics) s Cobasom in imunskim analizatorjem (Roche Diagnostics, Mannheim, Nemčija).

2.5. Histološka študija vitalnih organov

Po odvzemu krvi,jetra, ledvicain reproduktivne organe, vključno z modi in epididimisom, so hitro zbrali in stehtali. Vsa tkiva so bila 72 ur fiksirana z 10-odstotno raztopino za fiksiranje formalina. Nato so bili obdelani za rutinske parafinske reze in obarvani z Massonovimi trikromnimi barvili, da bi raziskali razvoj kolagenskih vlaken. Na kratko, odseki tkiva so bili deparafinizirani s ksilenom in rehidrirani s serijskimi padajočimi alkoholi. Nato so rezine potopili v Bouinovo raztopino in obarvali z Weigertovim železovim hematoksilinom. Nato so bili odseki obarvani z Massonovimi kompleti za trikromno barvanje (kataloška št. HT15, Sigma-Aldrich, Inc, ZDA). Nazadnje smo rezine sprali z 1-odstotno ocetno kislino. Histološke spremembe vitalnih organov in reproduktivnih organov smo opazovali in fotografirali z Nikonovim svetlobnim mikroskopom ECLIPSE E200, opremljenim z digitalno kamero DXM1200.

2.6. Statistična analiza

Vsi podatki so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon (SD). Za primerjavo razlik med štirimi skupinami so bile uporabljene Post Hoc večkratne primerjave za normalno porazdeljene podatke, razlike podatkov pa so bile izvedene z uporabo One Way ANOVA z uporabo programa SPSS statistics 19.0.2software(statistični paket za the Social Sciences, različica 19.0.2, SPSS Inc, Armonk, New York, ZDA nameščen iz KKUSoftware Center, Univerza Khon Kaen) za analizo podatkov. Za preverjanje pomembne razlike med skupinami je bil uporabljen program SPSS. P-vrednost<0.05 was="" considered="" a="" significant="">

3. Rezultati

3.1. Vpliv izvlečka cvetov D.serrulata na telesno težo ter vitalne in reproduktivne organe

Povprečno telo je spremenilo telo in teža testisov živali v kontrolni in zdravljeni skupini ni pokazala pomembne razlike. Nasprotno pa teža epididimisa in semenovoda v DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)600 zdravljeni skupini se je znatno povečalo v primerjavi s kontrolo. Vnos vode in poraba hrane pri vseh živalih nista pokazala pomembnih sprememb (tabela 1). Zanimivo je, da so relativne teželedvicain jetrav DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)300 in 600 zdravljenih živali se je znatno zmanjšalo v primerjavi s kontrolo (P < 0,05).

Tabela 1. Primerjave telesne teže, testisov, epididimisa in semenovodov, ledvic in organov jeter med kontrolo in DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)-zdravljene podgane po 48 dneh študije subkronične toksičnosti.

3.2. Vpliv ekstrakta cvetov D.serrulata na biokemične parametre

Po analizah seruma so biokemični parametri, ki kažejo na delovanje jeter, pokazali, da DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)znatno znižane ravni alanin aminotransferaze (ALT) in alkalne fosfataze (ALP) v primerjavi s kontrolno skupino (P<0.05, table="" 2).="" by="" contrast,="" creatinine="" levels="" which="">delovanje ledvic, DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)100 in DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)300 skupin se je znatno povečalo v primerjavi s kontrolno skupino (P<0.05, table="" 2).="" interestingly,="" no="" difference="" in="" renal="" function="" was="" indicated="" by="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" albumin,="" and="" blood="" urea="" nitrogen(bun)levels="" in="" all=""> (Cvet Dolichandrone serrulata)zdravljenih skupin.

Tabela 2. Primerjave ravni biokemičnih parametrov v serumu med kontrolnimi in zdravljenimi podganami po 48 dneh študije subkronične toksičnosti

3.3. Učinek ekstrakta cvetov D.serrulata na razvoj kolagenskih vlaken v testisih, repnem epididimisu, ledvicah in jetrih podgan

Odseki tkiva testisa, kavdalnega epididimisa,ledvica, in jetraobarvana z Massonovim trihomom, ni pokazala razlike v debelini kolagenskih vlaken med kontrolno in zdravljeno skupino, kot je prikazano na slikah 1-4. Nasprotno pa je bilo na bazalni lamini pod semenskim epitelijem najdenih veliko kolagenskih vlaken in fibroblastov (modre puščice na sliki 1). Poleg tega so v kavdalnem epididimisu vidna fina kolagenska vlakna skupaj s tubularno steno in medtubularnimi prostori (črne zvezde na sliki 2). ). V ledvicah so kolagenska vlakna prisotna v bazalni membrani ledvičnih tubulov in Bowmanovem prostoru (modre puščice na sliki 3). Poleg tega je jetrno tkivo vseh skupin pokazalo majhno količino kolagenskih vlaken, ki obkrožajo portalno triado, ki vsebuje jetrno arterijo, portalno veno in žolčni kanal (modre puščice na sliki 4).

Slika 1. Reprezentativna histologija testisa, obarvanega z Massonovim kontrolnim trihomom: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) in DSF600 (D) skupine. Rdeče puščice=kolagenska vlakna; SG=spermatogoniji; RS=okrogel spermatid.	Slika 2. Reprezentativna histologija kavdalnega epididimisa, obarvanega z Massonovim kontrolnim trihomom: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) in DSF600 (D) skupine. Črne zvezde=kolagenska vlakna.
Slika 3. Reprezentativna histologija ledvice, obarvane z Massonovim kontrolnim trihomom: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) in DSF600 (D) skupine. Modre puščice=kolagenska vlakna; RT=ledvičnih tubulov.	Slika 4. Reprezentativna histologija jeter, ki prikazuje portalno triado, obarvano z Massonovim kontrolnim trihomom: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) in DSF600 (D) skupine. Modre puščice=kolagenska vlakna.

4. Razprava

Ta študija je pokazala, da DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)ekstrakt ni vplival najetra, ledvica, in strukture reproduktivnih organov po dajanju 48 dni. Vendar DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)rahlo spremenjenodelovanje jeter in ledvic, vendar so bile njihove serumske ravni še vedno znotraj normalnega območja v skladu s standardnimi vrednostmi. Poročali so, da so visoki odmerki (500 mg/kg telesne mase) iste vrste te rastline zavirali proizvodnjo sperme (Azuet al., 2010); vendar visok odmerek DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)(600 mg/kg telesne mase) ni spremenilo teže reproduktivnih organov ali histoloških struktur. Ta rezultat se je strinjal s prejšnjo študijo, ki je pokazala povečano koncentracijo in kakovost sperme epididimisa po DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)zdravljenje (Chaimontri et al., 2021). Poleg tega je DSF izboljšal število in fiziologijo semenčic ter histopatologijo testisov pri podganah s sladkorno boleznijo tipa 1 (Yannasithinon et al., 2021). Skupaj z našimi rezultati te preiskave kažejo, da je vodni DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček nima subkronične toksičnosti za moški reproduktivni sistem. To je mogoče pojasniti z vodnim DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)deluje antioksidativno in vsebuje celotno vsebnost fenolov, vključno s terpenoidnimi komponentami (Chaimontri et al., 2021). Pravzaprav je v literaturi dokazano, da imajo številni deli D.serrulata, ekstrahirani z etanolom ali metanolom, antioksidativne sposobnosti in snovi, kot so alkaloidi, flavonoidi, glikozidi, fenolne spojine, saponini in tanini (Chatchanayuenyong in Sujayanont, 2020; Khaing et al, 2018; Kiratipaiboon et al., 2012; Sinaphet et al, 2006; Sittiwet, 2009). Te antioksidativne sposobnosti DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)bi lahko znižal visoke ravni glukoze v hitri krvi (FBG) in malondialdehid v modih (MDA) s povečanimi ravnmi testosterona pri podganah, zdravljenih z DM tipa 2 (Yannasithinon et al., 2021).

Prejšnje študije so poročale o toksičnosti številnih snovi, vključno z rastlinskimi izvlečki, na usedline kolagenskih vlaken v testisih diabetikov (Ismail et al. 2017), hipertenzivnem epididimisu (Mazen in Zidan, 2017), porazdelitvi zvezdastih celic v jetrih (Nishimura et al, 2012; Towne). et al., 2015) inkronična ledvična bolezenbolnikov (Allon et al, 2019). Kot je prikazano v tej nedavni študiji, intenzivnost kolagenskih vlaken, prisotnih v testisih, kavdalnem epididimisu, jetrih in ledvičnih tkivih, obarvanih z Massonovim trikromom, ne kaže nobene razlike med kontrolo in DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)skupine za zdravljenje. Ti rezultati so pokazali, da DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček ni povzročil histopatološke fibroze, nakopičenih kolagenskih vlaken v vitalnih in reproduktivnih tkivih. Ti rezultati kažejo, da uživanje DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček v subkroničnem obdobju ni povzročil fibroze reproduktivnih ali vitalnih organov. Ugotovljeno je bilo, da je debelina Bowmanove kapsule med DSF (Cvet Dolichandrone serrulata) zdravljene skupine niso pokazale očitnih sprememb v primerjavi s kontrolno skupino. Poleg tega se teže teh organov med skupinami niso bistveno razlikovale, kar se je strinjalo s prejšnjo študijo, ki je opazovala miši, zdravljene v obdobju akutne toksičnosti (Katisart in Konsue, 2019).

Jetra in ledvicemikrostrukture niso pokazale očitnih sprememb po DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)dajanje v katerem koli odmerku. Vendar so bile njihove funkcije nekoliko spremenjene zaradi znižanih ravni ALT in ATP, medtem ko so bile ravni kreatinina znatno povečane. Takšne funkcionalne spremembe bi lahko razložili z aktivnostjo saponina v DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)surovi ekstrakt, kot je opisano v prejšnji študiji (Kiratipaiboon et al. 2012). Ta mehanizem je lahko podoben tistemu, ki so ga opazili pri zdravljenju s sončnim ginsengom, katerega vsebnost saponinov je povzročila spremembe parametrov krvnega seruma, povezanih z jetri inledvicafunkcijokot so ravni ALT, ALP in kreatinina (Kim et al. 2013). Vendar takšne fiziološke spremembe niso zadostovale za resno poškodbo jeter inledvicastrukture. Kot je prikazano v tabeli 2; biokemičnih parametrov v krvnem serumu iz DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)zdravljene skupine so bile spremenjene v primerjavi s tistimi v kontrolnih skupinah, vendar so bile njihove ravni še vedno v normalnih mejah, vključno z ALT[{{0}}U/L], ALP 62-230 U/L] in kreatininom [0.2-0.5 mg/dl, kot je bilo predhodno navedeno v živalskem modelu (Hayakawa et al., 2013; Pereira et al., 2017). Kot omejitev študije so druge strupene snovi v DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)in apoptotične označevalce v tkivih je treba nadalje raziskati, da se ugotovi njihova varnost za uporabo in uživanje v daljših obdobjih.

5. Zaključek

Ta študija je pokazala, da vodni DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček cvetov ni imel toksičnih učinkov na vitalne organe in moška reproduktivna tkiva, vendar je povzročil blage spremembe nekaterih parametrov zajetra inledvicafunkcijo.

6. Obeti za prihodnost

Na podlagi ugotovitev tega članka je varnost DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)dokazana je bila dolgotrajna poraba za mikrostrukture ledvic in jeter. Natančneje, DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)dokazano je, da izvleček ni toksičen za moda in epididimis. Upajmo, DSF (Cvet Dolichandrone serrulata)izvleček je mogoče nadalje razviti kot prehransko dopolnilo za reproduktivno zdravje moških.

Reference

1. ABA, PE in AMADI, AU, 2019. Ocena možnih hepatotoksičnih in nefrotoksičnih potencialov izvlečka soka Averrhoa carambola pri samicah albino podgan. Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, vol.31, no.1.https:// doi.org/10.1515jbcpp-2019-0042.PMid:31536032.

2. ALLON, M., LITOVSKY, SH, TEYJ, SUNDBERG, CA., ZHANG, Y, CHEN, Z., FANG, Y., CHEUNG, AK. in SHIU, YT, 2019. Nenormalnosti vaskularne histologije in konfiguracije kolagenskih vlaken v bolniki z napredovalimkronična ledvična bolezen.The Journal of Vascular Access, vol. 20, št. 1, str.31-40.http://dx. doi. org/10.1177/1129729818773305.PMid:29742957.

Opomba:zgoraj ni popoln seznam referenc