Polisaharidi Xinjiang Cistanche Deserticola imajo antioksidativne učinke
Aug 30, 2023
povzetek
Proučevali so antioksidativno delovanje polisaharida Cistanche deserticola in vitro. Če vzamemo askorbinsko kislino kot kontrolo, Fentonovi podobni reakciji za proizvodnjo hidroksilnih radikalov, reakcijo avtooksidacije dopamina za proizvodnjo superoksidnih anionskih radikalov, reakcijo natrijevega hipoklorita z vodikovim peroksidom za proizvodnjo singletnega kisika, difenil grenke hidrazinske radikale kot eksperimentalni model , učinki polisaharidov Cistanche deserticola na superoksidne anionske radikale, hidroksilne radikale DPPH · prosti radikal (difenil grenak hidrazinski radikal), lovilni učinek singletnega kisika. Rezultati so pokazali, da so imeli polisaharidi iz Cistanche deserticola očiten lovilni učinek na zgornje proste radikale, lovilni učinek pa je bil v pozitivni korelaciji s koncentracijo polisaharidov.
Ključne besede :Čistancon tubulosa Polysaccharide; Prosti radikal
1. Uvod
Telo v procesu oksidativnega metabolizma življenjskih aktivnosti nenehno proizvaja različne reaktivne kisikove proste radikale (ROS), ki so vmesni produkt oksidacijsko-redukcijske reakcije aerobnega metabolizma.Raziskave so pokazale, da presežek prostih radikalov napada življenjske makromolekule in različne organele, povzroča različne poškodbe na molekularni ravni, ravni celic, tkiva in organov, pospešuje proces staranja telesa in povzroča bolezni, kot so tromboza, diabetes, ateroskleroza, tumorji itd. [1]. Zaradi toksičnosti kemično sintetiziranih antioksidantov za človeško telo je iskanje naravnih antioksidantov z visoko učinkovitostjo in nizko toksičnostjo, ki lahko odstranijo kisikove proste radikale, postalo vroča raziskovalna tema na področju medicine, prehrane, kemijskega inženirstva in drugih področjih v V zadnjih letih.
Cistanche deserticola(YCMa.)je redka kitajska tradicionalna medicina in je znana kot "puščavski ginseng" [2]. Cistanche deserticola mapolisaharid je ena glavnih bioaktivnih sestavin Cistanche deserticola, vendar ni poročila o tem, ali ima polisaharid Cistanche deserticola učinek čiščenja prostih radikalov. V tem prispevku so bili s spektralno analizo določeni čistilni učinki polisaharida Cistanche deserticola na superoksidni anionski radikal, hidroksilni radikal, prosti radikal DPPH · in singletni kisik, da bi ocenili njegovo antioksidativno delovanje in zagotovili znanstveno osnovo za popoln razvoj in uporabo ta naravni vir.
kitajsko zelišče cistanche
2. Eksperimentalni del
2.1 Instrumenti in reagenti
UV-2401 UV-vidni spektrofotometer (Shimadzu, Japonska); LumatLB9507 ultra občutljiv cevni luminometer (Nemčija
BertholdTechnologies); rotacijski uparjalnik RE-52CS (Šanghajska tovarna Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronska termostatska vodna kopel (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH-meter PHS-3C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vakuumska sušilna peč (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: kupljeno pri Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, ZDA), dopamin (Kitajski inštitut za nadzor farmacevtskih in bioloških izdelkov), FeSO4, EDTA, vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 itd. so vsi domači analitski reagenti. Eksperimentalna voda je ionsko izmenjevalna destilirana voda.
2.2 Eksperimentalna metoda
2.2.1 Metoda ekstrakcijeCistanche deserticolapolisaharid
Vzemite 30 g praška Cistanche deserticola in ga dajte v 500 ml erlenmajerico. Potopite ga v petrol eter (60-90 stopinj), eter in vročo raztopino 80 % etanola (30 stopinj) za 6 ur, ostanek pa izhlapi, da se topilo posuši. Ostanek filtra namočite v vodo v razmerju 1 ∶ 10 za 24 ur, segrejte na 30 stopinj in ekstrahirajte 100 minut. Po ekstrakciji centrifugirajte, da dobite supernatant. Ko supernatant koncentriramo pod znižanim tlakom, ga oborimo s 95 % etanolom 3-kratnega volumna. Pustimo stati 24 ur pri 4 stopinjah. Po centrifugiranju se zbere in obori. Po vakuumskem sušenju lahko dobimo surovi polisaharid Cistanche deserticola. Odtehtajte 1,00 g surovega polisaharida, ga raztopite z vodo in dajte v 50 ml merilno bučko za mirovanje.
Puščavski ginseng – antioksidant
Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche v prahu
【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692
2.2.2 Preskus čistilne sposobnostiCistanche deserticolapolisaharid v O-2 · prosti radikal
Sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na O{{0}} · je bila testirana s proizvodnjo prostih radikalov superoksida (O-2 ·) iz avtooksidacije dopamina [3]. Dodajte 3.0mL {{10}}.1mmol/LpH=10.12 raztopine karbonatnega pufra, 3.0mL vode in {{18 }}.5mL raztopine vzorca polisaharida različnih koncentracij v epruveti za sušenje z lestvico po vrsti. Po 5-minutnem predgretju v vodni kopeli pri 30 stopinjah dodajte 10mL 2,0 mmol/L dopamina, predhodno segretega v vodni kopeli pri 30 stopinjah, takoj premešajte in čas, reakcijo vzdržujte pri 30 stopinjah 5 minut in takoj ustavite reakcijo z 2 kapljicama 10 mol/L HCl. Uporabite pufersko raztopino kot referenco, izmerite absorbanco (vzorec A) pri 221 nm, zamenjajte vzorec (slepi A) z 0,5 ml vode v slepi skupini in zamenjajte vzorec z 0,5 ml askorbinske kisline v kontrolni skupini. , vsak vzorec trikrat vzporedno izmerite in vzemite povprečno vrednost. O-2 · stopnja očiščenja (%)=(slepo - vzorec)/slepo × 100 %
2.2.3 Preskus čistilne sposobnostiCistanche deserticolapolisaharid na · prosti radikal OH
Desert živo zelišče cistanche—antioksidant
Sistem EDTA-Fe (Ⅱ) - metilensko modro - H2O2 je bil uporabljen za testiranje sposobnosti odstranjevanja polisaharida Cistanche deserticola na hidroksilni radikal. Načelo je, da EDTA-Fe (Ⅱ) reagira z vodikovim peroksidom, da proizvede · OH proste radikale, kar zmanjša značilen absorpcijski vrh raztopine metilen modrega pri 660 nm.
Dodajte 1.0mL 5 mmol/L raztopine LFeSO4, 1,2 mL 5 mmol/L raztopine LEDTA, 2.0mL 0.03mol/L NaH2PO{ {12}}Na2HPO4 (pH=7.4) puferske raztopine in 1,3 mL 20mmol/L raztopine vodikovega peroksida v niz 10mL epruvet z zamaški, dobro pretresite, dodajte 0.7 ml 0,2 mmol/L raztopine metilen modrega in nato dodajte 1,0 ml raztopine za testiranje in vitamin C1.0 različnih koncentracij, razredčite na 10.00 mL z vodo, dobro premešajte, hranite pri 37 stopinjah 30 minut in izmerite vrednost absorbance vsake raztopine pri 660 nm. Slepa skupina je zamenjala raztopino vzorca z vodo. Vsak vzorec se izmeri trikrat vzporedno in vzame se povprečna vrednost. · Stopnja zajemanja OH radikalov vzorca (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × V formuli 100 %: A0 -- absorbanca vrednost nepoškodovane cevi; A1 - vrednost absorbance poškodovane cevi; A2 -- Fotometrična vrednost po dodajanju vzorca.
2.2.4 Preskus DPPH · čistilne sposobnostiCistanche deserticolapolisaharid
Vzemite {{0}}.1 ml raztopine polisaharida Cistanche deserticola in jo dodajte v raztopino 5,0 ml LDPPH ·, hitro premešajte in pustite 10 minut pri sobni temperaturi,
Določite njegovo spremembo absorbance pri valovni dolžini 517 n [4]. Vsak vzorec se izmeri trikrat vzporedno in vzame se povprečna vrednost. Stopnja očistka vzorca DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × V formuli 100 %: vrednost absorbance A0 -- DPPH · (1,9 mLDPPH · +0.1 mL 50% etanola) brez vzorca; A - vrednost absorbance vzorca po reakciji z DPPH ·; B -- vrednost absorbance slepega vzorca (vzorec 0,1 ml+1.9 ml 50 % etanola).
2.2.5Cistanche deserticolatest singletnega kisika 1O2 za lovljenje polisaharida
Enočrtni kisik (1O2) nastane s kemično reakcijo NaClO in H2O2 pri 37 stopinjah [5]. Raztopina, ki se uporablja za določanje 1O2, je 100 μ L2,8 mmol/L raztopina NaClO, 400 μ L5 mmol/LNaOH raztopina, 300 μ L10 mmol/LH2O2 raztopina, 50 μ L1 mmol/Luminol raztopina. Med reakcijo se raztopini vzorca doda reakcijska raztopina, kemiluminescenčni instrument pa hkrati samodejno beleži reakcijski proces. Kot slepo kontrolo vzemite NaClO-H2O2-NaOH-Luminol. Začnite reakcijo in dodajte reakcijsko raztopino v epruveto za vzorec iz steklenice za shranjevanje kemiluminiscenčnega instrumenta v skladu s količino, ki je določena s postopkom. Nato se intenzivnost kemiluminiscence reakcijske mešanice zabeleži na snemalni papir vsakih 5 s, vsak vzorec se izmeri trikrat vzporedno in vzame povprečna vrednost.
Stopnja čiščenja se izračuna po naslednji formuli: stopnja čiščenja (%)=(kontrolna svetlobna jakost – vzorčna svetlobna jakost)/kontrolna svetlobna jakost × 100 %
3 Rezultati in razprava
3.1 Čistilni učinekCistanche deserticolapolisaharid na O-2 ·
Prednosti cistanche tubulosa—Antiooksidant
Kemična lastnost O-2 · je aktivna, zaradi česar lahko maščobne kisline na biofilmu proizvedejo peroksid in nato uničijo celice [6]. V tem prispevku je bila za določitev sposobnosti odstranjevanja O-2 · uporabljena dopaminska metoda. Sposobnost Cistanche deserticola za odstranjevanje O-2 · je prikazana na sliki 1. Rezultati so pokazali, da lahko polisaharid Cistanche deserticola zavira O-2 ·, ki nastane z avtooksidacijo dopamina, in se poveča s povečanjem koncentracija v območju izmerjenih koncentracij (0-8 mg/mL), vendar je bila sposobnost čiščenja nižja kot pri askorbinski kislini.
3.2 Čistilni učinekCistanche deserticolapolisaharid · OH
·OH je eden najbolj aktivnih kisikovih prostih radikalov v aktivni kisikovi obliki. Reagira lahko s skoraj vsako biološko makromolekulo v živih celicah in lahko vodi do biokemičnih procesov, kot so peroksidacija lipidov, polimerizacija in depolimerizacija beljakovin, razpad nukleinske kisline itd. v telesnem tkivu, kar povzroči bolezni tkiv in celic, kar povzroči pojav različne bolezni in pospeševanje staranja telesa [7]. Sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na · OH je prikazana na sliki 2. Rezultati so pokazali, da je imel polisaharid Cistanche deserticola dober učinek čiščenja na · OH in se povečuje s povečanjem koncentracije.
3.3 Sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na DPPH ·
DPPH · (difenil grenak hidrazinski radikal) je stabilen prosti radikal, ki je v organskem topilu vijoličen in ima močno absorpcijo blizu 517 nm. Po dodatku antioksidantov se nekaj prostih radikalov odstrani, kar oslabi absorpcijo, na podlagi česar lahko ocenimo antioksidativno delovanje te snovi [8]. Glej sliko 3 za DPPH · lovilno sposobnost polisaharida Cistanche deserticola. Eksperimentalni rezultati so pokazali, da je sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na DPPH · v pozitivni korelaciji z njegovo koncentracijo in da je bila sposobnost čiščenja večja kot pri askorbinski kislini.
3.4 Sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na 1O2
Enočrtni kisik je vzbujen molekularni kisik z aktivnimi kemičnimi lastnostmi. Ker imajo nesparjeni elektroni nagnjenost k združevanju, prosti radikali kažejo bolj aktivne kemične lastnosti [9]. Sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola na 1O2 je prikazana na sliki 4. Eksperimentalni rezultati so pokazali, da je bila sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola nižja od sposobnosti askorbinske kisline v območju 0-4.0mg /mL, sposobnost čiščenja polisaharida Cistanche deserticola pa je bila večja kot pri askorbinski kislini, ko je bila koncentracija večja od 4.0mg/mL.
4. Sklep
Antioksidativno delovanje polisaharidov Cistanche deserticola in vitro smo podrobno proučevali preko različnih reaktivnih sistemov brez kisikovih radikalov.Iz eksperimentalnih rezultatov je razvidno, da ima polisaharidni ekstrakt Cistanche deserticola znotraj eksperimentalnega koncentracijskega območja čistilne učinke na O-2 ·, · OH, DPPH · in 1O2, pri čemer so čistilni učinki različni za različne sistemi.To so pokazali rezultatiPolisaharid Cistanche deserticola je učinkovit eksogeni naravni antioksidant, ki je vreden nadaljnjih raziskav, razvoja in celovite uporabe..
Cistanche tubulosa 200 mg—Antiooksidant
