Akteozid: raziskave o antioksidativnem in antihipertenzivnem delovanju

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Antioksidativno in antihipertenzivno delovanje akteozida in njegovih analogov

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* in Miao-Lin HU1,*

Povzetek. Akteozid(Act), feniletanoidni glikozid, je aktivna spojina v več rastlinah in tradicionalnih zeliščnih zdravilih. Deluje skupaj s svojim strukturnim izomerom,izoakteozid(Isoact) in analog 6-O-acety-lakteozid (6-O-acetilakt), so bili uporabljeni v študiji za raziskovanjeantioksidant, anti-angiotenzinske konvertaze (ACE) in inhibitorne aktivnosti hemolizev vitroin antihipertenzivno delovanje proti spontano hipertenzivnim podganam (SHR)v vivo. Pokazali smo, da so Act, Isoact in 6-O-acetilakt je učinkovito lovil 1,1-difenil-2-pikril-hidrazilne radikale (z IC50 pri 11,4, 9,48 oziroma 9,55 μM) in superoksidne radikale (z IC50 pri 66,0, 38,5 in 39,1 μM). Kot Isoact in 6-O-acetilakt je imel podobne aktivnosti lovljenja radikalov, le Act in Isoact sta bila uporabljena za naslednje študije. Tako Act kot Isoact sta zavirala aktivnost ksantin oksidaze z IC50 pri 53,3 oziroma 62,2 μM. Tako Act kot Isoact sta prav tako znatno zavirala aktivnost ACE in hemolizo, ki jo je sprožil 2,2'-azo-bis(2-amidinopropan)dihidroklorid, vendar so bili učinki Acta močnejši kot Isoacta. Nato smo peroralno dali enkratni odmerek zdravila Act ali Isoact (10 mg/kg telesne teže) SHR in izmerili spremembe sistoličnega krvnega tlaka (SBP) in diastoličnega krvnega tlaka (DBP) v 24 urah. Act, vendar ne Isoact, je pokazal antihipertenzivno delovanje pri zniževanju SBP in DBP. Rezultati kažejo na potencialno uporabnost zakona kot zdravega prehranskega izdelka zaantioksidantzaščita in uravnavanje krvnega tlaka.

Ključne besede: Akteozid; Antihipertenzivno delovanje; Angiotenzin-konvertaza (ACE); antioksidant; hemoliza.

učinkovina akteozid v cistanči

Uvod

Akteozid(Act), feniletanoidni glikozid, ki vsebuje kofeinsko kislino, 3',4'-dihidroksi feniletanol, glukozo in ramnozo, je bil prvič izoliran iz cvetovSyringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968) in skupaj s strukturnim izomeromizoakteozid(Isoact) in derivat6-O-acetilakteozid(6-O-acetilakt), najdemo v številnih rastlinah in zeliščnih zdravilih, kot je nprLigstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Callicarpa dihotoma(Koo et al., 2006; Lee et al., 2006),Cistanche deserticolainBoschniakia rosica(Wu et al., 2006),Škropularija ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et al., 2006). Poročali so, da dejanje kaže antimetastatsko aktivnost na celicah melanoma B16 v mišjih modelih C57BL/6 (Ohno et al., 2002). Act, Isoact in 6-O-acetilakta so nedavno pokazali, da zavirajo IL-1 -aktivirano izražanje medceličnega CAM-1 in vaskularnega CAM-1 v endotelijskih celicah človeške popkovnične vene (Chen et al., 2009). Act prav tako ščiti goveje pljučne endotelne celice pred oksidativnim stresom, ki ga povzročajo hidroksilni radikali (Chiou et al., 2004) in zavira nastajanje dušikovega oksida in TNF-a z blokiranjem aktivacije AP-1 v makrofagih, stimuliranih z lipopolisaharidi (Rao et al. , 2009). Act in Isoact izkazujeta nevroprotektivne aktivnostiv vitro(Koo et al., 2005). Koo et al. (2006) so poročali, da Act in njegovi aglikoni učinkovito čistijo 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil (DPPH) in dušikov oksidv vitro. Vendar pa je nekaj študij primerjalo eno ob drugiv vitro antioksidantaktivnosti Acta in njegovih strukturno sorodnih spojin, kot sta Isoact in 6-O- acetilakt.

Za zdravljenje hipertenzije je bilo uporabljenih več razredov farmakoloških učinkovin (Mark in Davis, 2000). En razred antihipertenzivnih zdravil, znan kot zaviralci angiotenzinske konvertaze (ACE) (tj. zaviralci peptidaze), ima nizko pojavnost neželenih stranskih učinkov in so prednostni razred antihipertenzivov.

pri zdravljenju bolnikov s sočasnimi sekundarnimi boleznimi (Fotherby in Panayiotou, 1999). ACE (peptidil-dipeptid hidrolaza EC 3.4.15.1) je eksopeptidaza, ki sprošča dipeptide in vsebuje Zn, ki odstrani dipeptid s C-konca angiotenzina I, da nastane angiotenzin II, zelo hipertenzivna spojina. Večantioksidantpeptidi (reducirani glutation in karnozinu sorodni peptidi) kažejo zaviralne aktivnosti ACE (Hou et al., 2003). Prvi klinično dostopen, peroralno aktiven zaviralec ACE, kaptopril, je bil razvit za zdravljenje hipertenzije (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). Poročali so, da ima to dejanje sproščujoče učinke, posredovane z dušikovim oksidom, na endotelijsko nepoškodovane aortne obroče podgan SD (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) so poročali, da Act povzroči od odmerka odvisno znižanje sistoličnega krvnega tlaka (SBP) in diastoličnega krvnega tlaka (DBP) po njegovem intravenskem injiciranju normotenzivnim anesteziranim podganam Wistar. Vendar pa ni jasno, ali so peroralno uporabljeni Act in/ali njegovi sorodni izomeri antihipertenzivi.v vivo. V pričujoči študiji smo raziskaliv vitro antioksidantzmogljivost in zaviralne aktivnosti ACE terv vivoantihipertenzivno delovanje Acta, Isoacta in/ali 6-O-acetilaktom z uporabo podgan s spontano hipertenzijo (SHR). Pričakuje se, da bodo te študije zagotovile uporabne podatke za razvoj zdravila Act kot zdravega prehranskega izdelka.

Materiali in metode

Materiali

2,2'-azo-bis(2-amidinopropan)dihidroklorid (AAPH), ACE (enota I, kunčja pljuča), butiliran hidroksitoluen (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furil]akriloil)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenazin metosulfat (PMS), ksantin in ksantin oksidazo smo kupili pri Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, ZDA). Kaptopril je bil kupljen pri Calbiochem Co. (CA, ZDA). Act, Isoact in 6-O-acetilakt (slika 1) so bili kupljeni pri Equal Corp. (čistost > 98 odstotkov, Šanghaj, Kitajska). Druge kemikalije in reagenti so bili iz Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, ZDA).

Čiščenje dejavnost od dejanje, Isoact, in 6-O- acetilakt proti dPPH radikali avtor spektrofotometrija

Prostornina (0,3 ml) Acta, Isoacta in 6-O-acetilakt (končne koncentracije so bile 1,56 do 50 µM), BHT in askorbinska kislina (končne koncentracije so bile 2,4 do 60 µM) smo dodali 0,1 ml 1 M Tris-HCl pufra (pH 7,9). ) in nato zmešan z 0,6 mL 100 µM DPPH v metanolu do končne koncentracije 60 µM 20 minut pod zaščito pred svetlobo pri sobni temperaturi (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Izmerili smo zmanjšanje absorbance pri 517 nm in ga izrazili kot ΔA517 nm. Kot slepi poskus je bila uporabljena deionizirana voda. Čistilna aktivnost radikala DPPH (v odstotkih) je bila izračunana z enačbo: (ΔA517blank − ΔA517vzorec) ÷ ΔA517blank × 100. IC50 pomeni koncentracijo polovične inhibicije.

Zaviralno dejavnost od dejanje in Isoact proti ksantin oksidaza

Aktivnost ksantin oksidaze smo merili z določanjem tvorbe sečne kisline pri 295 nm z uporabo ksantina kot substrata (Kalckar, 1947). Različne količine Acta in Isoacta (končne koncentracije so bile 25, 50 in 75 µM) so bile predhodno zmešane s 50 µL 1 mU/mL ksantin oksidaze pri 4 stopinjah 1 uro in nato 300 µL 1 mM ksantina. so bili dodani. Spremembe absorbance pri 295 nm so bile zabeležene v 2 minutah in izražene kot ΔA295 nm/min. Inhibicijska aktivnost ksantin oksidaze (v odstotkih) je bila izračunana na naslednji način: (ΔA295 nm/min črna − ΔA295 nm/min vzorec) ÷ ΔA295 nm/min črna × 100. Kot slepi poskus je bila namesto raztopine vzorca uporabljena deionizirana voda. IC50 pomeni koncentracijo polovične inhibicije.

Čiščenje dejavnost od dejanje, Isoact, in 6-O- acetilakt proti superoksid radikali avtor spektrofotometrija

Superoksidni radikal je bil ustvarjen s sistemom PMS-NA-DH (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Vsi 0,2 ml vzorci, ki vsebujejo različne količine Acta, Isoacta in 6-O-acetilat (končna koncentracija je bila 15,6, 31,3, 62,5, 125 in 250 µM), smo dodali v zaporedju k 0.2 mL 630 µM nitromodrega tetrazolija, 0,2 ml 33 µM PMS in 0,2 ml 156 µM NADH v 100 mM fosfatnem pufru (pH 7,4). Kot slepi poskus je bila namesto raztopine vzorca uporabljena deionizirana voda. Kot pozitivno kontrolo smo uporabili askorbinsko kislino (končna koncentracija je bila 6, 9, 12 in 24 µM). Spremembe absorbance pri 560 nm so bile zabeležene v 2 minutah in izražene kot ΔA560 nm/min. Lovilna aktivnost superoksidnih radikalov (v odstotkih) je bila izračunana na naslednji način: (ΔA560 nm/min črni − ΔA560 nm/min vzorec) ÷ ΔA560 nm/min črni × 100. IC50 pomeni koncentracijo polovične inhibicije.

odločnost od AcE zaviralne dejavnost od dejanje in Isoact avtor HPLC

Vsakih 50 µL Act (0.2, 0.4, 0.5 in 2.0 µmol) in Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 in 2.0 µmol) smo predhodno zmešali s 15 µL 1U/mL ACE 5 minut, nato pa smo dodali 200 µL 0,5 mM FAPGG in reagirali pri sobni temperaturi 10 minut (Anzenbacherova et al., 2001). Dodali smo 800 µL metanola, da smo zaustavili reakcijo. Slepi poskus je bil samo FAPGG. V kontrolnem poskusu je ACE reagiral s FAPGG pod enakimi pogoji. Kromatografsko ločevanje FAPGG in FAP smo izvedli na kromatografskem sistemu Hitachi (Japonska) z 10 µL-zanko. Analiza HPLC je bila izvedena na koloni Biosil Aqua-ODS-W 5 µ (Biotic Chemical Co., Ltd., Tajvan, 250 × 4,6 mm id), velikost delcev 5 µm. Reagirano zmes smo izokratsko ločili z mobilno fazo, sestavljeno iz 0,02 M nonilamina (naravnanega na pH 2,4 s fosforno kislino) in acetonitrila v razmerju 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). Hitrost pretoka je bila 1 ml/min; volumen injekcije je bil 10 µL; detektor je bil nastavljen na 345 nm. Inhibicije ACE (v odstotkih) za Act in Isoact so bile izračunane na naslednji način: [(površina FAPGGblank − površina FAPGGcontrol) − (površina FAPGGblank − površina FAPGGvzorca) ÷ (površina FAPGGblank − površina FAPGGcontrol) × 100.

Zaviralno dejavnost od dejanje in Isoact proti posredovano z AAPH hemoliza

Verižna oksidacija podganjih rdečih krvničk (RBC) s prostimi radikali prek hemolize, posredovane z AAPH (Miki et al., 1987). Kri podgan smo dali v heparinizirane epruvete in centrifugirali pri 1000 ×gza 10 min. Po trikratnem izpiranju z 0,15 M NaCl smo pakirane rdeče krvne celice dobili s centrifugiranjem pri 1000 ×gza 10 min. Različni količini Acta in Isoacta (končne koncentracije so bile 2, 5 in 10 µM) smo zmešali 25 µL 20-odstotne suspenzije eritrocitov (V/V, v 10 mM PBS) in 25 µL 500 mM raztopine AAPH pri 37 stopinjah za 0 , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 in 3,5 ure z nežnim stresanjem. Vsako mešanico smo centrifugirali pri 1000 ×g10 minut in supernatant smo izmerili pri 536 nm. Namesto raztopine AAPH oziroma raztopine vzorca je bila uporabljena deionizirana voda kot slepa skupina oziroma kot kontrolna skupina. Inhibicija hemolize (v odstotkih) za Act in Isoact po 3 h ali 3,5 h je bila izračunana na naslednji način: (ΔA536 nm kontrola − ΔA536 nm vzorec) ÷ ΔA536 nm kontrola × 100.

Antihipertenziv učinki od dejanje in Isoact na SHr

Učinke peroralno dajanih Acta, Isoacta in kaptoprila po napajalni sondi (20 × 80 mm) na znižan SBP in znižan DBP so določili v skladu z metodo prejšnjih poročil (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Vsi poskusni postopki na živalih so sledili objavljenim smernicam (National Science Council, 1994). Samci SHR (stari 8 tednov, National Laboratory Animal Center, Taipei) so bili nameščeni posamično v jeklenih kletkah pri 24 stopinjah s ciklom 12-h svetlo-temno in so imeli prost dostop do standardne hrane za miši/podgane ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) in vodo. SHR so bili naključno razdeljeni na kontrolno in vzorčno obdelavo za določanje SBP in DBP (šest podgan na skupino). Pri kratkotrajnem antihipertenzivnem poskusu so enkrat peroralno dali 0,5 ml 10 mg Acta ali Isoacta/kg SHR ali 5 mg kaptoprila/kg SHR in krvni tlak v repu izmerili pri 2, 4, 6 in 24 h po enkratnem peroralnem dajanju. Za slepi poskus smo uporabili 0,5 ml destilirane vode. Posredni merilnik krvnega tlaka (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokio, Japonska) je bil uporabljen za štirikratno merjenje SBP in DBP pri vsakem določanju za vsako zdravljenje.

podatke analizo

Vrednosti so predstavljene kot povprečja ± SD in analizirane z uporabo enosmerne ANOVA, ki ji sledi post hoc Tukeyjev test za večkratne primerjave povprečij. Študentjet-test je bil izveden, ko sta bili primerjani samo dve skupini podatkov (kot na primer med Act in Isoact pri isti koncentraciji). P-vrednost < 0.05="" velja="" za="" statistično="" pomembno.="" statistična="" analiza="" je="" bila="" izvedena="" s="" programom="" spss="" za="" windows,="" različica="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteozidv cistanche za izboljšanje spomina

Rezultati

Čiščenje dejavnost od PPH in superoksid radikali

Act, Isoact in 6-O-acetilakt je pokazal od odmerka odvisne aktivnosti odstranjevanja DPPH pri pH 7,9 (slika 2). Vrednosti IC50 so bile 11,4, 9,48 oziroma 9,55 µM za Act, Isoact in 6-O-acetilakt. Vrednosti IC50 pozitivnih kontrol askorbinske kisline in BHT so bile 13,1 oziroma 18,5 µM.

Zaviranje od ksantin oksidaza dejavnost

Pokazalo se je, da imata Act in Isoact od odmerka odvisno zaviranje ksantin oksidaze (slika 3). IC50 je bil izračunan na 53,3 oziroma 62,2 µM za Act in Isoact.

Zaviranje od superoksid dismutaza dejavnost

Ker sta Act in Isoact zavirala aktivnost ksantin oksidaze, smo uporabili sistem PMS-NADH za generiranje superoksidnih radikalov (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). dejanje,

Isoact in 6-O-acetilakt je pokazal od odmerka odvisno aktivnost odstranjevanja superoksidnih radikalov (slika 4). Vrednosti IC50 so bile 66,0, 38,5 oziroma 39,1 µM za Act, Isoact in 6-O-acetilakt. Vrednosti IC50 pozitivne kontrole askorbinske kisline so bile 9,0 µM. Iz rezultatov slik 2 in 4 je bilo jasno, da Isoact in 6-O-acetilat je imel podobne aktivnosti lovljenja radikalov proti DPPH in superoksidnim radikalom, zato sta bila za nadaljnje preglede biološke aktivnosti izbrana samo Act in Isoact.

AcE zaviralne dejavnosti od dejanje in Isoact

V preliminarnem testu smo ugotovili, da Act in Isoact vplivata na absorbanco substrata ACE FAPGG in njegovega hidroliziranega produkta FAP pri 345 nm, ki se uporabljata za kontinuiran spektrofotometrični test (Holmquist et al., 1979). Zato je bila za spremljanje inhibitornih aktivnosti ACE uporabljena ločitev skupaj z detekcijo Act ali Isoact in FAPGG s HPLC. Slike 5A do Slike 5D so tipični kromatogrami HPLC iz 10 µl reakcijskih mešanic slepega testa (samo FAPGG, slika 5A); kontrolni test (ACE je reagiral s FAPGG, da je proizvedel FAP, slika 5B); 0.5 µmola Act (312,5 µg), ACE in FAPGG (slika 5C); in 0,5 µmola Isoacta (312,5 µg), ACE in FAPGG (slika 5D). Območje FAPGG na sliki 5B je bilo najnižje, na sliki 5A pa najvišje od štirih tipičnih kromatogramov HPLC. Območja FAPGG na slikah 5C in 5D so odvisna od inhibitornih aktivnosti ACE različnih koncentracij Acta in Isoacta. Izračunane inhibicije ACE za Act in Isoact so prikazane na sliki 5E. Dejanje je pokazalo višje zaviralne aktivnosti ACE kot Isoact, IC50 prvega pa je bil izračunan na 472 µM po površini v kromatogramih HPLC.

Zaviralno dejavnost od dejanje in Isoact proti posredovano z AAPH hemoliza

Zaviralne aktivnosti Acta in Isoacta proti hemolizi, ki jo povzroča AAPH, pri koncentracijah 2, 5 in 10 µM so ocenjevali v 3,5 h (Miki et al., 1987). Rezultati slike 6A kažejo, da se je hemoliza v eritrocitih podgan dramatično povečala (izraženo kot ΔA536 nm) po 3-h ali 3.5-h reakcijah v prisotnosti radikalov AAPH (kot kontrolne skupine, beli simbol cikla ). V odsotnosti radikalov AAPH med reakcijo 3.5-h (kot prazne skupine, črn simbol cikla) ​​so opazili malo ali nič hemolize. Zato je bila inhibicija hemolize Acta in Isoacta po 3 h ali 3,5 h izračunana na naslednji način: (ΔA536 nm kontrola − ΔA536 nm vzorec) ÷ ΔA536 nm kontrola × 100. Slika 6B

kaže, da sta tako Act kot Isoact pri 2, 5 in 10 µM pokazala od koncentracije odvisno inhibicijo hemolize, ki jo povzroča AAPH, pri čemer so inhibitorni učinki Acta bistveno močnejši od učinkov Isoacta pri vsaki uporabljeni koncentraciji.

Antihipertenziv učinki od dejanje in Isoact na SHr

SHR so prejeli enkratno peroralno dajanje Acta in Isoacta (10 mg/kg SHR), spremembe v SBP in DBP pa so bile zabeležene v 24 urah. Prej smo poročali, da je bil krvni tlak (SBP in DBP) SHR spremenljiv med 24- h (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Zato je bila uporabljena primerjava ob določenem času (kot je 2, 4, 6, 8 in 24 ur) med slepim vzorcem in vzorcem namesto pred in po samem peroralnem dajanju. Ugotovljeno je bilo, da je Act, vendar ne Isoact, učinkovito znižal SBP in DBP SHR v primerjavi s skupino s slepim (destilirana voda). SBP se je v skupini Act pomembno znižal po 2, 4 in 6 urah za 18,8, 16,5 oziroma 14,9 mmHg, vendar znižanje SBP (3,3 mmHg) 24 ur po zdravljenju z Actom ni bilo sta

umetniško pomembna (slika 7A). Kot je prikazano na sliki 7B, se je DBP znižal v skupini Act po 2, 4 in 6 urah (za 8,5, 7,6 oziroma 12.0 mmHg), čeprav je bil statistično pomemben samo rezultat, dobljen po 6 urah. (P< 0.05).="" ugotovljeno="" je="" bilo,="" da="" imata="" act="" in="" kaptopril="" (kot="" pozitivna="" kontrola)="" podobne="" učinke="" na="" sbp="" v="" zgodnjih="" fazah="" (2,="" 4="" in="" 6="" ur)="" po="" peroralni="">

akteozidv cistanche imajo dobre učinke na antioksidant

DISKUSIJA

Aktivne kisikove vrste in reakcije, ki jih posredujejo prosti radikali, so vključene v degenerativne ali patološke procese, kot so staranje, rak, koronarna srčna bolezen in Alzheimerjeva bolezen (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Več poročil se je osredotočilo na pregledovanjeantioksidantdejavnosti iz naravnih virov. V tej študiji smo najprej primerjaliantioksidantdejavnosti Acta, Isoacta in 6-O-acetilat. Act in Isoact sta strukturna izomera, v katerih je sestavni del dela kofeinske kisline vezan na C-4 hidroksilno skupino glukoze v prvem in na C-6 hidroksilno skupino glukoze v drugem. Medtem ko so sestavine ramnoze oziroma 3',4'-dihidroksi fenil etanola vezane na C-3 in C-1 hidroksilne skupine glukoznega dela v isti molekuli Act in Isoact, { {8}}O-acetilakt je derivat Acta, v katerem je ocetna kislina vezana na C-6 hidroksilno skupino v glukoznem delu (slika 1). Koo et al. (2006) so poročali, da so Act in njegovi aglikoni pokazali aktivnosti odstranjevanja DPPH, vrstni red teh aktivnosti (izražen kot IC50) pa je bil Act (1,28 µM) > kofeinska kislina (2,22 µM) > 3',4'-dihidroksi fenil etanol ( 7,72 µM) > -tokoferol (15,1 µM). V tem poročilu (slika 2) je vrstni red dejavnosti odstranjevanja DPPH (izražen kot IC50) 6-O-acetilat (9,55 µM) ≈ Isoact (9,48 µM) > Act (11,4 µM). Te vrednosti so bile primerljive ali boljše od vrednosti askorbinske kisline (IC50 13,1 µM) in BHT (IC50 18,5 µM) za lovljenje radikalov DPPH. Višji IC50 za Act v tem poročilu bi lahko izhajal iz končne koncentracije 60 µM DPPH namesto 30 µM, uporabljene pri Koo et al. poročali (2006). Ker analiza radikalov DPPH spada v reakcijo prenosa elektronov (Huang et al., 2005), se špekulira, da je derivat v C-6 hidroksilni skupini glukoznega dela, kot je acetilna skupina v {{21 }}O- acetilatni in kofeinsko kislinski del v Isoactu lahko lažje zagotovita reakcijo prenosa elektronov kot tisti iz proste hidroksilne skupine C-6 v glukoznem delu Acta za test odstranjevanja DPPH.

Deluj, 6-OPoročali so, da imata -acetilat in Isoact aktivnost odstranjevanja superoksida in vitro z uporabo sistema ksantin/ksantin oksidaza za ustvarjanje superoksidnih radikalov (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Vendar pa je naša trenutna študija pokazala, da je Act pokazal inhibitorne aktivnosti ksantin oksidaze (slika 3). Zato je bil superoksidni radikal ustvarjen z uporabo sistema PMS-NADH v tem poročilu (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) namesto sistema ksantin/ksantin oksidaza. Z uporabo sistema ksantin/ksantin oksidaza za generiranje superoksidnih radikalov so Wang et al. (1996) so dobili IC50 63 µM Act proti superoksidnim radikalom in ta vrednost je blizu vrednosti za inhibicijo aktivnosti ksantin oksidaze z Actom, kot je navedeno v tej študiji (53,3 µM). Poročali so, da kofeinska kislina kaže inhibitorne aktivnosti ksantin oksidaze (Chiang et al., 1994). Lahko se špekulira, da so lahko aktivnosti odstranjevanja superoksida z uporabo sistema za ustvarjanje ksantina/ksantin oksidaze nekaterih fitokemikalij s strukturami, povezanimi s kofeinskimi kislinami, kot sta Act ali Isoact (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). vsaj delno prispeval k zaviranju ksantin oksidaze. Zanimivo je, da Wang et al. (1996) so ugotovili, da Act (0,5 in 2,5 mM) ne zavira aktivnosti ksantin oksidaze, ki je bila določena s kisikovo elektrodo za porabo kisika med oksidacijo ksantina. Zato je pomembno upoštevati, da lahko različne metode za testiranje aktivnosti odstranjevanja superoksida povzročijo nasprotujoče si podatke.

Li et al. (1993) so poročali o podobnem obsegu inhibicije Acta in Isoacta proti hemolizi, ki jo povzroča AAPH, v eritrocitih miši. Vendar smo tukaj pokazali, da je Act pokazal veliko večjo zaviralno aktivnost proti hemolizi, ki jo povzroča AAPH, v eritrocitih podgan kot Isoact (slika 6). Ni jasno, ali je bila taka nedoslednost morda posledica razlike v vrstah glodalcev.

Kang et al. (2003) so poročali, da je Act pokazal zaviralne aktivnosti ACE in IC50 je bil 373,3 µg/mL, kar je bilo izračunano na 598 µM z uporabo Hip-His-Leu kot substratov. V tem poročilu je Act pokazal višje zaviralne aktivnosti ACE kot Isoact, IC50 prvega pa je bil izračunan na 472 µM po površini v kromatogramih HPLC (slika 5). Poročali so, da ima to dejanje sproščujoče učinke, posredovane z dušikovim oksidom, na endotelijsko nepoškodovane aortne obroče podgan SD (Wong et al., 2001). Čeprav se je Act pri podganah Wistar izkazal kot antihipertenziv,

študija je uporabila intravensko injekcijo Acta v anestezirano podgano, da bi izključila adsorpcijski faktor (Ahmad et al., 1995). Tu smo SHR ustno dali Act in določili spremembe krvnega tlaka. Ugotovili smo, da je dejstvo peroralnega dajanja, vendar ne zdravila Isoact, pokazalo antihipertenzivne učinke z znižanjem SBP in DBP v 24 urah po enkratnem dajanju (slika 7). Act v odmerku 10 mg/kg telesne mase je imel pri zniževanju SBP učinek, ki je bil podoben učinku kaptoprila v odmerku 5 mg/kg SHR in je bil boljši od kaptoprila pri zniževanju DBP.

Za zaključek je razstavljen Actantioksidantaktivnosti, inhibitorne aktivnosti ACE in antihipertenzivne učinke na SHR. Tu predstavljeni rezultati bodo koristili prizadevanjem za razvoj zdravil rastlinskega izvora ali sorodnih izdelkov z uporabo zakona, ki je bil najden v številnih rastlinah in zdravilih rastlinskega izvora, za zaščito pred oksidacijo in terapevtske učinke v prihodnosti.

Cistancheakteozidza antioksidacijo in proti staranju

1 Oddelek za znanost o hrani in biotehnologijo, Nacionalna univerza Chung Hsing, Taichung, Tajvan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Tajvan

3 Fakulteta za farmacijo, Taipei Medical University, Taipei, Tajvan

4 Podiplomski inštitut za biomedicinske materiale in inženiring, Taipei Medical University, Taipei, Tajvan

5 Raziskovalni center tradicionalne zeliščne medicine, Taipei Medical University Hospital, Taipei, Tajvan

6 Podiplomski inštitut za farmakognozijo, Taipei Medical University, Taipei, Tajvan

(Prejeto 12. marca 2012; sprejeto 20. aprila 2012)

NAVEDENA LITERATURA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani in SP Ahmad. 1995.Akteozid: novo antihipertenzivno zdravilo. fitoter. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Prehranski rakotvorni in antikarcinogeni: kisikovi radikali in degenerativne bolezni. Znanost 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek in J. Kvetina. 2001. Določanje inhibitorjev encima (angiotenzin konvertaze) na podlagi encimske reakcije, ki ji sledi HPLC.J. Farmacevt. Biomed. Analno 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser in U. Thomas. 1968.Akteozidin neoakteozid: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- obešena 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Inhibicija angiotenzinske konvertaze: pomemben napredek pri zdravljenju kardiovaskularnih bolezni. EUR. Heart J. Suppl. 9(Dodatek E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang in ML Hu. 2009.Akteozidin 6-O-acetilakteozid uravnava molekule celične adhezije, ki jih povzroča IL-1 z inhibicijo ERK in JNK v človeških žilnih endotelijskih celicah. J. Agric. hrana

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo in FJ Lu. 1994. Zaviralci ksantin oksidaze iz listov Alsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Enzyme Inhibit. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin in CF Chen. 2004.Akteozidščiti endotelne celice pred oksidativnim stresom, ki ga povzročajo prosti radikali. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD in B. Panayiotou. 1999. Antihipertenzivna terapija v preprečevanju možganske kapi: kaj, kdaj in za koga? Droge 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi in M. Nukina. 1999. Aktivnost čiščenja radikalov fenilpropanoidnih glikozidov v Caryopteris incana. Biosci. Biotehnologija. Biochem. 63: 983-988.

Gey, KF 1990. Theantioksidanthipoteza o srčno-žilnih boleznih: epidemiologija in mehanizmi. Biochem. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Botanične študije, Vol. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu in WC Hou. 2011. Antihipertenzivne aktivnosti predelanega česna na spontano hipertenzivnih podganah in hipertenzivnih ljudeh. Bot. Žrebec 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning in JF Riordan. 1979. Kontinuiran spektrofotometrični test za angiotenzinsko pretvorbo encima. Analno Biochem. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen in YH Lin. 2003. Antioksidativni peptidi z inhibitornimi aktivnostmi angiotenzinske konvertaze in aplikacije za čiščenje angiotenzinske konvertaze. J. Agric. Food Chem. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou in RL Prior. 2005. Kemija zadajantioksidanttesti zmogljivosti. J. Agric. Food Chem. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li in BH Jiao. 2008. Hipourikemijski učinki fenilpropanoidnih glikozidovakteozidScrophularia ningpoenis na ravni sečne kisline v serumu pri miših, predhodno zdravljenih s kalijevim oksonatom. Amer. J.

brada. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee in YC Kim. 2006.AkteozidCallicarpa dichotoma zmanjšuje motnje spomina, ki jih povzroča skopolamin. Biol. Pharm. Bik. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu in Z. Jia. 1993. Zaščita fenilpropanoidnih glikozidov iz Pedicularis proti oksidativni hemolizi in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang in ZB Hu. 2006. HPLC določanjeakteozidv Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu in WC Hou. 2008.antioksidant, na anti-semikarbazid občutljivo aminooksidazo in antihipertenzivne aktivnosti geraniina, izoliranega iz Phyllanthus urinaria. Food Chem. Toxicol. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin in WC Hou. 2004. Razstava monohidroksamatov asparaginske in glutaminske kislineantioksidantin inhibitorne aktivnosti angiotenzinske konvertaze. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Diferencialna spektrofotometrija purinskih spojin s pomočjo specifičnega encima. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee in HS Lee. 2003. Zaviralci angiotenzinske konvertaze fenilpropanoidni glikozidi iz Clerodenron trichotomum. J. Ethnopharmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee in YC Kim. 2005. In vitro nevroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozidov iz Callicarpa dichotoma. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh in YC Kim. 2006.Akteozidin njegovi aglikoni ščitijo primarne kulture kortikalnih celic podgan pred ekscitotoksičnostjo, ki jo povzroča glutamat. Life Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin in WC Hou. 2006. Učinki gomoljnega skladiščnega proteina jama (Dioscorea alata cv. Tainong št. 1) in njegovih peptičnih hidrolizatov na spontano hipertenzivne podgane. J. Sci. Food Agric. 86: 1489-1494.

Mark, KS in TP Davis. 2000. Možganska kap: razvoj, preprečevanje in zdravljenje z zaviralci peptidaze. Peptidi 21: 1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto in E. Niki. 1987. Verižna oksidacija rdečih krvnih celic podgan s prostimi radikali z molekularnim kisikom in njeno zaviranje z -tokoferolom. Arch Biochem. Biophys. 258: 373-380.

Državni svet za znanost. 1994. Vodnik za nego in uporabo laboratorijskih živali. Državni znanstveni svet, Tajvan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara in I. Saracoglu. 2002. Protimetastatsko delovanjeakteozid, feniletanoidni glikozid. Biol. Pharm. Bik. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Oblikovanje specifičnih zaviralcev angiotenzinske konvertaze: nov razred peroralnih antihipertenzivov. Znanost 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh in YM Tzeng. 2009. Sestavine Anisomeles India in njihove protivnetne aktivnosti. J. Ethnopharmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal in N. Kowal 1996. Oksidativna škoda pri Alzheimerjevi bolezni. Nature 382: 120-121. Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao in Z. Jia.

1996. Učinki čiščenja fenilpropanoidnega glikozida iz Pedicularis na superoksidnem anionu in hidroksilnem radikalu z metodo spin trappinga. Biochem. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau in ZY Chen. 2001. Sproščujoči učinki izvlečka in prečiščenega ligstruma purpurascensakteozidv aortnih obročih podgan. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung in TH Tsai. 2006. Določitevakteozidpri Cistanche deserticola in Boschniakia rossica ter njena farmakokinetika pri prosto premikajočih se podganah z uporabo LC-MS/MS. J. Chromatogr. B 844: 89-95.