Akteozid, sestavni del Stachys Sieboldii MIQ, je lahko obetaven antinefritik: Učinek akteozida na nefritis tipa polmeseca proti GBM pri podganah

Za več informacij:ali.ma@wecistanche.com

Kazumi Hayashi, Tadashi Nagamatsu, Mikio Ito, Tomohisa Hattori in Yoshio Suzuki

Oddelek za farmakologijo, Fakulteta za farmacijo, Univerza Meijo, 150 Yagotoyama, Tenpaku-Ku, Nagoya 468, Japonska

POVZETEK

Učinkiakteozid(ACT) na anti-GBM v obliki polmesecanefritispri podganah so raziskovali. Ko so podgane zdravili zAkteozidod 1. dne po intravenski injekciji anti-GBM seruma,Akteozidzavirajo povečanje izločanja beljakovin v urin. VAkteozidpri podganah, ki so bile zdravljene z zdravilom, so bile vsebnosti holesterola in kreatinina ter proizvodnja protiteles proti kunčjemu r-globulinu v plazmi nižja kot pri kontrolnih podganah z nefritom. Histološko opazovanje je pokazalo, da je to sredstvo zaviralo hipercelularnost in incidenco tvorbe polmeseca, adhezijo kapilarne stene na Bowmanovo kapsulo in fibrinoidno nekrozo v glomerulih. Poleg tega so bile usedline podganjih IgG in C3 na GBM znatno manjše vAkteozidzdravljeni skupini kot v kontrolni nefritični skupini. Če smo zdravljenje začeli od 20. dne po intravenski injekciji anti-GBM seruma, s katero smo ugotovili bolezen,Akteozidpovzročilo podoben učinek nanefritičnipodgane, kot je navedeno zgoraj. Ti rezultati kažejo, da je Acteoside lahko koristno zdravilo proti hitro napredujočemu glomerulonefritisu, za katerega so značilne hude glomerularne lezije z difuznimi polmeseci.

Ključne besede: anti-GBM tipa polmesecanefritis,Akteozid, Podgana-IgG, Podgana-C3

Click to Cistanche uporablja z Acteoside

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) predpisujejo za številne bolezni, ta gomolj pa Kitajci, Rusi in Japonci uporabljajo kot hrano. Nedavne raziskave so pokazale, da chyrogi deluje proti anoksiji (1), zavira aktivnost hialuronidaze (2) in imunosupresivno (3).

Po drugi strani pa je omenjeno, da imunski odziv sodeluje pri nastanku nefritisa. Natančneje rečeno, poškodbo glomerulov posreduje odlaganje imunskega kompleksa v glomerulih, čemur sledi imunsko vnetna reakcija, vključno z aktivacijo komplementa in sproščanjem drugih vnetnih mediatorjev. V novejših študijah je bilo veliko pozornosti namenjene prispevku celično posredovanega imunskega odziva pri razvoju glomerulonefritisa (4, 5). Še več, Neild et al. (6) so poročali, da je supresija delovanja celic T s ciklosporinom A (CyA) blokirala kasnejši razvoj glomerularnih lezij pri akutnem nefritisu. Poročali smo, da imajo mizoribin (7), azatioprin (7), CyA (8), metilprednizolon (9) in nekatere rastlinske komponente (10) imunosupresivno delovanje, ki je pokazalo ugoden učinek na anti-GBM nefritis. Čeprav ti imunosupresivi delujejo antinefritično, jih je zaradi stranskih učinkov težko uporabiti v kliničnih preskušanjih (11). Zato se pričakuje razvoj novega imunosupresivnega sredstva za zdravljenje nefritisa v klinični fazi.

Namen te študije je bil razjasnitiantinefritični učinek akteozida, sestavina chyorogija, na nefritis anti-GBM tipa polmeseca pri podganah.

MATERIALI IN METODE

Živali

Samci podgan vrste Sprague-Dawley, težki pribl. Za vse poskuse smo uporabili 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu). Te živali so bile med poskusnim obdobjem nameščene v klimatiziranem prostoru pri 23 ± 1 C.

Droge

Kemijska struktura akteozida (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tokio) je prikazana na sliki 1. Ta komponenta je bila ekstrahirana iz nadzemnega dela chyorogija (Stachys sieboldii MIQ). Čistost ACT je bila preverjena s HPLC (kolona: TSK gel ODS-80TM (4.0 id x 250 mm); mobilna faza: 20 odstotkov CH3CN/H2O, ki vsebuje 10 AcOH; Hitrost pretoka: 0,7 ml/min; Temp.: sobna temperatura; Zaznavanje: UV 254 nm) pri Tsumura Co., Ltd. ACT, uporabljen v teh poskusih, je imel čistost večjo od 9970. ACT je bil raztopljen v destilirani vodi. Uporabljena sta bila tudi dipiridamol (Dip) (Boehringer Ingelheim, Nemčija) in azatioprin (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, ZDA); Ta zdravila so bila suspendirana v 1070 arabskem gumiju.

Indukcija anti-GBM nefritisa tipa polmeseca

Anti-GBM nefritis tipa polmeseca je bil induciran z imunizacijo podgan, ki so prejele nefritogeni odmerek kunčjega anti-podganjega GBM (anti-GBM) seruma, s kunčjim r-globulinom (rG) v skladu z rahlo modifikacijo predhodno opisane metode ( 12). V tem poskusu so podgane tehtale pribl. 160 g smo dajali 0,6 ml/žival seruma proti GBM v repno veno.

Učinek testnih zdravil smo ocenjevali tako, da smo jih dajali od 1. dneva po injiciranju anti-GBM seruma (heterologna faza) oziroma 20. dan po injiciranju anti-GBM seruma (avtologne faze). V poskusih so zbrali 24--urne vzorce urina in podgane nato razdelili v 5 ali 6 skupin po 8 podgan, tako da je bila povprečna vsebnost beljakovin v 24--urnem urinu v vsaki skupini podobni ravni.

Vrednotenje antinefritičnega učinka testiranih zdravil

V poskusu zdravljenja z zdravili iz heterologne faze so štirim skupinam peroralno dajali 3, 10 ali 30 mg/kg/dan ACT oziroma 100 mg/kg/dan Dip v volumnu 1 ml na 100 g. telesne teže, dnevno od 1. dneva ali dan po iv injekciji anti-GBM seruma do 40. dneva. V poskusih zdravljenja z zdravili iz avtologne faze so tri ali štiri skupine peroralno dobivale 3, 10 ali 30 mg/kg/dan ACT (A) ali 30 mg/kg/dan ACT, 100 mg/kg/dan Dip ali 50 mg/kg/dan Aza (B) v volumnu 1 ml na 100 g telesne teže dnevno od 20. dne po iv injekciji anti-GBM seruma do 40. (A) ali 45. (B) dan. Preostali skupini so oralno dali vehikel (destilirano vodo) namesto testnih zdravil in je služila kot kontrola nefrita. Poleg tega je bila za primerjavo z nefritičnimi skupinami uporabljena nezdravljena (normalna) skupina.

Zbirke urina in krvi

{{0}}-urni vzorci urina so bili pridobljeni tako, da je bila vsaka žival 24 ur v posamezni metabolični kletki. Na začetku odvzema urina je vsaka žival prejela 8 ml destilirane vode peroralno brez hranjenja. Urin smo nato centrifugirali pri 3,000 obratih na minuto 15 minut pri 41°C in supernatant uporabili za določanje beljakovin. Na zadnji dan poskusa smo iz ledvične vene vsake anestezirane podgane z brizgo za enkratno uporabo odvzeli 20 ml krvi in ​​jo dali v epruveto, ki je vsebovala 0,125 ml heparina. Kri smo centrifugirali pri 5,000 obratih na minuto, da smo dobili plazmo za določanje nekaterih parametrov.

Določitev beljakovin v urinu, holesterola in kreatinina v plazmi

Izločanje beljakovin z urinom je bilo določeno po metodi Kingsbury et al. (13) in izraženo kot mg/24 ur urina. Vsebnost holesterola je bila določena s komercialnim testnim kompletom (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokyo) (14) in izražena kot mg/dl plazme. Vsebnost kreatinina je bila določena z uporabo kompleta za določanje kreatinina (CRE-EN; Kainos, Inc., Tokio) in izražena kot mg/dl plazme/100 g telesne teže.

Merjenje plazemskega titra protiteles proti -G

Titer protiteles v plazmi proti rG je bil določen s posredno hemaglutinacijo z uporabo senzibiliziranih ovčjih rdečih krvničk (15).

Merjenje ravni komplementa CH50 v plazmi

Raven plazemskega komplementa CH50 smo določali po Mayerjevi metodi (16).

Ocena histopatoloških parametrov

Za svetlobno mikroskopsko študijo so bile ledvice izolirane iz podgan, anesteziranih s pentobarbitalom, nato dehidrirane in fiksirane, tako da so tkiva postopno potopili v različne zaskrbljujoče tradicije etilnega alkohola od nizke do visoke. Tkiva so bila nato vdelana v parafin in razrezana na 2 do 3 em debele rezine. V študijah anti-GBM nefritisa polmesečastega tipa so bili rezi obarvani s hematoksilinom in eozinom ter Massonovim trikromom. Pod svetlobnim mikroskopom smo opazovali število jeder (hipercelularnost), tvorbo polmeseca, adhezijo Bowmanove kapsule na steno kapilare (adhezija) in fibrinoidno nekrozo v glomerulih. Za oceno teh parametrov je bil z metodami naključnega vzorčenja izbran ekvatorialni prerez. Opaženih je bilo 50 glomerulov/prečnih prerezov in stopnja pojava tvorbe polmeseca, adhezije in fibrinoidne nekroze je bila izražena kot odstotek glomerulov (incidenca), ki imajo te morfološke spremembe, kot je opisano prej (17). Ocenjevanje je opravila druga oseba, ki ni poznala identitete posameznega vzorca. Za oceno hipercelularnosti je bil izbran ekvatorialni prerez z metodo naključnega vzorčenja. Število jeder (vključno z jedri glomerularnih celic in eksudativnih levkocitov) je bilo prešteto in izraženo kot povprečno število na glomerularni presek v 10 glomerulih/presek.

Imunohistokemija

V tkivih za imunoencimsko barvanje podganjega IgG smo parafinske reze razrezali, kot je opisano zgoraj, in reze obdelali z 0.1 odstotno proteazo v 0.05 M Tris- HCl pufru 7 minut in nato speremo v ohlajeni 0.01 M fiziološko raztopino s fosfatnim pufrom (PBS), pH 7,4. Odseke smo nato 90 minut inkubirali z mišjim monoklonskim protitelesom proti podganjemu IgG (mAb) (Cappel, West Clester, PA, ZDA) pri razredčitvi 1:100. Odseke smo ponovno sprali s PBS, obdelali z 0,3-odstotnim vodikovim peroksidom v metanolu 20 minut, da smo blokirali endogeno peroksidazo, in inkubirali z biotiniliranim afinitetno prečiščenim protimišjim IgG in avidinirano peroksidazo hrena s 3,3'-diaminobenzidin tetrahidrokloridom (DAB) (Vecta stain ABC Kit; Vector institution, Burlingame, CA, ZDA). Vsi koraki so bili izvedeni pri sobni temperaturi.

Tkiva za imunoencimsko barvanje proliferirajočega celičnega jedrnega antigena (PCNA), ki je marker za celično proliferacijo, smo fiksirali v 10-odstotnem formalinu v PBS, tkiva, vdelana v parafin, pa smo obarvali po enakem postopku kot za podganji IgG, razen za uporaba mAb (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, ZDA) za PCNA.

Kvantifikacija podganjega IgG, C3 in PCNA na odsekih tkiva

Celotno površino imunoreaktivnega podganjega IgG in C3 v glomerulih smo izmerili v 30 glomerulih na odsek z uporabo slikovnega analizatorja (Toyobo Image analyzer V1; Toyobo Co., Ltd., Tokio) in predstavili kot mm2/glomerularni presek (GCS ). PCNA-pozitivne celice v glomerulu so bile preštete z analizatorjem slike in rezultati so bili izraženi kot število celic/GCS

Statistične analize

Podatki predstavljajo povprečje ± SD, rezultati pa so bili statistično ovrednoteni z ANOVA. Ko so bili ti rezultati parametrični, so bili statistično ovrednoteni z Duncanovim testom. Kadar so bili rezultati neparametrični, so bili statistično ovrednoteni s Kruskal-Wallisovim testom. Zaviralni odstotek je bil izračunan na naslednji način:

Inhibitorni odstotek ( odstotek )=(kontrola - testno zdravilo) x 100 / (kontrola - normalno)

REZULTATI

Učinek Acteozida pri anti-GBM nefritisu tipa polmeseca

Izločanje beljakovin v urinu (sliki 2 in 3): Ko se je zdravljenje z ACT začelo na dan po injiciranju seruma proti GBM (heterologna faza), so prvo pomembno supresijo beljakovin v urinu opazili 5. dan pri 30 mg. /kg, po; 20. dan po 3 in 10 mg/kg, peroralno; in 40. dan z Dip pri 100 mg/kg, po

Ko je bil ACT dan od 20. dne po injiciranju antiGBM seruma (avtologna faza), je ACT pri 10 in 30 mg/dan zaviral povečanje izločanja beljakovin v urinu do 30. dne. Po drugi strani pa je bil Aza pri 50 mg/kg šibkejši od ACT pri 30 mg/kg, čeprav ne bistveno, Dip pa ni imel učinka.

Vsebnost holesterola in kreatinina v plazmi (tabela 1): Vsebnost holesterola in kreatinina v plazmi smo določili 40. ali 45. dan. Vsebnost holesterola v plazmi pri nefritičnih kontrolnih podganah je bila izrazito povišana. Nasprotno pa se je zvišanje vsebnosti holesterola zmanjšalo z ACT (30 mg/kg) iz heterologne faze za 60 odstotkov kontrolne ravni in z ACT (30 mg/kg) iz avtologne faze za 62'o kontrole. ravni. Vsebnost kreatinina v plazmi pri nefritičnih podganah je bila prav tako povišana. Po drugi strani pa je bila vsebnost kreatinina v plazmi pri ACT (30 mg/kg) obeh fazno zdravljenih podgan podobna kot pri normalnih podganah.

Titer protiteles v plazmi proti rG: Nefritične podgane so pokazale izrazito pospešeno proizvodnjo protiteles. Pospešeno nastajanje protiteles je bilo zavrto na 72 odstotkov kontrolne ravni z zdravljenjem z ACT (10 in 30 mg/kg) iz heterologne faze (tabela 2), ACT (30 mg/kg) iz avtologne faze in Aza do 70 oziroma 51 odstotkov kontrolne ravni (podatki niso prikazani) in nanjo ni vplival Dip.

Histološko opazovanje (tabela 3, sliki 4 in 5): Svetlobni mikroskopski pregled nefritičnih glomerulov je pokazal lezije, za katere je značilna huda tvorba polmeseca, adhezija, fibrinoidna nekroza in proliferacija mezangialnih celic. Histološko opazovanje je pokazalo, da je ACT (iz heterologne in avtologne faze) zaviral hipercelularnost in incidenco tvorbe polmeseca, adhezije in fibrinoidne nekroze v glomerulih do 40. ali 45. dne. Poškodbe pri nefritičnih podganah, zdravljenih z Dip in Aza, so bile tudi manjše kot pri kontrolnih nefritičnih podganah. Ko pa so bile nefritične podgane zdravljene z Dipom iz avtologne faze, je Dip le malo vplival na histološke spremembe (podatki niso prikazani).

Proliferacijo glomerulnih celic, in sicer povečanje PCNA-pozitivnih celic v glomerulih, so opazili prinefritične podgane. Nasprotno pa 30. dan 52-odstotno zmanjšanjeopazili so motnjo v celični proliferaciji in to je bilo povezano ws pomembnim zmanjšanjem glomerulnih celiclularnost v primerjavi s kontrolo (tabela 3).

Odlaganje imunskega reaktanta (tabela 2 in slika 6): Možno je bilo opaziti odlaganje podganjega IgG in C3 na GBM pri nefritičnih kontrolnih podganah; vendar jih pri normalnih podganah niso našli. ACT (30 mg/kg) iz heterologne faze je zmanjšal odlaganje podganjega IgG na GBM za 72 odstotkov kontrolne ravni. Poleg tega je ACT (3, 10 in 30 mg/kg) iz heterologne faze zmanjšal odlaganje podganjega C3 na GBM za 60 do 69 odstotkov do 40. dne. Tudi ko je bil ACT dan iz avtologne faze, je bila inhibicija podganjega IgG in odlaganja C3 podobna zgornjim rezultatom. Padec ni vplival na odlaganje podganjega IgG in C3. Aza pa je zmanjšala odlaganje podganjega IgG in C3 na GBM za 67 oziroma 68 odstotkov (podatki niso prikazani).

Učinek ACT na aktivnost komplementa in depozite C3 na GBM pri prvotnem tipu anti-GBM nefritisa (slika 7)

Prvotni tip anti-GBM nefritisa je bil induciran pri podganah z injiciranjem 0.6 ml anti-GBM seruma v njihove repne vene, kot je opisano prej (18). Nefritične podgane so bile predhodno in naknadno zdravljene z ACT v odmerku 30 mg/kg, peroralno in faktorjem strupa kobre (CVF) (Sigma) v odmerku 10 fig/podgano, ip, trikrat vsakih 8 ur. Zdravljenja z ACT in CVF so zmanjšala izločanje beljakovin z urinom z zaviralnim odstotkom pribl. 35 stopinj oziroma 71 odstotkov. CH50 pri nefritičnih kontrolnih podganah je bil izrazito nižji kot pri normalnih podganah 24 ur po indukciji nefritisa. ACT je zaviral zmanjšano CH50 in povečano odlaganje C3 na GBM pri nefritičnih kontrolnih podganah. CVF je odpravil odlaganje CH50 in C3. Poleg tega je v poskusu in vitro ACT zaviral aktivacijo komplementa za 37 odstotkov. Ko so ACT dajali normalnim podganam, je ACT zmanjšal aktivacijo komplementa v poskusu ex vivo (podatki niso prikazani).

DISKUSIJA

Hitro napredujoči glomerulonefritis in ledvične bolezni pri Goodpasturejevem sindromu so maligne bolezni, ki preidejo v odpoved ledvic 2 ali 3 mesece po razvoju bolezni (19). Značilnosti tega nefritisa so vključevale hipercelularnost, izrazito infiltracijo nevtrofilcev in monocitov ter tvorbo polmeseca v glomerulih. Pri tej bolezni se v glavnem uporablja koktajl terapija z imunosupresivi, antiagregacijskimi zdravili in steroidi. Po drugi strani, čeprav je CyA presežen imunosupresiv, ki ugodno vpliva na eksperimentalni nefritis (6, 8), so poročali, da CyA povzroča disfunkcijo ledvic in povzroča ireverzibilne histološke spremembe v glomerulih (11). Metilprednizolon ima veliko stranskih učinkov. Poleg tega sta dve izmed težav povratni fenomen in odtegnitveni sindrom po dolgotrajnem zdravljenju s tem zdravilom. Zato je treba razviti novo imunosupresivno sredstvo za zdravljenje nefritisa, ki ima manj stranskih učinkov.

Anti-GBM nefritis polmesečastega tipa je eksperimentalni model, ki kaže histološke in patološke spremembe, podobne tistim pri hitro napredujočem glomerulonefritisu in ledvični bolezni Goodpasturjevega sindroma (20). Razvoj in napredovanje tega nefritisa sta sestavljena iz dveh faz, ki ju posredujejo imunski odzivi. Zgodnja reakcija, tako imenovana heterologna faza, je posledica odlaganja protiteles proti GBM, čemur sledi od komplementa odvisno kopičenje polimorfonuklearnih granulocitov (21, 22). Pozna faza (avtologna faza) se razvije z vezavo avtolognih protiteles, odloženih vzdolž GBM, in dotokom monocitov/makrofagov v glomerule po tej reakciji (22, 23). Za ta nefritis so značilne dvofazne beljakovine v urinu in hipercelularnost, ki vključuje tvorbo polmeseca in fibrinoidno nekrozo. Domneva se, da tvorbo polmeseca posredujejo migrirani makrofagi in proliferirane epitelijske celice (22, 24).

Prej smo poročali, da sta mizoribin in Aza, imunosupresivno sredstvo (7), zavirala zvišanje plazemskih protiteles proti kunčjim IgG in Pachyman, glavna sestavina Poria cocos (18), zmanjšala stopnjo odlaganja C3 na GBM in oba sta bila izrazito učinkovit proti anti-GBM nefritisu.

Zdravljenje z ACT je zaviralo razvoj anti-GBM glomerulonefritisa, kot so ocenili z zmanjšanjem proteinurije in holesterola v plazmi, preprečevanjem okvare ledvične funkcije in preprečevanjem progresivnih histoloških sprememb, vključno z razvojem glomerularnih polmesecev in hipercelularnosti. Na 40. dan je samo ACT pri 30 mg/kg pomembno zmanjšal količino odlaganja podganjega IgG na GBM, posredovano z zaviranjem proizvodnje protiteles v tem nefritičnem modelu. Po drugi strani pa se je količina usedlin C3 na GBM zmanjšala z ACT na 3, 10 ali 30 mg/kg. Poleg tega je ACT znatno zaviral aktivacijo komplementa v poskusih in vitro in ex vivo. Zmanjšanje CH50 pri nefritičnih kontrolnih podganah je zaviral ACT. Zgornji podatki kažejo, da ACT zavira ledvično poškodbo z zaviranjem aktivacije komplementa, ker je komplementni membranski napadalni kompleks (MAC) vključen v patogenezo glomerularne poškodbe (25), sublitični MAC pa ima potencialne vnetne mediatorje, ki bi lahko bili povezani s poškodbo glomerulov, proliferacija mezangialnih celic in difuzije zunajceličnega matriksa, kot so reaktivne kisikove vrste (26), proteaze (27), prostaglandini (28) in interlevkin-1 podobni citokini (29), kot tudi kolagen (30).

Menijo, da je aktivacija komplementa tesno povezana z infiltracijo levkocitov. V nedavnih študijah so poročali, da C5a izzove adhezijo monocitov in nevtrofilcev na mezangialne celice oziroma endotelijske celice (31, 32). Zato bomo v nadaljnji študiji raziskali učinek ACT na kopičenje levkocitov v glomerulih.

REFERENCE

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H in Kawahara Y: Študije o Stachys sieboldii MIQ. II Delovanje proti anoksiji in aktivne sestavine. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (Abstrin angleščina)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T in Kakegawa H: O glikozidnih sestavinah Stachys sieboldii MIQ. in njihove učinke na aktivnost hialuronidaze. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (povzetek v angleščini)

3 Sasaki H, Nishimura H in Morita T: Imunosupresivna načela Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T in Atkins RC: Prispevek mononuklearnih levkocitov k napredovanju eksperimentalne žariščne glomerularne skleroze. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG, Neale TJ in Holdsworth SR: Sodelovanje limfocitov T pri eksperimentalnem glomerulonefritisu, povzročenem s protitelesi. Kidney Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH, Ivory K in Williams DG: Ciklosporin A zavira serumsko bolezen saktusa pri kuncih. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983)

7 Okamoto K, Ito M in Suzuki Y: Študije o antinefritičnem učinku na mizoribin (p-INN, Bredinin®), novo imunosupresivno sredstvo, in azatioprin (2): Učinek na nefritis tipa polmeseca proti GBM pri podganah. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M in Suzuki Y: Zaviranje anti-GBM nefritisa pri podganah s ciklosporinom A. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M in Suzuki Y: Izrazito antinefritično delovanje in manj škodljivih učinkov metilprednizolon sultanata z intermitentnim dajanjem pri podganah. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N in Suzuki Y: Študije o antinefritičnih učinkih rastlinskih komponent (6): Antinefritični učinki in mehanizmi felogenskega drina (OB-5) na srpastih tipa anti-GBM nefritis pri podganah (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992)

11 Mason J: Učinki zdravila Sandimmune na ledvice. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y in Suzuki Y: Nefritis polmesečastega tipa, ki ga povzroči serum proti glomerularni bazalni membrani (GBM) pri podganah. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G in Post AL: Hitro določanje albumina v urinu. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Zurkowski P: Hitra metoda za določanje holesterola z enim reagentom. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G in Post AL: Zatiranje sinteze protiteles s prostaglandinom E kot mehanizem za preprečevanje glomerulonefritisa mišjega imunskega kompleksa. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: Komplement in fiksacija komplementa. V Experimental Immunochemistry, str 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T in Suzuki Y: Študije o antinefritičnem učinku TJ-8014, novega japonskega zeliščnega zdravila (3): Učinki na nefritis tipa polmeseca proti GBM pri podganah. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M in Suzuki Y: Študije o antinefritičnih učinkih rastlinskih komponent (3): Učinek pachymana, glavne sestavine Poria cocos Wolf na izvor nalnega tipa anti-GBM nefritis pri podganah in njegovi mehanizmi. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T in Takuma T: Glikoprotein, ki inducira nefrotoksično protitelo: Njegova izolacija in čiščenje iz podganje glomerularne bazalne membrane. J Immunol 102, 593 601 (1969)

20 Falk RJ: Ledvična bolezen, povezana z ANCA. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC in Ward PA: Zahteve za levkocitne adhezijske molekule pri nefrotoksičnem nefritisu. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: Rastni faktorji in glomerularna skleroza. Kidney Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD in Atkins RC: Kvantifikacija intraglomerularnih mononuklearnih fagocitov pri eksperimentalnem glomerulonefritisu pri podganah z uporabo specifičnih monoklonskih protiteles. Patologija 19, 290-293 (1987)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC in Thomson NM: Vpletenost makrofagov v eksperimentalni kronični imunski kompleksni glomerulonefritis. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ in Adler S: Odlaganje kompleksa napada membrane pri eksperimentalni glomerularni poškodbi. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P in Couser WG: Komplementni membranski napadalni kompleks stimulira proizvodnjo reaktivnih kisikovih presnovkov s kultiviranimi mezangialnimi celicami podgan. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 Johnson RJ, Couser WG in Alpers CE: Človeška nevtrofilistična proteaza, esteraza in katepsin G lahko posredujejo glomerularno poškodbo in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG in Salant DJ: Vloga tromboksana pri poškodbi glomerula, ki jo povzroča komplement. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K in Gemsa D: Aktivacija glomerularnih mezangialnih celic s terminalnimi komponentami komplementa. Stimulacija sproščanja prostanoidov in interlevkinu-l podobnega faktorja. Imunobiologija 168, 34-35 (1986)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K in Hansch GM: C5b_8 in C5b_9 modulirata sproščanje kolagena človeških glomerularnih epitelijskih celic. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM in Wrigh SD: Prehodna adhezija nevtrofilcev na endotelij. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D in Brenner BM: Kemoatraktanti izzovejo adhezijo monocitov na človeške mezangialne celice in poškodbo mezangialnih celic. Kidney Int 42, 480-487 (1992)