siJezik
Dom / znanje / Vsebine

znanje

Antioksidativne in proti utrujenosti sestavine okra

Mar 21, 2022

Fangbo Xia, Yu Zhong, Mengqiu Li, Qi Chang, Yonghong Liao, Xinmin Liu * in Ruile Pan *


Inštitut za razvoj zdravilnih rastlin, Peking Union Medical College, Kitajska medicinska akademijaSciences, No 151, North Road Malianwa, Haidian District, Peking 100193


Za več informacij:ali.ma@wecistanche.com



Povzetek


Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench), zdrava zelenjava, je zelo razširjena v tropskih in subtropskih območjih. Prejšnje študije so dokazale, da imajo okra strokiaktivnost proti utrujenosti,in cilj te raziskave je razjasnitiproti utrujenostisestavine. Da bi to dosegli, smo stroke bamije (OPD) razdelili na semena (OSD) in lupine (OSK) ter primerjali vsebnost skupnih polisaharidov, skupnih polifenolov, skupnih flavonoidov, izokvercitrina in kvercetin-3-O-gentiobioze ter antioksidanta dejavnost in vitro inaktivnost proti utrujenostiin vivo med OSD in OSK. Vsebnost skupnih polifenolov je bila v OSD 29,5 odstotka, v OSD pa 14,8 odstotka, v OSK pa 1,25 odstotka oziroma 43,1 odstotka. Skupni flavonoidi, izokvercitrin in kvercetin-3-O-gentiobioza (5,35 odstotka, 2,067 odstotka oziroma 2,741 odstotka) so bili odkriti samo v OSD. Testi antioksidantov, vključno z lovljenjem 1-difenil-2-pikrilhidrazila (DPPH), zmanjševanjem železove antioksidativne moči (FRAP) in testom redukcijske moči ter testom plavanja z obremenitvijo teže, so pokazali, da ima OSD znatne antioksidativne inučinki proti utrujenosti. Poleg tega je biokemična določitev pokazala, daaktivnost proti utrujenostiOSD povzroči znižanje ravni mlečne kisline v krvi (BLA) in sečninskega dušika (BUN), povečanje skladiščenja glikogena v jetrih in spodbujanje antioksidativne sposobnosti z znižanjem ravni malondialdehida (MDA) in povečanjem superoksid dismutaze (SOD) in glutation peroksidaze (GSH- Px). Ti rezultati so dokazali, da so semena okraproti utrujenostidel strokov bamije, aktivne sestavine pa so bili polifenoli in flavonoidi.


Ključne besede: okra; proti utrujenosti; antioksidant; polifenoli



Cistanche

1. Uvod


Utrujenost je kompleksen fiziološki pojav, ki je opredeljen kot težave pri začetku ali vzdrževanju prostovoljnih dejavnosti [1]. Poleg tega, da se povečuje s starostjo in se kaže pri bolnikih z rakom, depresijo, okužbo z virusom HIV, multiplo sklerozo in Parkinsonovo boleznijo, postaja utrujenost vse pogostejši simptom pri normalnih ljudeh z naraščajočim tempom sodobnega življenja [2–4]. Velike raziskave v skupnosti so pokazale, da se več kot polovica odrasle populacije pritožuje nad utrujenostjo [5,6]. Dolgotrajno nakopičena ali kronična utrujenost ne le znižuje kakovost življenja, ampak vodi tudi v sindrom kronične utrujenosti in druge organske bolezni ter vodi celo v karoshi (nenormalno smrt zaradi akutnih srčno-žilnih bolezni, ki jih povzroča preobremenitev [7]). Obstaja več teorij o vzrokih utrujenosti, kot je teorija izčrpanosti, ki trdi, da je utrujenost posledica pomanjkanja razpoložljivega ATP za sklopitev aktin-miozin, črpanje Na`/K` in privzem Ca2` s sarkoplazmatskim retikulumom [8–11]. ]; teorija motenj homeostaze, ki kaže, da je utrujenost posledica kopičenja različnih presnovnih stranskih produktov [10,12]; in teorija katastrofe, ki kaže, da se lahko utrujenost razvije zaradi okvare na enem ali več mestih na poti proizvodnje sile [13]. Med temi naj bi imel oksidativni stres pomembno vlogo pri etiologiji utrujenosti [10, 13–16]. Izkazalo se je, da imajo antioksidanti iz nekaterih zelišč znatne učinke proti utrujenosti, kar kaže, da je zdravljenje z antioksidanti lahko dragocen terapevtski pristop proti utrujenosti [17–20]. Zato potrošniki iščejo več naravnih antioksidantov v svoji prehrani za zmanjšanje oksidativne škode in boj proti utrujenosti. Okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench, družina: Malvaceae), znana tudi kot ženska prst, bhindi in gumbo, je enoletna rastlina, ki izvira iz Afrike in jo gojijo v različnih državah po svetu, predvsem v tropskih, subtropskih, in tople zmerne regije.


Stroki okra se že dolgo uporabljajo kot zelenjava in vir dietetičnih zdravil. V tradicionalni azijski in afriški medicini se okra stroki uporabljajo kot sluzna hrana za boj proti gastritisu [21]. Farmakološke študije so pokazale, da ima okra antioksidativne, nevroprotektivne, antidiabetične, antihiperlipidemične in proti utrujenosti [22–26]. Čeprav je bilo delovanje okra strokov proti utrujenosti dokazano že prej [26], je malo znanega o njegovih dejavnostih in sestavinah proti utrujenosti. Prejšnja literatura je poročala, da okra stroki vsebujejo visoko vsebnost polisaharidov, polifenolov in flavonoidov [27–34]. V prejšnjih študijah je bilo tudi dokazano, da imajo polifenoli in flavonoidi močne antioksidativne učinke in učinke proti utrujenosti [15,18,20,35,36]. Še več, naš preliminarni kvalitativni poskus, v katerem smo uporabili raztopino železovega klorida kot reagent za razvijanje barve, je pokazal, da je izvleček semen okra pokazal močno fenolno reakcijo; vendar pa njen izvleček kože skoraj ni pokazal takšne reakcije (dodatni materiali), kar je pokazalo, da so semena okre vsebovala večjo vsebnost polifenolov in flavonoidov kot kože okre. Zato bi lahko špekulirali, da so lahko semena okra del okra strokov proti utrujenosti, polifenoli in flavonoidi pa so lahko aktivne sestavine. Cilj študije je bil razjasniti sestavine okra strokov proti utrujenosti. Da bi to dosegli, smo sveže stroke bamije razdelili na semena in lupine ter primerjali kemično vsebnost skupnih polisaharidov, skupnih polifenolov, skupnih flavonoidov, izokvercitrina in kvercetin-3-O-gentiobioze ter antioksidativne aktivnosti in vitro in anti- aktivnosti utrujenosti in vivo med semeni okra in kožo. Vsi ti rezultati so razkrili, da so semena bamije del okra strokov proti utrujenosti, polifenoli in flavonoidi pa so bile aktivne sestavine. Proučevali so tudi potencialne mehanizme delovanja okre proti utrujenosti.


2. Eksperimentalni odsek


2.1. Rastlinski material in ekstrakcija


Sveže okra stroke smo kupili na trgu (Sanya, provinca Hainan, Kitajska) julija 2013. Pristnost rastline sta potrdila profesor Bengang Zhang, Inštitut za zdravilne rastline, Kitajska akademija medicinskih znanosti in Peking Union Medical College, Peking, Kitajska, kjer so bili primerki vavčerjev (št. 20130705) deponirani v herbariju inštituta. Pripravili smo dve porciji 2,5 kg svežih strokov bamije. En del smo neposredno liofilizirali, da smo dobili posušene okra stroke (251,3 g). Drugi del smo razdelili na semena okra in lupine bamije, liofilizirane, da smo dobili posušena semena bamije (50,1 g) oziroma posušene lupine bamije (200,5 g). Stroki okra, semena in lupine so bili dobro zmleti in ločeno ekstrahirani s 1500 ml vrele vode 1 uro (3-krat). Vsako filtrirano tekočino smo združili in koncentrirali pod vakuumom, da smo dobili ostanke okra strokov (OPD, 105,4 g), okra semen (OSD, 20,5 g) in okra kože (OSK, 84,1 g). Zato je razmerje ekstrakta OPD:OSK:OSD približno 5:4:1. Vsi vzorci so bili shranjeni pri ´20 ˝C do naslednjih kemijskih analiz in poskusov na živalih.


Acteoside of Cistanche

2.2. Kemikalije in reagenti


Izokvercitrin in kvercetin-3-O-gentiobiozo je naš laboratorij izoliral iz strokov bamije s čistostjo nad 98 odstotkov z analizo s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC). Standardi za rutin, galno kislino in D-glukozo so bili kupljeni pri Nacionalnem inštitutu za nadzor hrane in zdravil (Peking, Kitajska). Za določanje fenolov smo uporabili Folin–Ciocalteujev fenolni reagent (1N, Coolaber Science & Technology, Peking, Kitajska). Komplet za zmanjšanje antioksidativne moči železa (FRAP) je bil kupljen pri Beyotime Biotechnology (Peking, Kitajska). 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) in Trolox sta bila kupljena pri Sigma-Aldrich Inc. (St. Louis, MO, ZDA). Fosfatni pufer (PBS, Gibco) je bil kupljen pri Thermo Fisher (Waltham, MA, ZDA). Topila, vključno z acetonitrilom (Thermo Fisher, MA, ZDA) in mravljinčno kislino (CNW, Dusseldorf, Nemčija), so bila razreda HPLC, voda pa je bila pridobljena iz sistema za čiščenje vode Milli-Q (Millipore, MA, ZDA). Testni kompleti za določanje krvnega laktata (BLA), dušika sečnine v serumu (BUN), jetrnega glikogena (HG), glutation peroksidaze (GSH-Px), tiobarbiturne kisline (TBA) in superoksid dismutaze (SOD) so bili kupljeni pri Nanjing Jiancheng Biotechnology Inštitut (Nanjing, Kitajska). Vsi drugi reagenti in kemikalije, uporabljeni v tej študiji, so bili analitske kakovosti.


2.3. Živali


Samci miši ICR (20–22 g) so bili kupljeni pri Vital River Laboratories (kvalificirana št.: SCXK 2012-0001, Peking, Kitajska). Miši so bile nameščene v skupinah po 6 živali na kletko pri konstantni temperaturi (23 ˝C ˘ 2 ˝C) in vlažnosti (50 odstotkov ˘ 10 odstotkov) na 12/12- h ciklu svetloba/tema (lučke so prižgane od 8:00 do 20:00). Živali so imele prost dostop do standardne prehrane in sterilizirane pitne vode v živalski hiši SPF (Specific pathogen Free). Vsi poskusni postopki so bili izvedeni pod nadzorom in odobritvijo Akademije za poskusne živali na Inštitutu za razvoj zdravilnih rastlin in v strogem skladu z Vodnikom NIH za nego in uporabo laboratorijskih živali (osma izdaja) [37].



2.4. Kemijska analiza OSD in OSK


2.4.1. Določanje vsebnosti skupnih flavonoidov (TF).


Vsebnost TF je bila izmerjena s kolorimetričnim testom NaNO{{0}}Al(NO)3 v skladu s tehničnimi standardi za testiranje in ocenjevanje funkcionalne hrane, ki jih je izdala Nacionalna komisija za zdravje in načrtovanje družine LRK v 2{{20}}03, z manjšimi spremembami. Na kratko, 50 mg vzorca smo raztopili v 40 ml destilirane vode in raztopino vzorca trikrat ekstrahirali s 50 ml kloroforma. Nato smo vodno raztopino razredčili na 50 ml in 2 ml razredčene raztopine adsorbirali s 5 g poliamidne smole in eluirali z 20 ml 70-odstotnega etanola. 70-odstotno eluacijo etanola smo koncentrirali na 10 ml pod vakuumom. Tri mililitre koncentrirane elucije smo dali v 10 ml merilno bučko in nato dodali 2 ml 70-odstotnega etanola, 0,3 ml NaNO2 (5 odstotkov) in 0,3 ml Al(NO)3. Po 5 minutah smo mešanici dodali 2 ml raztopine NaOH (1,0 M) in pustili stati 6 minut. Nazadnje smo dodali 2,4 ml 30 % etanola. Absorbanco smo izmerili proti slepemu vzorcu pri 510 nm s spektrofotometrom UNICO-2012 UV-VIS (Šanghaj, Kitajska). Celotno vsebnost flavonoidov smo izračunali iz umeritvene krivulje z uporabo rutina kot standarda (20–100 mg/L). Rezultati so bili izraženi kot mg ekvivalenta rutina na mg vzorcev.


Echinacoside of Cistanche

2.4.2. Določanje vsebnosti skupnih polifenolov (TP).


Vsebnost TP je bila določena z uporabo metode Folin–Ciocaiteu z rahlo modifikacijo [38]. Skratka, vzorec 50 mg smo zmešali s 25 ml 50-odstotne raztopine metanola, nato pa je zadostovalo 0,5 ml raztopine vzorca, 0,3 ml Folin-Ciocaiteujevega reagenta in 10 ml natrijevega karbonata (10 odstotkov). zmešali in nato volumen naravnali na 25 ml z destilirano vodo. Zmes pustimo stati pri 50 ˝C v temi 1 uro. Absorbanca je bila izmerjena pri 765 nm. Pripravljena je bila umeritvena krivulja galne kisline. Rezultati so bili izraženi kot mg ekvivalentov galne kisline na mg vzorcev.


2.4.3. Določanje izokvercitrina in kvercetin-3-O-gentiobioze


Kvantificiranje izokvercitrina in kvercetin{{0}}O-gentiobioze je bilo izvedeno s HPLC-UV z uporabo pettočkovne umeritvene krivulje (r2=0.999) v območju 5–5{{23 }}0 µg/mL. Izokvercitrin in kvercetin-3-O-gentiobiozo (5 mg) in vzorce (10 mg) smo raztopili v 10 ml metanola oz. Vse raztopine smo pred analizo HPLC filtrirali skozi 0.45-µm politetrafluoretilenske filtre. Črpalka Waters 600 HPLC z detektorjem Waters 2489 UV/Visible je bila uporabljena za ločevanje spojin skozi kolono z reverzno fazo (Thermo synchronize aQ, 4,6 mm ˆ 250 mm, 5 µm) pri drugi hitrosti 1 ml/min. Mobilna faza je bila sestavljena iz acetonitrila (A) in 0,1 % ocetne kisline v vodi (B). Program gradientne elucije je bil naslednji: 10 odstotkov A pri 0 minutah in linearno do 40 odstotkov v 40 minutah, 90 odstotkov pri 41 do 50 minutah in 10 odstotkov pri 51–65 minutah. Valovna dolžina za UV detekcijo je bila 354 nm in temperatura kolone je bila nastavljena na 25 ˝C. Spojine so bile identificirane s primerjavo z retenzijskim časom standardov in kvantificirane z izračunom površine pod krivuljo z zunanjimi standardi.


2.4.4. Določanje vsebnosti skupnih polisaharidov (TPS).


Vsebnost TPS je bila določena z metodo fenol–žveplova kislina [39,40]. Na kratko, 80 mg vzorca smo raztopili v 50 mL destilirane vode in nato protein odstranili z divjo metodo (raztopina vzorca:kloroform:N-butilni alkohol=20:4:1). Nato smo dobljeni viskozni raztopini dodali štirikratno količino etanola, da smo oborili surovi polisaharidni ekstrakt. Raztopino etanola centrifugiramo pri 617,4 ˆ g 30 minut, da dobimo oborino. Oborino smo zaporedoma sprali z etanolom, acetonom in etrom ter raztopili v 250 ml destilirane vode. Nato smo 0,1 ml raztopine polisaharida v epruveti zmešali z 0,9 ml destilirane vode, 1 ml 5-odstotne raztopine fenola in 5 ml žveplove kisline ter hranili pri sobni temperaturi 30 minut. Absorbanco smo izmerili pri 490 nm s spektrofotometrom UNICO-2012 UV-VIS (Šanghaj, Kitajska). Izdelali smo umeritveno krivuljo glukoze in vsebnost TPS določili iz regresijske enačbe umeritvene krivulje. Rezultati so bili izraženi kot mg ekvivalentov glukoze na mg vzorcev.


2.5. In vitro antioksidativni testi


Antioksidativno zmogljivost OPD, OSK in OSD so odkrili s tremi metodami, vključno z odstranjevanjem {{0}}difenil-2-pikrilhidrazila (DPPH), antioksidantno močjo, ki zmanjšuje železo (FRAP), in močjo zmanjševanja, po literaturi [19,41] z rahlo modifikacijo. Trolox je bil uporabljen kot pozitivna kontrola, rezultati pa so bili izraženi kot Trolox ekvivalentna antioksidativna kapaciteta. Ker je bil OPD sestavljen iz OSK in OSD, je bila za osvetlitev aktivnih sestavin okra strokov koncentracija OSK in OSD uporabljena kot ekvivalent OPD. Glede na predhodne teste so bili razponi koncentracij OPD, ODS, OSK 0.0{{10}}4–0.8, {{17 }}.0{{20}}32–0.64 in 0.0008 –{{40}}.16 mg/mL za test DPPH; 1.0–4.0, 0.8–3.2 in {{50}}.2–0.8 mg/mL za test FRAP; in 0,1–4, 0,08–3,2 oziroma 0,02–0,8 mg/ml za test zmanjševanja moči. Za test DPPH raztopina vzorca (50 µL) s sorazmernim območjem (0,004–0,8 mg OPD/ml, 0,0032–0,64 mg OSK/ mL in 0,0008–0,16 mg OSD/mL) smo zmešali z raztopino DPPH (100 µL, 1,28 ˆ 10´4 mol/L) za merjenje aktivnosti lovljenja prostih radikalov (A1) in 95-odstotnim etanolom (100 µL) za kontrolo. (A2). Destilirano vodo (50 µL) smo zmešali z raztopino DPPH (100 µL) za slepi vzorec (A0). Absorbanco smo izmerili pri 517 nm, potem ko smo raztopine premešali in jih 30 minut hranili pri sobni temperaturi. Zmogljivost čiščenja radikala DPPH je bila izračunana z naslednjo enačbo:


Flavonoids of Cistanche

Čistilna aktivnost (odstotki){{0}}[ 1-(A1-A2/{A0]* 100 odstotkov. (1)


FRAP treh vzorčnih raztopin (1.0–4.0 mg OPD/mL, 0.8–3.2 mg OSK/mL in 0.2– {{10}}.8 mg OSD/mL) so bile odkrite v skladu z navodili Inštituta za biotehnologijo Beyotime. Razredčeno raztopino vzorca (5 µL) smo zmešali z delovno raztopino FRAP (180 µL) in jo hranili 5 minut pri 37 ˝C. Absorbanco reakcijske mešanice smo nato zabeležili pri 593 nm. Standardna krivulja je bila pripravljena z uporabo FeSO4 v razponu od 0.15 do 1,5 mm. Pri določanju redukcijske moči vzorčna raztopina (0.5 ml za 0.1–4 mg OPD/ml, 0.08–3,2 mg OSK/ml in 0.02–{{50}}.8 mg OSD/mL) smo zmešali z enakim volumnom PBS (0.2 mol/L , pH 6,6) in raztopino kalijevega fericianida (1 odstotek, m/v) in inkubacijo izvajamo 20 minut pri 50 ˝C. Mešanici smo dodali trikloroocetno kislino (0,5 ml, 10 odstotkov, m/v), ki smo jo centrifugirali 10 minut pri 201,6 g. Po tem smo zgornjo plast raztopine (0,5 mL) razredčili z destilirano vodo (0,5 mL) in ji nato dodali železov klorid (0,1 mL, 0,1 odstotka, w/v). Absorbanco smo izmerili pri 700 nm.



2.6. Učinki OPD, OSK in OSD proti utrujenosti ter biokemična analiza


Na podlagi istega razloga kot in vitro testi antioksidantov so bili odmerki OPD, OSK in OSD zasnovani kot skupine OPD (0.75, 1.50 in 3.{{ 6}} g/kg telesne teže), skupine OSK (0.60, 1,20 in 2,40 g/kg telesne teže) in skupine OSD (0,15, 0,30 in 0,60 g/kg telesne teže). Miši smo v poskusnem okolju pred poskusi hranili z osnovno prehrano. Po 3 dneh prilagajanja je bilo 120 miši naključno razdeljenih v deset skupin: kontrolna skupina (CG), po 3 skupine OPD, OSK in OSD. Vsaka skupina je imela 12 miši. Kontrolna skupina (CG) je bila tretirana s sterilno vodo, druge skupine pa z ustreznim izvlečkom. Miši so vodo/izvlečke dajali peroralno (8:00 zjutraj) enkrat na dan 21 dni, 20. in 21. dan pa sta bila izvedena test na odprtem terenu in test plavanja z utežmi (WLST). Po WLST so bile miši odstranjene iz bazena, posušene s papirnatimi brisačami in postavljene nazaj v prvotne kletke. Eksperimentatorji WLST in testa na odprtem polju so bili zaslepljeni glede eksperimentalnih pogojev, živali pa so bile randomizirane pred sodelovanjem v poskusih. Da bi pojasnili učinek OSD proti utrujenosti med okrevanjem, smo miši anestezirali z etrom in iz vsake skupine po 24 urah WLST zbrali vzorce krvi. Vzorce seruma smo pridobili s centrifugiranjem (896 ˆ g, 15 min, 4 ˝C). Jetra so hitro razrezali in sprali v ledeno mrzli slanici. Vse vzorce smo zamrznili v tekočem dušiku in hranili pri ´80˝C za nadaljnjo analizo.


2.6.1. Test na prostem


Da bi preverili učinke OPD, OSK in OSD na lokomotorne aktivnosti, smo miši samodejno ovrednotili z uporabo računalniško podprtega nadzornega sistema odprtega polja, ki smo ga razvili [42,43]. Naprava je sestavljena iz štirih kovinskih rezervoarjev (30 cm v premeru, 40 cm v višino) z video kamero, pritrjeno na vrhu. Eksperimente smo izvajali v mirni sobi, aparaturo pa smo osvetljevali s svetlobnim virom 120 luksov na stropu. Eno uro po odmerjanju so vsako miško postavili na sredino kovinskega rezervoarja in ji pustili prosto raziskovati 2 minuti in s programsko opremo izračunali prepotovano razdaljo v 4 minutah, ki je indeks lokomotorne aktivnosti. Hkrati so testirali štiri miši.


Cistanche can relieve chronic fatigue syndrome symptoms

2.6.2. Test plavanja z obremenitvijo (WLST)


WLST je bil izveden za induciranje utrujenosti v skladu z metodologijo, opisano prej z rahlo spremembo [19,44,45]. Eno uro po odmerjanju so miši natovorili s svinčenimi ploščami, ki so bile pritrjene na isti položaj njihovih repov in so tehtale približno 3 odstotke njihove telesne teže. Nato smo obremenjene miši posamezno prisilili plavati v valjastih recipientih (premera 40 cm), ki smo jih napolnili z vodo (25 ˘ 1 ˝C) do globine 30 cm. Izčrpanost je bila razvrščena kot izguba usklajenih gibov in nezmožnost dviga na površje v 10 sekundah, čas plavanja pa je bil takoj zabeležen. Voda v bazenu je bila zamenjana po vsaki seji.



2.6.3. Analiza biokemičnih parametrov, povezanih z utrujenostjo


Serum smo pripravili za določanje dušika sečnine v krvi (BUN) in mlečne kisline v krvi (BLA). Jetra smo pripravili za določanje ekvivalentov malondialdehida (MDA), skupne superoksid dismutaze (SOD), glutation peroksidaze (GSH-Px) in jetrnega glikogena (HG). Vsi biokemični parametri so bili določeni s komercialno dostopnimi kompleti in vsi postopki so bili v skladu z navodili proizvajalca. Na kratko, vsebnost HG je bila določena z antronskim reagentom pri 620 nm, medtem ko je bila BLA določena z reagentom nitrotetrazolijev modri klorid pri 530 nm. BUN je bil ocenjen z ureazo z metodo vezanega encima z glutamat dehidrogenazo pri 640 nm. Aktivnost GSH-PX smo izmerili v sklopljenem sistemu z merjenjem zmanjšanja trifosfopiridin nukleotida (NADPH) pri 340 nm. Test aktivnosti SOD je temeljil na njegovi sposobnosti zaviranja oksidacije z O2, ki nastaja iz sistema ksantin-ksantin-oksidaza. Ena enota aktivnosti SOD je bila opredeljena kot količina, ki zmanjša absorbanco pri 450 nm za 50 odstotkov. Vsebnost ekvivalentov MDA je bila določena pri 532 nm z reakcijo s TBA, da je nastal stabilen kromoforni produkt.


2.7. Statistična analiza


Kemijske določitve so bile izvedene v treh izvodih, rezultati pa so izraženi kot srednje vrednosti. Testi antioksidantov so bili izvedeni v treh izvodih, rezultati pa so bili izraženi kot srednje vrednosti ˘ standardne deviacije. Vedenje in biokemične podatke je analizirala statistična programska oprema SPSS (SPSS 19.0 Inc., Chicago, IL, ZDA). Za primerjavo med skupinami je bila uporabljena enosmerna analiza variance (One-way ANOVA) s testom najmanj pomembne razlike (LSD). Vrednosti P, manjše od 0,05, so veljale za statistično pomembne. Rezultati so bili izraženi kot povprečje ˘ standardna napaka povprečja (SEM).


3. Rezultati


3.1. Kemijska analiza OSK in OSD


Kot je prikazano v tabeli 1, je bila vsebnost TF in TP v OSD veliko višja od tiste v OSK, medtem ko je bila vsebnost TPS v OSD veliko nižja od tiste v OSK. Spojini izokvercitrina in kvercetin-3-O-gentiobioze sta bili odkriti le v OSD s HPLC (prikazano na sliki 1).


image

image

3.2. In vitro antioksidativna aktivnost OPD, OSK in OSD


Kot je prikazano v tabeli 2, je bila antioksidativna aktivnost OPD in OSD dokazana z DPPH, FRAP in testi zmanjševanja moči, OSD pa je pokazal veliko boljšo antioksidativno aktivnost kot OPD. Vendar je OSK pokazal šibek učinek pri zmanjševanju testa moči in nobenega učinka pri testih DPPH in FRAP. Zato je bil OSD aktivni del okra strokov za antioksidativno delovanje



image


3.3. Učinki OPD, OSK in OSD na lokomotorno aktivnost


Lokomotorne aktivnosti miši so testirali 20. dan po zdravljenju z OSD. Kot je prikazano na sliki 2, je visok odmerek skupin OSD (0,6 g/kg) znatno zmanjšal skupno razdaljo miši v novem okolju v primerjavi s kontrolno skupino (p=0. 04). Vendar pa za druge skupine niso opazili pomembnih učinkov na skupno razdaljo. Ti rezultati so pokazali, da okra stroki in semena niso imeli nobenega vznemirljivega učinka na centralni živčni sistem. Poleg tega je mogoče sklepati, da ima lahko OSD rahel sedativni učinek pri visokem odmerku (0,6 g/kg).



image


3.4. Učinki na izčrpni čas plavanja OPD, OSK in OSD (WLST)


Kot je prikazano na sliki 3, po 21-dnevnem dodajanju OPD, OSK in OSD lahko zdravljenje z OPD (3 g/kg) in OSD (0.3 in 0.6 g/kg) opazno podaljša čas plavanja miši, ki se je raztegnil na 57,84 ˘ 12,37, 46,51 ˘ 5,82 in 70.05 ˘ 12.07 min (p < 0="" .05,="" p="">< 0.05="" in="" p="">< 0.{{70}}1),="" veliko="" dlje="" od="" tega="" v="" kontrolni="" skupini="" (15,20="" ˘="" 1,49="" min).="" medtem="" pa="" zdravljenje="" z="" opd="" (0.75="" in="" 1,5="" g/kg),="" osd="" (0,15="" g/kg)="" in="" osk="" (0,6,="" 1,2="" in="" 2,4="" g/kg)="" ni="" pokazalo="" pomembnega="" povečanja="" časa="" plavanja="" pri="" miših="" (="" 14,73="" ˘="" 1,28,="" 23,96="" ˘="" 3,70="" oziroma="" 27,34="" ˘="" 5,72="" min)="" v="" primerjavi="" s="" kontrolno="" skupino="" (p="0.897," p="0.398" oziroma="" p="0.268" ),="" vendar="" je="" osd="" (0,15="" g/kg)="" pokazal="" trend="" povečevanja="" časa="" plavanja,="" vendar="" ni="" pokazal="" pomembne="" razlike="" (p="0.225)." poleg="" tega="" je="" enosmerna="" anova="" pokazala="" pomembne="" razlike="" v="" izčrpnem="" času="" plavanja="" miši="" med="" skupinami="" (f="" (3,="" 40)="12.839," p="">< 0,001).="" čas="" plavanja="" skupine="" z="" visokim="" odmerkom="" osd="" (0,6="" g/kg)="" je="" pokazal="" izrazito="" razliko="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" s="" srednjim="" odmerkom="" (0,3="" g/kg)="" (p="0,019)" in="" opažen="" je="" bil="" enak="" rezultat="" med="" skupinami="" 0.3-g/kg="" in="" 0.15-g/kg="" (p="0.034)," dokazovanje="" osd="" bi="" lahko="" podaljšalo="" izčrpen="" čas="" plavanja="" na="" način,="" ki="" je="" odvisen="" od="">

image

3.5. Vpliv OSD na biokemične parametre pri miših po testu plavanja z utežmi


Kot je pokazal rezultat obremenjenega testa plavanja, bi OSD lahko znatno podaljšal izčrpen čas plavanja miši; vendar zdravljenje z OSK ni pokazalo pomembnega povečanja časa plavanja pri miših. Zato so bili biokemični parametri določeni samo na miših za zdravljenje OSD.


3.5.1. Vpliv OSD na BLA, BUN in HG


Razlika v vsebnosti BLA, BUN in HG med skupinami je bila pomembna (BLA: F (3, 40)=8.257, p < {{10}}.{{="" 20}}01;="" bun:="" f="" (3,="" 40)="8.596," p="">< 0.{{3{{32="" }}}}01;="" hg:="" f="" (3,="" 36)="6.960," p="">< 0.{{40}}="" 01).="" kot="" je="" prikazano="" v="" tabeli="" 3,="" so="" bile="" ravni="" bla="" in="" bun="" v="" skupinah="" osd="" pomembno="" nižje="" kot="" v="" kontrolni="" skupini="" 24="" ur="" po="" plavalnem="" testu="" z="" obremenitvijo="" (bla:="" p="">< 0.05,="" p="">< 0.05="" in="" p="">< 0,01="" za="" 0,15,="" 0,3="" oziroma="" 0,6="" g/kg;="" bun:="" p="">< 0,01="" za="" 0,15,="" 0,3="" in="" 0,6="" g/kg).="" ravni="" hg="" v="" skupinah="" osd="" so="" bile="" signifikantno="" višje="" v="" primerjavi="" s="" kontrolno="" skupino="" (p=""><0,05, p=""><0,01 in="" p=""><0,01 za="" 0,15,="" 0,3="" oziroma="" 0,6="">


image


3.5.2. Vpliv OSD na GSH-PX, MDA in SOD


Razlike v aktivnostih SOD, GSH-PX in ekvivalentu MDA med skupinami so bile pomembne (MDA: F (3, 40)=8.355, p < 0.{{18}="" }01;="" sod:="" f="" (3,="" 42)="9.876," p="">< 0.001;="" gsh-px:="" f="" (="" 3,="" 40)="7.959," p="">< 0.001).="" kot="" je="" prikazano="" v="" tabeli="" 4,="" je="" bil="" ekvivalent="" mda="" v="" skupinah="" osd="" značilno="" nižji="" kot="" v="" kontrolni="" skupini="" po="" testu="" plavanja="" z="" obremenitvijo="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.{="" {45}}1="" in="" p="">< 0.01="" za="" 0.15,="" 0,3="" oziroma="" 0,6="" g/kg).="" poleg="" tega="" so="" bile="" ravni="" sod="" in="" gsh-px="" v="" skupinah="" osd="" značilno="" višje="" v="" primerjavi="" s="" kontrolno="" skupino="" (sod:="" p=""><0,01, p=""><0,01 in="" p=""><0,01; gsh-px:="" p=""><0,05, p=""><0,01 in="" p="">< 0,01="" za="" 0,15,="" 0,3="" oziroma="" 0,6="">


image



4. Razprava


Nezreli strok bamije je zdrava zelenjava, ki se uživa na večini območij sveta. Prejšnje študije so poročale, da imajo nezreli okra stroki antioksidativne učinke in učinke proti utrujenosti [25,46], vendar njihove aktivne sestavine in potencialni mehanizmi niso bili jasni. Da bi raziskali antioksidativno delovanje in delovanje strokov okra proti utrujenosti, smo sveže stroke okra razdelili na semena in lupine ter pridobili OSD, OSK in OPD s postopkom ekstrakcije, nato pa antioksidativno aktivnost in vitro OSD, OSK in OPD so zaznali z DPPH, FRAP in zmanjšanjem moči, učinek OSD, OSK in OPD proti utrujenosti in vivo pa so proučevali s testom plavanja z utežmi. Naši rezultati so pokazali, da OSD ni imel le dobre antioksidativne aktivnosti in vitro, ampak je tudi znatno podaljšal čas plavanja miši v primerjavi s kontrolno skupino, medtem ko OSK ni pokazal nobenega učinka pri obeh. Izčrpen čas plavanja je neposredna meritev, ki objektivno odraža vadbeno vzdržljivost telesa [47], spodbujanje vadbene vzdržljivosti pa je povezano z daljšimi plavalnimi časi. Zato je treba antioksidativni in protiutrujenostni del OPD sklepati kot njegova semena. Poleg tega bi lahko v tej študiji OSD (0.3{{10}}, 0,60 g/kg) opazno podaljšal čas plavanja miši, ekvivalentni odmerki semen bamije za ljudi pa bi lahko bili 0,9 ~1,8 g/kg (4,5~8,9 g/kg za stroke bamije) glede na telesno površino [48]. Te odmerke lahko doseže človeška porcija zelenjave. Vendar pa so aktivne sestavine okra še vedno nejasne. Rezultati kemijske analize v pričujoči študiji so pokazali, da je vsebnost polifenolov v OSD približno 24-krat večja kot v OSK, vendar je vsebnost polisaharidov v OSD veliko nižja kot v OSK (tabela 1).


Moreover, total flavonoids content and two compounds of isoquercitrin and quercetin-3-O-gentiobiose were only detected in OSD and were not detected in OSK (Table 1). It has been proven that okra seeds contained epigallocatechin oligomers, catechin, and its oligomers, isoquercitrin, quercetin-3-O-gentiobiose, and other catechin and quercetin derivatives [27–29]. Furthermore, previous studies have reported that polyphenols like catechin and flavonoids like quercetin possess anti-fatigue activity due to their antioxidant activity [35,36,49–51]. Therefore, we deduced that polyphenols and flavonoids of OSD might be the antioxidant and anti-fatigue constituents. As for the reason that the effect of OPD was less than the effect of OSD, it might be that the high content of mucilaginous polysaccharides can affect the assimilation of polyphenols and flavonoids in OPD, which needs to be researched in the future. When it comes to the anti-fatigue mechanism of OSD, an open-field test showed that OSD had no central nerve stimulation in mice, which proved that the anti-fatigue of OSD was not through central excitation. Apart from this, it was likely that OSD possessed a slight sedative effect in high doses (>0.6 g/kg). Za dokazovanje tega je potrebnih več podatkov, ker je majhno zmanjšanje gibanja lahko tudi posledica zmanjšane motivacije za raziskovanje ali možnega anksiogenega učinka. Vendar pa je bil v tej raziskavi test odprtega polja uporabljen za izključitev možnosti, da bi OSD deloval proti utrujenosti z ekscitatornim učinkom na centralni živčni sistem, in več podatkov, ki bi dokazali sedativni učinek OSD, ni bilo predstavljenih. Poleg tega je bilo dokazano, da so čezmerne reaktivne oksidne vrste (ROS), ki nastanejo med naporno vadbo, glavna sestavina fizične utrujenosti. Prekomerni ROS lahko vpliva na različne presnovne in encimske procese tako, da napade večkrat nenasičene maščobne kisline, da proizvede MDA in povzroči disfunkcijo biofilmov [13, 52].


Zaradi tega ROS ne vpliva le neposredno na encimsko aktivnost med oskrbo z energijo in procesi spajanja vzbujanja in kontrakcije, temveč tudi pospešuje kopičenje odpadkov, vključno z BLA in BUN. Poleg tega je naraščajoča raven BLA pomemben vzrok za utrujenost zaradi nižjega pH v tkivih, višja vsebnost BUN pa kaže na manjšo vzdržljivost pri vadbi. Zato bi lahko ne samo povečal vzdržljivost pri vadbi, ampak tudi ublažil fizično utrujenost in pospešil okrevanje s spodbujanjem aktivnosti encimskih antioksidantnih sistemov, vključno s SOD in GSH-PX, ali neposredno dopolnil antioksidante. V tej študiji določanje biokemičnih parametrov, ki je bilo izvedeno 24 ur po testu plavanja, kaže, da je zdravljenje z OSD pomembno znižalo ravni BLA in BUN v krvi, MDA v jetrih in povečalo ravni HG, SOD in GSH v jeter med okrevanjem zaradi utrujenosti, kar je dokazalo, da OSD lahko ublaži fizično utrujenost in pospeši okrevanje. Glede na rezultate testov antioksidantov in vitro v naši raziskavi je mogoče sklepati, da je OSD imel učinek proti utrujenosti ne samo z neposrednim lovljenjem prostih radikalov, temveč tudi s spodbujanjem aktivnosti antioksidativnih encimov, vključno s SOD in GSH-PX.


23

Kliknite sliko za Cistanche Uk za boj proti utrujenosti

5. Sklepi


Na koncu je ta študija pokazala, da je OSD del okre proti utrujenosti, polifenoli in flavonoidi pa so verjetno aktivne sestavine OSD zaradi njihove antioksidativne aktivnosti. Vendar pa je utrujenost kompleksen pojav in sedanja študija o mehanizmih bamije proti utrujenosti je zelo predhodna. Več podrobnosti je treba še osvetliti v prihodnosti.



Reference


1. Chaudhuri, A.; Behan, PO Utrujenost pri nevroloških motnjah. Lancet 2004, 363, 978–988. [CrossRef]

2. Belluardo, N.; Westerblad, H.; Mudó, G.; Casabona, A.; Bruton, J.; Caniglia, G.; Pastoris, O.; Grassi, F.; Ibáñez, CF Razstavljanje živčno-mišičnega stika in mišična utrujenost pri miših brez nevrotrofina-4. Mol. Celica. Neurosci. 2001, 18, 56–67. [CrossRef] [PubMed]

3. Tharakan, B.; Dhanasekaran, M.; Brown-Borg, HM; Manyam, BV Trichopus zeylanicus se bori proti utrujenosti brez amfetaminske mimetične aktivnosti. fitoter. Res. PTR 2006, 20, 165–168. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, L.-Z.; Huang, B.-K.; Ja, Q.; Qin, L.-P. Frakcioniranje, vodeno z biološko aktivnostjo, za lastnost Acanthopanax senticosus proti utrujenosti. J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 213–219. [CrossRef] [PubMed]

5. Pawlikowska, T.; Chalder, T.; Hirsch, SR; Wallace, P.; Wright, DJ; Wessely, SC Populacijska študija utrujenosti in psihološke stiske. BMJ 1994, 308, 763–766. [CrossRef] [PubMed]

6. Li, G. Stanje utrujenosti 2823 zdravih ljudi za pregled in njegova korelacija s fizičnimi kazalniki; Pekinška univerza za kitajsko medicino: Peking, Kitajska, 2013.

7. Uehata, T. Karoshi, smrt zaradi preobremenjenosti. Nippon Rinsho Jpn. J. Clin. Med. 2005, 63, 1249–1253.

8. Layzer, RB Mišični metabolizem med utrujenostjo in delom. Baillierejeva klinika. Endocrinol. Metab. 1990, 4, 441–459. [CrossRef]

9. Hultman, E.; Bergstrom, M.; Spriet, LL; Söderlund, K. Energijski metabolizem in utrujenost; Človeška kinetika: Champaign, IL, ZDA, 1990.

10. Glaister, M. Multiple sprint work: Fiziološki odzivi, mehanizmi utrujenosti in vpliv aerobne pripravljenosti. Sports Med. 2005, 35, 757–777. [CrossRef] [PubMed]

11. Nozaki, S.; Mizuma, H.; Tanaka, M.; Jin, G.; Tahara, T.; Mizuno, K.; Yamato, M.; Okuyama, K.; Eguchi, A.; Akimoto, K.; et al. Tiamin tetrahidrofuran disulfid izboljša energijsko presnovo in telesno zmogljivost med fizično utrujenostjo pri podganah. Nutr. Res. 2009, 29, 867–872. [CrossRef] [PubMed]

12. McCully, KK; Authier, B.; Olive, J.; Clark, BJ, 3. Mišična utrujenost: vloga metabolizma. Lahko. J. Appl. Physiol. 2002, 27, 70–82. [CrossRef] [PubMed]

13. Carter, GT Utrujenost. V Enciklopediji nevroloških znanosti, 2. izdaja; Aminoff, MJ, Daroff, RB, ur.; Academic Press: Oxford, Velika Britanija, 2014; strani 276–280.

14. Filler, K.; Lyon, D.; Bennett, J.; McCain, N.; Elswick, R.; Lukkahatai, N.; Saligan, LN Združenje mitohondrijske disfunkcije in utrujenosti: pregled literature. BBA Clin. 2014, 1, 12–23. [CrossRef] [PubMed]

15. Lin, Y.; Liu, H.-L.; Fang, J.; Yu, C.-H.; Xiong, Y.-K.; Yuan, K. Proti utrujenosti in vazoprotektivni učinki kvercetin-3-O-gentiobioze na oksidativni stres in vaskularno endotelijsko disfunkcijo, ki jo povzroča vzdržljivostno plavanje pri podganah. Food Chem. Toxicol. 2014, 68, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

16. Edwards, RH Človeška mišična funkcija in utrujenost. Najdena Ciba. Symp. 1981, 82, 1–18. [PubMed]

17. Gupta, A.; Vij, G.; Sharma, S.; Tirkey, N.; Rishi, P.; Chopra, K. Kurkumin, polifenolni antioksidant, ublaži sindrom kronične utrujenosti v modelu stresa pri mišji vodi. Imunobiologija 2009, 214, 33–39. [CrossRef] [PubMed]

18. Wu, CY; Chen, R.; Wang, XS; Shen, B.; Yue, W.; Wu, Q. Antioksidativne in protiutrudne aktivnosti fenolnega ekstrakta iz semenske lupine Euryale Ferox salisb. In identifikacija treh fenolnih spojin z lc-esi-ms/ms. Molekule 2013, 18, 11003–11021. [CrossRef] [PubMed]

19. Jiang, D.-Q.; Guo, Y.; Xu, D.-H.; Huang, Y.-S.; Yuan, K.; Lv, Z.-Q. Antioksidativni in protiutrujenjski učinki antocianinov čiščenja murvinega soka (MJP) in čiščenja murvinih tropin (MMP) iz različnih sort sadja murve na Kitajskem. Food Chem. Toxicol. 2013, 59, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

20. Swamy, MSL; Naveen, S.; Singsit, D.; Naika, M.; Khanum, F. Učinki proti utrujenosti polifenolov, ekstrahiranih iz lupine granatnega jabolka. Int. J. Integr. Biol. 2011, 11, 69–72.

21. Messing, J.; Thole, C.; Niehues, M.; Ševcova, A.; Glocker, E.; Boren, T.; Hensel, A. Antiadhezivne lastnosti ekstrakta nezrelega sadja Abelmoschus esculentus (Okra) proti adheziji helicobacter pylori. PLoS ONE 2014, 9, e84836. [CrossRef] [PubMed]

22. Tongjaroenbuangam, W.; Ruksee, N.; Chantiratikul, P.; Pakdeenarong, N.; Kongbuntad, W.; Govitrapong, P. Nevroprotektivni učinki kvercetina, rutina in okra (Abelmoschus esculentus Linn.) pri miših, zdravljenih z deksametazonom. Neurochem. Int. 2011, 59, 677–685. [CrossRef] [PubMed]

23. Fan, S.; Zhang, Y.; Sonce, Q.; Yu, L.; Li, M.; Zheng, B.; Wu, X.; Yang, B.; Li, Y.; Huang, C. Izvleček Okra znižuje glukozo v krvi in ​​serumske lipide pri debelih C57Bl/6 miših, ki jih povzroča prehrana z visoko vsebnostjo maščob. J. Nutr. Biochem. 2014, 25, 702–709. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, H.; Chen, G.; Ren, D.; Yang, ST. Hipolipidemična aktivnost okra je posredovana z zaviranjem lipogeneze in povečano regulacijo razgradnje holesterola. fitoter. Res. PTR 2014, 28, 268–273. [CrossRef] [PubMed]

25. Hu, L.; Yu, W.; Li, Y.; Prasad, N.; Tang, Z. Antioksidativna aktivnost ekstrakta in njegovih glavnih sestavin iz semena okra na hepatocitih podgan, ki jih poškoduje ogljikov tetraklorid. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 341291. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, Y.; Jin, Z.; Mao, P.; Jin, J.; Huang, J.; Yang, M. Študija o učinku izvlečkov okra proti utrujenosti. brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2012, 29, 4. [CrossRef]

27. Arapitsas, P. Identifikacija in kvantifikacija polifenolnih spojin iz semen in kože okra. Food Chem. 2008, 110, 1041–1045. [CrossRef] [PubMed].

28. Sengkhamparn, N.; Sagis, LMC; de Vries, R.; Schols, HA; Sajjaanantakul, T.; Voragen, AGJ Fizikalno-kemijske lastnosti pektinov iz okra (Abelmoschus esculentus (L.) Moench). Hrana Hydrocoll. 2010, 24, 35–41. [CrossRef]

29. Karakoltsidis, PA; Constantinides, SM Okra semena: nov vir beljakovin. J. Agric. Food Chem. 1975, 23, 1204–1207. [CrossRef] [PubMed]

30. Zhou, Y.; Jia, X.; Shi, J.; Xu, Y.; Jing, L.; Jia, L. Dva nova pentaciklična triterpena iz Abelmoschus esculentus. Helv. Chim. Acta 2013, 96, 533–537. [CrossRef]

31. Jia, L.; Zhong, LJ; Li, HF; Jing, LL Kemične sestavine v vodni frakciji Abelmoschus esculentus. brada. Tradicija. Zelišče. Droge 2011, 42, 2186–2188.

32. Jia, L.; Guo, M.; Li, D.; Jing, L. Kemične sestavine iz dela petrol etra Abelmoschus esculentus II. Zhongguo Zhong Yao Zazhi 2011, 36, 891–895. [CrossRef] [PubMed]

33. Jia, L.; Li, HF; Jing, LL Kemične sestavine v ekstraktu N-butanola Abelmoschus esculentus L. Chin. Tradicija. Zelišče. Droge 2010, 41, 1771–1773.

34. Jia, L.; Li, D.; Jing, LL; Guo, MM Študije o kemičnih sestavinah petroleterskega dela Abelmoschus esculentus. J. Chin. Med. Mater. 2010, 33, 1262–1265.

36. Kobori, M.; Takahashi, Y.; Akimoto, Y.; Sakurai, M.; Matsunaga, I.; Nišimura, H.; Ippushi, K.; Oike, H.; Ohnishi-Kameyama, M. Kronični visok vnos kvercetina zmanjša oksidativni stres in povzroči izražanje antioksidativnih encimov v jetrih in visceralnih maščobnih tkivih pri miših. J. Funk. Živila 2015, 15, 551–560. [CrossRef]

36. Nogueira, L.; Ramirez-Sanchez, I.; Perkins, GA; Murphy, A.; Taub, PR; Ceballos, G.; Villarreal, FJ; Hogan, MC; Malek, MH (-)-epikatehin poveča odpornost proti utrujenosti in oksidativno sposobnost v mišji mišici. J. Physiol. 2011, 589, 4615–4631. [CrossRef] [PubMed] .

37. Odbor za posodobitev Vodnika za nego in uporabo laboratorijskih živali. Vodnik za nego in uporabo laboratorijskih živali, 8. izdaja; Založba National Academies Press: Washington, DC, ZDA, 2011.

38. Liao, H.; Dong, W.; Ši, X.; Liu, H.; Yuan, K. Analiza in primerjava aktivnih sestavin in antioksidativnih aktivnosti izvlečkov iz Abelmoschus esculentus L. Pharmacogn. mag. 2012, 8, 156–161. [PubMed]

39. Žu, Z.; Li, N. Študija o metodi določanja vsebine okra polisaharida. Jiangsu Agric. Sci. 2012, 40, 2. [CrossRef]

40. DuBois, M.; Gilles, KA; Hamilton, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetrična metoda za določanje sladkorjev in sorodnih snovi. Analno Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

41. Luo, J.; Li, L.; Kong, L. Preparativno ločevanje fenilpropanoidnih gliceridov iz čebulic Lilium lancifolium s protitočno kromatografijo visoke hitrosti in vrednotenje njihovih antioksidativnih aktivnosti. Food Chem. 2012, 131, 1056–1062. [CrossRef]

42. Dang, H.; Chen, Y.; Liu, X.; Wang, Q.; Wang, L.; Jia, W.; Wang, Y. Posteljno jedro stria terminalis: Anatomija, fiziologija, funkcije posteljnega jedra. Prog. Nevro-psihofarmakol. Biol. Psihiatrija 2009, 33, 1417–1424. [CrossRef] [PubMed]

43. Wang, Q.; Mai, WL; Li, YH; Chen, SG; Wang, LW; Feng, ZQ; Zhu, YF; Liu, XM Vzpostavitev računalniško podprtega sistema za obdelavo slik za lokomotorno aktivnost živali in verifikacijo pomirjevala s praškom kaixin. brada. Tradicija. Zelišče. Droge 2009, 40, 1773–1779.

44. Qi, B.; Liu, L.; Zhang, H.; Zhou, G.-X.; Wang, S.; Duan, X.-Z.; Bai, X.-Y.; Wang, S.-M.; Zhao, D.-Q. Učinki proti utrujenosti beljakovin, izoliranih iz Panax quinquefolium. J. Ethnopharmacol. 2014, 153, 430–434. [CrossRef] [PubMed]

45. Tan, W.; Yu, KQ; Liu, YY; Ouyang, MZ; Yan, MH; Luo, R.; Zhao, XS Dejavnost polisaharidov proti utrujenosti, ekstrahiranih iz radixa Rehmannia preparata. Int. J. Biol. Macromol. 2012, 50, 59–62. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, J.; Zhou, J.; Tang, G. Študija o učinku Okra proti utrujenosti. brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2003, 20, 2. [CrossRef]

47. Contarteze, RV; Manchado Fde, B.; Gobatto, CA; de Mello, MA Biomarkerji stresa pri podganah, ki so bile podvržene plavanju in teku na tekalni stezi. Comp. Biochem. Physiol. A Mol. Integr. Physiol. 2008, 151, 415–422. [CrossRef] [PubMed]

48. Xu, SY Eksperimentalna metodologija farmakologije; Ljudska medicinska založba: Peking, Kitajska, 2002.

49. Zanwar, AA; Badole, SL; Shende, PS; Hegde, MV; Bodhankar, SL Antioksidativna vloga katehina pri zdravju in boleznih. V Polifenoli v zdravju in boleznih ljudi; Watson, RR, Preedy, VR, ur.; Academic Press: San Diego, CA, ZDA, 2014; strani 267–271.

50. Jadhav, SB; Singhal, RS Laccase-arabski konjugat za pripravo vodotopnega oligomera katehina z izboljšano antioksidativno aktivnostjo. Food Chem. 2014, 150, 9–16. [CrossRef] [PubMed]

51. Liudong, F.; Feng, Z.; Daoxing, S.; Xiufang, Q.; Xiaolong, F.; Haipeng, L. Vrednotenje antioksidativnih lastnosti in učinka polifenolov zelenega čaja proti utrujenosti. Sci. Res. Eseji 2011, 6, 2624–2629.

52. Vi, L.; Zhao, M.; Regenstein, JM; Ren, J. In vitro antioksidativna aktivnost in in vivo učinek proti utrujenosti peptidov loach (misgurnus anguillicaudatus), pripravljenih s prebavo papaina. Food Chem. 2011, 124, 188–194. [CrossRef]


Morda vam bo všeč tudi