Spremembe aktivnosti antioksidantov med fermentacijo encima

Poglavje 4 Spremembe aktivnosti antioksidantov med fermentacijo encimov

Sadje je bogato s hranili in je v številnih sortah. Proizvodnja snovi med fermentacijo je zapletena in raznolika, na njihovih velikosti pa je veliko raziskavaktivnost antioksidantov. Ljudje vedno raziskujejo in odkrivajo, iščejo hrano, ki je koristna zazdravje ljudi, zato so encimi v zadnjih letih postali vroča tema. Tradicionalni postopek proizvodnje encimov je pridobivanje encimov z naravno fermentacijo sadja in zelenjave. Na podlagi prejšnjih raziskav ta članek dodaja 4 koristne fermentacijske bakterije. Ta bakterije obstajajo tudi v encimu. Po dodatnem dodajanju bakterij se spremenita število in vrsta mikroorganizmov v procesu fermentacije. Kakšen učinek bo imel ta sprememba na njegovo antioksidantno aktivnost? V prejšnjem poglavju smo kot primer za podrobno razlago vzeli jabolka. Primerjava antioksidativne aktivnosti eksperimentalne skupine in kontrolne skupine pri različnih koncentracijah encimov je pokazala, da je bila antioksidativna aktivnost encima v eksperimentalni skupini večja kot pri kontrolni skupini. Intenzivnost antioksidativne aktivnosti odraža tudi zanesljivost encima na določen način.

Nova zelišča cistanča z močno antioksidantno močjo

 

Podporna služba Wecistanche-največji Cistanche izvoznik na Kitajskem:
E -pošta: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

To poglavje v prvotni eksperiment doda običajne sadje hruške in citruse ter sledi in zazna spremembe v njihovihaktivnost antioksidantovmed fermentacijo. Na podlagi zmanjšanja stroškov s poskusi upamo, da bomo bolj celovito odražali biološko aktivnost encimov po dodajanju bakterij in zagotovili določeno teoretično osnovo in podporo podatkov za proizvodnjo mikrobnih encimov By Umetna inokulacija sevov.

 

 

 

4.1 Materiali in metode

4.1.1 Materiali

(1) Eksperimentalni materiali

Sveže jabolke, hruške in citrusove sadje sperite s sterilno vodo v sterilnih pogojih, jih naravno posušite na sterilni operacijski mizi, jih olupite in narežite za kasnejšo uporabo. V masno razmerje 1: 1 dodajte beli sladkor in sadje v steriliziran stekleni kozarec. Aktivirajte bakterije, potrebne za eksperiment, in jih inokulirajte v encim v skladu z optimalno shemo (ta korak delovanja je za kontrolno skupino izpuščen), jo zatesnite in postavite na hladen in suh. Vzemite vzorce v različnih časovnih obdobjih fermentacije pri sobni temperaturi, da dobite vso encimsko tekočino, ki vsebuje sadno kašo, in jo filtrirate. Vzemite supernatant kot eksperimentalni vzorec in ga uporabite za merjenje ustreznih podatkov, potem ko ga centrifugirate pri 10, 000 RPM v centrifugi visoke hitrosti 15 minut. Omeniti velja, da se v procesu izdelave encimov, da bi se izognili nepotrebni kontaminaciji, vse naše operacije izvajajo v sterilnih pogojih.

(2) Glavni instrumenti

Instrumenti, potrebni za poskus, so enaki 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metode

(1) Spremembe celotne vsebnosti fenola med fermentacijo

Dodali smo 450 μl raztopine vzorca z destilirano vodo, da smo dobili prostornino 46 ml, nato pa dodali 1 ml folinskega fenola. Dobro premešamo in reagiramo 3min. Nato smo dodali 3 ml 20% NACO3. Zmes smo pretresli v konstantni temperaturni vodni kopeli pri 25 stopinjah za 2h. Destilirana voda je bila uporabljena kot prazna kontrola. Absorbanca A smo merili pri 760Nm s spektrofotometrom. Za vsako zdravljenje so bile izvedene tri ponovitve. Skupna vsebnost fenola je bila izračunana v skladu s standardno enačbo krivulje.

(2) Spremembe zmanjšanja moči med fermentacijo

Dodajte 45 0 μl vzorca v 2,5 ml fosfatnega pufra s koncentracijo 0. (w/v) z masno koncentracijo 10%centrifugiranje pri 3000 vrtljajih 10 minut, vzemite in takoj narišite 2,5 ml supernatanta v volumetrično bučko, dodate 2,5 ml destilirane vode in 0,5 ml železovega klorida (w/v) z masno koncentracijo 0,1%. Uporabite destilirano vodo kot prazno krmiljenje in izmerite absorbanco A pri valovni dolžini 700nm s spektrofotometrom. Izvedite 3 ponovitve za vsako zdravljenje. Moč redukcijske moči se določi na podlagi vrednosti absorbance.

 

(3) Spremembe sposobnosti odstranjevanja radikalov superoksida med fermentacijo
Postavite 4,5 ml 0. {{1 0}}}}}}} 5 mol/l pH 8.2 Tris-HCl pufer v konstantni temperaturni vodni kopeli in prilagodite temperaturo na 25 stopinj. Po 20 minutah dodajte 1 ml raztopine encimskega vzorca in 0,4 ml raztopine pirogalola z molarno koncentracijo 25 mmol/L. Dobro premešamo in postavite v 25 -stopinjsko vodno kopel 5 minut. Za prekinitev reakcije dodajte 1,0 ml 8 mol/L HCl. Uporabite Tris-HCL pufer kot referenco in za izračun hitrosti čiščenja uporabite spektrofotometer za merjenje absorbance A pri 299 nm. Prazna kontrolna skupina namesto vzorca uporablja 1 ml topila. Hitrost odstranjevanja radikalov superoksida se izračuna v skladu s formulo 4.1: hitrost odstranjevanja radikalnih anionskih radikalov (%)=(a {{24} a2)/a1 × 100 (4.1), kjer je: a1 absorbanca prazne kontrolne skupine; A2 je absorbanca raztopine encimskega vzorca eksperimentalne skupine.

 

(4) Spremembe sposobnosti čiščenja hidroksilnih radikalov med fermentacijo

 

Add water to 450μL sample solution to 2mL, then add it to 1.4mL of hydrogen peroxide with a molar mass concentration of 6mmol/L, then add 0.6mL of sodium salicylate with a molar mass concentration of 20mmol/L and 2mL of ferrous sulfate with a molar mass concentration of 1.5mmol/L, and heat in a constant temperature water Kopel pri 37 stopinjah za 1H. Nič z destilirano vodo in izmerite absorbanco A pri valovni dolžini 562nm s spektrofotometrom. Za vsako zdravljenje so bile izvedene tri ponovitve. Hitrost čiščenja hidroksilnih radikalov je bila izračunana v skladu s formulo 4.2: hitrost čiščenja hidroksilnih radikalov (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.2), kjer je: a1 povprečna absorbanca prazna; A2 je povprečna absorbanca raztopine vzorca.

 

(5) Spremembe sposobnosti čiščenja prostih radikalov DPPH med fermentacijo
Natančno prestavite 2 ml raztopine encimskega vzorca v volumetrično bučko 1 0 ml, nato dodajte 2 ml 80% vodne raztopine DPPH etanola v volumetrično bučko z molsko koncentracijo 2 × 10-4}} mol/l. Dobro premešajte in pustite stati pri sobni temperaturi 30 minut. Kot referenco vzemite 80% raztopino etanola in izmerite absorbanco vzorca pri valovni dolžini 517 nm, ki je zapisana kot A1. Zmešajte 2 ml raztopine DPPH in 2 ml 80% raztopine etanola in izmerite njihovo absorbanco na isti valovni dolžini, ki je zabeležena kot A0. Zmešajte 2 ml encimske raztopine in 2 ml 80% raztopine etanola in izmerite njihovo absorbanco na isti valovni dolžini, ki je zabeležena kot A2. Za vsako zdravljenje so bile izvedene tri ponovitve. Izračunajte hitrost čiščenja prostega radikala DPPH v skladu s formulo 4.3:
DPPH prosta hitrost čiščenja radikala (%) {0}}} [1- (a 1- a2)/a {{16}] × 100 (4.3), kjer je: a1 povprečna absorbanca 2 ml dpph 80% ethanol -vodni volan; A2 je absorbanca 2 ml encimske raztopine in 2 ml 80% mešane raztopine etanola; A0 je absorbanca 2 ml raztopine DPPH in 2 ml 80% mešane raztopine etanola.

(6) Spremembe sposobnosti čiščenja prostih radikalov med fermentacijo
8 μl raztopine vzorca smo dopolnili 10 μl s fosfatnim puferjem (5 mmol/L pH 7,4) in nato enakomerno mešali z 10 ml kalijevega sulfata in ABTS mešane raztopine, da reagira pri reakcijski temperaturi 30 stopinj in reakcijskega časa 5 minut. Raztopina z destilirano vodo in izmeri absorbanco A pri valovni dolžini 734 nm z uporabo spektrofotometra. Za vsako zdravljenje so bile izvedene tri ponovitve. Stopnja čiščenja prostih radikalov ABTS je bila izračunana po formuli 4.4:
ABTS hitrost odstranjevanja radikalov (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.4), kjer: a1 je absorbanca prazne kontrolne skupine; A2 je absorbanca vzorčne eksperimentalne skupine.