Prehranska Cistanche ublažila akutno poškodbo ileuma rac Ⅱ

3.1 Morfologija črevesja

V tej študiji sta bila na sliki 1 prikazana vrhunska patološka preiskava (H&E) in navodila za mikrostrukturo, ocenjeno z ultrastrukturo ileuma. V primerjavi s T0 skupini, ileum v T0plus skupina AFB1 kaže zmanjšanje debeline epitelija, poškodbe strukture resic invnetnaagregacija celic in uničenje mikrostrukture, kot je veliko število resno zlomljenih mikrovil in mitohondrijev, dobro ed in krčenje. Poškodbe v ileumu rac, ki vsebujejo strukturne uničenje resic in mikrovilov po dajanju AFB1 je povzročilo pojav vnetjeoksidacijski stres. Kot je bilo pričakovano,dietna cistančaimel možnost, dazaščititi ileum pred akutno poškodbo, ki jo povzroči AFB1dajanje, vključno z nekaj zlomljenimi resicami ileuma,vnetna celicazbrana in majhna poškodba ileuma, strukturno ocenjena s strani H&E, in zmanjšanje števila zlomljenih mikrovilov, zmanjšanje mitohondrijskih nabrekanje in odpravljanje mitohondrijev krčenje starost ocenjena s prikazano obročasto strukturo razlika v strukturi med T500plus AFB1group in T0plus skupina AFB1.

skupina; T500 plus AFB1: cistanche plus skupina AFB1

Kliknite tukaj, če želite dobiti dodatke proti oksidaciji Cistanche

Vprašaj za več:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

3.2. Ravni aduktov AFB1-DNA v plazmi

AFB1-DNA adukte v plazmi rac so izmerili s posredno kompetitivno ELISA in prikazano na sliki2. V primerjavi s T0 skupini je uporaba AFB1 znatno povečala vsebnost aduktov AFB1-DNA (p < 0.001) in the plasma. As expected, dietna cistančazmanjšana vsebnost aduktov AFB1-DNA (p = 0.001) v plazmi rac v skupini T500 plus AFB1 glede na tisto v skupini T0 plus skupina AFB1.

plus AFB1: cistanche plusskupina AFB1. Vrednosti so izražene kot povprečje± SEM (n= 15), ** pomeni < 0.01.

3.3. Antioksidativna zmogljivost v plazmi in ileumu

Antioksidativna sposobnost plazme je prikazana na sliki3. Izpostavljenost AFB1 je povzročila oksidacijski stres, kar kaže, da je T-SOD (p = 0.073), GSH-PX (p = 0.034) in GSH-ST (p = 0.003) aktivnosti v plazmi so se zmanjšale pri T0 plus skupina AFB1 kot tiste v skupini T0 skupina. Vendar T-SOD (p = 0.039), GSH-PX (p = 0.009) in GSH-ST (p = 0.003) so bile dejavnosti v T500 plus skupina AFB1 kot tiste v skupini T0 plus skupina AFB1. Koncentracija MDA (p = 0.028) v plazmi se je v T0 plus skupina AFB1 kot tista v skupini T0 skupino in koncentracijo MDA (p < 0.001) in the plasma was decreased in the T500 plus skupina AFB1 kot tiste v skupini T0 plus AFB1. 

3.4. Izražanje genov, povezanih s signalno potjo Nrf2-ARE, v ileumuDajanje AFB1 je povzročilo celični oksidacijski stres in nadalje povzročilo spremembe izražanja genov, vključno s Keap1, Nrf2, CAT, SOD1, GPX, GST, NQO-1, HO-1, GCLC in GCLM v ileumu race. Kot je prikazano na sliki4je uporaba AFB1 znatno povečala mRNA (p = 0.001) ravni gena Keap1 in zavirane ravni mRNA genov, vključno z Nrf2 (p = 0.171), MAČKA (p = 0.166), SOD1 (p = 0.121), GPX (p = 0.065), GST (p = 0.008), NQO-1 (p = 0.061), HO-1 (p = 0.068), GCLC (p = 0.800) in GCLM (p = 0.090) in vsebnost beljakovin Nrf2 (p = 0.001) v ileumu rac v T0 plus skupina AFB1 glede na tiste v skupini T0 skupina. Kot je bilo pričakovano, je 70-dnevno dodajanje cistanche racam, hranjenim z dieto, znatno zmanjšalo mRNA (p = 0.012) ekspresija gena Keap1 v ileumu, znatno povečana raven mRNA genov, vključno z Nrf2 (p = 0.042), SOD1 (p = 0.038), HO-1 (p = 0.041), NQO-1 (p = 0.047) in GCLC (p = 0.043) in izboljšana raven mRNA genov, vključno s CAT (p = 0.229), GPX (p = 0.568), GST (p = 0.454) in GCLM (p = 0.860) in protein Nrf2 (p = 0.005) v ileumu rac v T500 plus skupina AFB1 glede na tiste v skupini T0 plus skupina AFB1.

* pomenip < 0.05, ** meansp < 0.01

3.5. Izražanje genov, povezanih z NF-κB Signalna pot v ileumu

Izražanje vnetnih genov je prikazano na sliki5. V primerjavi s T0 skupini je uporaba AFB1 povečala raven mRNA nekaterih genov, kot je TLR4 (p = 0.037), NF-κB (p <0.001), TNF- (p = 0.025), IL-6 (p = 0.072), TXNIP (p = 0.007), NLRP3 (p <0.001) in IL-18 (p = 0.478) v ileumu rac v T0 plus skupina AFB1. Kot je bilo pričakovano,dietna cistančaznatno zaviral čezmerno izražanje genov, vključno s TLR4 (p <0.001), NF-κB (p = 0.001), TNF- (p = 0.012), IL-6 (p = 0.007), TXNIP (p = 0.001), NLRP3 (p = 0.001) in IL-18 (p <0.001) v ileumu rac v T500 plus skupina AFB1 glede na tiste v skupini T0 plus skupina AFB1. Poleg tega je vsebina PP 65 (p = 0.004) v ileumu povečano v T0 plus skupina AFB1 glede na tisto v skupini T0 skupina. Kot je bilo pričakovano,dietna cistančaznatno potisnjen PP 65 (p = 0.015) vsebnost beljakovin.

intenzivnost tarčnega proteina glede na notranjo referenco (GAPDH). Vrednosti so bile izražene kot povprečje± SEM (n = 15) in* pomenip < 0.05, ** means p < 0.01

4. Razprava

Črevesna morfologija je eden od vedenjskih markerjev za oceno vnetja in oksidacijskega stresa črevesja, ki ga povzroča dajanje AFB1. Literature o učinkih dajanja AFB1 na morfologijo ileuma rac je malo. Yan et al. (2020) so poročali, da je dajanje AFB1 povzročilo patološko poškodbo srca pri podganah Sprague-Dawley, infiltracijo vnetnih celic in večjo degeneracijo kardiomiocitov [29]. Kataralni enteritis z infiltracijo vnetnih celic v črevesju pitovnih piščancev, povzročen z AFB1, je uničil strukturo črevesja.12]. Luzi idr. (2002) so poročali o akutnih kontrakcijah ileuma, ki jih povzroča dajanje AFB1 [30]. Rezultati v tej študiji so pokazali, da je prehranska cistanča močna zaščita ileuma pred zaviranjem vnetja, kar bi lahko pomenilo, da je imela cistanča sposobnost zaviranja protivnetnega delovanja pri več vnetnih motnjah pri miših [31–33]. Poškodba DNK, ki jo povzroči oksidativni stres, bo uničila stabilnost DNK, kar lahko spodbudi nastanek različnih aduktov DNK.34]. AFB1-DNK adukt je biomarker za oceno stopnje poškodbe telesa, ki jo je povzročil AFB1. Sintetiziranje in obogatitev aduktov AFB1-DNA je uničilo strukturo tkiv, kar je povzročilo karcinogeni razvoj [35]. AFB1 bi izoencimi citokroma P450s presnovili v AFB1-8,9-epoksid (AFBO) in proizvedli sorodne adukte [36] in poveča poškodbe tkiva, oksidativni stres in poškodbe DNK zaradi ROS [37]. AFB1-adukti DNK se lahko vežejo na nukleoproteine ​​in nukleinske kisline, s čimer povzročijo poškodbe DNK in celic ter zmanjšajo raven antioksidativnih encimov in sintezo beljakovin [38]. Zhang et al. (2016) so poročali, da je dopolnjen s cistanhami zaviral poškodbe jeter, ki jih povzroča AFB1, s povečanjem antioksidacijske aktivnosti antioksidativnih encimov (GPx, SOD, CAT in GST) in zaviranjem proizvodnje DNA AFB1- [39]. V tej študiji je uporaba AFB1 povečala vsebnost aduktov AFB1-DNA v plazmi. Prehranska cistanča je znatno zmanjšala ta pojav, rezultati so pokazali, da je prehranska cistanča potencial za zaščito ileuma v tem modelu akutnega dajanja AFB1, kar je mogoče razložiti z antioksidativnim učinkom cistanhe, ki je izboljšal antioksidacijsko sposobnost telesa [40,41]. Oksidacijski stres se pojavi, ko je neravnovesje oksidacije in antioksidacije v telesih povzročeno z zmanjšanjem aktivnosti antioksidativnih encimov in zvišanjem ravni peroksidacije lipidov. Antioksidativni encimski sistem, vključno s CAT, GSH-Px in SOD, je prva linija celične obrambe pred prostimi radikali in reaktivnimi kisikovimi vrstami (ROS) in je nepogrešljiv v celotni obrambni strategiji antioksidantov v telesu [42]. 

GST je ključni encim za znižanje regulacije reaktivnih kisikovih vrst (ROS) in oksidativnega stresa, da se doseže razstrupljanje telesa [43]. Kot je prikazano na sliki3, se je oksidacijski stres v plazmi in ileumu rac pojavil med akutno poškodbo ileuma, ki jo je povzročilo dajanje AFB1. Kot je bilo pričakovano, je prehranska cistanča izboljšala oksidacijski stres teles s povečanjem aktivnosti T-SOD, GSH-PX in GSH-ST v plazmi in ileumu po dajanju AFB1. Rezultati te študije so pokazali, da je cistanča močno antioksidacijsko sredstvo za race, ki so jih hranili z AFB1, kar je mogoče razložiti z antioksidativno zmogljivostjo prek zaviranja oksidacije lipidov in povečanja aktivnosti antioksidacijskih encimov z dodatkom cistanhe [8,44,45]. Ti rezultati so v skladu s prejšnjim poročilom, ki je pokazalo, da je cistanche izboljšal AFB1-povzročeno spremembo v aktivnostih glutationa, SOD, CAT in MDA [8]. To je lahko posledica sposobnosti cistanche, da lovi proste radikale z obnavljanjem aktivnosti antioksidativnih encimov in lajšanjem oksidativnega stresa.15,46]. Ravnovesje med oksidacijo in antioksidacijo in vivo uravnavata T-SOD in GSH-Px [47]. Nrf2 je bil premeščen v celično jedro in kombiniran z antioksidantnim odzivnim elementom (ARE) ter pospešil transkripcijo genov antioksidantnih encimov, vključno s SOD, CAT, GSH-Px, HO-1, NQO-1, GCLC in GCLM [47,48]. Poleg tega se GST poveča z aktiviranjem signalne poti Nrf2 in kot nekakšen encim za razstrupljanje faze II, ki je vključen v različna razstrupljanja in vivo za lajšanje oksidativnega stresa.49,50]. Oksidativni stres in lipidna peroksidacija sta bila biomarkerja za podgane, ki sta bila povzročena z dajanjem AFB1 [51,52]. Oksidativni stres je bil zmanjšan z izražanjem aktivacijskih genov pod signalnimi potmi Nrf2-ARE, kot so NQO-1, HO-1 in GCLC [40]. Številne raziskave poročali, da je ekspresija genov, dopolnjena s cistanhami, povzročila izražanje genov, vključno z HO-1, NQO-1, -GCLC, -GCLM, CAT in GPX prek aktivacije Nrf2 pri brojlerjih in podganah [40,41] in odpravil poškodbe jeter, povzročene z dajanjem AFB1 [39,53]. 

Rezultati te študije so pokazali, da lahko dajanje AFB1 povzroči poškodbo ileuma zaradi oksidativnega stresa z zaviranjem signalne poti Nrf2. Prehranska cistanča je spodbujala ekspresijo genov Nrf2 na nižji stopnji, kot so antioksidativni geni (CAT, SOD1, GPX1, GST) in geni za razstrupljanje encimov faze II (NQO1, HO-1, GCLC, GCLM), kar je pokazalo, da dodajanje cistanče v prehrano za race zavirale akutno oksidacijsko poškodbo ileuma, ki jo je povzročilo dajanje AFB1, z aktiviranjem signalne poti Nrf2-ARE. Rezultati te študije so zagotovili dokaze, da je prehranska cistanča lahko močno sredstvo za izboljšanje zaščite ileuma pred oksidacijskim stresom, ki ga povzroča dajanje AFB1. Oksidacijski stres aktiviran NF-κB signalna pot je nato nadalje ovrednotila proizvodnjo vnetnih citokinov [54]. V tej študiji je lahko poškodba ileuma, ki jo povzroči dajanje AFB1, posledica vnetja. Dajanje AFB1 lahko neposredno povzroči poškodbo ileuma s povečanim izražanjem vnetnih dejavnikov in neposrednim aktiviranjem vnetne signalne poti. Obstaja pozitivna povezava med oksidacijskim stresom in vnetjem v tkivih.55]. Ko et al. (2020) so poročali, da NF-aktiviran oksidacijski stresκB signalne poti, povečali pro-vnetne citokine in povzročili vnetje v pljučih podgan [56]. NF-κB signalizacijo lahko aktivira AFB1 v celični liniji 3D4/21 [57], kar povzroči vrsto vnetnih reakcij [58]. Kumara et al. (2020) so ugotovili, da dajanje AFB1 povzroči vnetje s povišanjem ravni provnetnih dejavnikov citokinov, TNF- , IL-12 in IL-6 v serumu albino miši [59]. Izpostavljenost AFB1 s hrano je povzročila prekomerno izražanje genov TNF- , IL -1 in IL-6 v jetrih prašičev ter ravni mRNA vnetnih dejavnikov (TNF- , IL-12, IL-6) v jetrih prašičev, hranjenih s hrano, ki je vsebovala 8 odstotkov moke grozdnih pečk, in AFB1 vrnil na kontrolne ravni [60]. Ravni TNF- , IL-6 in IL-1 v jetrih podgan z intrauterinim zaostankom rasti so se povečale, kar v jetrih podgan z IUGR, hranjenih s cistanho 400 mg kg−1 dieta vrnjena na kontrolno raven normalne porodne teže podgan [38]. Aktivacija NF-κSignalna pot B je pospešila izražanje genov (NLRP3 in kaspaza-1), kar je spodbujalo IL-1 in zorenje in izločanje IL-18 ter sprožilo vnetni odziv [61]. Rezultati v tej študiji so pokazali, da je dajanje AFB1 pomembno ovrednotilo gensko izražanje dejavnikov vnetja v ileumu rac, prehranska cistanča pa je zavirala izražanje tega gena, v skladu s študijo, da aktivacija signalne poti NLRP3 z AFB1 pri podganah [40]. Prejšnji rezultati so pokazali, da ima cistanche sposobnost zaviranja ekspresije proteina NLRP3 z zaviranjem kaspaze-1 in IL-1 [29]. Tako so rezultati te študije pokazali, da je lahko cistanche eden od obetavnih krmnih dodatkov za lajšanje vnetja v ileumu in poškodbe ileuma, ki jih povzroča dajanje AFB1 z zaviranjem NF-κB signalna pot

5. Sklepi

Skratka, uporaba AFB1 je povzročila poškodbo ileuma, oksidacijski stres in vnetje z zaviranjem izražanja spodnjih genov signalne poti Nrf2-ARE in aktiviranjem izražanja genov spodnjih genov NF-κB signalna pot. Vendar pa je prehranska cistanča izrazito izboljšala poškodbe ileuma, oksidacijski stres in vnetje pri racah, povzročeno z dajanjem AFB1, verjetno zaradi aktiviranja Nrf2-ARE in zaviranja NF-κB signalna pot (slika6). Rezultati te študije so zagotovili močne dokaze, da je prehranska cistanča učinkovit krmni dodatek za zaščito ileuma pred akutno poškodbo, ki jo povzroča dajanje AFB1 z aktiviranjem Nrf2-ARE in zaviranjem NF-κB signalna pot.