Vpliv izvlečkov bananine lupine Sucrier na zaviranje melanogeneze prek signalne poti ERK
Apr 25, 2023
Povzetek
Hiperpigmentacija je vrsta pigmentne motnje, ki jo povzroči prekomerna vsebnost melanina, ki povzroči hude estetske težave, kot so melazma, pege, epelidi, lentigo in druge oblike na človeški koži. Več belilnih sredstev je omejena zaradi njihovih stranskih učinkov ali stabilnosti, kot so kojična kislina, askorbinska kislina in hidrokinon, ki lahko delujejo kot citotoksične snovi, povezane z dermatitisom in kožnim rakom. Da bi našli varno snov, je ta študija želela odkriti sposobnost več komponent v izvlečkih bananinega olupka Sucrier (SBP), da zavirajo proces melanogeneze prek signalne poti p38 v celicah mišjega melanoma B16F10. Aktivnost tirozinaze in vsebnost celičnega melanina sta se zmanjšala po zdravljenju s SBP, odvisno od odmerka. Poleg tega je SBP zmanjšal izražanje beljakovin, povezanih z melanogenezo, kot sta z mikroftalmijo povezani transkripcijski faktor (MITF) in protein tirozinaze po 24 urah inkubacije s stimulacijo melanocitnih stimulirajočih hormonov (MSH). Ugotovitve so pokazale, da je SBP vseboval učinkovito sredstvo za zaviralce hiperpigmentacije prek signalnih poti p38 brez kakršnega koli vpliva na pot ERK in posledično znižalo ekspresijo MITF in proizvodnjo družine encima tirozinaze.
Glede na ustrezne študije,cistancheje navadno zelišče, ki je znano kot »čudežno zelišče, ki podaljšuje življenje«. Njegova glavna sestavina jecistanozid, ki ima različne učinke kot nprantioksidant, protivnetno, inspodbujanje imunske funkcije. Mehanizem med cistanho in beljenjem kože je v antioksidativnem učinku cistanche glikozidov.Melaninv človeški koži nastane z oksidacijo tirozina, ki jo katalizira tirozinaza, oksidacijska reakcija pa zahteva sodelovanje kisika, zato radikali brez kisika v telesu postanejo pomemben dejavnik, ki vpliva na proizvodnjo melanina.Cistanchevsebuje cistanozid, ki je antioksidant in lahko zmanjša nastajanje prostih radikalov v telesu, takozaviranje proizvodnje melanina.
Kliknite na Kje lahko kupim Cistanche
Za več informacij:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
Ključne besede:sucrier bananin olupek; fenolne spojine; tirozinaza; z mikroftalmijo povezan transkripcijski faktor; melanogeneza
Uvod
Melanin nastaja v melanosomu, ki je pomemben organel znotraj celic melanocitov. Melanociti se nahajajo v bazalni plasti povrhnjice kože. Po proizvodnem procesu je melanin pigment, odgovoren za obarvanost kože, las in oči, ki deluje kot naturaliziran antioksidant, sredstvo za razstrupljanje in močan kelator kationov ter lahko deluje tudi kot univerzalna zaščita pred poškodbami UV [1]. Nenormalna proizvodnja melanina lahko povzroči pigmentne motnje, kot sta hipopigmentacija in hiperpigmentacija. Hipopigmentacija povzroča vitiligo, albinizem in nenormalne težave z lasmi, medtem ko hiperpigmentacija povzroča pege, melazmo, starostne pege in povnetno hiperpigmentacijo. Genetska predispozicija, hormonske spremembe, zlasti estrogen, tudi drugi, kot so bolezen jeter, tumor, rak, podhranjenost ali nepravilno delovanje hipofize, so intrinzični dejavniki, vključno z zunanjimi dejavniki, kot je izpostavljenost UV žarkom, strupene snovi pa so glavni vzrok za hiperpigmentacijo [2] .
Tirozinaza je stopenjski encim, ki omejuje hitrost in cilja na proces stimulacije in zaviranja procesa proizvodnje melanina. Stimulacija melanina se uporablja kot sredstvo za porjavitev ali zdravljenje depigmentacije las. Ekspresijo tirozinaze nadzira transkripcijski faktor, povezan z mikroftalmijo (MITF), ki je za melanocite specifičen transkripcijski faktor, ki nadzoruje diferenciacijo, proliferacijo in preživetje melanocitov [3, 4]. Odgovornost MITF za melanogenezo je povečati ekspresijo tirozinaze z vezavo na DNA v strukturi homodimera ali heterodimera z MiT proteinom, pri čemer ta vezavna mesta vključujejo E-Box in M-Box bočni timidinski nukleotid, ki stimulira neprekinjene korake k proizvodnji melanogenega encima kot so s tirozinazo soroden protein 1 (TRP-1), s tirozinazo soroden protein-2 (TRP-2) in dopakrom tavtomeraza. Regulacija MITF se začne s transdukcijo signala, potem ko se -MSH veže na receptor MC1R, ki stimulira mitogen-aktivirano protein kinazo (MARKs), ki je serin/treonin kinaza in vključuje tudi zunajcelično signalno regulirano kinazo (ERK) in tudi p38. Več študij je pokazalo, da je sinteza melanina nadzorovana z več signalnimi potmi, kot je fosfotidilinazital-3-kinaza (PI3K/AKT), ki jo lahko zavirajo naravne snovi, ki vsebujejo polifenolno skupino prek signalne poti ERK celic mišjega melanoma B16F10 [5,6]. ].
Namen te študije je bil ugotoviti učinek zaviranja melanogeneze iz izvlečkov bananine lupine Sucrier (SBP). SBP lahko vsebuje več vrst polifenolnih spojin, ki delujejo kot inhibitorji tirozinaze, kot so katehin, procianidin, ferulinska kislina in galna kislina, ki jih zazna izražanje signalnih poti ERK, ki vpliva na proizvodnjo melanogenih encimov, kot je TRP-1 in TRP-2 [7-10].
Materiali in metode
Kemikalije in materiali
Natrgani (7 dni po obiranju) olupki banan Sucrier (Musa spp.) iz province Kampangpetch na Tajskem. Oprane bananine olupke z vodo, nato pečene na soncu, dokler niso popolnoma posušene, zmlete v mešalniku in ekstrahirane z namakanjem v 60-odstotnem metanolu za 24 ur (MW24), centrifugirane s 95-odstotnim etanolom 10 minut pri 4 stopinjah (E4), vrejo v DI vode pri 60 stopinjah 20 minut (W60) in vre v 95 odstotnem metanolu pri 60 stopinjah 20 minut (M60). Naslednji korak je bil zmanjšanje prostornine z rotacijskim uparjalnikom pri 40 stopinjah in sušenje z zamrzovalnim sušilnikom Christ Alpha- 4 LD plus.
Kultura celic
Celice mišjega melanoma B16F10 smo gojili v Dulbeccovem modificiranem Eagleovem mediju (DMEM), dopolnjenem z 10 odstotki fetalnega govejega seruma pri 37 stopinjah v inkubiranem okolju s 5 odstotki CO2. Po 24 urah inkubacije nato medij zamenjajte z medijem brez seruma z različnimi koncentracijami izvlečkov bananine lupine Sucrier (SBP) s stimulacijo -MSH. Nato so bile celice pobrane s tripsinizacijo za naslednje poskuse.
Test viabilnosti celic
Citotoksičnost izvlečkov SBP smo merili z MTT testom. Celice (5 × 10 3) smo zasejali na plošče s 96 vdolbinicami in gojili v DMEM 24 ur pri 37 stopinjah v inkubiranem s 5 odstotki CO2, nato pa medij zamenjali z medijem brez seruma z različnimi koncentracijami izvlečkov SBP za 48 ur. Po obdelavi smo medij zavrgli in dvakrat sprali s hladnim PBS, v vsako vdolbinico dodali 100 ul raztopine MTT (5 mg/ml), inkubirali pri 37 stopinjah 4 ure, nato pa izmerili z čitalnikom ELISA pri 420 nm.
Analiza vsebnosti melanina
Pobrane celice smo lizirali v hladnem pufru za lizo (20 mM natrijevega fosfata pH 6,8, 1 odstotek tritonX-100, 1 mM PMSF in 1 mM EDTA) in nato 10 minut centrifugirali 1200 vrt./min pri 4 stopinjah, da smo ločili supernatant, medtem ko so melaninske pelete smo raztopili v 200 ul 1N NaOH 60 minut pri 80 stopinjah. Za merjenje absorbance pri 415 nm smo uporabili čitalnik ELISA. in izračunano v primerjavi z vsebnostjo beljakovin iz testa vsebnosti beljakovin bicinhoninske kisline (BCA) (Pierce Biotechnology, Packford, IL, ZDA).
Western blot analiza
Supernatant, ki je bil ločen med napredovanjem celične lize, je bil vzet za frakcioniranje na SDS-PAGE in nato prenesen na Hybond izboljšano kemiluminiscenčno nitrocelulozno membrano (Amersham, Little Chalfont, Združeno kraljestvo) in sondo s primarnim protitelesom proti tirozinazi (Santa Cruz, Biotechnology, Santa Cruz , CA, ZDA), MITF (Merck Millipore Darmstadt, Nemčija), ERK (Merck Millipore Darmstadt, Nemčija), P38 (Merck Darmstadt Millipore, Nemčija) in monoklonska protitelesa proti B-aktinu (AC-15, Sigma Aldrich ). Od takrat naprej inkubirajte membrano z vizualizacijo kompleksa sekundarnih protiteles, konjugiranih s hrenovo peroksidazo, in kvantificirajte signale s programsko opremo ImageJ.
Statistična analiza Vse informacije so bile analizirane s povprečjem ± standardni odklon (SD). Enosmerni test ANOVA se uporablja za merjenje razlik med posameznimi nizi informacij. P-vrednost, manjša od 0,05, je veljala za statistično pomembno.
Rezultati
Fenolna spojina
Cilj tega poskusa je bil izmeriti učinkovitost topil, uporabljenih za ekstrakcijo, in tudi metodo, ki lahko čim bolj ekstrahira fenolne spojine. Večina fenolnih spojin se zelo dobro raztopi pri ekstrakciji z visoko polarnimi raztopinami, kot so voda, metanol (MeOH), etanol (EtOH), aceton, etilacetat, propanol, ocetna kislina ali njihova mešanica v različnih delih [11]. Slika 1A prikazuje, da lahko W60 ekstrahira fenolne spojine do 16,24 µg/ml, ki mu sledijo M60, E4 in MW24 s skupnim fenolom 13,89, 9,21 oziroma 8,38 µg/ml. Citotoksičnost SBP so eksperimentirali z redukcijskim testom MTT, ki je meril redukcijsko okolje iz mitohondrijske funkcije živih celic z merjenjem tvorbe formazana za dostop do citotoksičnih učinkov. Rezultat je pokazal, da SBP pri navedenih koncentracijah (do 500 µg/ml) z 48-urno inkubacijo. Citotoksičnost ne kaže pomembnega učinka po zdravljenju s SBP (slika 1B).
Učinki SBP na aktivnost encimov in vsebnost melanina v celicah B16F10
Da bi preizkusili supresijo melanogeneze SBP, je bil prvi korak preizkusiti zmožnost zaviranja encima tirozinaze v primerjavi s kojično kislino, ki je komercialno belilno sredstvo. SBP (MW24) ima večjo učinkovitost kot Kojična kislina in druge ekstrakcije pri enaki koncentraciji (100-500 µg/ml). MW24 ima najvišji odstotek inhibicije tirozinaze (66.39-77.05 odstotkov), medtem ko ima kojična kislina le odstotek inhibicije tirozinaze pri 44.68-59.93 odstotkov, kot je prikazano na sliki 1C. Od takrat naprej je bil MW24 z najvišjim odstotkom inhibicije tirozinaze izbran za merjenje proti melanogenezi s proizvodnjo melanina iz celic B16F10. Vsebnost melanina v celicah B16F10 se je zmanjšala po zdravljenju s SBP (MW24) (slika 2A). Količina vsebnosti melanina v celicah B16F10 se znatno zmanjša po stimulaciji z -MSH in obdelavi s SBP (MW24) 24 ur na način, ki je odvisen od odmerka, kot je prikazano na sliki 2B.
Učinki SBP (M24) na ravni izražanja beljakovin tirozinaze in MITF
Western blot analiza je bila uporabljena za aktivnost tirozinaze in MITF z merjenjem ravni ekspresije beljakovin po 24-urnem zdravljenju s SBP (MW24). Regulacija melanogenih encimov, kot sta TRP-1 in TRP-2, je bila posledica transkripcijskega učinka MITF in ravni proteina tirozinaze. Rezultati kažejo, da je bil SBP (MW24) sposoben od odmerka odvisno znižati ekspresijo proteina tirozinaze in MITF, kot je prikazano na sliki 3.
Vpliv SBP (M24) na inhibicijo melanogeneze prek signalne poti, aktivirane z mitogenom protein kinaze (MAPKs)
Pri melanogenezi je družina kinaz MAPK, zlasti ERK in p38, neposredno povezana s tem postopkom [12]. Signalizacija ERK se bo regulirala navzdol, medtem ko se bo signalizacija p38 med pojavom proizvodnje melanina regulirala navzgor. Vendar bo fosforilacija ERK in p38 imela obraten postopek proizvodnje melanina. Rezultati so pokazali jasen učinek po zdravljenju s SBP (MW24) z -MSH, aktiviranim z imunoblotingom na signalno pot MAPK. SBP (MW24) je rahlo zmanjšal izražanje proteina p38 in pospešil fosforilacijo p38. Ta rezultat je pokazal način za zaviranje procesa melanogeneze po poti p38 brez kakršnega koli vpliva na ERK, vendar se je fosforilacija ravni proteina ERK rahlo zmanjšala po zdravljenju z -MSH in SBP (MW24), kot je prikazano na sliki 4.
Diskusija
Sucrier bananin olupek je kmetijski odpadek, ki ima obilico številnih učinkovin, predvsem v skupini fenolnih spojin in karotenoidov, ki so sekundarni metabolit, ki ga rastline ustvarjajo za samoobrambne mehanizme [7]. Te snovi najdemo v listih, lubju, plodovih, lupinah in semenih skoraj vseh rastlin. Fenolne spojine in karotenoidi so fitokemične snovi, ki imajo dobre lastnosti za zdravje ljudi. Snovi vključujejo protivnetne, protivirusne, analgetične, antioksidativne, antikarcinogene itd. [13]. Na splošno se lahko fenolne spojine dobro raztopijo v visokopolarnih topilih. Za poskus bi morala biti ekstrakcija MW24 sposobna najbolj ekstrahirati fenolne spojine zaradi postopka ekstrakcije iz testa Folin-Cicualteu. Najprej smo ekstrahirali nizko polarne spojine, nato pa visoko polarne snovi, odvisno od končnega mešalnega razmerja topila v postopku. Rezultati kažejo, da lahko W60 najbolj ekstrahira fenolne spojine, verjetno zaradi temperature 60 stopinj Celzija, ki bi lahko bila primerna temperatura za ekstrakcijo fenolnih spojin [11]. Lahko se tudi domneva, da lahko SBP vsebuje visoko polarne snovi, ki se dobro topijo v vodi. Pri primerjavi količine skupnih fenolnih spojin, kot je prikazano na sliki 1A, so W60, M60, E4 in MW24 znatno pokazali možnost topnosti snovi.
Ko je znana skupna količina fenolne spojine, lahko nadaljujemo z natančno določitvijo vrste in količine flavonoidov in karotenoidov. Ugotovili smo, da izvlečki SBP (MW24) vsebujejo ferulinsko kislino do 906,62 mg/100 g, našli pa smo tudi majhno količino luteina in karotena, ki sta bila razvrščena v skupino karotenoidov pri 1,23 oziroma 2,37 mg/100 g. SBD (MW24) ima še vedno visok odstotek inhibicije tirozinaze. Zato je bil za nadaljnjo študijo izbran SBP (MW 24).
Pri testiranju citotoksičnosti ni bilo ugotovljenih pomembnih citotoksičnih učinkov SBP, čeprav je bila koncentracija uporabe do 500 µg/ml. verjetno zato, ker ima majhna količina karotenoida v ekstrakciji sposobnost zaščite celic. Snovi v tej skupini imajo antioksidativne lastnosti, ki lahko prekinejo strup s citokromom P-450, zlasti -karoten, ki ima stimulativno vlogo pri imunskih funkcijah z interakcijo z reakcijskimi kisikovimi vrstami (ROS). To bo podprlo učinkovitost fenolne spojine, ki ima učinek odstranjevanja ROS za zmanjšanje vnetnega citokina [14]. SBD (MW24) torej nima samo toksičnega učinka, ampak ima tudi vlogo zaščite celic.
Naša študija je tudi pokazala, da ima SBP (MW24) sposobnost zaviranja melanogeneze celic B16F10. Izražanje tirozinaze in MITF se je zmanjšalo po zdravljenju s SBP (MW24) pri obeh, ocenjenih z gobjo tirozinazo in Western blot analizo na način, ki je odvisen od odmerka. Ta test je pokazal, da lahko SBP (MW24) zavre nastajanje melanina tako, da zniža signalno pot p38 in poveča fosforilacijo p38, kar aktivira razgradnjo proteina MITF in nato vpliva na zmanjšanje izražanja družine melanogenih encimov, kot je tirozinaza. Supresija p38 zmanjša funkcije cAMP odzivnega vezavnega proteina (CREB), ki je pomemben transkripcijski faktor, ki deluje s PAX3 in SOX10, ki se veže na M-BOX gena MITF, da aktivira ekspresijo proteina MITF, ki vpliva na proces proizvodnje melanina in aktivnost preživetja celic [15]. ]. Na splošno aktiviranje ERK vodi do fosforilacije MITF pri serinu 73, kar povzroči ubikvitinacijo in sčasoma razgradnjo. Večina naravnih spojin lahko zavira melanogenezo s procesom stimulacije signalne poti ERK, vendar SBP (MW24) ni bistveno vplival na signalno pot ERK [16].
Številne raziskave so pokazale, da lahko fenolne spojine in karotenoidi zavirajo nastajanje pigmentov melanina, ker ima beta-karoten sposobnost absorbiranja fotonov UVB, hkrati pa ima tudi lastnost lipidotopnega antioksidanta, fenolna spojina pa lahko aktivira Nrf2, blokira receptorje ROS in zmanjša vnetje. proizvodnjo citokinov in inducirajo izražanje y-GSC, kar podpira našo študijo, vendar na drugačen način inhibicije melanogeneze [17]. Razen te ferulinske kisline, ki jo najdemo v SBP (MW24), je bila glavna snov v skupini fenolnih spojin, kar je potrdilo več študij, da ima lastnost anti-melanogeneze, ker lahko modulira ekspresijo vaskularnega endotelnega rastnega faktorja (VEGF), inducira dušikov oksid sintaze, delujejo kot tumor supresorski gen in so povezani tudi s postopkom proizvodnje melaninskih pigmentov. V raztopini SBP (MW24) lahko ferulinska kislina poveča učinkovitost, če jo pomešamo s karotenoidom ali drugimi fosfolipidi, ker se bo povečala topnost v vodi, topnost v lipidih in biološka uporabnost, kar bo izboljšalo inhibicijo melanogeneze celic B16F10 [18]. Posledica vseh rezultatov je zaključek, da bi SBP (MW24) lahko učinkovito zmanjšal melanogenezo.
Okrajšave
MITF: z mikroftalmijo povezan transkripcijski faktor; -MSH: -melanocite stimulirajoči hormon; MC1R: receptor za melanokortin-1; TRP1: s tirozinazo soroden protein 1; TRP2: s tirozinazo soroden protein 2; MAPK: protein kinaza, aktivirana z mitogenom.
Zahvala
To delo je bilo podprto s štipendijami Royal Golden Jubilee Ph.D.: RGJPHD. Tajska. (PH.D./0017/2558).
Avtorski prispevki
RH, KT, KS in UP so zasnovali in oblikovali poskuse; RHCHL in MC sta izvedla poskuse; RH in MC ter CHL so analizirali podatke; Reagenti/materiali/analizna orodja, ki jih prispeva RH; RH in CHL sta napisala prispevek.
Konkurenčni interesi
Avtorji so izjavili, da ne obstaja noben konkurenčni interes.
Reference
1. Regnault MR, Gadaud N, Boulinguez S, Tournier E, Lamant L, Gladieff L, et al. Retikularna hiperpigmentacija, povezana s kemoterapijo: serija primerov in pregled literature. Dermatologija 2015; 231: 312-8.
2. Ali A. Dermatologija slikovni pregled. McGraw Hill Education 2010. ISBN978-0-07-179323-0.
3. Garraway LA, Widlund R, Rubin MA, Getz G, Berger AJ, Ramaswamy S, Beroukhim R, et al. Integrativne genomske analize identificirajo MITF kot onkogen za preživetje linije, pomnožen v malignem melanomu. Narava 2005; 436: 117–22.
4. Busca R, Ballotti R. Ciklični AMP ključni glasnik pri uravnavanju pigmentacije kože. Raziskave pigmentnih celic in melanoma 2000; 13: 60-9.
5. Zhou J, Ren T, Li Y, Cheng A, Xie W, Xu L, et al. Oleoiletanolamid zavira melanogenezo, stimulirano s hormonom, ki stimulira melanocite, prek signalnih poti ERK, Akt in CREB v celicah melanoma B16. Oncotarget 2017; 8: 56868-79.
6. Onkoksoong T, Jeayeng S, Poungvarin N, Limsaengurai S, Thamsermsang O, Tripatara P, Akarasereenont P, Panich U. Tajska zeliščna antipiretična formula 22 (APF22) zavira UVA-posredovano melanogenezo z aktivacijo Nrf2-reguliranega antioksidanta obramba. Raziskava fitoterapije 2018; 32: 1546-54.
7. Singh B, Singh JP, Kaur A, Singh N. Bioaktivne spojine v banani in z njimi povezane koristi za zdravje – pregled. Živilska kemija 2015; 1: 1-11.
8. Leerach N, Yakaew S, Phimnuan P, Soimee W, Nakyai W, Luangbudnark W, Viyoch J. Učinek tajske banane (skupina Musa AA) pri zmanjševanju kopičenja končnih produktov oksidacije v koži miši, obsevani z UVB. Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biologija 2017; 168: 50-58.
9. Hung BY, Kim SY, Jung JM, Won CH, Choi JH, Lee MW. Antimikotik klotrimazol zavira melanogenezo s pospeševanjem razgradnje tirozinaze, posredovane z ERK in PI3K-/Akt. Eksperimentalna dermatologija 2015; 24: 381-400.
10. Shen T, Heo SI, Wang MH. Vpletenost p38 MAPK in signalne poti ERK v antimelanogeni učinek metil 3,5- kafeoil kinata v celici mišjega melanoma B16F10. Kemijsko-biološka interakcija 2012; 199: 106-11.
11. Ruesgas-Ramón M, Figueroa-Espinoza MC, Durand E. Uporaba globokih evtektičnih topil (DES) za ekstrakcijo fenolnih spojin: pregled, izzivi in priložnosti. Journal of Agricultural and Food Chemistry 2017; 10: 3591-3601.
12. Tsao YT, Kuo CY, Kuan YD, Lin HC, Wu LH, Lee CH. Izvlečki Astragalus membranaceus zavirajo melanogenezo skozi signalno pot ERK. International Journal of Medical Sciences 2017; 3: 1049-53.
13. Chang TS. Posodobljen pregled zaviralcev tirozinaze. International Journal of Molecular Sciences 2009; 26: 2440-75.
14. Juturu V, Bowman JP, Deshpande J. Splošni ton kože in učinki izboljšanja posvetlitve kože z oralnimi dodatki izomerov luteina in zeaksantina: dvojno slepo, s placebom nadzorovano klinično preskušanje. Klinična, kozmetična in raziskovalna dermatologija 2016; 7: 325-332.
15. Bell RE, Levy C. Trije m-ji: melanom, transkripcijski faktor, povezan z mikro-oftalmijo, in mikroRNA. Raziskava melanoma pigmentnih celic 2011; 24: 1088–106.
16. Zhou J, Ren T, Li Y, Cheng A, Xie W, Xu L, Peng L. Oleoylethanolamide zavira -melanocite stimulira hormonsko stimulirano melanogenezo preko ERK, Akt in CREB signalnih poti v celicah melanoma B16. Oncotarget 2017; 23: 56868-79.
17. Toews DPL, Hofmeister NR, Taylor SA. Evolucija in genetika predelave karotenoidov pri živalih. Trendi v genetiki 2017; 33: 171-182.
18. Li L, Liu Y, Xue Y, Zhu J, Wang X, Dong Y. Priprava kompleksa ferulinska kislina-fosfolipid za izboljšanje topnosti, raztapljanja in inhibicijske aktivnosti celične melanogeneze B16F10. Chemistry Central Journal 2017; 22: 11-26.
Za več informacij: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
