Gao-Zi-Yao izboljša učenje in funkcijo spomina pri starih podganah s spontano hipertenzijo 2. del

Poskusne živali

Dvanajstmesečni in osem tednov stari podganji samci s spontano hipertenzijo (SHR) so bili kupljeni pri Nanjing Animal Model Center.

Med 8-teden starimi samci in spominom obstaja močna povezava. Možgani moškega bitja se v tem obdobju pospešeno razvijajo, povezave med njegovimi nevroni se postopoma krepijo, kar posledično vpliva na razvoj spomina.

Raziskave kažejo, da se spomin moških s staranjem še naprej izboljšuje. To ne le pomembno vpliva na njihovo preživetje in razmnoževanje, temveč jim pomaga tudi pri boljšem prilagajanju okolju in spopadanju z novimi izzivi.

Zato bi morali mlade moške aktivno spodbujati k sodelovanju v različnih koristnih dejavnostih, kot so reševanje ugank, učenje novih veščin in raziskovanje novih področij. Te dejavnosti spodbujajo njihove možgane, kar jim omogoča hitrejši razvoj in izboljšanje njihovih spominskih sposobnosti.

Hkrati bi morali mladim moškim bitjem zagotoviti tudi primerno okolje in vzdušje. Če jim omogočite, da se počutijo varne in blizu, lahko spodbudite razvoj njihovih možganov in izboljšate njihov spomin.

Skratka, storiti bi morali vse, kar je v naši moči, da mladim moškim pomagamo izboljšati spomin, tako da postanejo pametnejša, samozavestnejša in sposobnejša bitja. To ne prispeva le k njihovemu osebnemu razvoju, temveč tudi k blaginji in preživetju celotne vrste. Vidimo lahko, da moramo izboljšati spomin, in Cistanche deserticola lahko bistveno izboljša spomin, saj ima Cistanche deserticola antioksidativne, protivnetne in anti-aging učinke, ki lahko pomagajo zmanjšati oksidativne in vnetne reakcije v možganih, s čimer ščitijo zdravje živčnega sistema. Poleg tega lahko Cistanche deserticola spodbuja tudi rast in popravilo živčnih celic ter tako izboljša povezljivost in delovanje nevronskih mrež. Ti učinki lahko pomagajo izboljšati spomin, učenje in hitrost razmišljanja ter lahko tudi preprečijo razvoj kognitivnih motenj in nevrodegenerativnih bolezni.

Kliknite poznajte dodatke za povečanje spomina

V tem modelu se hipertenzija začne razvijati pri 4 mesecih starosti s pojavom s hipertenzijo povezanih sprememb v možganski mikrovaskulaturi pri 6 mesecih starosti [37].

Podgane so bile nameščene v optimalnih pogojih s standardno higieno, shranjene pri temperaturi 25 stopinj s ciklom svetlobe/teme 12/12 in hranjene s standardno hrano za podgane in vodo ad libitum.

Vse postopke je odobrila in izvajala v skladu s smernicami za nego in uporabo živali, ki jih je določila Univerza Soochow, kar je skladno z našim prejšnjim poročilom[35].

Poskusi so bili izvedeni v skladu s smernicami Nacionalnega inštituta za zdravje za uporabo laboratorijskih živali (NIH, številka objave 85–23, revidirano 1996). O tej študiji poročajo smernice ARRIVE.

Osem tednov star SHR je bil uporabljen za nadzor staranja (SHR-Young, n=10). Dvanajstmesečne podgane so bile zdravljene z ali brez Gao-Zi-Yao z destilirano vodo (stari SHR-C, n=10), nizek odmerek (stari SHR-L, n=10), srednji odmerek (Stari SHR-M, n=10), visok odmerek (Stari SHR-H, n=10) s hranjenjem v želodcu.

Odmerki nizkega, srednjega in visokega Gao-Zi-Yao enaki 1/2-, 1-, trikratni odmerki za klinično uporabo pri pacientih, izračunani glede na telesno površino. Gao-Zi-Yao smo pred nanosom raztopili v 5 ml destilirane vode in 4 tedne dajali enkratno mleko.

Krvni tlak in srčni utrip smo spremljali vsak teden z metodo repne manšete, prav tako smo vsak teden spremljali telesno težo v skladu s prejšnjim našim opazovanjem [35].

Po 4 tednih je bil izveden Morrisov poskus z vodnim labirintom in podgane so bile žrtvovane pod anestezijo z natrijevim pentobarbitalom (50 mg/kg ip), tkivo hipokampusa je bilo zbrano za nadaljnjo analizo. Vse eksperimentalne protokole je odobril odbor za etično licenciranje univerze Soochow.

Morrisov poskus vodnega labirinta

Morrisov poskus z vodnim labirintom (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Šanghaj, Kitajska) je bil izveden, kot je opisano prej, z nekaj spremembami [38]. Test je bil načrtovan za 6 dni, dnevi od 1 do 5 so bili za obdobje usposabljanja, dan 6 pa za rezultate testiranja.

Podgane so se usposabljale za 2 min mleka, pri čemer so beležili čas za vkrcanje na ploščad kot čas zakasnitve. 6. dan je bila platforma odstranjena. Podgane so bile postavljene v najbolj oddaljeni kvadrant in plavalna pot je bila zabeležena 2 minuti.

Programska oprema je izračunala parametre za funkcijo učenja in spomina.

Merjenje serumskih ravni NO in vnetnih dejavnikov z ELISA

Serumske ravni NO (kataloška št.: S0023), IL-1 (kataloška številka: A301BH80153), IL-2 (kataloška številka: A31038348), IL-6 (kataloška številka: A30681042), in TNF- (kataloška številka: A38280855) smo izmerili s komercialno dostopnimi kompleti ELISA (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzyme research. Shanghai, Kitajska). Vsi koraki so bili izvedeni v skladu z navodili proizvajalca.

Nisslovo barvanje

Tkivo podganjega hipokampusa smo izolirali, fiksirali, vdelali v parafin in nato inkubirali v 1% raztopini za barvanje s toluidin modrim 5–10 minut pri sobni temperaturi. Deset odsekov smo splaknili z destilirano vodo, namočili v 95% etanolu 5–30 minut in dehidrirali v 100% etanolu.

Po dehidraciji smo rezino dali v ksilen in pokrili s smolnim medijem. Število nevronov v regijah hipokampusa CA1, CA2 in dentat gyrus (DG) so opazovali in analizirali z uporabo programa za analizo ImageJ.

Western blot za proteine, povezane z učenjem in spominom

Western blot za beljakovine, povezane z učenjem in spominom, je bil izveden, kot je opisano v našem prejšnjem poročilu z nekaj spremembami [39].

Hipokampusti so bili homogenizirani s pufrom RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7,0), ki je vseboval fenilmentansulfonil fluorid (R&D Systems Inc., Minneapolis, ZDA). Homogenate smo centrifugirali pri 12,000 × g 10 minut pri 4 stopinjah.

Celične proteine ​​smo ločili s SDS-PAGE in prenesli na PVDF membrane (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membrane so bile blokirane v 5% nemastnem mleku v PBS in 0.1% Tween-20pri sobni temperaturi.

Blote smo nato inkubirali s primarnim protitelesom: protitelesom proti glutamatnemu receptorju 1 (1:1000, Abcam, Inc., kataloška št.: ab183797), protitelesom proti NMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., kataloška št.: ab28373), anti-fosfo -CaMKII protitelesa (1:1000, Abcam, Inc., kataloška št.: ab171095), antifosfo-CREB protitelesa (1:1000, Abcam, Inc., kataloška št.: 32096) ali anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Kataloška št.: sc-47724).

Nato smo membrane inkubirali 1 uro s sekundarnim protitelesom (HRP konjugirani anti-kunčji Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Kataloška št.: ab205718). Membrane smo nato trikrat 15 minut spirali z uporabo TBS-T, da smo odstranili odvečna protitelesa pred 1 minutno inkubacijo s kemiluminiscentnimi reagenti (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, ZDA).

Nadalje so bili imunoreaktivni pasovi odkriti s sistemom za analizo gela za elektroforezo (GL2200 Pro, Crestream Inc. ZDA). Intenzivnost pasov je bila analizirana s programsko opremo Image J. Količina ciljnih proteinov je bila normalizirana z izražanjem GAPDH [39].

Statistična analiza

Za statistično analizo je bila uporabljena programska oprema SPSS 18.0. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SEM. Združeni podatki so bili analizirani z enosmerno analizo variance, ki ji je sledil Student–Newman–Keulsov test. Vrednost P < 0.05 je veljala za statistično pomembno kot v našem prejšnjem poročilu [35].

Rezultati

Sistolični krvni tlak (SBP), srčni utrip in telesna teža med mladim SHR in starim SHR

Yong SHR je v prvih dveh tednih pokazal nižji SBP v primerjavi s starim SHR, nato pa se je v naslednjih treh tednih povečal tako, da med obema skupinama ni bilo nobene razlike (slika 2A).

Nasprotno, srčni utrip med obema skupinama v prvih dveh tednih ni bil razlik, nato pa se je SHR pri mladih opazno povečal v primerjavi s SHR pri starih v poznejših treh tednih (slika 2B). Mlad SHR je pokazal nižjo telesno težo v primerjavi s starim SHR v celotnem obdobju opazovanja (slika 2C).

Parametri Morrisovega vodnega labirinta med mladim SHR in starim SHR

Za določitev učenja in spomina, odvisnega od hipokampusa, je bil izveden poskus Morrisovega vodnega labirinta. Stari SHR je pokazal daljšo zakasnitev pobega v prvih štirih dneh v primerjavi z mladim SHR (slika 3A).

Časi prehoda ciljnega kvadranta so bili krajši pri starem SHR kot pri mladem SHR (slika 3B).

Odstotek časa na kvadrantu ciljne platforme je bil krajši pri starem SHR v primerjavi z mladim SHR (slika 3C). Odstotek dolžine poti v kvadrantu je bil prav tako krajši pri starem SHR v primerjavi s starim SHR (slika 3D). Ti rezultati kažejo, da ima stari SHR okvaro kognitivnih funkcij.

Število nevronov v hipokampusu med mladim SHR in starim SHR

Število nevronov v različnih predelih hipokampusa je bilo prešteto z barvanjem po Nisslu. Rezultati so pokazali, da je v regijah CA1, CA2 in DG starega SHR manjše število nevronov v primerjavi z mladim SHR (slika 4).

Izražanje proteinov, povezanih z učenjem in spominom, v hipokampusu med mladim SHR in starim SHR

Rezultati Western blota so pokazali, da je bila ekspresija proteinov, povezanih z učenjem in spominom (GluR1, NMDAR 2B, fosforilirani-CaMK II in fosforilirani-CREB) v starem hipokampusu SHR nižja kot v mladem hipokampusu SHR (slika 5).

Vpliv Gao‑Zi‑Yao na SBP, srčni utrip in telesno težo pri starem SHR

Analiziran je bil učinek Gao-Zi-Yao na SBP. Zdravljenje z nizkim odmerkom Gao-Zi-Yao je opazno znižalo SBP pri starem SHR od drugega do četrtega tedna v primerjavi s kontrolno staro skupino SHR, srednji in visoki odmerki Gao-Zi-Yao pa so izrazito znižali SBP pri starem SHR od prvega tedna do četrti teden v primerjavi s kontrolnim starim SHR (slika 6A). Ti rezultati kažejo, da ima Gao-Zi-Yao antihipertenzivni učinek pri starem SHR.

Primerjali smo tudi podatke o učinkih Gao-Zi-Yaoon srčnega utripa in telesne teže. Naši podatki so pokazali, da med vsemi skupinami v celotnem obdobju opazovanja ni bilo bistvene razlike v srčnem utripu in telesni teži (slika 6B, C).

Vpliv zdravila Gao-Zi-Yao na serumske ravni NO, IL-1, IL-2 in TNF- pri starem SHR

Zdravljenje s srednjimi in visokimi odmerki GAO-ZIYAO je povečalo serumske ravni NO v primerjavi z ravnmi v kontrolni skupini SHR (slika 7A). Zdravljenje z vsemi testiranimi odmerki GAO-ZI-YAO je znižalo serumske ravni IL-1, IL-2 v primerjavi z ravnmi v kontrolni skupini SHR (slika 7B, C); vendar je le visok odmerek GAO-ZI-YAO zmanjšal serumske ravni TNF- (slika 7D).

Ti rezultati kažejo, da lahko GAO-ZI-YAO uravnava oksidativni stres in vnetje.

For more information:1950477648nn@gmail.com