Zakaj se Herba Cistanches lahko uporablja za zdravljenje sindroma pomanjkanja ledvic?

Presnovno profiliranje razkriva terapevtske učinke Herba Cistanches v živalskem modelu s hidrokortizonom povzročenega 'sindroma pomanjkanja ledvic'

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

Povzetek

Ozadje

Herba Cistanches(Roucongrong) je učinkovit pri zdravljenju Shenxu Zheng ('sindrom pomanjkanja ledvic'). Vendar pa mehanizmi in sistemski presnovni odzivi na zeliščni poseg niso jasni.

Metode

Z uporabo presnovnega profiliranja na osnovi GC-MS smo raziskali presnovne odzive naHerba Cistanchesposeg v podganji model s hidrokortizonom povzročenegasindrom pomanjkanja ledvic'.

Rezultati

Presnovni profili podgan po injiciranju hidrokortizona so odstopali od presnovnega stanja pred odmerkom v različnih časovnih točkah, od 1. do 10. dne, medtem ko so presnovni profili podgan, zdravljenih s hidrokortizonom in vodnim izvlečkomHerba Cistanchesvrnil v stanje pred odmerkom 10. dan.

Zaključek

IntervencijaHerba Cistanchespovzročil sistemsko okrevanje po presnovni motnji, ki jo je povzročil hidrokortizon pri podganah. Ta študija tudi dokazuje, da je presnovno profiliranje koristno pri preučevanju terapevtskih mehanizmov zdravil rastlinskega izvora.

Ozadje

Z modulacijo biokemičnih reakcij, nadzornih mehanizmov in aktivnosti encimov mnoga zdravila ali kemikalije povzročijo nihanje metabolitov, prisotnih v posameznih celicah, tkivih ali telesnih tekočinah [1]. Metabolno profiliranje, tj. sondiranje metabolitov z nizko molekulsko maso (MW < 1000="" da)="" s="" pomočjo="" naprednega="" analitičnega="" instrumenta="" skupaj="" z="" multivariatno="" statistiko,="" lahko="" pokaže="" sistemske="" odzive="" živih="" sistemov="" na="" ksenobiotike.="" prav="" tako="" je="" tehnično="" izvedljivo="" katalogizirati="" vse="" večfaktorske="" dedne="" in="" presnovne="" profile="" organizma,="" ki="" so="" pod="" vplivom="" okolja,="" vključno="" s="" fiziopatološkimi="" posledicami="" motenj="" ali="" neravnovesij,="" ki="" jih="" povzročajo="" toksini="" in/ali="" bolezni,="" v="" presnovni="" regulativni="" mreži="" na="" sistemski="" ravni.="" do="" danes="" je="" bilo="" presnovno="" profiliranje="" vzpostavljeno="" pri="" presejanju,="" diagnozi,="" prognozi="" bolezni="" [2–4]="" in="" oceni="" varnosti="" nekaterih="" zdravil="" in="" kemikalij="">

Jedrska magnetna resonanca (NMR) [12] in masna spektrometrija (MS) [13], uporabljeni samostojno ali v kombinaciji, sta bili uporabljeni pri profiliranju in karakterizaciji presnovnih posledic motenj, ki jih povzročajo toksini in/ali bolezni. NMR, ki ne zahteva dolgočasne predhodne obdelave vzorcev, je hitra in preprosta metoda za pridobivanje intrinzičnih informacij iz kompleksnih in nedotaknjenih bioloških vzorcev. Po drugi strani pa je široka uporaba MS z vezajem pri presnovnem profiliranju posledica njene visoke občutljivosti in razpoložljivosti [14, 15]. Predvsem je bilo presnovno profiliranje na osnovi GC-MS uporabljeno pri odkrivanju mehanizmov zdravil in herbicidov in vivo, biomarkerjev bolezni [16] in učinkov spremenjenega izražanja genov na metabolizem ter spremljanju delovanja organizmov v biotehnoloških aplikacijah [17–20]. .

Herba Cistanches(Roucongrong), običajno kitajsko krepčilno zelišče, ki raste v puščavi, izkazuje izrazite aktivnosti za izboljšanje spomina [21] in/ali spolne moči [22], lovljenje prostih radikalov, preprečevanje staranja [23–26] in nevroprotekcijo [27]. , 28]. Stoletja,Herba Cistanchesse učinkovito uporablja pri zdravljenju Shenxu Zheng ('sindrom pomanjkanja ledvic') [29]. Pred kratkimHerba Cistanchesdokazano je izboljšalo ledvične motnje, ki jih povzroča hidrokortizon [30]; vendar njegove presnovne posledice niso jasne. Naša prejšnja študija [31] je pokazala, da presnovni profili podgan, izpostavljenih hidrokortizonu v visokih odmerkih (tj. živalski model za "sindrom pomanjkanja ledvic') [32], je pokazala edinstven biokemični vzorec endogenih metabolitov v urinu. Ti rezultati so nas navdihnili, da smo preučevali mehanizme doslednih biokemičnih sprememb po modifikaciji hidrokortizona, pri čemer smo uporabili presnovno profiliranje na podlagi GC-MS, da bi raziskali, ali lahko Herba Cistanches obrne ali prepreči nenormalne presnovne učinke hidrokortizona.

Cistanche lahko izboljša delovanje ledvic

Metode

Materiali in instrument

Herba Cistanchesje bil kupljen pri Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (Kitajska) in ga je dr. Mengyue Wang (Laboratorij za farmakognostiko, Fakulteta za farmacijo, Univerza Jiao Tong v Šanghaju) identificiral kot Cistanche deserticola YC Ma [33]. Raztopina hidrokortizona za injiciranje (0,5 odstotkov) je bila kupljena pri Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (Kitajska). Derivatizacijski reagenti so bili N-metil-N-trimetilsilil tri fluoroacetamid (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, ZDA) in trimetiljodosilan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, ZDA), pomešani v razmerju 1000:1. Vsi reagenti, uporabljeni v poskusu, so bili analitske kakovosti. Ultra čisto vodo smo pripravili s čistilnim sistemom Millipore (18,2 MΩ, ZDA). Metabolne kletke so bile kupljene pri Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (Kitajska).

Priprava izvlečka Herba Cistanches

Petsto gramov grobo zdrobljenega rastlinskega materiala smo 2 uri refluktirali z 2 L ultra čiste vode. Po filtraciji smo ekstrakt uparili na približno eno desetino prvotnega volumna na rotacijskem uparjalniku Buchi in razredčili na 250 ml v merilni bučki z ultra čisto vodo. Končna koncentracija surove nafteHerba Cistanchesekstrakt je bil 2 g/ml.

Odmerjanje in vzorčenje

Ravnanje z vsemi živalmi v tej študiji je bilo v skladu z nacionalnimi smernicami in je bilo izvedeno v Centru za laboratorijske živali, Šanghajska univerza tradicionalne kitajske medicine, Šanghaj, Kitajska. Skupaj 19 devet tednov starih podganjih samcev Wistar je bilo kupljenih pri Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (Kitajska). Vse živali so bile v pregradnem sistemu z regulirano temperaturo (20–22 stopinj) in vlažnostjo (60 ± 10 odstotkov) ter v 12-urnem ciklu temno/svetlo s prižganimi lučmi ob 8:00 zjutraj. Podgane so dobile ad libitum hrano in vodo. Po dvotedenskem privajanju so bile živali premeščene v posamezne presnovne kletke in naključno razdeljene v tri skupine: (1) skupina za zdravljenje (n=7), v kateri je bil injiciran hidrokortizon (5 odstotkov) v odmerku 1,5 mg/100 g telesne teže, ki ji sledi peroralna uporabaHerba Cistanchesekstrakt za 10 dni; (2) modelna skupina (n=7), v kateri so hidrokortizon (5 odstotkov) injicirali ip po 1,5 mg/100 g enkrat na dan 10 dni; in (3) kontrolna skupina (n=5), v kateri je bil vehikel injiciran ip pri približno 0,6 ml 10 dni [31].Herba Cistanchesdajali zdravljeni skupini v odmerku 20 g/kg po priporočilu Shen et al. [30]. Štiriindvajseturni vzorci urina so bili zbrani v določenih časovnih intervalih: pred odmerkom (-24 – 0 h), 1. dan (0 – 24 h), 3. dan, 7. dan in 10. dan. Ves urin vzorce smo centrifugirali (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, Kitajska) 10 minut, da smo odstranili suspendirane ostanke, in jih takoj shranili pri -80 stopinji za nadaljnjo analizo GC-MS.

Priprava vzorca in GC-MS

GC-MS smo izvedli v skladu z našo prejšnjo študijo z manjšimi spremembami [31]. Na kratko, vsak 0.5 μL alikvot trimetilsililnega (TMS) derivatiziranega analita je bil vbrizgan v kapilarno kolono iz taljenega silicijevega dioksida (17 m × 220 μm notranji premer, 0,11 μm debelina filma; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, ZDA). GC-MS smo izvedli na plinski kromatografiji PerkinElmer in TurboMass-Auto sistemu XL masnem spektrometru (PerkinElmer Inc, ZDA).

Obdelava podatkov in multivariatna analiza

Podatki GC-MS so bili pretvorjeni v format NetCDF prek DataBridge (PerkinElmer Inc, ZDA). Skripte po meri so izvajali v MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, ZDA) za izvedbo korekcije osnovne črte, dekonvolucije vrhov in poravnave, izključitve internega standarda in normalizacije na skupno vsoto kromatograma. Dobljena 3-dimenzijska matrika, ki vključuje poljuben indeks vrhov (parni retencijski čas-m/z), vzorce (opazovanja) in normalizirana območja vrhov (spremenljivke), je bila uvožena v programsko opremo SIMCA-P 11.0 paket (Umetrics, Švedska) za multivariatno analizo.

Centriranje povprečja je bilo izvedeno po stolpcu, da se odstranijo odmiki. Vsi merjeni presnovki so bili pred multivariatno analizo obravnavani na enaki ravni s samodejnim skaliranjem (prilagojeno na varianco enote). Analiza glavnih komponent (PCA) je bila izvedena s programsko opremo SIMCA-P 11.0, da bi razkrili splošno združevanje v skupine, skupine in trende med subjekti brez predhodnega znanja. Prva glavna komponenta (PC1) predstavlja največjo variacijo v podatkih. Druga glavna komponenta (PC2) je pravokotna na PC1 in predstavlja največjo količino variance, ki ni pojasnjena s PC1. Preostale glavne komponente so bile zgrajene na enak način. Medtem so bile povprečne trajektorije rezultatov PCA uporabljene za zagotavljanje dinamične indikacije za začetek, napredovanje in/ali okrevanje sindroma skozi čas. Korelacijski koeficienti iz delnih najmanjših kvadratov – diskriminantne analize (PLS-DA) so bili uporabljeni za razvrščanje pomembnosti vsake spremenljivke za nadaljnje zajemanje različno izraženih presnovkov, odgovornih za ločevanje med skupinami. PLS-DA izhaja iz metode delnih najmanjših kvadratov (PLS), ki je posplošena metoda multiple regresije, ki obravnava več kolinearnih napovednikov in spremenljivk odziva [34]. PLS-DA je bil izveden s programsko opremo SIMCA-P 11.0 [35]. Izvedena je bila tipična 7-krožna navzkrižna validacija. Ena sedmina vzorcev je bila v vsakem krogu izključena iz modela, da bi validirali model. Ta postopek je bil ponovljen na iterativni način za navzkrižno validacijo, dokler ni bil vsak vzorec enkrat izključen.

Herba Cistanches se lahko uporablja za zdravljenje sindroma pomanjkanja ledvic

Univariatna analiza

Diferencialno izraženi presnovki, identificirani z multivariatno analizo, so bili prav tako preverjeni v programski opremi MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, ZDA) z neparametričnim Kruskal-Wallisovim testom s stopnjo pomembnosti pri P < 0.05 .

Rezultati in razprava

Interpretacija GC-MS spektrov

Tipični GC-MS kromatogrami skupnega ionskega toka (TIC) urina podgan na 10. dan iz tretirane skupine, modelne skupine in kontrolne skupine so prikazani na sliki 1. Z uporabo našega optimiziranega protokola analize GC-MS v povezavi z vrhom, ki temelji na programski opremi postopkom dekonvolucije je bilo v vsaj 90 odstotkih vzorcev urina dosledno odkritih skupno 117 posameznih metabolitov. Identifikacija spojine zanimivih vrhov je bila izvedena s primerjavo fragmenta masnega spektra z referenčnimi knjižnicami NIST (Nacionalni inštitut za standarde in tehnologijo), knjižnicami Wiley in referenčnimi standardi. Uspelo nam je preveriti 23 od 117 metabolitov (20 odstotkov), od katerih je bila večina aminokislin, poliaminov, maščobnih kislin, purinov in nadledvičnih hormonov, ki so v glavnem vključeni v presnovo energije, presnovo lipidov in presnovo aminokislin.

Slika 1 Tipični GC-MS kromatogrami celotnega ionskega toka (TIC) urina na 10. dan iz skupine za zdravljenje (A), modelne skupine (B) in kontrolne skupine (C).

Časovno odvisne spremembe vzorcev urina

Povprečne trajektorije rezultatov PCA, izpeljane iz modelne skupine in zdravljene skupine, so bile prikazane na sliki 2. Prehodni premik v grafu trajektorije je razkril dinamično napredovanje 'sindrom pomanjkanja ledvic' ki jih povzroča hidrokortizon sam ali v kombinaciji zHerba Cistancheszdravljenje. V modelni skupini so bili presnovni vzorci 1. in 3. dan drugačni od tistih 7. in 10. dan, kar nakazuje, da je presnovno regulativno omrežje 1. in 3. dan morda prestalo prehodno obdobje z velikimi nihanji in da je moteno omrežje se je lahko obnovilo 7. in 10. dan, kar je na koncu privedlo do stabilnega vzorca, ki je blizu stanja pred odmerkom. Podobno dejstvo, da je presnovni vzorec 1. in 3. dne očitno odstopal od vzorca pred odmerkom v zdravljeni skupini, kaže na prevladujočesindrom pomanjkanja ledvic' država. V tem obdobju so učinki hidrokortizona verjetno prevladovali nad učinkiHerba Cistanchesekstrakt. Te ugotovitve so bile skladne s splošnim opažanjem, da so podgane iz obeh skupin prvi in ​​tretji dan pokazale manjšo aktivnost. Zanimivo je, da so se presnovni vzorci 7. in 10. dan postopoma in znatno približali stanju pred odmerkom, kar nakazuje, daHerba Cistanchesimelo nekatere protiutežne ali terapevtske učinke na podgane, ki so bile izpostavljene hidrokortizonu. Ti rezultati podpirajo klinične ugotovitve, daHerba Cistanchesje učinkovit pri zdravljenjusindrom pomanjkanja ledvic'. Na splošno obe trajektoriji zagotavljata vizualno, splošno in dinamično sliko začetka, napredovanja in okrevanjasindrom pomanjkanja ledvic'.

Slika 2 Povprečna krivulja rezultatov PC1 proti PC2 za vzorce urina iz modelne skupine (-●-) in zdravljene skupine (--●--). Vsaka pika označuje povprečni rezultat v različnih časovnih točkah, tj. pred odmerkom, 1., 3., 7. in 10. dan. Vrstica napake predstavlja standardno odstopanje za vsako časovno točko, pridobljeno s prvo glavno komponento.

Primerjalna presnovna analiza vzorcev urina

Da bi bolje razumeli presnovne učinke hidrokortizona, smo primerjali presnovne profile, pridobljene iz kontrolnih, modelnih in zdravljenih skupin. Splošno združevanje treh skupin je mogoče zlahka opaziti v različnih časovnih točkah, tj. pred odmerkom, 3. dan in 10. dan (slika 3). Medtem ko v profilih urina pred odmerkom ni težnje po ločevanju, so presnovni profili odstopali od profilov kontrolne skupine 3. dan po izpostavljenosti hidrokortizonu. Presnovna motnja zaradi hidrokortizona se je pojavila tako v modelni kot v zdravljeni skupini. Vendar pa po zaporednem 7-dnevnem zdravljenju zHerba Cistanches, so presnovni profili terapevtske skupine spet postali primerljivi s tistimi v kontrolni skupini, kar kaže na toHerba Cistanchesučinkovito obnovil moten metabolizem.

Slika 3 Primerjava presnovnih profilov iz kontrolne skupine (črni diamant), modelne skupine (rdeči diamant) in zdravljene skupine (modri diamant) v različnih časovnih točkah: pred odmerkom (A), 3. dan (B) in 10. dan (C). Vsaka pika na grafu rezultatov PCA predstavlja podatke, pridobljene od podgane.

Diferencialna identifikacija presnovnih profilov

Navzkrižno validiran model PLS-DA je bil uporabljen za identifikacijo ključnih metabolitov v različnih presnovnih profilih za lažje razlikovanje med podganami iz kontrolne skupine in podganami z modelno skupino (tj. s hidrokortizonom inducirano) z ali brezHerba Cistancheszdravljenje 3. dan (tabela 1). Določene so bile večkratne spremembe relativne koncentracije vsakega ključnega presnovka med skupinami in izdelana je bila ustrezna vizualizacija sprememb med skupinami na dan pred odmerkom, dan 3 in dan 10 (slika 4). Kot je prikazano na sliki 4 in tabeli 1, medtem ko se je večina endogenih presnovkov v modelni skupini znatno povečala ali zmanjšala, so bili tisti v zdravljeni skupini podvrženi prehodnemu obdobju, kot so opazili 1. in 3. dan, in se postopoma približali kontrolni (normalni) ravni . Na primer, v primerjavi z rahlo spremembo (1,1–1,5-krat) metabolitov v zdravljeni skupini na 10. dan so opazili močno povečane ravni (1,7–3,0-krat) tirozina, tiramina, dopamina in noradrenalina v urinu. modelno skupino v celotnem poskusu. Naša prejšnja študija je pokazala, da je povečana presnova kateholamina, ki jo povzročajo glukokortikoidi, povzročila prekomerno porabo imunskih funkcij, kar je povzročilo "sindrom pomanjkanja ledvic' [31]. Herba Cistanches, tonično zelišče, ki izboljša imunski sistem [36], lahko prepreči nekatere učinke hidrokortizona.Herba Cistancheslahko tudi obnovi normalno presnovno regulativno mrežo. Za opredelitev delovanjaHerba Cistanches(in njegove sestavine) v 'sindrom pomanjkanja ledvic'.

Tabela 1 Seznam metabolitov, vključenih v presnovno profiliranje te študije

Od: Profiliranje presnove razkriva terapevtske učinkeHerba Cistanchesv živalskem modelu s hidrokortizonom povzročenesindrom pomanjkanja ledvic'

Opomba: korelacijski koeficienti (corr coeffs) vseh spojin so bili izračunani iz navzkrižno validiranega modela PLS-DA (Q2Ycum=0.899, zadovoljiv model z uporabo dveh komponent) na 3. dan med kontrolno in modelno skupino. z ali brezHerba Cistancheszdravljenje. Poleg tega so bile spremembe gub testirane z neparametričnim Kruskal-Wallisovim testom. Kw (P) označuje vrednosti P testa. H=kontrolna skupina, M=modelna skupina, D=terapevtska skupina. Na primer, H/M/0 predstavlja relativne kratne spremembe (model za nadzor) v stanju pred odmerkom.

Slika 4 Kratne spremembe ključnih metabolitov. Rdeča barva označuje relativno povišane koncentracije (kratne spremembe > 1,5), medtem ko zelena barva označuje relativno znižane koncentracije (kratne spremembe < -1,5).="" spremembe="" gub="" v="" razponu="" od="" -1,5="" do="" 1,5="" veljajo="" za="" fiziološke="" variacije.="" kratna="" sprememba="" (m/h,="" d/h)="" je="" razmerje="" koncentracije="" modelne="" skupine="" ali="" tretirane="" skupine="" proti="" kontrolni="">

Zaključek

Sedanja študija presnovnega profiliranja z uporabo GC-MS je pokazala, daHerba Cistanchespovzročil sistemsko okrevanje po presnovni motnji, ki jo je povzročil hidrokortizon pri podganah, živalskem modelu za 'sindrom pomanjkanja ledvic'. Ta študija tudi dokazuje, da je presnovno profiliranje uporabna metoda za preučevanje terapevtskih učinkov zeliščnih zdravil.

Okrajšave

MS: masna spektrometrija

GC-MS: plinska kromatografija-masna spektrometrija

NMR: jedrska magnetna resonanca

PCA: analiza glavnih komponent

PLS-DA: delni najmanjši kvadrati – diskriminantna analiza

Reference

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomika': Razumevanje presnovnih odzivov živih sistemov na patofiziološke dražljaje s pomočjo multivariatne statistične analize bioloških NMR spektroskopskih podatkov. ksenobiotika. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Hitra in neinvazivna diagnoza prisotnosti in resnosti koronarne srčne bolezni z uporabo 1H -metabonomika na osnovi NMR. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10,1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Uporaba spektroskopije jedrske magnetne resonance v kombinaciji z analizo glavnih komponent pri odkrivanju prirojenih napak metabolizma z uporabo krvnih madežev: metabonomski pristop. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Vizualizacija presnovnih sprememb v tkivu raka dojke z uporabo 1H-NMR spektroskopije in samoorganizirajočih zemljevidov. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Uporaba metabonomije za identifikacijo oslabljenega metabolizma maščobnih kislin kot mehanizma toksičnosti, povzročene z zdravili. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR in študije prepoznavanja vzorcev o časovno povezanih presnovnih učinkih -naftilizotiocianata na jetra, urin in plazmo pri podganah: integrativna metabonomika pristop. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: Integrirana metabonomska raziskava toksičnosti acetaminofena pri miših z uporabo NMR spektroskopije. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Izpostavljenost materialom, pridobljenim iz tobaka, povzroči prekomerno proizvodnjo izločenih proteinaz v mastocitih. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomska dekonvolucija vgrajene toksičnosti: uporaba pri hepato- in nefrotoksičnosti tioacetamida. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomika v toksikologiji: pregled. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toksično/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: Visoko zmogljiva toksikologija: Praktični vidiki. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomika: platforma za preučevanje toksičnosti zdravil in delovanja genov. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Uporaba metabolomike za razlikovanje genotipov rastlin z uporabo statistike in strojnega učenja. Bioinformatika. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: "ultra-performance" tekočinska kromatografija visoke ločljivosti, povezana z masno spektrometrijo oa-TOF kot orodje za diferencialno profiliranje presnovne poti v funkcionalne genomske študije. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: Strategija za ugotavljanje razlik v velikih serijah metabolomičnih vzorcev, analiziranih z GC/MS. Anal Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Kemijska diagnoza Lesch-Nyhanovega sindroma z detekcijo s plinsko kromatografijo in masno spektrometrijo. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Profiliranje metabolita za funkcionalno genomiko rastlin. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Kombinirane analize profiliranja proteomov in metabolitov razkrivajo presenetljive vpoglede v presnovo žvepla pri kvasovkah. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS knjižnice za hitro identifikacijo metabolitov v kompleksnih bioloških vzorcih. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identifikacija večjih telesnih vonjav, reguliranih s kompleksom histokompatibilnosti, s statistično analizo primerjalnega poskusa plinske kromatografije/masne spektrometrije. Anal Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Izboljšanje spomina miši na feniletanoidne glikozide Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Učinek etanolnega ekstrakta Cistanche deserticola na vsebnost monoaminskih nevrotransmiterjev v možganih podgan. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Antilipidna peroksidacija in antiradiacijsko delovanje glikozidov vherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fitokemične raziskave in antioksidativna aktivnost Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Trije novi feniletanoidni glikozidi iz Caryopteris incana in njihova antioksidativna aktivnost. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, nov feniletanoidni glikozid z lovljenjem prostih radikalov in protimikrobnimi aktivnostmi iz Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Zaščitni učinek tubulozida B na apoptozo, ki jo povzroča TNF alfa v nevronskih celicah. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Nevroprotektivni učinki feniletanoidnih glikozidov iz Cistanches salsa proti 1-metil-4-fenilu-1, 2, 3, 6- dopaminergična toksičnost, ki jo povzroča tetrahidropiridin (MPTP) pri miših C57. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Krepitev ledvic in podpiranje janga delovanja cistanche deserticola YC Ma pred in po pripravi. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Vpliv Cistanche deserticola na normalne in pomanjkljive podgane Shen-yang. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomska študija o biokemičnih profilih živalskega modela, povzročenega s hidrokortizonom. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Živalski modeli in zdravila za pomanjkanje Yin in Yang. Eksperimentalna metodologija farmakoloških raziskav v tradicionalni kitajski medicini. Uredil: Chen Q. 1993, Peking: People's Health Publishing House, 982-984.

33. Nacionalni odbor za farmakopejo: Farmakopeja Ljudske republike Kitajske. 2005, Peking: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Multi- in megavariatna analiza podatkov I. del: Osnovna načela in aplikacije, druga revidirana in razširjena izdaja. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. Uporabniški priročnik za SIMCA-P in SIMCA-P plus 11. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_userguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Študija o farmakoloških učinkih Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Iz: Kitajska medicina, zvezek 3, številka članka: 3 (2008)