E-naslov:joanna.jia@wecistanche.com

Antidepresivi in ​​dejavnosti tradicionalnega kitajskega zelišča Cistanche za izboljšanje kognitivnih sposobnosti

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 in Li Gu2

1 Državni ključni laboratorij za biokontrolo, Inštitut za vodne gospodarske živali in ključni laboratorij province Guangdong za vodne gospodarske živali, Šola znanosti o življenju, Univerza Sun Yat-sen, Guangzhou 510275, Kitajska

2 Raziskovalni center za živilsko in zdravstveno inženirstvo državnega ministrstva za izobraževanje, univerza Sun Yat-sen, Guangzhou 510275, Kitajska

Korespondenca mora biti naslovljena na Li Gu; Prejeto 20. februarja 2017; Spremenjeno 11. maja 2017; Sprejeto 28. maja 2017; Objavljeno 28. junija 2017 Akademski urednik: Ki-Wan Oh Copyright © 2017 Dongfang Wang et al. To je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod licenco Creative Commons Attribution, ki dovoljuje neomejeno uporabo, distribucijo in reprodukcijo v katerem koli mediju, če je izvirno delo pravilno citirano. Več kot deset odstotkov ljudi v življenju zboli za vsaj eno epizodo depresije in z njo povezanih duševnih motenj, depresija in z njo povezane duševne motnje pa so eden največjih svetovnih javnozdravstvenih problemov. Teorija več sistemov trdi, da je disregulacija več sistemov osnova patogeneze depresije in povezanih duševnih motenj, zato so nujno potrebne nove terapije, ki temeljijo na teoriji več sistemov disregulacije. V tej študiji je antidepresivni učinek decoction iz zeliščCistanchedeserticolaYCMa in Cistanchetubulozaje bil pregledan. ZeliščeCistanchedecoction je znatno zmanjšal obdobje nepremičnosti pri preskusu obešanja mišjega repa. Miši, zdravljene z decokcijo zelišč, so pokazale izboljšano sposobnost prostorskega učenja in spomina v Morrisovem testu vodnega labirinta. Skupine, zdravljene z zeliščnim decoktom, so pokazale zmanjšano aktivnost monoaminooksidaze (MAO); koncentracija dopamina (DA) v možganih se je povečala, kar kaže na zeliščeCistanchedecokcija je izboljšala razdražljivost živcev; serumska koncentracija kortikosterona (CORT) je bila znižana, kar je pokazalo, da je mišim koristila zmanjšana raven stresa. Zato sta antidepresivna učinkovitost in mehanizem tradicionalnegakitajskizeliščeCistancheso bili raziskani v tej študiji. ZeliščeCistanchepokazala potencial za razvoj kot dopolnilno in alternativno zdravljenje depresije.

Preprečite Alzheimerjevo bolezen s cistančo

1. Uvod

Depresija in z njo povezane motnje razpoloženja so po ocenah 12–17 odstotkov prebivalstva vsaj eno epizodo v življenju med glavnimi vzroki duševnih motenj in veljajo za enega največjih svetovnih javnozdravstvenih problemov.[1].Posebej pomembno je, da velik delež bolnikov z depresijo trpi zaradi izgube spomina, težav s koncentracijo, zmanjšane energije ali utrujenosti, izgube zanimanja ali užitka do hobijev in dejavnosti, težav s spanjem, zgodnjega jutranjega prebujanja ali prekomernega spanca. Čeprav nevronski substrati za nenormalnosti pri depresiji in sorodnih sindromih niso jasni, je splošno sprejeto, da okvara nevroplastičnosti in celične odpornosti povzroči patofiziologijo depresije in je uspešno zdravljenje lahko odvisno od posega na ravni nevrotransmiterjev.[2]. Pristop k zdravljenju depresije v osnovi temelji na klasičnem monoaminskem sistemu

hipotezo, ki trdi, da disregulacija monoaminov, zlasti serotonina (5-HT) in norepinefrina (NE), prispeva k patogenezi depresije, intervencija nevrotransmiterjevega sistema z dopaminskimi agonisti in dopamin-noradrenergičnimi modulatorji pa bi ublažila simptome velike depresije motnja [3]. Čeprav se pogosto predpisuje, je kurativna učinkovitost antidepresiva vprašljiva, stranskih učinkov pa ni mogoče prezreti, saj se znaten delež bolnikov ne odzove na manipulacijo monoaminskega sistema.4]. V zadnjem času nove teorije o patogenezi depresije kažejo, da več sistemov, vključno z vnetnimi potmi, potjo oksidativnega stresa, osjo hipotalamus-hipofiza-nadledvična žleza (HPA), presnovnim in bioenergijskim sistemom, nevrotrofičnimi potmi, glutamatnim sistemom, opioidnim sistemom in holinergični sistem, so tesno povezani s pojavom depresije [3]. Dokazi kažejo, da je večkratna ciljna intervencija dosegla boljšo učinkovitost kot ena sama ciljna intervencija [5]. Nove terapije, ki temeljijo na teoriji disregulacije več sistemov, so nujno potrebne.

Zeliščne izdelke naj bi uživala več kot polovica prebivalstva ZDA[6];zanimanje in povpraševanje po zeliščih ali zeliščnih izdelkih kot dopolnilnem načinu zdravljenja depresije narašča po vsem svetu. Ugotovljeno je bilo, da številne zdravilne rastline dokazujejo ugoden učinek pri lajšanju depresije. Zelišča, za katera poročajo, da imajo učinek zatiranja depresije in izboljšanja kognitivnih funkcij, vključujejo rakitovec [7], Ginkgo biloba[8], Piper nigrum[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. Kombinirano dajanje ferulinske kisline in piperina je pokazalo sinergistični učinek, podoben antidepresivu, pri miših z manipulacijo monoaminergičnega sistema[7]. Za albiflorin je bila značilna visoka selektivna afiniteta do receptorjev in prenašalcev nevrotransmiterjev ter znatno povečana zunajcelična koncentracija 5-HT in NE v hipotalamusu prosto gibljivih podgan[12]. Zdravilna rastlina Melissa officinalis L. je lajšala depresivno vedenje miši z vplivom na raven serotonergičnega nevrotransmiterja.[13].Ta zelišča ali decoctions, razvita kot alternativna zdravila za depresijo, pomagajo ublažiti simptome depresije in zagotavljajo nov vir za razvoj zdravil proti depresiji. ZeliščeCistanchevrste, razširjene v sušnih deželah in puščavah severnega dela Kitajske, so zelišča tradicionalne kitajske medicine in se na Kitajskem pogosto uporabljajo za zdravljenje različnih bolezni že več kot 1,{1}} let. Večkratna učinkovitost zeliščCistanchedecoction razpon med afrodiziakom [14], ki spodbuja imunski sistem[15], antioksidativno [16] in hepatoprotektivno [17] lastnosti. Odvarki C. deserticola inducirajo testikularne steroidogene encime [18], spodbujajo erektilni odziv penisa in skrajšajo latentno obdobje erektilne reakcije pri kastriranih podganah [19]. ZeliščeCistancheporočali so, da zavira aktivnosti dopaminergičnih nevronov z uravnavanjem inhibitornih genov za apoptozo in nevrotrofičnih dejavnikov [20]. C.tubulozadecoctions spremenili kognitivno disfunkcijo, ki jo povzroča A� 1-42 z blokiranjem odlaganja amiloida in oživili holinergično in hipokampalno dopaminergično nevronsko funkcijo [21]. Nevroprotektivna lastnost zeliščne Cistanche pomeni terapevtski potencial pri boleznih, povezanih s kognitivnimi funkcijami. Depresija je pogost mešan način čustvenih reakcij s pozabljivostjo in kognitivnim upadom kot pogostima simptomoma [22]. Zelišče Cistanche se je pogosto uporabljalo kot tradicionalno kitajsko zdravilo za zdravljenje pozabljivosti; poleg tega je nedavno poročilo pokazalo, da zgodnja uporaba koruzne moke, dopolnjene s C.tubulozaje koristen za spodbujanje dolgoživosti in učenje, povezano z vohom, ter izboljšanje spomina v nevretenčarskem modelu Drosophila [23]. Ta dejstva kažejo, da zelišče izboljšuje kognitivne sposobnostiCistanche; v tej raziskavi smo prvič opisali lastnost antidepresiva in njegov odnos do dejavnosti izboljšanja kognitivnih sposobnosti v modelu sesalcev z uravnavanjem monoaminskega sistema in osi HPA. Osvetlitev lastnosti antidepresiva in predhodnega mehanizma zeliščCistanchebi lahko razširili spekter uporabe zelišča Cistanche, ki bi ga lahko razvili kot alternativno zdravilo za depresijo.

2. Materiali in metode

1.1. Rastlinski material in priprava decokcije. C. deserticola YCMa je ​​bila pridobljena iz avtonomne regije Nei Mongol na Kitajskem; C.tubulozaje bil pridobljen iz avtonomne regije Xinjiang Uygur na Kitajskem. Pred decokcijo je bilo zelišče (C. deserticola YCMa ali C. tubulosa) pregledano za odkrivanje vsebnosti ehinakozida in verbaskozida z uporabo HPLC (high-performance tekočinska kromatografija) (Milford, MA, Waters, ZDA) in primerni izdelek (v skladu z do farmakopeje Ljudske republike Kitajske) je bil uporabljen za poskuse na živalih. Odvarek je bil pridobljen na podlagi metode izhlapevanja vode, ki jo je razvil Raziskovalni center za prehrano in zdravje pri Ministrstvu za šolstvo, Univerza Sun Yat-sen. Posušen 125 g Cistanche deserticola YCMa smo zdrobili in presejali z 120-mrežastim sitom, nato pa prah raztopili v 3 L ultračiste vode, segrete

pri 100∘C 2 uri, nato ohladimo na sobno temperaturo in presejemo; supernatant je bil recikliran. Usedlino smo nato raztopili v 2 L ultračiste vode in nato segrevali 1,5 ure ter ohladili, kot je navedeno zgoraj, da recikliramo supernatant; sediment je bil nato uporabljen za recikliranje supernatanta. Vsebino celotnega supernatanta smo obogatili z rotacijskimi vakuumskimi uparjalniki pri 60∘C; končno je bila koncentracija surovega zdravila nastavljena na 0,5 g/ml in produkt shranjen pri –20∘C.

1.2. Test ehinakozida in verbaskozida s HPLC analizo. HPLC (tekočinska kromatografija visoke ločljivosti) je bila uporabljena za merjenje kvalitativnega in kvantitativnega testa ehinakozida in verbaskozida; verbaskozid (čistost > 93 odstotkov) in ehinakozid (čistost > 93 odstotkov) sta bila kupljena pri Nacionalnem inštitutu za nadzor hrane in zdravil (Peking, Kitajska) in uporabljena kot standardna kontrola.

1.3. Skrb za živali in vodenje poskusov. Preiskovanci so bili SPF (brez specifičnih patogenov) samci miši Kunming, težki 21–25 gramov, ki jih je dobavil Center za medicinske poskuse na živalih province Guangdong. Živali so bile nameščene v plastičnih kletkah (deset na kletko); okoljski pogoji so bili nastavljeni takole: vlažnost 40–70 odstotkov, sobna temperatura 21 ± 1∘C in 12 ur: 12 ur svetlo-temno obdobje. Vse poskuse na živalih je odobril Odbor za etiko živali Univerze Sun Yat-sen.

1.4. Test zadnjega vzmetenja. Preskus obešanja repa je bil izveden v skladu s protokolom, ki so ga opisali Cryan et al. [24] s skromnimi spremembami. Na kratko, 21. dan so miši obesili za rep z uporabo kovinskih vislic, privezanih z najlonskim katetrom, z glavo na višini 50 mm od tal. Miši so obesili na kavelj na lepilne trakove 10–20 mm od skrajnega dela repa in jih zvočno in vizualno izolirali z oblogami. Gibanje telesa miši je bilo zabeleženo, dihalni gibi pa so bili prezrti. Pred dnevom poskusa smo miši suspendirali za 8 minut za prilagoditev.

1.5. Morrisov test vodnega labirinta. Preizkus vodnega labirinta je bil izveden v skladu z opisom Vorhees et al. [25–27] z uporabo naprave, ki jo je razvila Kitajska akademija medicinskih znanosti. Okrogel bazen (premera 150 cm), napolnjen z vodo (26

± 1∘C; višina roba (razdalja med vodno površino in robom stene): 10 cm)

Tabela 1: Vsebnost ehinakozida in verbaskozida v prahu in prevretku C. deserticola YCMa in C.tubuloza.

uporabljena je bila krožna reševalna ploščad (premer: 11 cm; razdalja

Vzorci

ECH odstotek VerBS odstotek med središčem ploščadi in steno bazena: 27 cm) je bil potopljen 1–1,5 cm pod vodno gladino, preskusno območje pa je bilo osvetljeno s posredno svetlobo (50 ± 10 luksov), da bi se izognili odbojem. Uporabljene so bile štiri začetne lokacije, S, J, V in Z. Za test prostorskega učenja so bile živali dnevno trenirane 9.–11. dni na fiksni začetni lokaciji. Obdobje zakasnitve pobega se meri za prikaz prostorskega spomina in sposobnosti učenja miši. Če miši ne bi mogle najti ploščadi ali splezati nanjo, bi jih odpeljali na ploščad in tam ostale 10 s. Po 60 sekundnem počitku bi se začela naslednja vadba. Podatki, pridobljeni pri zadnjem preizkusu prostorskega učenja, so bili uporabljeni kot osnovna vrednost za oblikovanje. 23.–28. dan sta bila opravljena navigacija po kraju in prostorska sonda. Preizkus navigacije po kraju je trajal 6 dni in je bil opravljen ob 13. uri, živali so bile postavljene v vodo z glavo obrnjeno proti steni bazena v smeri urinega kazalca in zabeležena je bila latenca (v 2 minutah). Po opravljenem preskusu navigacije po kraju je bila ploščad odstranjena. Miši so bile postavljene v vodo z glavo obrnjeno proti steni bazena na naključnem mestu, zabeležena pa je bila sled gibanja in pogostost, ki so jo miši preplavale na mestu, kjer je bila ploščad v 2 minutah. Sled gibanja je posnel večnamenski avtonomni snemalnik gibanja miši (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Kitajska).

ehinakozid v cistanči

1.6. Odkrivanje aktivnosti MAO. Aktivnost MAO je bila izmerjena s kompletom za odkrivanje MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kitajska), odkrivanje pa je bilo izvedeno v skladu s protokolom proizvajalca. Dobili smo homogenat iz možganskega tkiva; 500 µl smo zmešali s 300 µl sredstva 1 in 300 µl sredstva 2, inkubirali 3 ure pri 37∘C in nato zaporedoma dodali 300 µl sredstva 3, 3 ml sredstva 4 in vrtinčili za 2 min. Reakcijsko zmes smo centrifugirali pri 3,000 obratih na minuto 10 minut in določili optično gostoto supernatanta s spektrofotometrom ultravijoličnega in vidnega spektra (Lambda 25, PerkinElmer, ZDA) z uporabo vzbujalne svetlobe 242 nm.

1.7. Encimski imunosorbentni test nevrotransmiterjev ter ACTH in CORT. Komplet za odkrivanje dopamina (DA), norepinefrina (NE) in 5-hidroksitriptamina (5-HT) z encimsko vezanim imunskim testom (ELISA) je bil kupljen pri BLUE GENE, Šanghaj. Kompleti za odkrivanje ELISA so bili kupljeni pri Qiyun Biotech, Guangzhou.

Postopki so naslednji: poskus smo izvajali pri sobni temperaturi. Vdolbinice PVC mikrotitrske plošče premažite z zajemnim protitelesom v koncentraciji 1–10 µg/mL v karbonatnem/bikarbonatnem pufru (pH 9,6). Zaprite ploščo in inkubirajte čez noč pri 4∘C; ploščo 3-krat sperite s PBS/tween in nespecifična vezavna mesta blokirajte z Block Solution; nato ploščo 3-krat sperite s PBS/tween. Standarde in vzorce razredčimo v raztopini za blokiranje in 100 µl dodamo v vdolbino plošče, ploščo pa zapremo in inkubiramo pri 37∘C 1 uro. Dodajte 100 µl razredčenega detekcijskega protitelesa in ploščo inkubirajte pri

C. deserticola v prahu 1,27 ± 0.009 0.52 ± 0.003

C. tubulozaprah 19,81 ± 0.66 2.45 ± 0.12

Odvar C. deserticola {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0.001 C.tubulozadecoction 5,90 ± 0.12 0.54 ± 0,05 Echinacoside, ECH; feniletanoidni glikozidi, PeGs; verbaskozid, VerBS.

37∘C 1 uro; ploščo 3-krat sperite s PBS/Tween. Dodajte 50 µl raztopine za razvijanje barve in ploščo hranite stran od svetlobe ter jo inkubirajte pri sobni temperaturi 15 minut; Dodamo 50 µl pufra za zaustavitev reakcije. Izmerite optično gostoto (OD) za vsako vdolbinico z bralnikom mikroplošč, nastavljenim na 405 nm, v 30 minutah.

1.8. Statistična analiza. Vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM (standardna napaka povprečja), pomembna razlika je bila analizirana s t-testom ali enosmerno ANOVA, ki so ji sledili Duncanovi testi večkratnega obsega z uporabo SPSS 16.0 in razlike med skupine z � < 0.05="" so="" veljale="" za="" statistično="">

2. Rezultati

2.1. Določanje vsebnosti glavnih bioaktivnih sestavin v C. deserticola YCMa in C.tubulozaVzorci. Feniletanoidni glikozidi, kot sta ehinakozid in verbaskozid, na splošno veljajo za glavne bioaktivne sestavine; od tod vsebnost ehinakozida in verbaskozida tako v C. deserticola YCMa kot v C.tubulozavzorcev smo določili s HPLC. Kromatogrami HPLC so prikazani na sliki1, rezultati pa kažejo, da je bila skupna vsebnost feniletanoidnih glikozidov iz C. deserticola YCMa približno dvakrat večja od C. tubulosa. Masi ehinakozida in verbaskozida predstavljata 1,27 ± 0.009 odstotkov in {{10}},52 ± 0,003 odstotka praška, pripravljenega iz C. deserticola YCMa ter 19,81 ± 0,66 odstotka in 2,45 ± 0,12 odstotka praška, pripravljenega iz C.tubuloza. Uteži ehinakozida in verbaskozida znašajo {{0}},90 ± 0.{{10}}01 odstotek in 0,20 ± 0,001 odstotka decoctiona C. deserticola YCMa ter 5,90 ± 0,12 odstotka in 0,54 ± 0,05 odstotka praška, pripravljenega iz C.tubuloza(Tabela1).

2.2. Odvar C. deserticola YCMa in C. tubulosa je ublažil stres in depresijo. Test obešenja repa (TST) je hitra in klasična metoda za oceno antidepresivnega učinka zdravil pri miših [24]; v tej raziskavi je bil nepremični status, ki ga je povzročil kratkotrajni in neizogibni stres zaradi obešenja za rep, uporabljen kot lastnost, ki odraža stopnjo depresije miši. Preverili smo, ali je prevretek C. deserticola YCMa in C.tubulozabi lahko obrnil nepremičnost in spodbudil pojav vedenja, povezanega s pobegom. V primerjavi s kontrolnimi skupinami se je obdobje imobilnosti stresne skupine povečalo za 27,4 odstotka; v primerjavi s stresom

Slika 1: HPLC kromatografski profil feniletanoidnih glikozidov iz prahu C. deserticola YCMa in C. tubulosa. Vrhovi 1 in 2 predstavljajo ehinakozid oziroma verbaskozid.

Slika 2: Učinek decokcij C. deserticola YCMa in C. tubulosa na obdobje nepremičnosti miši z obešenim repom v 5 minutah. Po prilagoditvi smo poskusnim skupinam 21 dni dajali decokcijo zelišča Cistanche z gavažo in jih nato obesili na rep ter spremljali gibanje v 5 minutah po suspenziji; vsako skupino je sestavljalo 10 miši. L, M in H predstavljajo nizko, srednjo in visoko; CD oziroma CT predstavljata

Odvar C. deserticola YCMa in C. tubulosa. Vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM; p< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

skupine,

skupine, skupine, zdravljene s srednjo visoko koncentracijo decoctiona zelišč C. deserticola YCMa, so pokazale statistično značilno zmanjšanje obdobja nepremičnosti za 44,1 odstotka in 56,1 odstotka; skupine, zdravljene s srednjo, visoko koncentracijo

Odvar zelišča C. tubulosa je pokazal statistično pomembno zmanjšanje obdobja nepremičnosti za 41,9 odstotka in 47,7 odstotka (slika2). Ti rezultati kažejo, da je decokcija C. deserticola YCMa in C.tubulozabi lahko zmanjšal raven stresa in depresije pri miših, decokcija C. deserticola YCMa pa je pokazala nekoliko večjo učinkovitost kot C.tubulozadecoction.

1.1. Odvar C. deserticola YCMa in C. tubulosa je izboljšal prostorsko učenje in spomin miši. Ljudje (tako mladostniki kot odrasli), ki trpijo za depresijo, so nagnjeni k depresiji

do učnih težav [28]; decoction C. deserticola YCMa in C.tubulozadokazano blaži raven stresa in depresije; nato smo se odločili, da ocenimo, ali bi decokcija C. deserticola YCMa in C. tubulosa lahko vplivala na prostorsko učenje in spomin z uporabo Morrisovega modela vodnega labirinta, ki se pogosto uporablja pri ocenjevanju prostorskega učenja in spominske funkcije povezanega področja možganov[29]. Sledi gibanja so med zakasnitvijo iskanja razvrščene v štiri; ravna trajektorija je pokazala, da so miši natančno določile položaj reševalne ploščadi, krivulja težnje je pokazala, da so miši v bistvu pokazale pravilno orientacijo, trajektorija ostrega tipa pa je pokazala, da so bile miši v zgodnjem obdobju usposabljanja ali pa so trpele za demenco in poskušale poiščite ciljno mesto na podlagi instinkta; naključna krivulja iskanja je pokazala, da so miši imele nizko sposobnost pozicioniranja in brezciljno iskale ciljno mesto. Podatki so bili pridobljeni po kriterijih.

Učinek decokcij C. deserticola YCMa in C. tubulosa na sposobnost učenja vesolja in pomnjenja miši, ki so pod stresom zadrževanja, je prikazan na sliki3. Po preskusu obešanja repa so miši pokazale znatno podaljšano latenco. V primerjavi s stresnimi skupinami so miši, zdravljene z zmernimi visokimi odmerki C. deserticola YCMa in nizkimi visokimi odmerki C. tubulosa decoction, pokazale skrajšano latenco; pogostost, da so miši plavale skrito ploščad, je bila znatno povečana v skupinah, ki so bile zdravljene z zmernim, visokim odmerkom decoctiona C. deserticola YCMa. Ti rezultati kažejo, da je miši pod stresom koristilo dajanje odvarka zelišča Cistanche in pokazalo izboljšanje prostorskega učenja in spomina.

1.2. Odvar C. deserticola YCMa in C.tubulozaZnižana aktivnost monoaminooksidaze. MAO katalizira oksidativno deaminacijo aminov, kot so tiramin, kateholamin in 5-hidroksitriptamin (5-HT) v možganih in perifernih tkivih; zaviranje aktivnosti MAO povzroči učinkovitost antidepresiva [30]. Skušali smo razložiti antidepresivni učinek C. deserticola YCMa in C.tubuloza; nato je bila določena aktivnost MAO v možganih. Po preskusu obešanja repa se je aktivnost MAO znatno povečala; aktivnost MAO v skupinah, ki so bile zdravljene z suspenzijo repa, nato pa so jim sledili zmerni, visoki odmerki

Slika 3: Učinek C. deserticola YCMa in C.tubulozadecoctions o vesoljskem učenju in spominski sposobnosti miši, ki so bile pod stresom zadrževanja. Po prilagoditvi smo poskusnim skupinam 21 dni dajali zvarek zeliščne cistanče z gavažo in nato testirali z

R. Morris vodni labirint za določanje prostorskega učenja in spomina. L, M in H predstavljajo nizko, srednjo in visoko; CD oziroma CT predstavljata C. deserticola YCMa in C.tubulozadecoction. Vsak "#" in "∗" predstavljata P< 0.05="" and="" p="" <="">

Slika 4: Učinek dekokcij C. deserticola YCMa in C. tubulosa na aktivnost možganske monoaminooksidaze (MAO) miši, izpostavljenih stresu z obešanjem repa. Po prilagoditvi so poskusnim skupinam 21 dni dajali odvar zelišča Cistanche z gavažo in jih nato 5 minut obesili na rep, vsako skupino je sestavljalo 10 miši in miši so žrtvovali, da so pobrali možganska tkiva. in se uporablja za merjenje aktivnosti MAO. L, M in H predstavljajo nizko, srednjo in visoko; CD oziroma CT predstavljata decokcijo C. deserticola YCMa in C. tubulosa. P= 10; vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM; P <0,05 je="" veljalo="" za="" značilno="" drugačno="" in="" je="" bilo="" označeno="" z="">

decoction iz C. deserticola YCMa je ​​pokazal znatno zmanjšanje za približno 13,9 odstotka ~12,3 odstotka; aktivnost MAO v skupinah, zdravljenih s suspenzijo repa in nato visokim odmerkom decokcije iz C. tubulosa, je pokazala znatno zmanjšanje za približno 13,2 odstotka (slika4).Podatki so pokazali, da lahko decoction iz C. deserticola YCMa in C. tubulosa zavira aktivnost MAO in lahko prispeva k antidepresivu

učinek in decokcija C. deserticola YCMa je ​​pokazala močnejšo učinkovitost kot C. tubulosa.

1.1. Dajanje decoctiona C. deserticola YCMa in C. tubulosa je povzročilo zvišanje centralne koncentracije dopamina in znižanje koncentracije serumskega kortikosterona. Raven DA in NE v

Slika 5: Učinek dekokcij C. deserticola YCMa in C. tubulosa na ravni možganskih nevrotransmiterjev pri miših, ki so bile pod stresom z visečim repom. Po prilagoditvi so poskusnim skupinam 21 dni dajali decokcijo zelišča Cistanche z gavažo in jih nato 5 minut obesili na rep, vsako skupino je sestavljalo 10 miši, miši pa so žrtvovali, da so pobrali možganska tkiva in jih uporabili kot možganski nevrotransmiter merjenje ravni. L, M in H predstavljajo nizko, srednjo in visoko; CD oziroma CT predstavljata decokcijo C. deserticola YCMa in C. tubulosa. P= 10; vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM; p< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

osrednji

izmerili so centralni živčni sistem, da bi ugotovili razdražljivost živcev. Po 4 tednih preskusa obešanja repa se je v primerjavi s stresnimi skupinami raven DA v skupinah, zdravljenih z zmernim odmerkom C. deserticola YCMa, bistveno povečala za 43,5 odstotka; tudi raven DA v skupinah, zdravljenih z zmernim odmerkom C. tubulosa, se je znatno povečala (slika5(a)). Raven NE je bila v skupinah, zdravljenih z decokcijo obeh zelišč, rahlo povišana v primerjavi s skupinami, ki so bile izpostavljene stresu, in ni bilo ugotovljene nobene statistične razlike (slika5(b)).Ti rezultati bi lahko pojasnili molekularni mehanizem antidepresivnega učinka zelišča Cistanche.

Adrenokortikotropni hormon (ACTH), polipeptidni hormon, ki ga proizvaja in izloča anteriorna hipofiza, stimulira izločanje glukokortikosteroida z delovanjem na skorjo nadledvične žleze, zona fasciculata [31]; kortikosteron, steroidni hormon, ki ga proizvaja skorja nadledvične žleze, sodeluje pri uravnavanju fizioloških procesov, kot so dvig energije, imunske reakcije in odzivi na stres [32], zato smo se odločili preučiti učinek zeliščnega decoctiona na os HPA. Izmerili smo koncentracijo ACTH in kortikosterona v serumu. Po 4 tednih preskusa obešenja repa sta bili koncentraciji ACTH in kortikosterona v stresni skupini znatno povečani (slika6).V skupinah, zdravljenih z decokcijo zelišča Cistanche, v primerjavi s skupino, ki je prejemala stres, niso opazili bistvenih sprememb (slika 2).6(a)).V primerjavi s skupino, ki je bila izpostavljena stresu, je bila serumska koncentracija kortikosterona v skupinah, zdravljenih z zmernim, visokim odmerkom decoctiona C. deserticola YCMa, znatno znižana; koncentracija kortikosterona v skupinah, zdravljenih z visokimi odmerki C. tubulosa, je bila znižana, vendar ne do pomembne statistične razlike

(Slika5(b)).Podatki so pokazali, da decoction iz obeh

C. deserticola YCMa in C. tubulosa lahko zmanjšata koncentracijo kortikosterona v serumu in lahko sodelujeta pri uravnavanju osi HPA, decoction C. deserticola YCMa pa je pokazal močnejšo učinkovitost kot C. tubulosa.

1. Razprava

V tej študiji so bile opredeljene antidepresivne aktivnosti ter izboljšanje spomina in učenja zelišča Cistanche, kar bi lahko osvetlilo delovanje zelišča Cistanche in dalo namige za razširitev obsega terapevtske uporabe. Prejšnje študije so pokazale, da je zelišče Cistanche večnamensko kitajsko zdravilo z biološkim delovanjem proti staranju, antioksidativnim, estrogenim, antiosteoporotičnim, afrodiziačnim in protivnetnim učinkom.33]. Zelišče Cistanche je bilo priznano kot zdravilo za odpoved ledvic, neplodnost in kronično zaprtje (Farmakopejski odbor Kitajske, 2010). Odvar zelišča Cistanche je sestavljen iz hlapnih olj, nehlapnih feniletanoidnih glikozidov (PeG), iridoidov, lignanov, alditolov, oligosaharidov in polisaharidov. Ehinakozid in verbaskozid na splošno veljata za glavni bioaktivni sestavini [34]. Obstajajo štiri glavne vrste Cistanche, vključno s C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck in Cistanche salsa var. albiflorashi idr. [35]; smo izbrali C. deserticola YCMa in C. tubulosa kot naš model za določanje vsebnosti PeG, C. deserticola YCMa pa je imela višjo vsebnost PeG (slika1), kar lahko pojasni večjo učinkovitost C. deserticola YCMa. Rezultati kažejo, da vsebnost glavnih bioaktivnih sestavin določa učinkovitost zelišča cistanča.

Slika 6: Vpliv dekokcij C. deserticola YCMa in C. tubulosa na koncentracije hormonov v serumu pri visečih miših pod stresom. Po prilagoditvi smo poskusnim skupinam 21 dni dajali decokcijo zelišča Cistanche z gavažo in jih nato za 5 minut obesili na rep, vsako skupino je sestavljalo 10 miši, odvzeli so kri in jo uporabili za določanje ravni serumskega adrenokortikotropnega hormona (ACTH) in kortikosterona (CORT). L, M in H predstavljajo nizko, srednjo in visoko; CD oziroma CT predstavljata decokcijo C. deserticola YCMa in C. tubulosa. P=10; vsi podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SEM; P <0,05 so="" veljali="" za="" pomembno="" različne="" in="" so="" bili="" označeni="" z="">

Prejšnje študije kažejo, da so zeliščni izdelki Cistanche koristni za zdravljenje nevrodegenerativnih motenj z uravnavanjem živčnega rastnega faktorja (NGF) v hipokampusu miši [36,37], vendar ni bilo poročil o nobeni raziskavi o antidepresivih in kognitivnih učnih dejavnostih zelišča Cistanche na modelih sesalcev. V tej študiji se je izkazalo, da je decoction zelišča Cistanche učinkovit pri zmanjševanju ravni stresa in znatno povečanju vedenja preživetja v testu obešenja repa (slika2) in izboljšati zmogljivost prostorskega učenja in spomina v modelu vodnega labirinta (slika 2).3). Lin et al. dokazal, da je zelišče Cistanche izboljšalo spomin, povezan z vohom, v modelu vinske mušice [23]; raziskavo smo usmerili v antidepresivni učinek in sprejeli drugačen živalski model; rezultat je dokazal, da je zelišče Cistanche izboljšalo različno vrsto kognitivne funkcije, in sicer sposobnost prostorskega učenja pri miših. Po monoaminski teoriji sta izkušnja stresa in depresija tesno povezana z možgansko ravnjo monoaminskih nevrotransmiterjev, kot so DA, NE, 5-HT in epinefrin [38]. In ugotovili smo, da lahko decoction zelišča Cistanche spodkopava aktivnost MAO (slika 2).4) in povečati centralno koncentracijo DA (slika5(a)). Presenetljivo je, da je bila centralna koncentracija 5-HT znižana z zdravljenjem z decokcijo zelišč Cistanche (podatki niso prikazani), ker so prejšnje raziskave pokazale, da je zmanjšana centralna aktivnost 5-HT povezana z depresijo [39]. Disregulacija osi hipotalamus-hipofiza-nadledvična žleza je pogosto povezana z depresijo [40], intervencija s sistemom glukokortikoidnega receptorja (GR) je uspešno obrnila depresivni fenotip pri miših[41], in ugotovili smo, da zelišče Cistanche znatno ublaži serum

koncentracija CORT (slika6(b)).Modulacija monoaminskega sistema in HPA osi prispeva k antidepresivnemu učinku zelišča Cistanche. Ehinakozid lahko prosto prečka krvno-možgansko pregrado in deluje na osrednji živčni sistem [42], kar lahko pojasni, zakaj je decoction zelišča Cistanche imel antidepresivno funkcijo. Prvič smo opisali lastnost antidepresiva in njegov odnos do aktivnosti za izboljšanje kognitivnih sposobnosti v mišjem modelu in raziskali smo predhodni mehanizem. Kljub temu mehanizem antidepresivnih lastnosti Cistanche na molekularni ravni ni pojasnjen, zato so potrebne nadaljnje raziskave za pojasnitev celovitega antidepresivnega mehanizma zelišča Cistanche.

Glede na to, da je zvarek zelišča čistanca mešanica spojin, lahko obstaja več načinov, kako zvarek zelišča čistinca deluje antidepresivno in povečuje sposobnost učenja. Oksidativni stres vpliva na številne celične funkcije nevronov in prekomerna proizvodnja reaktivnih kisikovih vrst (ROS) povzroči poškodbe celic, apoptozo in smrt [4].3]. Ehinakozid, ekstrahiran iz stebel C. salsa, ima nevroprotektivni učinek z zmanjšanjem proizvodnje ROS in mitohondrijsko posredovano apoptozo [44]; akteozid, izjemno močna antioksidativna spojina, je lahko delno odgovoren za nevroprotektivni učinek[45]. Poleg tradicionalne metode prekuhavanja bi lahko uporaba sodobnih farmacevtskih metod, kot so glikozidne kapsule z nadzorovanim sproščanjem, povečala učinek prekuhavanja zelišč, saj bi bioaktivne sestavine lahko prebavile in razgradile prebavila.37].

Prejšnje študije kažejo, da so zeliščni izdelki Cistanche koristni za zdravljenje nevrodegenerativnih motenj z uravnavanjem živčnega rastnega faktorja (NGF) v hipokampusu miši [36,37], vendar ni bilo poročil o nobeni raziskavi o antidepresivih in kognitivnih učnih dejavnostih zelišča Cistanche na modelih sesalcev. V tej študiji se je izkazalo, da je decoction zelišča Cistanche učinkovit pri zmanjševanju ravni stresa in znatno poveča preživetje v testu obešenja repa (slika2) in izboljšati zmogljivost prostorskega učenja in spomina v modelu vodnega labirinta (slika 2).3). Lin et al. dokazal, da je zelišče Cistanche izboljšalo spomin, povezan z vohom, v modelu vinske mušice [23]; raziskavo smo usmerili v antidepresivni učinek in sprejeli drugačen živalski model; rezultat je dokazal, da je zelišče Cistanche izboljšalo različno vrsto kognitivne funkcije, in sicer sposobnost prostorskega učenja pri miših. Po monoaminski teoriji sta izkušnja stresa in depresija tesno povezana z možgansko ravnjo monoaminskih nevrotransmiterjev, kot so DA, NE, 5-HT in epinefrin [38]. In ugotovili smo, da lahko decoction zelišča Cistanche spodkopava aktivnost MAO (slika 2).4) in povečati centralno koncentracijo DA (slika5(a)). Presenetljivo je, da je bila centralna koncentracija 5-HT znižana z zdravljenjem z decokcijo zelišč Cistanche (podatki niso prikazani), ker so prejšnje raziskave pokazale, da je zmanjšana centralna aktivnost 5-HT povezana z depresijo [39]. Disregulacija osi hipotalamus-hipofiza-nadledvična žleza je pogosto povezana z depresijo [40], intervencija s sistemom glukokortikoidnih receptorjev (GR) je uspešno obrnila depresivni fenotip pri miših[41], in ugotovili smo, da zelišče Cistanche znatno ublaži serum

koncentracija CORT (slika6(b)).Modulacija monoaminskega sistema in HPA osi prispeva k antidepresivnemu učinku zelišča Cistanche. Ehinakozid lahko prosto prečka krvno-možgansko pregrado in deluje na osrednji živčni sistem [42], kar lahko pojasni, zakaj je decoction zelišča Cistanche imel antidepresivno funkcijo. Prvič smo opisali lastnost antidepresiva in njegov odnos do aktivnosti za izboljšanje kognitivnih sposobnosti v mišjem modelu in raziskali smo predhodni mehanizem. Kljub temu mehanizem antidepresivnih lastnosti Cistanche na molekularni ravni ni pojasnjen, zato so potrebne nadaljnje raziskave za pojasnitev celovitega antidepresivnega mehanizma zelišča Cistanche.

Glede na to, da je zvarek zelišča čistanca mešanica spojin, lahko obstaja več načinov, kako zvarek zelišča čistinca deluje antidepresivno in povečuje sposobnost učenja. Oksidativni stres vpliva na številne celične funkcije nevronov in prekomerna proizvodnja reaktivnih kisikovih vrst (ROS) povzroči poškodbe celic, apoptozo in smrt [4].3]. Ehinakozid, ekstrahiran iz stebel C. salsa, ima nevroprotektivni učinek z zmanjšanjem proizvodnje ROS in mitohondrijsko posredovano apoptozo [44]; acetonid, izjemno močna antioksidativna spojina, je lahko delno odgovoren za nevroprotektivni učinek[45]. Poleg tradicionalne metode prekuhavanja bi lahko uporaba sodobnih farmacevtskih metod, kot so glikozidne kapsule z nadzorovanim sproščanjem, povečala učinek prekuhavanja zelišč, saj bi bioaktivne sestavine lahko prebavile in razgradile prebavila.37].

1. Sklepi

V tej študiji smo ugotovili, da decoctions C. deserticola

YCMa in C. tubulosa sta pokazala antidepresivni učinek in izboljšala sposobnost prostorskega učenja in spomina v mišjem modelu, decokcije C. deserticola YCMa in C. tubulosa pa so pomembno vplivale na os HPA;

C. deserticola YCMa je ​​pokazala močnejšo farmakološko funkcijo. C. deserticola in C. tubulosa imata potencial za razvoj kot alternativna zdravila za zdravljenje depresije.

Razkritje

Stališča, izražena tukaj, so stališča avtorjev in ne odražajo nujno stališč katere koli od teh agencij.

Nasprotja interesov

Avtorji izjavljajo, da niso v nasprotju interesov.

Zahvala

Ta projekt je bil podprt z donacijami Nacionalne naravoslovne fundacije (81503333) in projekta Science and Technology Support by Project v avtonomni regiji Xinjiang Uygur (Kitajska) (200840102-15).

Reference

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao et al., »Življenjska in 12-mesečna razširjenost psihiatričnih motenj DSM-III-R v Združenih državah: rezultati iz nacionalne raziskave komorbidnosti,« Arhiv Splošna psihiatrija, letn. 51, št. 1, str. 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska in G. Chen, "Nevroplastičnost in celična odpornost pri motnjah razpoloženja", Molecular Psychiatry, vol. 5, št. 6, str. 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis in AF Carvalho, "Beyond monoamines-novel targets fortherapy-resistant depression: A celovit pregled," Current Neuropharmacology, vol. 13, št. 5, str. 636–655, 2015.

[4] K. Wilson in P. Mottram, "Primerjava stranskih učinkov selektivnih zaviralcev ponovnega privzema serotonina in tricikličnih antidepresivov pri starejših bolnikih z depresijo: meta-analiza," International Journal of Geriatric Psychiatry, vol. 19, št. 8, str. 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljkovic´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Pharmacokinetics and efficacy of fluvoxamine and amitriptyline in depression," Journal of Pharmacological Sciences, vol. 110, št. 1, str. 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "Prehranska dopolnila in funkcionalna živila: 2 strani kovanca?" American Journal of Clinical Nutrition, let. 77, str. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang et al., "Raziskava o antidepresivnem učinku olja iz semen rakitovca s pristopom metabolomike, ki temelji na GC-MS, skupaj z multivariatno analizo," Food and Function, vol. 6, št. 11, str. 3585–3592, 2015.

[8] Y. Hou, MA Aboukhatwa, D.-L. Lei, K. Manaye, I. Khan in

Y. Luo, "Naravni flavonoli proti depresiji modulirajo BDNF in

beta-amiloid v nevronih in hipokampusu miši dvojne TgAD," Neuropharmacology, vol. 58, št. 6, str. 911–920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem, in O. Tankamnerdthai, "Piperin, potencialna funkcionalna hrana za razpoloženjske in kognitivne motnje," Food and Chemical Toxicology, vol. 46, št. 9, str. 3106–3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi in J. Terao, "Pristop k novim funkcionalnim živilom za obvladovanje stresa 5. Profili antioksidativne aktivnosti antidepresivnih zelišč in njihovih aktivnih komponent," Journal of Medical Investigation, vol. 52, str. 249–251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain in B. Jitendra, "Pregled Griffonia simplicifollia – idealnega zeliščnega antidepresiva," International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 2010.

[12] Z.-L. Jin, N. Gao, W. Xu et al., "Profili vezave receptorjev in transporterjev ter aktivnosti albiflorina, ekstrahiranega iz Radix Paeonia Alba," Znanstvena poročila, vol. 6, ID članka 33793, 2016.

[13] S.-H. Lin, M.-L. Chou, W.-C. Chen et al., "Zdravilna rastlina, Melissa officinalis L. izboljša depresivno vedenje podgan v testu prisilnega plavanja z uravnavanjem serotonergičnega nevrotransmiterja," Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, člen št. 9741, str. 266–272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan in M.-H. Su, "Hipoholesterolemični učinki izvlečka Cistanche tubulosa, kitajskega tradicionalnega surovega zdravila, pri miših," American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, št. 6, str. 1125–1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui in LI Xiu-Wei, "Učinek različnih regulatorjev rasti rastlin na razmerje preživetja pri presajanju sadik haloxyfop amodendrona in parazitsko razmerje cistanche deserticola," Journal of Chinese Medicinski materiali, zv. 32, str. 1651–1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani in T. Namba, "Antioksidativni učinki feniletanoidov iz Cistanche deserticola," Biološki in farmacevtski bilten, vol. 19, št. 12, str. 1580–1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen in Y.-Q. Li, "Zaščitni učinki ehinakozida na hepatotoksičnost, ki jo povzroča ogljikov tetraklorid pri podganah," Toksikologija, vol. 232, št. 1-2, str. 50–56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby in X. Zhang, "Etanolni izvleček Cistanche tubulosa posreduje ravni spolnih hormonov pri podganah z indukcijo testikularnih steroidogenih encimov," Pharmaceutical Biology, vol. 54, št. 3, str. 481–487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang in X. Liu, "Učinki ekstrakta Cistanche deserticola na erektilni odziv penisa pri kastriranih podganah," Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 29, št. 2, str. 557–562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang, et al., "Kako kitajska zdravila, ki tonirajo ledvice, zavirajo apoptozo dopaminergičnih nevronov?" Raziskave nevronske regeneracije, vol. 8, št. 30, str. 2820–2826, 2013.

[21] C.-R. Wu, H.-C. Lin in M.-H. Su, "Razveljavitev vodnih izvlečkov Cistanche tubulosa iz vedenjskih pomanjkljivosti v modelu podgan, podobnem Alzheimerjevi bolezni: pomen za odlaganje amiloida in funkcijo centralnega nevrotransmiterja," BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 14, str. 1–11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol in LR Munari, "Antidepresiv, stabilizacija razpoloženja in prokognitivni učinki zelo nizkega odmerka sublingvalnega ketamina pri neodzivni unipolarni in bipolarni depresiji," International Journal of Neuropsychopharmacology, vol. 16, št. 9, str. 2111–2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai in H. Liu, "Molekularne poti, povezane s spodbujanjem dolgoživosti in kognitivnim izboljšanjem Cistanche tubulosa pri Drosophili,"

Fitomedicina, letn. 26, str. 37–44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau in A. Vassout, "Test obešanja repa kot model za ocenjevanje antidepresivne aktivnosti: Pregled farmakoloških in genetskih študij pri miših," Neuroscience and Biobehavioral Reviews, vol. 29, št. 4-5, str. 571–625, 2005.

[25] CV Vorhees in MT Williams, "Morrisov vodni labirint: postopki za ocenjevanje prostorskih in sorodnih oblik učenja in spomina," Nature Protocols, vol. 1, št. 2, str. 848–858, 2006.

[26] R. Morris, "Razvoj postopka vodnega labirinta za preučevanje prostorskega učenja pri podganah," Journal of Neuroscience Methods, vol. 11, št. 1, str. 47–60, 1984.

[27] A. Wolf, B. Bauer, EL Abner, T. Ashkenazy-Frolinger in A.

MS Hartz, "Celovita vedenjska testna baterija za oceno učenja in spomina pri miših 129S6/Tg2576," PLoS ONE, vol. 11, št. 1, ID članka e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young in AA Leenaars, "Težave pri učenju v otroštvu, zaradi katerih so prizadeti nagnjeni k depresiji in samomoru pri mladostnikih in odraslih," Journal of Learning Disabilities, vol. 22, št. 3, str. 169–175, 1989.

[29] R. D'Hooge in PP De Deyn, "Uporaba Morrisovega vodnega labirinta pri študiju učenja in spomina," Brain Research Reviews, vol. 36, št. 1, str. 60–90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen in MJ Ridd, "Monoaminooksidaza: od genov do vedenja," Annual Review of Neuroscience, vol. 22, str. 197–217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein in JP Herman, "Disociacija ACTH in glukokortikoidov," Trendi v endokrinologiji in metabolizmu, vol. 19, št. 5, str. 175–180, 2008.

[32] S. Whirledge in JA Cidlowski, "Glukokortikoidi, stres in plodnost," Minerva Endocrinologica, vol. 35, št. 2, str. 109–125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu et al., "Cistanches Herba: kemične sestavine in farmakološki učinki," kitajska zeliščna zdravila, vol. 7, št. 2, str. 135–142, 2015.

[34] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao in C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): eno najboljših farmacevtskih daril tradicionalne kitajske medicine", Frontiers in Pharmacology, vol. 7, 41. člen 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu in XB Li, "Identifikacija vrst Cistanche s kemičnim in medpreprostim zaporedjem ponavljajočih se prstnih odtisov," Biološki in farmacevtski bilten, vol. 32, št. 1, str. 142–146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim in

MS Oh, "Cistanches Herba izboljša učenje in spomin z induciranjem živčnega rastnega faktorja," Behavioral Brain Research, vol. 216, št. 2, str. 652–658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang et al., "Odprta, s placebom nadzorovana študija o glikozidnih kapsulah cistanche tubulosa (Memoregain®) za zdravljenje zmerne Alzheimerjeve bolezni," American Journal of Alzheimer's Disease and other Dementias, vol. 28, št. 4, str. 363–370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli in G. Racagni, "Modulacija sinaptične plastičnosti s stresom in antidepresivi," Bipolarne motnje, vol. 4, št. 3, str. 166–182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor in V. O'Keane, "Nevroendokrini dokazi o povezavi med hipotiroidizmom, zmanjšano centralno 5-aktivnostjo HT in depresijo," Clinical Endocrinology, vol. 43, št. 6, str. 713–719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs in CJ George, "Disregulacija osi hipotalamus-hipofiza-nadledvična žleza pri depresivnih otrocih in mladostnikih: meta-analiza," Psychoneuroendocrinology, vol. 34, št. 9, str. 1272–1283, 2009.

[41] N. Barden, "Pomembnost osi hipotalamus-hipofiza-nadledvična žleza v fiziopatologijo depresije," Journal of Psychiatry and Neuroscience, vol. 29, št. 3, str. 185–193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu in W. Li, "Prehodna izpostavljenost ehinakozidu zadostuje za aktiviranje signalizacije Trk in zaščito nevronskih celic pred rotenonom," Journal of Neurochemistry, vol. 124, št. 4, str. 571–580, 2013.

[43] T.-H. Lu, C.-C. Su, F.-C. Tang et al., "Kloroocetna kislina sproži apoptozo v nevronskih celicah preko signalne poti stresa endoplazemskega retikuluma, ki jo povzroči reaktivna kisikova vrsta," Chemico-Biological Interactions, vol. 225, str. 1–12, 2015.

[44] Y.-H. Wang, Z.-H. Xuan, S. Tian in G.-H. Du, "Ehinakozid ščiti pred 6-mitohondrijsko disfunkcijo, ki jo povzroča hidroksidopamin, in vnetnimi odzivi v celicah PC12 z zmanjšanjem proizvodnje ROS," Z dokazi podprta komplementarna in alternativna medicina, vol. 2015, ID članka 189239, 9 strani, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin in CF Chen, "Akteozid ščiti endotelijske celice pred oksidativnim stresom, ki ga povzročajo prosti radikali," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 56, št. 6, str. 743–748, 2004.