Metoda za identifikacijo kemičnih aktivnih sestavin Cistanche

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Identifikacija kemičnih sestavin Cistanche Deserticola s sistemom X500R QTOF

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Azijsko-pacifiški center za podporo aplikacijam (Šanghaj), Kitajska

Uvod

Cistanche deserticolaje bil prvič zabeležen v "Shen Nong Materia Medica"; znan je tudi kot "Dayun", "Rousong Rong" in "Zong rong." Kot tradicionalno zeliščno zdravilo ima lastnosti hranjenja ledvičnega janga, izboljša pretok krvi, deluje kot odvajalo, stimulira imunski sistem in ima druge učinke[1]. Leta 1983 so japonski učenjak H. Kobayashi in drugi začeli preučevati kemično sestavoCistanche Deserticola[2], od takrat pa je postala priljubljena tema v raziskavah kitajske medicine, ki je v zadnjih 30 letih vzbudila veliko zanimanja doma in v tujini.Cistanche Deserticolaspada v razred rastlin, ki vsebujejo fenolneglikozidi, iridoidi in njihoviglikozidi, ter lignani in njihoviglikozidi.

Kvadrupolna masna spektrometrija s časom preleta (QTOF) je občutljivo in specifično orodje za identifikacijo komponent kitajske medicine, ki so postopoma postale nepogrešljive za raziskave. Ta tehnologija je premagala tradicionalne tehnične izzive z retrospektivnimi analizami posameznih injekcij, ki omogočajo ekstrakcijo pomembnih podatkov in najobsežnejšo pridobitev informacij o vzorcu. Uporaba natančne mase in podatkov TOF-MS in TOF-MS/MS z visoko ločljivostjo omogoča hkratno, zelo specifično ciljno in neciljno kvalitativno analizo. Vendar je kompleksnost delovanja instrumenta in uporabe programske opreme zelo omejila širjenje in razvoj te tehnologije. Tukaj predstavljamo nov sistem QTOF, ki uporablja revolucionarno novo pot TOF, ki temelji na geometriji N, intuitivno programsko opremo in natančne tehnike molekulske mase, ki jih je lažje uporabljati pri identifikaciji komponent kitajske medicine.

Prednosti te metode so naslednje:

1. X500R uporablja vzdržljiv, v industriji odobren vir ionov Turbo VTM in zasnovo plinskega vmesnika za zračno zaveso, ki ima močno funkcijo proti kontaminaciji;

2. Programska oprema SCIEX OS ima integrirane funkcije pridobivanja, obdelave in poročanja na eni platformi; vmesnik je intuitiven, enostaven za obvladovanje in ima samodejni popravek z enim dotikom, ki zagotavlja, da lahko analitiki s kakršno koli stopnjo strokovnega znanja pridobijo visoko kakovostne in zanesljive podatke;

3. Uporaba programske opreme SCIEX OS za obdelavo podatkov za prepoznavanje komponent kitajske medicine je preprosta in omogoča hitro pridobivanje uporabnih informacij, torej ;

4. Pridobiva natančnejše in zanesljivejše rezultate identifikacije iz knjižnic kitajske medicine, ki vsebujejo spektre MS/MS;

5. Podatkovne baze kitajske medicine MS/MS visoke ločljivosti temeljijo na aktivnih sestavinah kitajske farmakopeje 1. dela TCM; vključno s sklicevanjem na sestavine v farmakopeji in aktivnimi sestavinami v zeliščih, obstaja skoraj 900 spojin

cistanche deserticola izboljšanje učinkovitosti

Eksperimentalni proces

1. Z načinom TOF-MS-IDA MS/MS vbrizgajte vzorec in hkrati pridobite primarne prekurzorske ione in ustrezne sekundarne spektre;

2. Uporaba programske opreme SCIEX OS s ciljnim pregledom, potrditvijo ciljnih spojin in sekundarnih spektrov skupaj s pregledom standardov kitajske medicine in metod ujemanja lahko poveča natančnost in delovno produktivnost.

3. Delovni tok neciljane identifikacije programske opreme SCIEX OS uporablja iskanje po knjižnicah in popolna neznana iskanja v ChemSpiderju za preverjanje rezultatov, s čimer zagotavlja identifikacijo več komponent s preprostejšim delovnim tokom.

Vzorci in metoda predhodne obdelave

Vir vzorca:

Kupljeno v šanghajskih lekarnah v narezani obliki

Metoda predhodne obdelave:

1. Rezine so bile zdrobljene v prah;

2. 0.9 mg smo stehtali in za 40 minut potopili v 3 ml metanola;

3. Vzorec iz koraka 2) je bil ultrazvočen 1 uro;

4. Izvedeno je bilo centrifugiranje in odstranitev supernatanta za uporabo kot vzorec.

Pogoji tekočinske kromatografije (LC).

Kromatografska kolona: XSelect HSS T3, 2,1*150 mm, 3,5 µm;

Mobilna faza: Uporabljena je bila gradientna elucija

Mobilna faza: A je 0.1 odstotek vode mravljinčne kisline-2mM NH4FA

B je 95 odstotkov acetonitrila-5 odstotkov vode-2mM NH4FA

Hitrost pretoka: 0,5 ml/min

Temperatura kolone: ​​40 °C

Vstavljena količina: 5µL

Metoda masne spektrometrije:

Metoda skeniranja: TOF MS-IDA-15 MS/MS kvalitativni pregled

Parametri ionskega vira ESI:

Plin za zračno zaveso CUR: 35psi; IS napetost: 5500 V/-4500V

Temperatura vira: 600ºC

Plin za razprševanje GAS1: 55 psi; Pomožni plin GAS2: 60psi

Iskanje instrumentacijskega načina:

Z enim dotikom (izberite MS Check spodaj desno), popolnoma avtomatiziran TOF-MS in TOF-MS/MS korekcijski način zagotavljata, da lahko analitiki katere koli ravni strokovnega znanja pridobijo natančne, zanesljive in ponovljive podatke.

BPC s pozitivnim in negativnim ionskim načinom:

Postopek identifikacije spojine

1. Potek dela za identifikacijo ciljne komponente

1.1: Iskanje molekulske formule

Zahtevana sta samo ime kemične spojine in molekulska formula; te je mogoče vnesti neposredno ali uvoziti z Excelovo funkcijo kopiraj in prilepi, da ustvariš metodo obdelave

Ko je tabela rezultatov ustvarjena, si lahko kvantitativne in kvalitativne rezultate ogledate v istem oknu. Rdeči/zeleni indikatorski sistem se uporablja za označevanje točnosti mase, retencijskega časa, vrste izotopa in zaupanja v identifikacijo z ujemanjem baze podatkov.

Programska oprema SCIEX OS uporabnikom omogoča filtriranje rezultatov in prikaz samo tistih spojin, ki izpolnjujejo merila sprejemljivosti in so v intervalih zaupanja, ki jih določi uporabnik. V velikih zbirkah podatkov lahko hitro najde ciljne rezultate.

Podatkovna baza MS/MS spektrov TCM omogoča sekundarno ujemanje in daje bolj zanesljive rezultate (siva barva v bazi podatkov označuje podatke MS/MS)

Literatura vsebuje imena in molekulske formule fenolaglikozidaktivne sestavine. Z uporabo zgornjega postopka za identifikacijo ciljnih komponent je bilo ugotovljeno, da vzorec vsebuje 39 vrst fenolnih glikozidov:

Poleg fenolnegaglikozidaktivnih sestavin Cistanche vsebuje tudi veliko število spojin, kot so iridoidi, glikozidi in lignani. Rezultati identifikacije so naslednji:

Identifikacijski seznam iridoidov, glikozidov in lignanov:

1.2: Iskanje po bazi podatkov:

53 spojin je bilo pridobljenih z ujemajočo se identifikacijo v bazi podatkov TCM: 43 pozitivnih ionov, 22 negativnih ionov in 12 ponovitev, navedenih spodaj. Poleg aktivnega fenolnegaglikozidi, iridoide, glikozide in lignane, vsebuje tudi Cistanche

2. Analiza neciljne komponente

Identifikacija neciljne komponente se lahko izvede z vgrajeno funkcijo iskanja ChemSpider za določitev klasifikacije in vrste neznank. Za identifikacijo neciljne komponente preprosto izberite "neciljani" način in iskanje molekulske formule bo razvilo metodo obdelave. Potek dela je naslednji:

Za popolne neznanke so rezultati iskanja molekulske formule prikazani v vrhunskem oknu brskalnika v spodnjem delu masnega spektra TOF MS; z iskanjem po bazi podatkov ChemSpider so rezultati navedeni po prioriteti, strukturne informacije, pridobljene v ChemSpiderju, pa se samodejno primerjajo z dobljenim spektrom MS/MS, kar zagotavlja sekundarne povratne informacije za hitro identifikacijo.

Povzetek

1. Hiter zajem podatkov visoke ločljivosti; ena sama injekcija je dala podatke TOF MS in MS/MS z visoko ločljivostjo, z 39 prepoznavnimi aktivnimi komponentami fenolnega glikozida in 16 iridoidi, lignani in glikozidi;

2. Podatkovna baza sekundarnih spektrov TCM zagotavlja dodatne informacije o ujemanju, programska oprema pa samodejno zagotovi rezultat ujemanja baze podatkov. Z rezultatom je mogoče preprosto, hitro in natančno identificirati komponente kitajske medicine;

3. Naprava je preprosta in ima samodejni popravek z enim dotikom, ki zagotavlja, da lahko analitiki s kakršno koli stopnjo strokovnega znanja pridobijo visoko kakovostne in zanesljive podatke;

4. Nova različica programske opreme SCIEX OS vključuje zajemanje podatkov, obdelavo (kvantitativno in kvalitativno), prikaz, poročanje in upravljanje baze podatkov. Z intuitivnim in za uporabo preprostim vmesnikom rešuje težave, s katerimi se soočajo številni uporabniki;

5. Ciljni in neciljani potek dela presejanja sta preprosta, vgrajen vodnik po metodah pa uporabnikom pomaga pri natančnem in hitrem ustvarjanju metod.

Reference

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, farmakopeja LRK [S]. Peking: Nacionalna farmakopejska komisija, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Raziskovalni napredek v kemični sestavi rastlin iz rodu Cistanche, "Kitajska zeliščna medicina," zvezek 34, št. 5, maj 2003, 473-476.