Identifikacija EST, odzivnih na vodikov peroksid, vključenih v biosintezo feniletanoidnih glikozidov v celični kulturi Cistanche Salsa

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Povzetek
Vodikov peroksid je učinkovit abiotski elicitor, ki lahko inducira biosintezo sekundarnega metabolita v rastlinah. To pokažemo v kulturi celične suspenzije zdravilne rastline, odporne na solCistanchesalsa, proizvodnja bioaktivnih sestavinfeniletanoidglikozidi(PeGs) se je povečal po zdravljenju s H2O2. Za identifikacijo genov, povezanih s PeG(feniletanoidglikozidi)biosintezo, na katero vpliva H2O2, smo z uporaboCistanchesalsacelično linijo in identificirali 105 izraženih zaporednih oznak (EST) in 85 genov. Funkcionalne opombe knjižnice EST in analize genske ontologije so pokazale gene, povezane z različnimi odzivi na stres, biosintezo sekundarnih metabolitov in regulacijo transkripcije. Med njimi smo identificirali dva gena, povezana s PeG(feniletanoidglikozidi)biosintezno pot (4-kumarat koencim A ligaza in cinamat 4-hidroksilaza) in dva transkripcijska faktorja tipa WRKY. Ekspresije izbranih genov po obdelavi s H2O2 smo analizirali z RT-qPCR. Zgodnje povečano prepisovanje PeG(feniletanoidglikozidi)geni poti biosinteze po zdravljenju so pokazali, da H2O2 inducira PeG(feniletanoidglikozidi)biosintezo s povečano regulacijo njegovih ključnih genov.
Dodatne ključne besede: cinamat-4-hidroksilaza, 4-kumarat koencim A ligaza, supresija, subtraktivna hibridizacija.Cistanchesalsa. feniletanoidglikozidi.

Uvod

Cistanchesalsaje večletna rastlinska zajedavka na korenu Haloxylos ammodendrun, raste pa v puščavskem območju zahodne Kitajske. Stoletja,Cistanchevrsta se uporablja kot tradicionalno zeliščno zdravilo (Wang et al. 2012). Bioaktivne komponente sofeniletanoidglikozidi(PeG), ki imajo izjemen učinek na očistek reaktivnih kisikovih vrst (ROS), zaščito pred sevanjem, izboljšanje imunosti in preprečevanje staranja (Nan et al. 2013). PeGs(feniletanoidglikozidi)biosinteza vCistanchese začne iz fenilalanina (slika 1 Suppl.) in sintetizirana kofeinska kislina se nadalje glikozilira, da tvori različne PeG.(feniletanoidglikozidi)(Wang et al. 2012). Trije glavni PeG-ji(feniletanoidglikozidi)ehinakozid, akteozid in 2'-acetilakteozid veljajo za najbolj aktivne sestavine vCistanche(Kobayashi et al. 1984). Da bi izboljšali njihovo vsebino vCistanchecelični kulturi so bili testirani različni elicitorji, vključno s hitozanom, putrescinom, Ag plus in osmotskim stresom (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu in Cheng 2008). Vendar pa geni, vključeni v PeG(feniletanoidglikozidi)biosinteza vCistanche, večinoma gene presnovne poti fenilalanina, so redko identificirali. Samo gen, ki kodira fenilalanin amonijačno liazo (PAL), je bil nedavno identificiran pri Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Drugi geni, ki kodirajo na primer cinamat-4-hidroksilazo (C4H), ki bi lahko kataliziral pretvorbo cinamata v kumarno kislino, in 4-kumarat koencim A ligazo (4CL), bistveni gen za lignin in flavanoide biosinteze, niso našli vCistanche.
Uporabili smo celično kulturoCistanchesalsaštudirati PeGs(feniletanoidglikozidi)biosintezo in izražanje povezanih genov. Raziskali smo tudi učinek učinkovitega elicitorja H2O2 na PeG(feniletanoidglikozidi)biosinteza. Poleg tega najti zgodnje odzivne gene, vključene v PeG(feniletanoidglikozidi)biosinteze, smo izvedli supresijsko subtraktivno hibridizacijo (SSH), da bi zgradili knjižnico cDNA H2O2-odzivnih genov.

Slika 1. Relativna genska ekspresija, določena z RT-qPCR po zdravljenju s H2O2. CsWRKY1 - WRKY transkripcijski faktor (Contig07), CsC4H1 - cinamat 4-hidroksilaza (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumarat: ligazo (Contig03), CsHSP1 - protein toplotnega šoka 70 kDa (Contig 01) in CsSOD1 - superoksid dismutazo (Contig16). Celice smo 2 uri obdelali z 80 ug dm-3 H2O2 v tekočem mediju in izraze primerjali s kontrolo, obdelano z vodo. Pomeni plus - SD treh bioloških ponovitev; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Materiali in metode

Celična linija CS2001 je bila vzpostavljena iz cvetnih listovCistanchesalsa(CA Mey.) Beck zbran v provinci Neimenggu in subkulturiran. Metoda kulture je bila podobna predhodno objavljenemu protokolu (Liu et al. 2007). Na splošno je bil za subkulturo uporabljen trden medij Murashige in Skoog (1962; MS), za PeG pa tekoči medij.(feniletanoidglikozidi)biosintezo (bil je modificiran medij MS, dopolnjen s 30 g dm-3 glukoze in 2.0 mg dm-3 indol-3-ocetne kisline). Za obdelavo s H2O2 smo 5.0 ± 0,2 g celic v obdobju hitre rasti, običajno 20 do 30 dni po subkulturi v trdnem mediju, nacepili v 50 cm3 tekočega medija v 250 cm3 erlenmajerici in gojimo v temi z ali brez različnih koncentracij H2O2. PeG-ji(feniletanoidglikozidi)vsebnost po 10-dnevni indukciji s H2O2 je bila analizirana v skladu z metodo, ki je bila predhodno objavljena (Liu et al. 2007), ki temelji na tekočinski kromatografiji visoke ločljivosti z reverzno fazo z eluiranjem z gradientom metanola.

Celice 2 uri po obdelavi s H2O2 smo zbrali iz medija s filtrirnim papirjem z uporabo Büchnerjevega lija, nato pa jih zamrznili v tekočem dušiku in zmleli v prah. Vsaka 2 g celičnega prahu smo lizirali z mešanico 1 cm3 2-merkaptoetanola, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkozila, in 8 cm3 GTC pufra (5 M gvanidinijevega izotiocianata, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiosečnine in 10 mM ditiotreitola). Celice smo nato inkubirali na ledu 15 minut, nato dodali 1/3 volumna 8,5 M CH3COOK, pH 6,0 in celice inkubirali na ledu 15 minut in nato centrifugirali pri 15 000 g 15 minut . Supernatant je bil dodan enakemu volumnu izopropanola, da se obori skupna RNA. Celotno RNA smo nadalje očistili z mini kompletom RNeasy (Qiagen, Hilden, ZDA) v skladu z navodili proizvajalca. Messenger RNA smo izolirali iz celotne RNA z uporabo kompleta Oligotex mRNA midi (Qiagen).

feniletanoidglikozidivCistancheSalsa

Knjižnica SSH je bila ustvarjena iz kontrolnih in 30-odstotnih H2O2-izzvanih vzorcev celic 2 uri po elicitaciji z uporabo PCR-select kompleta za odštevanje cDNA (Clontech, Mountain View, ZDA). Za konstrukcijo knjižnice so bili produkti ločeno prečiščeni z uporabo kompleta za čiščenje gela (Qiagen) in klonirani v vektor pGEM z uporabo kompleta za kloniranje TA (Tiangen, Peking, Kitajska). Plazmide iz neodvisnih klonov smo izolirali in sekvencirali s primerjem T7. Vse sekvence izražene oznake zaporedja (EST) iz knjižnice (z odstranjenimi vektorskimi sekvencami) so bile uporabljene za sestavljanje kontiga s CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST so bili združeni v contig in singletons; uporabljeni so bili za iskanje homologije s programom BLASTx pri NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Zaporedja so bila nato označena, analizirana in razvrščena glede na izraze genske ontologije (GO) z uporabo Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo (RT-qPCR) v realnem času smo izvedli v skladu z Bustinom et al. (2009). Vzorci cDNA so bili sintetizirani z uporabo reagentnega kompleta PrimeScript RT (Takara, Dalian, Kitajska) iz 0,5 ug celotne RNA. RT-qPCR je bil izveden z uporabo kompletov SYBR Premix Ex Taq II in ROX plus (Takara) na sistemu PCR v realnem času ABI 7300 (Applied Biosystems, Foster City, ZDA) s tremi tehničnimi ponovitvami. Primerji so bili zasnovani s spletno programsko opremo Primer3 v skladu z navodili, ki jih je priskrbel Takara; primerji, uporabljeni v tej študiji, so navedeni v tabeli 1 Suppl. Ekspresije genov so bile normalizirane na 18S RNA, katere ekspresija je bila stabilna v vseh vzorcih.

Rezultate smo analizirali z R različico 3.1.1, pomembnost razlik smo preverili s Studentovim t-testom.

Rezultati

Vodikov peroksid je povzročil biosintezo vseh treh glavnih PeG(feniletanoidglikozidi)vCistanchesalsasuspenzijskih celic (tabela 1), vendar brez očitnega učinka na rast celic (slika S2). Vsebnost ehinakozida se je povečala že po tretmaju z 10 ug dm-3 H2O2 (P < 0.05),="" večji="" porast="" pa="" po="" 20="" ug="" dm-3.="" -3="" zdravljenje="" s="" h2o2="" (p="">< 0,01),="" največje="" povečanje="" pa="" je="" bilo="" po="" zdravljenju="" s="" 40,="" 80="" in="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2.="" podobni="" rezultati="" so="" prikazani="" za="" akteozid,="" vendar="" je="" njegova="" vsebnost="" dosegla="" vrh="" po="" obdelavi="" z="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2.="" biosinteza="" 2'-acetilakteozida="" je="" bila="" manj="" občutljiva="" na="" obdelavo="" s="" h2o2;="" pomembno="" povečanje="" njegove="" vsebnosti="" (p="">< 0,05)="" je="" bilo="" pri="" koncentracijah="" h2o2="" nad="" 40="" ug="" dm-3.="" po="" obdelavi="" z="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" je="" količina="" vseh="" treh="" glavnih="">(feniletanoidglikozidi)znatno povečan (P < 0.01)="" v="" primerjavi="" s="" kontrolo.="" zato="" je="" bila="" ta="" koncentracija="" uporabljena="" v="" nadaljnjih="">
Za ustvarjanje knjižnice, obogatene za zgodnje odzivne gene, ki jih nadzira H2O2, smo uporabili cDNA izCistanchesalsasuspenzijske celice, obdelane z 80 ug dm-3 H2O2 2 uri. Sekvenciranje z enim prehodom 129 rekombinantnih klonov v knjižnici SSH je dalo 105 čistih EST po izključitvi vektorske sekvence. Te jasne EST je CAP3 uporabil za sestavljanje in ustvarjenih je bilo 18 kontigov in 67 singlov (tabela 2). Tako je bilo v tej knjižnici izoliranih 85 genov. Povprečna dolžina čistih 105 EST je bila 527 bp, kar je primerno za funkcionalno klasifikacijo na podlagi podobnosti zaporedja.

feniletanoidglikozidivCistancheSalsa

Vseh 85 genov, pridobljenih v knjižnici, je BLASTx pridobil v primerjavi z bazo podatkov GenBank o neredundantnih proteinih za podobnost zaporedja (E-vrednost manjša ali enaka 0.001). Enaindvajset genov ni pokazalo nobenih zadetkov v bazi podatkov, morda so specifični zaCistanchesalsa. Rezultati z BLASThits so bili uvoženi v programsko opremo Blast2GO za nadaljnje analize obogatitve poti GO in KEGG. Od 64 genov z zadetki BLAST je bilo 50 označenih v skladu z opisom homolognih genov drugih vrst. Označeni geni so bili poimenovani glede na opis zadetkov BLAST. Analiza GO (slika 3 Suppl.) kaže, da je bilo med temi 50 geni 14 genov, vključenih v odzive na dražljaje, in več kot 30 genov, povezanih s presnovnimi procesi (tabeli 1 in 2). Med temi geni sta bila po pričakovanjih izolirana dva genska homologa poti biosinteze PeG: 4-kumarat koencim A ligaza (imenovana Cs4CL1: Contig03) in cinamat 4-hidroksilaza (imenovana CsC4H1: Contig14). Nadalje je bil izveden RT-qPCR za potrditev induciranih izražanj genov iz knjižnice po obdelavi s H2O2.

Za potrditev, da so se bistveni geni, identificirani iz knjižnice SSH, odzivali na zdravljenje s H2O2, so bili izrazi dveh PeG(feniletanoidglikozidi)geni, povezani s potjo biosinteze (Cs4CL1, CsC4H1), dva gena, inducirana z ROS (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), in en gen, podoben faktorju transkripcije družine WRKY (CsWRKY1: Contig 07), so bili po zdravljenju izmerjeni z RT-qPCR s H2O2 (slika 1). Izrazi CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 in CsWRKY1 so bili povečani več kot 15--krat, 3--krat, 45--krat oziroma 4--krat 2 uri po H2O2 zdravljenje. Ekspresija CsHSP1 se je po obdelavi s H2O2 spremenila le 1,8-krat.
Časovni potek izražanja CsWRKY1, CsC4H1 in Cs4CL1 po obdelavi s H2O2 smo nadalje analizirali z RT-qPCR (slika 2). Ekspresiji CsC4H1 in Cs4CL1 sta se močno povečali (več kot 80--krat oziroma 50--krat) po 16--urnem zdravljenju in nato znižali po 32 urah. Ekspresija CsWRKY1 je bila povečana za več kot 20--krat po 4 urah in nato zmanjšana od 8 ur zatem (slika 2).

Slika 2. Relativna ekspresija CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) in Cs4CL1 (C) v različnih časih po obdelavi z 80 ug dm-3 H2O2. Izrazi so bili normalizirani na kontrolo; (obdelano z vodo). Pomeni plus - SD treh bioloških ponovitev; * - P < 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusija

Vodikov peroksid je znan rastlinski elicitor, ki ima različne učinke na rastline. Tako kot ROS lahko inducira čistilni sistem ROS, ki ga sestavljajo superoksid dismutaza, katalaza, peroksidaze itd., in služi kot spodnji signal soli, osmoze in dehidracije.

obremenitve (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Predlagali so, da nastajanje H2O2 v rastlinah spremlja inducirana biosinteza sekundarnega metabolita vCistanchesalsacelične kulture. Kot je bilo pričakovano, naši rezultati razkrivajo, da PeGs(feniletanoidglikozidi)biosinteza vCistanche salsacelična kultura je bila inducirana po obdelavi s H2O2 (tabela 1). Vsebina treh glavnih PeG(feniletanoidglikozidi)povečala po obdelavi s H2O2, kar kaže na njegovo ključno vlogo pri biosintezi PeG. Geni, obogateni v knjižnici SSH, so dodatno nakazali njen učinek na PeG(feniletanoidglikozidi)indukcija biosinteze vCistanche salsa.

Mnogi znani H2O2-odzivni geni, kot so askorbat peroksidaza (CISTH069, Karyotou in Donaldson 2005), h-kinon oksidoreduktaza (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), in geni odziva na odpornost na bolezni (Contig10, Nanda, et al. 2010), so bili obogateni v knjižnici SSH (tabela 3, tabela 2 Suppl.). Nekateri od teh tipičnih genov, odzivnih na ROS, z inducirano ekspresijo po zdravljenju s H2O2 so bili dodatno potrjeni z RT-qPCR (sliki 1 in 2), kar kaže, da je bila tukaj zgrajena kvalificirana knjižnica SSH. Dva gena poti biosinteze PeG, CsC4H1 in Cs4CL1, sta bila prav tako najdena v tej knjižnici in ti dve genski ekspresiji sta bili inducirani z obdelavo s H2O2 na časovno odvisen način (slika 2). Predlaga, da je zdravljenje s H2O2 povzročilo PeG(feniletanoidglikozidi)biosintezo na genetski ravni preko regulacije genov poti PAL. Vendar PAL in drugi geni za biosintezo PeG na nižji stopnji (Wang et al. 2012) niso bili identificirani v knjižnici SSH; to je morda zato, ker knjižnica ni bila ustrezno razvrščena. Razmerje med ekspresijami, ki jih povzročata CsC4H1 in Cs4CL1, ter povečano biosintezo PeG po obdelavi s H2O2 je treba pojasniti z nadaljnjo analizo.

Poleg genov poti PAL, induciranih z obdelavo s H2O2, sta bila v knjižnici SSH najdena dva transkripcijska faktorja družine WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) (tabela 3 in tabela 2 Suppl.), izražanje, inducirano s CsWRKY1, pa je bilo potrjeno z RT-qPCR . Njegovo izražanje se je odzivalo na obdelavo s H2O2 prej kot izražanje dveh genov poti PAL, Cs4CL1 in CsC4H1 (slika 2). Iz prejšnjih študij so pri rižu opazili sočasno izražanje nekaterih transkripcijskih faktorjev WRKY in genov poti PAL (Gupta et al. 2012). Poleg tega je ekspresija gena PAL povečana v mutantu s prekomerno ekspresijo OsWRKY03 (Liu et al. 2005). Zgoraj omenjena dva transkripcijska faktorja družine WRKY sta lahko vključena tudi v PeG(feniletanoidglikozidi)biosinteza vCistanchesalsa. Zanimivo je, da so bili v knjižnici SSH najdeni EST, povezani z dehidracijo (CISTH067, CISTH064), kar lahko nakazuje, da je bilo zdravljenje s H2O2 povezano z izražanjem genov, odzivnih na dehidracijo vCistanchesalsakot so opazili pri drugih rastlinah (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). V knjižnici SSH je bil identificiran en gen, povezan s signalizacijo giberelina (GA), receptorju giberelina gid1b (CISTH092), kar kaže na povezavo signalizacije GA in zdravljenja s H2O2 vCistanchesalsa, o čemer so poročali tudi pri ječmenu (Bahin et al. 2011). Vendar je potrebnih več študij, da bi potrdili, ali so ti geni povezani s PeG(feniletanoidglikozidi)biosinteza. Razen zgoraj omenjenih genov knjižnica SSH, izdelana tukaj, predstavlja tudi gene z ali brez zadetkov BLAST. Izboljša naše razumevanje učinka H2O2 na C. salsa in najprej posreduje informacije o njegovih genih, ki sodelujejo pri biosintezi PeG.

Na koncu smo ocenili učinek H2O2 na PeG(feniletanoidglikozidi)indukcija vCistanchesalsacelične kulture. Knjižnica SSH je bila zgrajena po obdelavi s H2O2 in izražanje izbranih genov je bilo potrjeno z RT-qPCR. Ugotovljena sta bila dva gena, povezana s potjo biosinteze PeG, in drugi geni, odzivni na H2O2-. Te ugotovitve bodo razširile naše razumevanje PeG, ki jih povzroča H2O2-(feniletanoidglikozidi)biosinteza vCistanchesalsana molekularni ravni, ki zagotavlja informacije za gensko manipulacijoCistanchesalsacelične kulture za izboljšanje PeG(feniletanoidglikozidi)proizvodnja.

Iz: Identifikacija EST, odzivnih na vodikov peroksid, ki sodelujejo pri biosintezi feniletanoidnih glikozidov v celični kulturi Cistanche salsaJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Reference

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Preslušavanje med reaktivnimi kisikovimi vrstami in hormonskimi signalnimi potmi uravnava mirovanje zrn v ječmenu. - Okolje rastlinskih celic. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Reaktivne kisikove vrste, ki jih ustvari produkt, ki inducira protein toplotnega šoka (Hsp), prispevajo k proizvodnji Hsp70 in Hsp{{1} }posredovana zaščitna imunost pri Artemia franciscana proti patogenim vibriosom. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Izražanje NAD(P)H: kinon oksidoreduktaze 1 v celicah HeLa  vloga vodikovega peroksida in faza rasti. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Standardizacija qPCR in RT-qPCR. - Genet. inž. Biotehnologija. Novice 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchecelične suspenzijske kulture deserticola:feniletanoidglikozidibiosinteza in antioksidativno delovanje. - Procesna biokemija. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Izboljšanjefeniletanoidglikozidibiosinteza vCistanchecelične suspenzijske kulture deserticola s hitozanskim elicitorjem. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscizinska kislina posreduje pri nastajanju vodikovega peroksida v arašidih, ki ga povzroča vodni stres. - Biol. Rastlina. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: En sam funkcionalni gen za odpornost na eksplozijo Pi54 aktivira kompleksen obrambni mehanizem v rižu. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Molekularna karakterizacija gena za fenilalanin amonia-liazo izCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Odziv rastlin na vodni stres: vloga reaktivnih kisikovih vrst. - Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbat peroksidaza, lovilec vodikovega peroksida v glioksisomskih membranah. - Lok h. Biochem. Biophys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Študije o sestavinahcistancheje herba. 4. Izolacija in strukture 2 novih fenilpropanoidnih glikozidov, cistanozida-C in cistanozida-D. - Chem. Pharm. Bik. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Izboljšanjefeniletanoidglikozidibiosinteza v celičnih kulturahCistanchedeserticola z osmotskim stresom. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Izboljšano kopičenjefeniletanoidglikozidis hranjenjem predhodnika v suspenzijsko kulturoCistanchesalsa. - Biokemija. inž. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, rižev transkripcijski aktivator, ki deluje v obrambni signalni poti pred OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Revidirani medij za hitro rast in biološki testi s kulturami tkiv tobaka. - Fiziol. Rastlina. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanoidglikozidis protivnetnim delovanjem iz stebelCistanchedeserticola, gojena v puščavi Tarim. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktivne kisikove vrste med zgodnjimi interakcijami med rastlino in mikroorganizmom. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Izboljšana proizvodnjafeniletanoid glikozidis prekurzorjem za hranjenje celične kultureCistanchedeserticola. - Procesna biokemija. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Izboljšana proizvodnjafeniletanoidglikozidiavtorCistanchecelice deserticola, gojene v bioreaktorju z zračnim dvigom z notranjo zanko s sito. - Encim Microbiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomska in histokemična karakterizacija in vitro haustorija iz korenin Castilleja tenuiflora. - Biol. Rastlina. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Privajanje na vodikov peroksid poveča toleranco za sol z aktiviranjem obrambno povezanih beljakovin v Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 uravnava od reaktivnih kisikovih zvrsti odvisno signaliziranje med začetnim odzivom na solni stres
v rižu. - Rastlinska celica 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": pregled. - Amer. J. brada. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Vzorec odlaganja vodikovega peroksida v listnih ovojnicah riža pod solnim stresom. - Biol. Rastlina. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 uravnava odzive na stres zaradi suše in odpiranje stomatov zaradi modre svetlobe zaviranje kopičenja reaktivnih kisikovih vrst v Arabidopsisu. - rastlinska fiziologija. 162: 1030-1041, 2013.