Študija rezin Cistanche Deserticola in parno obdelanega vina iz Cistanche Deserticola

Razlika v kemičnih sestavinah in bioloških aktivnostih rezin surovin in parno obdelanega vina Cistanche

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Ying Zhang, 1,2 Yuewu Wang, 3 Song Yang, 1 Yunfeng Xiao, 3 Haibin Guan, 2 Xin Yue, 2 Xiaoqin Wang, 2 in Xiangri Li 1

Povzetek

Kot znano kitajsko zeliščno zdravilo,Cistanche deserticolase na Kitajskem že tisočletja uporablja za zdravljenje sindroma ledvične odpovedi. Oba sta surov izdelekCistanche deserticola rezine(RCD) in njegovVino, obdelano s paro(WSCD) se klinično uporabljajo za različne učinke. V tej študiji so bili vplivi postopka parjenja z vinom (SPW) izCistanche deserticolana kemijske sestave in biološke učinke. Za preučevanje razlik v kemijski sestavi sta bili uporabljeni analiza glavnih komponent (PCA) in kvantitativna analiza. Raziskovali so tudi učinke hranjenja ledvic, da bi primerjali razlike med RCD (rezine Cistanche deserticola)in WSCD (Vino, obdelano s paro). Rezultati PCA so pokazali, da je bila očitna ločitev dosežena v RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD (Vino, obdelano s paro). Rezultati kvantitativne analize so pokazali, da ima WSCD višje količine skupnih polisaharidov, skupnih PhG, izoakteozida in osmantusida B kot RCD(rezine Cistanche deserticola), medtem ko se je vsebnost 2'-acetilakteozida in akteozida po SPW zmanjšala. Primerjava RCD in WSCD glede bioloških aktivnosti je pokazala, da bi oba lahko obnovila raven spolnega hormona v modelu pomanjkanja ledvičnega janga in izboljšala antioksidativni učinek. WSCD(Vino, obdelano s paro)je bil veliko boljši pri povečanju teže notranjih organovledvicain semenski vezikel. Rezultati so pokazali, da je SPW spremenil svoje kemične komponente in okrepil svoje biološke aktivnosti.

1. Uvod

Cistanche deserticolaje običajna tradicionalna kitajska medicina in se na Kitajskem in Japonskem že vrsto let na splošno uporablja kot tonik, splošno znan kot "puščavski ginseng".Cistanche deserticolaje bilo prvič zabeleženo kot najvišja ocena v "Shennong's Herbal Classic of Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)" približno leta 100 pr. n. št. in se je uporabljalo za zdravljenje različnih bolezni, vključno z odpovedjo ledvic, impotenco, žensko neplodnostjo, morbidno levkorejo, obilno metroragijo (belci) , občutek mraza v ledjih in kolenih ter kronično zaprtje pri starejših [1]. Doslej je bilo izoliranih več glavnih sestavin, kot so polisaharidi [2, 3], feniletanoidni glikozidi (PhG) [1, 4], iridoidi [1] in lignanoidi [1, 5]. Med njimi so se PhG in polisaharidi izkazali za glavne biološko aktivne sestavine vCistanche deserticola[6–9]. Sodobni farmakološki poskusi so dokazali, da lahko Cistanche deserticola poveča proizvodnjo testosterona in zaščiti spermo, spodbudi celično proliferacijo in poveča stopnjo preživetja celic, izkazuje izrazite aktivnosti za spolno moč, izboljša spomin, preprečuje staranje, lovi proste radikale in nevroprotekcijo [10]. –13].

Da bi zmanjšali toksičnost in/ali okrepili učinke, je treba večino tradicionalnih kitajskih zelišč predelati pred receptom. Tradicionalni procesni koraki vključujejo čiščenje, vodni postopek (mletje v vodi, kuhanje na pari in praženje) in ogenj (mešanje z vinom, kisom, soljo ali medom) [14]. Med postopkom se kemične komponente lahko spremenijo: spremenijo se lahko relativne vsebnosti določenih komponent ali pa nastanejo nove komponente [15]. Postopek zaCistanche deserticolaima dolgo zgodovino inCistanche deserticolaje treba predelati z namakanjem v riževem vinu, kuhanjem na pari, kot je opisano v kitajski farmakopeji (izdaja 2015) [16]. V skladu s teorijo tradicionalne kitajske medicine (TCM) [17] je bilo dokazano, da SPW vpliva na njihov učinek na meridian ledvic. WSCD(Vino, obdelano s paro)je prvič dokumentirano v "Razpravi Lei Gongs o pripravi in ​​vrenju Materije Medice (Lei Gong Pao Zhi Lun)" v severnih in južnih dinastijah Kitajske. WSCD je bolje uporabiti za zdravljenje pomanjkljivosti ledvic in zaščito semena, kot je zapisano v "Taiping Shenghui Fang" v kitajski dinastiji Song. Vendar pa ni bilo nobenih primerjalnih študij o kemičnih sestavinah med RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)doslej.

Sodobne farmakološke raziskave so pokazale, da bi WSCD lahko toniziral ledvice, da bi zagotovil esenco s stimulacijo osi hipotalamus-hipofiza-gonade v različnih stopnjah, in se uporablja za zdravljenje pomanjkanja v ledvicah, kot je pomanjkanje ledvičnega janga [18]. Vendar pa so do zdaj razlike v bioloških aktivnostih med RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)niso raziskani. Pred kratkim so za lažjo eksperimentalno raziskavo podvojili živalski model pomanjkanja ledvičnega janga z injiciranjem velikega odmerka hidrokortizona podganam, pri čemer bodo podgane pokazale simptome, ki so zelo podobni tistim, opisanim pri pomanjkanju ledvičnega janga TKM [19, 20]. . Podgane s pomanjkanjem ledvičnega janga imajo vedno nekatere simptome, kot so izguba teže, zmanjšana poraba hrane, šibkost, povečan vnos vode in zmanjšana aktivnost. Na podlagi tega živalskega modela so bile odkrite razlike v hranilnih učinkih na ledvice med RCD in WSCD ter celo razkrilo znanstveno bistvo tradicionalnega kitajskega postopka.

Cistanche deserticola ima številne funkcije

2. Materiali in metode

2.1. Materiali in kemikalije

Standardna snov, kot so akteozid, izoakteozid, ehinakozid, cistanozid A in 2′-acetilakteozid, je bila kupljena pri Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Šanghaj, Kitajska). Cistanosid F, cistanozid C, osmantusid B in tubulozid B so bili kupljeni pri Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, Kitajska). Čistost vseh standardov ni bila manjša od 98 odstotkov. Metanol in acetonitril kakovosti HPLC sta bila kupljena pri Aladdin Chemistry Inc. (Šanghaj, Kitajska). Deionizirano vodo smo pridobili z uporabo MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, ZDA) za pripravo vzorcev in mobilnih raztopin. Vsa druga organska topila, uporabljena v tej študiji, so bila analitske stopnje in kupljena pri Shanghai Chemical Co. Ltd (Šanghaj, Kitajska).

2.2. Zbirka vzorcev

Vse surovoCistanche deserticola(7 serij vzorcev) je zbrala Medicinska univerza Notranje Mongolije iz provinc Notranja Mongolija in Ningxia. Vsi so bili identificirani kotcistanche deserticolaYC Ma Xiao-qin Wang, profesor oddelka za farmakognozijo na Medicinski univerzi v Notranji Mongoliji. Vzorec vavčerja je bil deponiran na Fakulteti za farmacijo Medicinske univerze v Notranji Mongoliji. Po zbiranju socvetjaCistanche deserticolaodstranili, stebla narezali in posušili pri sobni temperaturi z zrakom, nato pa rezine naključno razdelili v dve skupini v vsaki seriji: ena je RCD(rezine Cistanche deserticola)drugi pa se uporablja za pripravo WSCD(Vino, obdelano s paro).

WSCD(Vino, obdelano s paro)so bili pripravljeni v laboratoriju po kitajski farmakopeji (izdaja 2015) [16], kar pomeni, da je narezan RCD(rezine Cistanche deserticola)namakali v riževem vinu z zaprto posodo 6 ur do mehkobe, parili v vodni kopeli dodatnih 12 ur, dokler površina ne postane črna, in posušili pri sobni temperaturi z zrakom.

2.3. Analiza glavnih komponent (PCA)

Analiza glavnih komponent (PCA) je sofisticirana tehnika, ki se pogosto uporablja za zmanjševanje razsežnosti večvariantnih problemov. Zmanjša dimenzionalnost izvirnega niza podatkov tako, da pojasni korelacijo med velikim številom spremenljivk v smislu manjšega števila osnovnih dejavnikov brez znatne izgube informacij. V tej študiji so razlike med RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)so bile izvedene z nenadzorovanim PCA z uporabo programske opreme SIMCA 13.0 na podlagi relativnih površin vrhov v HPLC kromatografiji. S pomočjo PCA smo ugotovili glavne vplive kemikalij na razvrstitev med različnimi vzorci.

2.4. Priprava vzorca

2.4.1. Priprava izvlečkov za živali

RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)so bili izbrani iz vzorcev, zbranih in pripravljenih, kot je opisano v razdelku 2.2.

Na zraku sušen in narezan RCD(rezine Cistanche deserticola)je bil zdrobljen v prah s pulverizerjem (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), natančno stehtan 1.0 kg in namočen v 50-odstotnem etanolu 30 minut, uporabljeno razmerje rastlina/etanol pa je bilo 1/ 10 (w/w). Nato smo ga ekstrahirali pod refluksom dvakrat po 1 uro. Oba ekstrakta smo združili in filtrirali ter etanol pridobili pod znižanim tlakom pri 60 stopinjah. Skupni surovi ekstrakt PhGs je bil posušen v vakuumu pri 60∘C in prečiščen z makroporozno smolo. Končno je bil pridobljen in natančno stehtan PhGs ekstrakt RCD.

Izvleček PhG iz WSCD(Vino, obdelano s paro)je bilo pridobljeno po enakem postopku zgoraj.

Usedline iz ekstrakcije PhG-jev so bile posušene na zraku in dvakrat po 1,5 ure raztopljene z 20-kratno količino vode. Dva ekstrakta smo združili in centrifugirali pri 4000 obratih na minuto 10 minut, supernatant pa koncentrirali in oborili s 95-odstotnim etanolom. Po centrifugiranju smo oborino posušili v vakuumu pri 60 stopinjah. Končno, polisaharidni ekstrakt RCD(rezine Cistanche deserticola)je bila pridobljena in natančno stehtana.

Polisaharidni ekstrakt WSCD(Vino, obdelano s paro)je bilo pridobljeno po enakem postopku zgoraj.

PhG in polisaharidni izvlečki RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)so bile mešane suspenzije v vodi, ko so bile podgane zdravljene oralno.

2.4.2. Priprava vzorcev za določanje PhG

Ekstrakti PhGs v razdelku 2.4.1 so bili natančno stehtani kot 0.15 g in ekstrahirani z ultrazvočno obdelavo s 50mL 50-odstotne vodne raztopine metanola 40 minut. Po ohladitvi smo izgubo teže nadomestili s 50-odstotnim metanolom. Vse vzorce in topila smo pred analizo filtrirali skozi 0,45 μm membrano. Vsebnost štirih PhG v RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)smo določili s HPLC, skupne PhG pa smo določili z UV spektrofotometrijo.

2.4.3. Priprava vzorca za določanje polisaharidov

Ekstrakti polisaharidov v razdelku 2.4.1 so bili natančno stehtani kot 0.10 g in ekstrahirani z ultrazvočno obdelavo s 50 ml vroče vode 40 minut; po ohladitvi je bila izguba teže dopolnjena z vodo. Vse vzorce in topila smo pred analizo filtrirali skozi 0,45 μm membrano.

2.5. Kromatografski pogoji HPLC in določanje štirih PhG

Kromatografsko ločevanje je bilo izvedeno v sistemu HPLC UltiMate 300{{40}} HPLC (Thermo Fisher Scientific, ZDA), opremljenem s črpalko z dvojnim gradientom, predelkom za kolone in detektor DAD. Podatki so bili zbrani in obdelani s ChromeLeon Chromatography Data System. Vzorci so bili ločeni na Agilent Zorbax SB-C18 (250mm × 4,6 mm, 5 μm) z zaščitno kolono C18 (4,6 mm × 12,5 mm, 5 μm). Mobilna faza je bila sestavljena iz acetonitrila (A) in 0.1-odstotne raztopine fosforne kisline (B) pri pretoku 1 ml/min. Gradientna elucija je naslednja: začetnih 0–13 minut, linearna sprememba od AB (5:95, v/v) do AB (15:85, v/v); 13–25 min, linearna sprememba v AB (20:80, v/v); 25–43 min, linearna sprememba v AB (25:75, v/v). Valovno dolžino detektorja smo spremljali pri 330 nm. Temperatura kolone je bila nastavljena na 30 stopinj, volumen vbrizganega vzorca pa je bil 10 μl [21]. Osnovna raztopina, ki vsebuje štiri referenčne standarde, je bila pripravljena z raztapljanjem referenčnih standardov v 50 odstotnem metanolu do končne koncentracije 0,20 mg/mL za 2-acetilakteozid, 0,20 mg/mL za akteozid, 0,05 mg/mL za osmantusid B, in 0,10 mg/mL za izoakteozid. Raztopino smo nato razredčili na pet različnih koncentracij s tremi ponovitvami, da smo vzpostavili umeritvene krivulje. Vsebnost vzorca smo izrazili v g/kg surove teže.

Študija rezin Cistanche deserticola in vina, predelanega s paro iz Cistanche deserticola

2.6. Določanje skupnih PhG

Celotne PhG so bile določene z metodo UV spektrofotometrije pri valovni dolžini 330nm v spektrofotometru UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Osnovna raztopina je bila pripravljena z raztapljanjem standardov ehinakozida v 50-odstotnem metanolu do končne koncentracije 0,10 mg/mL in nato razredčena na pet različnih koncentracij s tremi ponovitvami, da se določijo umeritvene krivulje.

2.7. Določanje polisaharidov

Določanje polisaharidov je potekalo z metodo fenol-žveplove kisline. V 20 mL epruveto s steklenim zamaškom smo dali 1 mL raztopine vzorca, dodali 1 mL 6 % raztopine fenola in 5 mL koncentrirane žveplove kisline ter stresali 5 min. Zmes smo za 10 minut prenesli v vrelo vodno kopel in ohladili na sobno temperaturo za ultravijolično detekcijo. Ultravijolično absorpcijo smo spremljali pri 480 nm v spektrofotometru UV1000. Referenčni standard brezvodne D-glukoze smo natančno stehtali in raztopili v destilirani vodi do končne koncentracije 0,10 mg/mL. Nato smo raztopino razredčili na pet različnih koncentracij s tremi ponovitvami, da smo vzpostavili umeritvene krivulje.

2.8. Poskusi na živalih

2.8.1. Živali in stanovanja

Spolno zreli podganji samci SD (180-200 g) so bili kupljeni pri Xinglong (Peking) Experimental Animal Farm (starost: 6 tednov), licenca za laboratorijske živali pa je bila SCXK (Jing):2016-0003. Vse postopke na živalih je odobril raziskovalni odbor za živali Medicinske univerze Notranje Mongolije in so bili izvedeni v skladu s smernicami Nacionalnega inštituta za zdravje v zvezi z načeli oskrbe živali (2004). Vse živali so bile v pregradnem sistemu z regulirano temperaturo 21–23 stopinj in relativno vlažnostjo 40–65 odstotkov ter v 12-urnem ciklu temno/svetlo. Podgane so dobile ad libitum hrano in vodo in so se teden dni aklimatizirale na zgoraj navedeno okolje.

2.8.2. Odmerjanje in vzorčenje

Podgane so bile premeščene v posamezne presnovne kletke in naključno razdeljene v 6 skupin (= 10 v vsaki skupini). Dobili so intramuskularno injekcijo 15 mg/kg hidrokortizon natrijevega sukcinata (kupljenega pri Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Kitajska) 2 tedna, razen skupini 1, ki so ji vbrizgali enako količino fiziološke raztopine. 14. dan so zbrali telesno težo, porabo hrane, vnos vode, količino urina in spontano aktivnost v 5 minutah, da bi se prepričali, ali je bil model pomanjkanja ledvičnega janga uspešno narejen. Od 15. dne je bilo 6 skupin zdravljenih na naslednji način: skupina 1 in skupina 2 (modelna skupina, M) je bila zdravljena z enako količino destilirane vode, skupina 3 (PhGs izvleček RCD(rezine Cistanche deserticola)skupina, PR) so bili zdravljeni z 0.42 g/kg PhGs ekstrakta RCD, kar je bilo enako približno 1,8 g/kg surovegaCistanche deserticolain druge skupine so bile enake, skupina 4 (PhGs ekstrakt WSCD(Vino, obdelano s paro)skupina, PW) so bili zdravljeni z odmerkom 0.49 g/kg PhG izvlečka WSCD(Vino, obdelano s paro), skupina 5 (izvleček polisaharidov RCD(rezine Cistanche deserticola)skupina, SR) so bili obdelani z 0.18 g/kg polisaharidnega ekstrakta RCD, skupina 6 pa je bila (polisaharidni ekstrakt WSCD(Vino, obdelano s paro)skupina, SW) so bili zdravljeni z odmerkom 0.22 g/kg polisaharidnega ekstrakta WSCD. Vse podgane so bile zdravljene s perfuzijo želodca na dan. Po enomesečnem zdravljenju so podganam 12 ur pred odvzemom krvi odrekli hrano. Naslednji dan so bile vse podgane anestezirane in žrtvovane. Med testiranjem so podgane stehtali enkrat tedensko za prilagajanje odmerka in jih ponovno stehtali pred žrtvovanjem. Vzorce krvi smo zbrali v Eppendorfovi epruveti z 10-odstotno raztopino EDTA-2Na. Serum smo ločili s centrifugiranjem pri 2000 obratih na minuto 15 minut in shranili pri -80 stopinjah za nadaljnjo uporabo. Poleg tega so bile odstranjene in hitro stehtane ledvice, testisi, epididimis, prostata in semenski mešiček. Po tehtanju smo testise zamrznili v tekočem dušiku za določitev SOD in MDA.

2.9. Analiza hormonskih in antioksidativnih učinkov

Raven testosterona (T) in estradiola (E2) je bila določena v inšpekcijskem centru Qingdao Kechuang z radioimunostno in kolorimetrično metodo. Zamrznjene testise smo stehtali in zmešali z 20-kratno hladno fiziološko raztopino (W/W). Homogenat testisov, pridobljen s tkivnim homogenatom v ledeni kopeli, smo centrifugirali, da smo dobili supernatant. Vsebnost SOD in MDA testisa smo določili s kompleti SOD in MDA po navodilih.

2.10. Statistična analiza

Pomembnost razlik med skupinami smo primerjali z enosmernim testom ANOVA, ki mu je sledil Scheffejev test z mejo pomembnosti 0.05 z uporabo programske opreme SPSS 25.0. Vsi podatki so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon (SD) (n=3).

3. Rezultati

3.1. Analiza sprememb PhGs po SPW z uporabo PCA

Za primerjavo sprememb PhG po SPW je bilo izbranih 9 kromatografskih vrhov kot značilnih vrhov in identificiranih. Njihove strukture so bile prikazane na sliki 1, katerih relativne površine vrhov so bile izračunane za kvantitativno izražanje. Kromatogram HPLC, kot je prikazan na sliki 2, je pokazal, da se je relativna vsebnost glavnih PhG spremenila med SPW. PCA analiza relativnih površin vrhov 9 komponent je bila pridobljena za razlikovanje različnih vzorcev. RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)bili daleč drug od drugega na grafu rezultatov (slika 3(a)), kar je pokazalo, da so bili vzorci razvrščeni v dve skupini. Zato se domneva, da je bila vsebnost kemičnih sestavin drugačna. Za nadaljnje iskanje potencialnih kemičnih označevalcev za diskriminacijo je bila izvedena razširjena statistična analiza za ustvarjanje obremenitve Bi plot (slika 3(b)). Vrhovi 2, 3, 4, 6 in 7 se bodo po SPW zmanjšali, medtem ko se bodo vrhovi 5, 8 in 9 povečali, in vsi so bili najpomembnejši sestavni deli za razlikovanje RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro). Relativne vsebnosti vrha 1 se po SPW ne spreminjajo veliko.

Slika 1 Kemične strukture PhG vCistanche deserticolaYC Ma.

Slika 2 Kromatogram HPLC standardne snovi (a), RCD(rezine Cistanche deserticola)(b) in WSCD(Vino, obdelano s paro)(c). Vrhovi: (1) cistanozid F, (2) ehinakozid, (3) cistanozid A, (4) akteozid, (5) izoakteozid, (6) cistanozid C, (7) 2'-acetilakteozid, (8) osmantusid B in (9) tubulozid B.

Slika 3 Diagram rezultatov PCA (a) in diagram Bi obremenitve (b) RCD(rezine Cistanche deserticola)(zelen krog) in WSCD (rdeč krog). RCD in WSCD sta bila razvrščena v dve skupini. Vrhovi 2, 3, 4, 6 in 7 so najpomembnejše komponente za razlikovanje RCD in WSCD, ki se bodo zmanjšale med SPW; vrhovi 5, 8 in 9 so tudi najpomembnejše komponente za razlike med RCD in WSCD(Vino, obdelano s paro), ki se bo povečala med SPW.

3.2. Vsebnost skupnih polisaharidov in PhG se je spremenila po SPW

Kot je prikazano na sliki 3(b), se je 8 komponent (5, 8 in 9 povečanih ter 2, 3, 4, 6 in 7 zmanjšanih) znatno spremenilo in je imelo velik vpliv na združevanje vzorca. Med njimi sta se najbolj povečala izoakteozid in osmantusid B, medtem ko sta se 2'-acetilakteozid in akteozid najbolj zmanjšala. Vsebnost izoakteozida, osmantusida B, 2'-acetilakteozida in akteozida smo torej določili s HPLC. Kot je prikazano na sliki 1, je bil vrh 4 akteozid, vrh 5 je bil izoakteozid, vrh 7 je bil 2'-acetilakteozid in vrh 8 je bil osmantusid B. Celotni PhG v RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)so bili določeni z UV metodo, skupni polisaharidi pa so bili izvedeni z metodo fenol-žveplove kisline, rezultati so bili prikazani v tabeli 1, izoakteozid, osmantusid B, skupni polisaharidi in PhG v WSCD so se znatno povečali v primerjavi z RCD. 2'-acetilakteozid in akteozid sta se znatno zmanjšala.

Tabela 1 Vsebnost polisaharidov in PhG v RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD(Vino, obdelano s paro)(mg/g) (n=3).

Opomba. Pomembne razlike z RCD(rezine Cistanche deserticola)so bili označeni kot *p < 0.05.

3.3. Izdelan je bil model pomanjkanja ledvic-Yang, ki ga povzroča hidrokortizon

V primerjavi z normalno skupino so se po 2-tedenski intramuskularni injekciji 15 mg/kg natrijevega hidrokortizon sukcinata telesna teža, poraba hrane in spontana aktivnost znatno zmanjšali (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

Tabela 2 Indikatorji so se spremenili po intramuskularni injekciji natrijevega hidrokortizon sukcinata (n=10).

Opomba. Pomembne razlike s skupino N so bile označene kot^# p<>

Slika 4 Nivoji T in E2: (a) nivo T in (b) nivo E2. Pomembne razlike s skupino M so bile označene kot^∗p < 0.05.="" pomembne="" razlike="" s="" skupino="" n="" so="" bile="" označene="">^#p < 0.05.

3.4. Vpliv izvlečkov na povprečno težo in indeks notranjih organov

Vse podgane in njihove notranje organe smo stehtali in nato izračunali povprečni notranji indeks.

V primerjavi s skupino N je skupina M znatno zmanjšala težo notranjih organov ledvice, semenskega vezikla, epididimisa in moda, kar je tudi pokazalo, da je bil model pomanjkanja ledvičnega janga, ki ga povzroča hidrokortizon, uspešno izdelan. V primerjavi s skupino M se je v skupini PW in SR povečala vsa opazovana teža notranjih organov, skupina PR je imela večjo težo testisa, epididimisa, semenskega mešička in prostate, skupina SW pa je imela večjo težo ledvice, testisa, epididimisa, in semenski vezikel. V primerjavi s skupinami PR je bila skupina PW boljša pri ledvicah, semenskem mešičku in prostati. Med skupinama SR in SW ni bilo bistvene razlike v teži mod, epididimisa, semenskega mešička in prostate. Rezultati so bili prikazani v tabeli 3.

Tabela 3 Teža notranjih organov (g) (n=10).

Opomba. Pomembne razlike s skupino M so bile označene kot^∗p < 0.05.="" pomembne="" razlike="" s="" skupino="" n="" so="" bile="" označene="">^#p < 0.05.

V primerjavi s skupino N so se v skupini M zmanjšali visceralni indeksi ledvic, mod, epididimisa in semenskega mešička. V primerjavi s skupino M sta imeli skupini PW in SR povečan indeks ledvic, testisov, prostate in semenskega mešička, skupine PR so imele povečan indeks testisa, prostate in semenskega mešička, skupina SW pa povečan indeks ledvic, testisov in semenskih veziklov. V primerjavi s skupinami PR je bila skupina PW boljša pri ledvicah, semenskem mešičku in prostati. Skupini SW in SR sta imeli podoben indeks ledvic, testisov, semenskih veziklov in epididimisa. Rezultati so bili prikazani v tabeli 4.

Tabela 4 Povprečni indeks notranjih organov (g/100g) (n=10).

Opomba. Pomembne razlike s skupino M so bile označene kot^∗p < 0.05.="" pomembne="" razlike="" s="" skupino="" n="" so="" bile="" označene="">^#p < 0.05.

3.5. Vpliv izvlečka na raven hormona (T in )

Kot je prikazano na sliki 4, sta se v primerjavi s skupino M ravni T in E2 v vseh zdravljenih skupinah (skupina PW, PR, SW in SR) znatno povečala (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. Vpliv izvlečkov na antioksidativni učinek

SOD je pomemben antioksidativni encim. MDA je produkt lipidne peroksidacije, ki je pokazatelj stopnje oksidativne škode. Vsebnosti SOD in MDA odražajo obseg oksidativne in antioksidativne sposobnosti. Kot je prikazano na sliki 5, je bil v primerjavi s skupino M antioksidativni učinek v vseh zdravljenih skupinah (PW, PR, SW in SR) povečan. Skupina SW je imela največantioksidantučinek.

Slika 5 Vsebnosti MDA in SOD: (a) vsebnost MDA in (b) vsebnost SOD. Pomembne razlike s skupino M so bile označene kot^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. Razprava

Pred klinično uporabo je treba surove materiale izpostaviti tradicionalnim kitajskim procesnim tehnikam. Kuhanje s paro je eden od tradicionalnih pristopov predelave nekaterih kitajskih zdravilnih zelišč, ki daje črno barvo, ki nastane zaradi Maillardove reakcije [22], s čimer se povečajo količine nekaterih bioaktivnih sestavin [23] in farmakološke aktivnosti. WSCD(Vino, obdelano s paro)saj je eden od proizvodov postopka boljši v smislu hranjenja ledvic v primerjavi z RCD(rezine Cistanche deserticola)kot je dokumentirano v kitajski farmakopeji iz leta 2015. V tej študiji so rezultati PCA pokazali, da je SPW spremenil kemijski profil RCD(rezine Cistanche deserticola). Še več, 8 komponent v PhG se je bistveno spremenilo. Skupni PhG, skupni polisaharidi, izoakteozid in osmantusid B so se najbolj povečali, medtem ko sta se 2'-acetilakteozid in akteozid po SPW zmanjšala. Rezultati so pokazali, da lahko SPW spremeni kemične sestavine RCD(rezine Cistanche deserticola). Vsebnost PhG z 1,3,4-trisubstituiranimi glukopiranozilnimi deli (kot so akteozid, 2'-acetilakteozid in cistanozid C) se je zmanjšala pri WSCD(Vino, obdelano s paro)vendar so se koncentracije njihovih izomerov z 1,3,5-trisubstituiranim glukopiranozilnim delom (kot sta izoakteozid in tubulozid B) povečale, kar kaže, da je med SPW morda prišlo do transformacije kemičnih sestavin in da bo reakcija hidrolize ena od razlogov. Predlagane poti transformacije so prikazane na sliki 6. O povečanju polisaharidov po SPW so poročali tudi pri ginsengu [24].

Slika 6 Predlagane poti transformacije PhG v Cistanche deserticola YC Ma med SPW.

Cistanche deserticolaje bilo dokumentirano, da poživi ledvice in obrne zmanjšanje ravni testosterona ter ima antioksidativni učinek in protivnetno delovanje [25], PhG in polisaharidi pa sta bili dve glavni biološko aktivni sestavini v Cistanche deserticola. Kot PhG sta imela izoakteozid in osmantusid B antioksidacijske in protivnetne učinke [26, 27]. Torej, primerjava farmakoloških učinkov na ravni testosterona in antioksidativnega učinka RCD in WSCD(Vino, obdelano s paro)je bil preučen. V modelu s hidrokortizonom povzročenega pomanjkanja ledvičnega janga je bil endokrini moten in raven spolnega hormona v krvi se je močno znižala. V tej študiji so rezultati analize spolnih hormonov pokazali, da sta oba RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD bi lahko bistveno povečala raven T in E2, tako PhG kot polisaharidi pa so pokazali izboljšanje spolnih hormonov. WSCD je bil boljši od RCD(rezine Cistanche deserticola), zlasti v skupinah ekstraktov PhG. Rezultati indeksov notranjih organov so pokazali, da lahko tako PhG kot polisaharidi izboljšajo uteži notranjih organov in njihove indekse teže. V skupinah ekstraktov PhG, WSCD(Vino, obdelano s paro)je boljši od RCD pri povečanju uteži in indeksov ledvic in semenskih veziklov. poleg tegaCistanche deserticolaima pomemben antioksidativni učinek, zlasti skupine ekstraktov polisaharidov z WSCD. Kot je razloženo zgoraj, oba RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD bi lahko izboljšala sindrom pomanjkanja ledvičnega janga; vendar je WSCD boljši od RCD pri povečanju ravni T, E2, uteži in indeksov epididimisa in testisa. Rezultati študije farmakoloških učinkov so pokazali, da je SPW spremenil kemijske sestavine PhG in povečal vsebnost polisaharidov, kar je posledično povečalo raven spolnih hormonov in povečaloantioksidantučinek.

5. Zaključek

Študija naj bi odkrila spremembo PhG, skupnih polisaharidov in farmakološkega učinka pri RCD(rezine Cistanche deserticola)in WSCD pri podganah s pomanjkanjem ledvic, zlasti na ravni hormonov in antioksidativnem učinku. Ta študija je pokazala, da lahko postopek tradicionalnih kitajskih zelišč spremeni njihove kemične sestavine in vpliva na njihovo bioaktivnost. Podprto je tudi, da so bili na kliniki različno predpisani surovi in ​​predelani proizvodi.

Razpoložljivost podatkov

Podatki, uporabljeni v podporo ugotovitvam te študije, so na zahtevo na voljo pri ustreznem avtorju.

Nasprotja interesov

Avtorji izjavljajo, da niso v nasprotju interesov.

Prispevki avtorjev

Ying Zhang in Song Yang sta načrtovala poskuse. Ying Zhang, Yuewu Wang in Yunfeng Xiao so vodili zbiranje in pripravo vzorcev. Ying Zhang je analiziral podatke in pripravil osnutek dokumenta. Xiangri Li in Xiaoqin Wang sta bila odgovorna za nadzor študije. Vsi avtorji so sodelovali pri pisanju in podajanju povratnih informacij o prispevku. Vsi avtorji so prebrali in potrdili končno nalogo.

Zahvala

To delo je bilo podprto z donacijami iz Postopkov predelave pripravljenih rezin kitajskih surovih drog (št. YP-PZ-2014). Posebna zahvala Wenjii Qu in Tianying Jia za njuno veliko pomoč pri zbiranjuCistanche deserticola.

Reference

1. Y. Jiang in P.-F. Tu, "Analiza kemičnih sestavin v vrstah Cistanche," Journal of Chromatography A, vol. 1216, št. 11, str. 1970–1979, 2009.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

2. W. Zhao, H. Yan, Z.-Y. Liang, Y.-J. Zhang in X.-Q. Jiao, "Strukturna analiza vodotopnega polisaharida SPA, izoliranega iz steblaCistanche deserticolaMa," Chemical Journal of Chinese Universities, letnik 26, št. 3, str. 461–463, 2005.

Ogled na: Google Scholar

3. Q. Dong, J. Yao, J.-N. Fang in K. Ding, "Strukturna karakterizacija in imunološka aktivnost dveh s hladno vodo ekstrahiranih polisaharidov izCistanche deserticolaYC Ma, "Raziskave ogljikovih hidratov, vol. 342, št. 10, str. 1343–1349, 2007.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

4. X.-M. Wu in P.-F. Tu, "Izolacija in karakterizacija -(1→6)-glukanov izCistanche deserticola," Journal of Asian Natural Products Research, letnik 7, št. 6, str. 823–828, 2005.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

5. B. Košíková, A. Ebringerová in R. Naran, "Karakterizacija frakcij lignin-ogljikovih hidratov, izoliranih iz lesnega parazitaCistanche deserticolaYC Ma.," Holzforschung, letnik 53, št. 1, str. 33–38, 1999.

Ogled na: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu in C. Li, "Tubulozid B iz Cistanche salsa rešuje nevronske celice PC12 pred 1-metil-4-fenilpiridinijevimi ioni apoptoza in oksidativni stres," Planta Medica, vol. 68, št. 11, str. 966–970, 2002.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

7. M. Deng, J.-Y. Zhao, X.-D. Ju, P.-F. Tu, Y. Jiang in Z.-B. Li, "Zaščitni učinek tubulozida B na apoptozo, ki jo povzroča TNF alfa v nevronskih celicah," Acta Pharmacologica Sinica, vol. 25, št. 10, str. 1276–1284, 2004.

Ogled na: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu in P. Tu, "Nevroprotektivni učinki feniletanoidnih glikozidov iz Cistanches salsa proti 1-metil-4-fenil-1, 2,3 ,6-dopaminergična toksičnost, povzročena s tetrahidropiridinom (MPTP) pri miših C57," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27, št. 6, str. 797–801, 2004.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng in ZH Wang, "Ehinakozid preprečuje zmanjšanje striatalnih zunajceličnih ravni monoaminskih nevrotransmiterjev pri 6-podganah s hidroksidopaminskimi poškodbami," Journal of Ethnopharmacology, vol. . 114, št. 3, str. 285–289, 2007.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia in R. Zheng, "Farmakološke aktivnosti in mehanizmi naravnih fenilpropanoidnih glikozidov", Die Pharmazie, vol. 58, št. 11, str. 767–775, 2003.

Ogled na: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang in YH Wong, "Naravno prisotni feniletanoidni glikozidi: Potencialni viri za nove terapevtike," Current Medicinal Chemistry, vol. 15, št. 25, str. 2592–2613, 2008.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

12. X.-W. Wang, X.-F. Wang in L.-Y. Wu, "Izboljšanje spomina miši na feniletanoidne glikozideCistanche deserticola," Kitajski farmakološki bilten, št. 19, str. 41-42, 2002.

Ogled na: Google Scholar

13. J.-X. Xie in C.-F. Wu, "Učinek etanolnega ekstraktaCistanche deserticolao vsebnosti monoaminskih nevrotransmiterjev v možganih podgan," Kitajska tradicionalna in zeliščna zdravila, št. 24, str. 417–419, 1993.

Ogled na: Google Scholar

14. H. Wu in C.-J. Hu, disciplina procesa kitajske medicine, Ljudska medicinska založba, Peking, Kitajska, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan et al., "Edinstveno vprašanje pri standardizaciji kitajske materie medice: predelava," Planta Medica, vol. 76, št. 17, str. 1975–1986, 2010.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

16. Komisija za kitajsko farmakopejo, Farmakopeja Ljudske republike Kitajske 2015, vol. IV, Farmakopeja Ljudske republike Kitajske, Peking, Kitajska, 2015.

17. J.-M. Chen, Enlightening Primer of Materia Medical, Traditional Chinese Medicine Ancient Books Press, Peking, Kitajska, 2009.

18. B.-R. Li in Y.-C. Ona, "Učinki tonizirajočih zdravil za ledvice na os hipotalamus-hipofiza-gonada (HPG)," Journal of Traditional Chinese Medicine, št. 7, str. 63–65, 1984.

Ogled na: Google Scholar

19. M. Chen, L. Zhao in W. Jia, "Metabonomska študija o biokemijskih profilih živalskega modela, povzročenega s hidrokortizonom," Journal of Proteome Research, vol. 4, št. 6, str. 2391–2396, 2005.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

20. Q. Chen in N.-Y. Yi, "Živalski modeli in zdravila za pomanjkanje Yin in Yang", v Eksperimentalna metodologija farmakoloških raziskav v tradicionalni kitajski medicini, založba People's Health Publishing House, Peking, Kitajska, 1993.

Ogled na: Google Scholar

21. Z.-G. Ma, Z.-L. Yang, P. Li in C.-H. Li, "Hkratno določanje osmih feniletanoidnih glikozidov v različnih vrstah rodu Cistanche s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti," Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, vol. 31, št. 18, str. 2838–2850, 2008.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song in A. Lu, "Maillardova reakcija, ki je vključena v proces parjenja korenine Polygonum multiflorum," Planta Medica, vol. 75, št. 1, str. 84–88, 2009.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

23. W.-T. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden, et al., "Tradicionalna obdelava močno vpliva na sestavo metabolita s hidrolizo v koreninah Rehmannia glutinosa," Chemical & Pharmaceutical Bulletin, vol. 59, št. 5, str. 546–552, 2011.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

24. Y. Jin, Y.-J. Kim, J.-N. Jeon et al., "Vpliv belega, rdečega in črnega ginsenga na fizikalno-kemijske lastnosti in ginsenozide," Rastlinska hrana za prehrano ljudi, vol. 70, št. 2, str. 141–145, 2015.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

25. T. Wang, X.-Y. Zhang in W.-Y. Xie, "Cistanche deserticolaYC Ma, 'puščavski ginseng': pregled," American Journal of Chinese Medicine, vol. 40, št. 6, str. 1123–1141, 2012.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

26. S.-Y. Nam, H.-Y. Kim, M.-S. Yoou et al., "Protivnetni učinki izoakteozida iz Abeliophyllum distichum," Imunofarmakologija in imunotoksikologija, vol. 37, št. 3, str. 258–264, 2015.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang, et al., "Antioksidativna aktivnost izoakteozida iz Clerodendron trichotomum," Journal of Toxicology and Environmental Health, del A. Current Issues, vol. 68, št. 5, str. 389–400, 2005.

Ogled na: Spletno mesto založnika|Google Učenjak

Iz: Z dokazi podprta komplementarna in alternativna medicina / 2019 / Članek

Letnik 2019|ID članka 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947