Zaviralec JAK blokira signalizacijo JAK-STAT-APOL1, ki jo povzroči COVID{0}}citokini, v glomerularnih celicah in podocitopatijo v organoidih človeških ledvic

Povzetek

Vzroki okužbe s COVID-19kolaps glomerularnih kapilarinizguba podocitov, ki se konča v ahuda ledvična bolezenklicalCOVID{0}}povezana nefropatija(COVAN). Osnovni mehanizem bolezni COVID-19 ni znan. Domnevali smo, da citokini, ki jih povzroča COVID-19, sprožijo izražanje patogenega APOL1 prek signalizacije JAK-STAT, kar povzroči izgubo podocitov in fenotip COVAN. Tu smo na podlagi devetih primerov COVAN, dokazanih z biopsijo, prvič dokazali, da je APProtein OL1 je obilno izražen v podocitih inglomerularni endotelcelic (GEC) ledvic COVAN, vendar ne v kontrolnih skupinah. Poleg tega je večina (77,8 %) bolnikov s COVAN nosila dvaAPOL1aleli tveganja. Pokazali smo, da rekombinantni citokini, inducirani s SARS-CoV-2, delujejo sinergistično na pogonAPOL1izražanje po poti JAK-STAT v primarnih človeških podocitih, GEC inmikroorganoidi ledvicizhaja iz nosilca dvehAPOL1tveganih alelov, vendar jih je blokiral zaviralec JAK1/2-, baricitinib. Prvič smo dokazali, da je s citokini inducirano signaliziranje JAK-STAT-APOL1 zmanjšalo sposobnost preživetja ledvičnih organoidnih podocitov, vendar ga je rešil baricitinib. Naši rezultati skupaj podpirajo sklep, daCitokini,-19-ki jih povzroči COVIDzadostujejo za spodbujanje s COVAN-om povezane podocitopatije prek signalizacije JAK-STAT-APOL1 in da bi zaviralec JAK lahko blokiral ta patogeni proces. Te ugotovitve kažejo, da imajo lahko zaviralci JAK terapevtske koristi pri obvladovanju s citokini povzročene podocitopatije, ki jo povzroča APOL1-.

Podporna storitev Wecistanche-največjega izvoznika cistanche na Kitajskem:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Trgovina za več podrobnosti o specifikacijah:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

PRIDOBITE NARAVNI ORGANSKI IZVLEČEK CISTANCHE S 25 % EHINAKOZIDA IN 9 % AKTEOZIDA ZA OKUŽBO LEDVIC

Uvod

Odpoved ledvic je uničujoč zapletOkužba s COVID-19. Do 50 % bolnišničnih in 70 % sprejemov v enotah intenzivne nege zaradi COVID-19 je zapletenih zaradi akutne ledvične poškodbe (AKI), kar posledično poveča umrljivost za 30-50 % (1, 2). Serija primerov biopsije ledvic je pokazala, da je kolabirajoča glomerulopatija najpogostejša histopatološka diagnoza pri AKI, povezani s COVID-19- (3). Posebnost kolapsirajoče glomerulopatije, povezane s COVID-19- (skrajšano COVAN), je njena skoraj izključna nagnjenost k Afroameričanom ali temnopoltim, ki nosijo dva tvegana alela Apolipoproteina L1 (APOL1) (3, 4). Dva alela tveganja (imenovana G1 in G2) sta se pojavila kot kodirni različici v genu APOL1 in nudita zaščito pred afriško tripanosomiazo. Vendar prenašanje G1G1, G2G2 ali G1G2 (imenovanih genotipov z visokim tveganjem) poveča tveganje za spekter ledvičnih bolezni in pojasnjuje velik del prevelikega tveganja za nediabetično ledvično bolezen med Afroameričani (5-8). Ocenjuje se, da ima 13 % Afroameričanov visoko rizične genotipe APOL1 (7). Med pandemijo COVID-19 so študije pokazale, da je bilo neverjetnih 92 % primerov COVAN, dokazanih z biopsijo, pri nosilcih genotipov APOL1 z visokim tveganjem, od katerih jih je 61 % ob nastopu potrebovalo dializo (3, 9). Te ugotovitve kažejo, da različice APOL1 močno prispevajo k rasnim razlikam v zdravstvenih rezultatih COVID-19. Kljub tej impresivni povezavi ostaja celični mehanizem, ki povezuje visokorizične genotipe APOL1 z okužbo s SARS CoV-2 in patogenezo kolapsirane glomerulopatije COVAN, neznan.

Močna epidemiološka povezava med genotipom APOL1 z visokim tveganjem in COVAN je privedla do hipoteze, da COVID-19-inducira ekspresijo APOL1 G1 ali G2 v podocitih in glomerulnih endotelijskih celicah – ledvične celice, prizadete pri kolapsu glomerulopatije – poganjajo patogenezo COVAN. To hipotezo so podprla nedavna poročila, da je transgena čezmerna ekspresija alelov tveganja APOL1 v mišjih podocitih ali glomerularnih endotelijskih celicah povzročila podocitopatijo, endoteliopatijo, glomerulopatijo in klinične manifestacije odpovedi ledvic (10-14). Ti modeli mišjih bolezni kažejo, da bi bil mehanizem, ki je podlaga za izražanje APOL1,-19-ki ga povzroča COVID, potencialna terapevtska tarča za COVID-19. Vendar pa obstajata dve pomembni neznanki. Prvič, ni znano, ali je ekspresija proteina APOL1 povečana v glomerulih bolnikov s COVAN. Drugič, ni znano, ali SARS-CoV-2 inducira izražanje APOL1 neposredno z virusno okužbo ledvičnih celic ali posredno prek učinkov citokinske nevihte, ki jo povzroča SARS-CoV-2-.

Neuspeh pri odkrivanju SARS-CoV-2 vbiopsije ledvic COVANposredno podpira hipotezo, da je COVAN verjetno posledica učinkov citokinske nevihte in ne neposredne virusne okužbe ledvičnega parenhima. Občasno odkrivanje virusnih delcev SARS-CoV-2 je bilo v obdukcijskih vzorcih ledvic, pri katerih ni bilo mogoče izključiti zmedenega učinka avtolize tkiva (3, 4, 15, 16). Ugotovljeno je bilo, da je več vnetnih citokinov in kemokinov uravnanih navzgorserumi bolnikov s COVID-19in/ali COVAN (4, 17, 18). Ta seznam vključuje citokine, kot so interferoni alfa, beta, gama in TNF, za katere je bilo prej znano, da povečajo izražanje APOL1. Vendar seznam vključuje tudi več vnetnih citokinov, ki jih okužba s COVID-19 močno uravnava. Ni znano, ali imajo ti citokini aditivne, sinergistične ali antagonistične učinke na izražanje APOL1 in s tem povezano podocitopatijo.

V trenutni študiji smo odpravili te vrzeli v znanju z uporabo biopsij ledvic, pridobljenih pri devetih bolnikih s COVAN in dvema človeškima kontrolnima ledvicama, da bi raziskali, ali in kje se protein APOL1 izraža v COVAN in kontrolnih ledvicah. Profilirali smo osemnajst citokinov, ki jih povzroči-19-COVID, da bi identificirali osem citokinov, ki so v odsotnosti SARS-CoV-2 zadostovali za sinergistično induciranje ekspresije APOL1 v primarnih človeških glomerularnih celicah in povzročili podocitopatijo v mikro- organoidi. Ta študija ne ponuja le prvega dokaza v eksperimentalnem modelu, ki ga je izpeljal človek, da citokinska nevihta COVID-19 inducira ekspresijo APOL1 in podocitopatijo, identificira tudi skupno signalno pot, ki posreduje pri patogenih učinkih. Ta študija ima posledice, ki bi lahko vplivale na strategije presejanja in zdravljenja bolezni COVID-19 pri temnopoltih in latinoameriških bolnikih. Postavlja vprašanja o varnosti dodatnih interferonov kot terapije za COVID{10}} pri temnopoltih in latinoameriških posameznikih, ki nosijo genotipe APOL1 z visokim tveganjem (19, 20).

Rezultati

Ekspresija APOL1 je povečana v podocitih in glomerularnih endotelijskih celicah bolnikov s COVAN. Da bi raziskali, ali imajo bolniki z biopsijo potrjeno diagnozo COVAN povečano izražanje proteina APOL1 v svojih podocitih in glomerularnih endotelijskih celicah (GEC), smo izvedli imunohistokemično sočasno obarvanje APOL1, sinaptopodina (z aktinom povezanega proteina diferenciranih podocitov) in CD31 (označevalec endotelijskih celic) na biopsijah ledvic dveh bolnikov z diagnozo COVAN (slika 1). Ekspresija APOL1 je bila bogata v glomerulih tako v primeru 1, ki je bil biopsiran deset mesecev po diagnozi COVID-19 (slika 1A-F), kot v primeru 6, ki je bil biopsiran devet dni po diagnozi COVID-19 (slika 1G-L). Pri obeh bolnikih je prišlo do močnega obarvanja APOL1 v podocitih, pozitivnih na sinaptopodin (puščica; slika 1B, E, H in K) in vzdolž CD31-pozitivnega glomerularnega endotelija (konica puščice; slika 1C, F, I in L ). Prisotnost proteina APOL1 v podocitih in GEC občasno 9 dni in 10 mesecev po diagnozi okužbe s COVID-19 nakazuje, da se ekspresija APOL1 inducira zgodaj in lahko vztraja v glomerulih več mesecev, dolgo po sprožitvi COVID{{ 27}} okužba je razrešena.

Ekspresija APOL1 je povečana v biopsijskem tkivu primerov COVAN, ne pa tudi pri kontrolah. Za nadaljnjo oceno posplošljivosti teh imunohistokemičnih ugotovitev smo identificirali skupno devet primerov COVAN z razpoložljivim tkivom za biopsijo za genotipizacijo in IHC (slika 2) ter dva kontrolna bolnika, vključno z enim obdukcijskim nadzorom bolnika, ki je imel COVID{{2 }} okužbo, vendar ni razvil AKI (sliki 2B in 2C). Klasične histopatološke značilnosti COVAN so vključevale kolaps glomerularnih kapilar s hipertrofijo in proliferacijo sosednjih podocitov, pogosto s kapljicami reabsorpcije beljakovin podocitov, povezanih z glomerulno proteinurijo (Supple Fig1 in Supple Fig2). Barvanje z APOL1 IHC ni bilo v vseh glomerulih kontrolnih skupin (slika AC), vendar je bilo prisotno v glomerulih vseh devetih bolnikov s COVAN (slika 2D-X). Barvanje z APOL1 je bilo v izobilju v citoplazmi podocitov, GEC in v nekaterih parietalnih epitelijskih celicah (slika 2N, razpršen krog) (slika 1, slika 2 in dodatek, slika 3). Protein APOL1 je bilo mogoče videti v glomerulih z odprtimi kapilarami, pa tudi na območjih kolapsa glomerulov. Očitna prisotnost proteina APOL1 v nekem kapilarnem lumnu je verjetno predstavljala kroženje APOL1, ki ga proizvajajo predvsem jetra (21). Poleg tega so APOL1 opazili tudi v peritubularnih kapilarah in v poškodovanih tubularnih epitelijskih celicah (zvezdice). Specifičnost in pomen te zadnje ugotovitve nista jasna. Predvsem je sedem od devetih primerov COVAN nosilo genotip APOL1 z visokim tveganjem (slika 2D-V). Druga dva primera, primer 9 in primer 4, sta nosila genotipe G0G0 z nizkim tveganjem (slika 2W in 2X). Kljub genotipu z nizkim tveganjem je bilo izražanje APOL1 v primeru 9 primerljivo s tistimi v sedmih primerih z visokim tveganjem (slika 2W). V diapozitivu za biopsijo ledvic 4 sta bila samo dva glomerula in izražanje APOL1 je bilo nižje v teh glomerulih (slika 2X). Te ugotovitve skupaj kažejo, da je bazalna ekspresija APOL1 v ledvicah nizka v glomerulih posameznikov brez glomerulne poškodbe, tudi če ima posameznik okužbo s COVID-19; medtem ko se ekspresija APOL1 poveča v podocitih in GEC v okolju COVAN v 89% naših primerov.

Kot je prikazano v tabeli 1, se je sedem od devetih bolnikov (77,8 %) z biopsijo dokazanim COVAN opredelilo kot Afroameričani. Šest od teh sedmih bolnikov (85,7 %) je imelo visokorizične genotipe APOL1 (štirje G1G1, en G1G2, en G2G2). Za primerjavo, 13 % Afroameričanov nosi visokorizični genotip APOL1. Preostala dva bolnika sta se identificirala kot bela Hispanica, vendar je eden od njiju nosil tudi visokorizičen genotip APOL1. Skupno je imelo sedem od devetih bolnikov s COVAN (77,8 %) genotipe APOL1 z visokim tveganjem. Mediana starosti primerov je bila 51 let (razpon 37-60). Pri vseh devetih primerih se je razvila akutna poškodba ledvic in so imele različne stopnje proteinurije, od subnefrotskega do nefrotskega obsega (1.4- 14 g/24 ur). Večina biopsij je bila opravljena vsaj 1 mesec po okužbi s COVID-19, z izjemo primera 6, ki je bil biopsiran 9 dni po pozitivnem testu PCR. Biopsija enega bolnika je bila opravljena šele 10 mesecev po okužbi zaradi nepopolnega okrevanja. Vseh devet biopsij bolnikov je pokazalo kolabirajočo glomerulopatijo, tubularno poškodbo in intersticijsko vnetje. Endotelijskih tubularnih retikularnih vključkov niso opazili v nobenem primeru. Predvsem v dveh biopsijah COVAN, ki sta bili testirani na neposredno okužbo z virusom SARS-CoV-2 z IHC in in situ hibridizacijo, virus ni bil odkrit (podatki niso prikazani).

Rekombinantni COVID{0}}inducirani citokini sinergistično povečajo ekspresijo APOL1 v primarnih človeških glomerularnih endotelijskih celicah in podocitih. Da bi raziskali, ali citokinska nevihta, ki jo povzroča COVID-19-, zadostuje za sprožitev ekspresije APOL1 v človeških glomerularnih celicah, smo gojili primarne človeške podocite, izolirane iz ledvic umrlega darovalca, in primarnih človeških glomerularnih endotelijskih celic (GEC) v 1 od 18 citokinov in kemokinov pred tem poročajo, da je povišan v serumu bolnikov s SARS-CoV-2 (slika 3A) (4, 17). Identiteta podocitov je bila potrjena z več markerji podocitov, vključno z Wilmsovim tumorjem1, sinaptopodinom, nefrinom in podokaliksinom (slika 3B in dodatek sliki 4A-B). Identiteta GEC je bila potrjena z izražanjem PECAM1 glede načloveška embrionalna ledvica293 cells (HEK) (Figure 3C). Induced APOL1 expression was quantitated by qPCR and immunoblot after 48hr treatment in GECs (Figure 3D and 3F) and podocytes (Figure 3E and 3G). Consistent with prior report (22), we found that interferons (gamma > beta > alpha) robustly induced expression of APOL1 in both GECs and in podocytes. Similarly, we found that TNF also induced a modest APOL1 expression in GECs and podocytes. Unexpectedly, we found that three cytokines-IL-6, IL-1β, and IL-18, which were previously unrecognized as inducers of APOL1 expression, also individually induced modest APOL1 expression in GECs or podocytes. Notably, the combination of all 18 recombinant cytokines produced a synergistic upregulation of APOL1 that was an order of magnitude higher than that produced by any of the interferons alone (Figure 3D). These effects were not only observed with cytokine concentration of 50ng/mL (Figures 3D and 3E) but also at 20ng/mL and 10ng/mL (Supplemental Figure 5). Cytokine conditions inducing >1,5-kratni prepis APOL1 v primerjavi s kontrolo, obdelano z medijem, je bil dodatno analiziran glede pomembnosti. Pomembnost je bila ocenjena z uporabo neparnega t-testa s Holm-Sidakovo korekcijo za večkratne primerjave. Sporočene P-vrednosti so prilagojene p-vrednosti. Ti rezultati razširjajo seznam fizioloških citokinov, ki so sposobni inducirati ekspresijo APOL1 poleg dobro prepoznavnih interferonov in TNF. Pomembno je, da ugotovitve tudi kažejo, da je lahko sinergija citokinov,{10}}ki jih povzroča COVID, bolj pomembna za regulacijo APOL1 kot vpliv izoliranega citokina samega.

JAK-STAT signalizacija posredujeIzražanje APOL1-19- zaradi COVID{0}}citokinov. Nato smo raziskali, ali citokini, ki jih povzroča COVID-19, povečajo ekspresijo APOL1 prek skupne znotrajcelične signalne poti, ki bi jo lahko izkoristili kot terapevtsko tarčo. Prej so poročali, da interferonsko indukcijo APOL1 posreduje JAK-STAT1/2 (22, 23). Pokazalo se je, da signalizacijo prek receptorja IL-6 posreduje STAT3, tako IL-1 kot TNF pa naj bi posredno aktivirala STAT3 (24, 25). Zanimivo je, da so Meliambro in drugi nedavno poročali o povečani regulaciji fosfo-STAT3 v biopsijskem tkivu primera COVAN in nefropatije, povezane s HIV (HIVAN) v primerjavi s kontrolo (26). Na podlagi teh osnovnih informacij smo domnevali, da so poti JAK1/2-STAT1/2/3 primarni mediatorji učinkov citokinov, ki jih povzroča COVID-19-, pri spodbujanju izražanja APOL1. Da bi preizkusili to hipotezo, smo določili stanje teh signalnih poti z merjenjem fosforiliranih STAT1, 2 in 3 v lizatih GEC po 48-urnem gojenju v posameznih ali kombiniranih citokinih (slika 3F). Interferoni tipa I (IFN in IFN) so povečali fosforilacijo STAT1-3, medtem ko je IFN pospešil fosforilacijo STAT 1 in 3. IL-1, TNF in IL-6 so povečali fosforilacijo samo STAT3. Kombinirani citokini so povečali fosforilacijo STAT1-3. Ker vemo, da sta JAK1 in JAK2 primarni proteinski kinazi navzgor, ki fosforilirata STAT1-3, smo domnevali, da bi inhibicija JAK1/2 blokirala ekspresijo APOL1, inducirano z "vsi citokini". V skladu s to napovedjo smo ugotovili, da je specifičen zaviralec JAK1/2-, baricitinib, znatno zmanjšal izražanje mRNA APOL1 in APOL1 s GEC, obdelanimi s citokini, in primarnimi podociti (slika 3D G). Ti rezultati skupaj kažejo, da je signaliziranje JAK-STAT primarna pot, ki posreduje izražanje APOL1, ki ga povzroči COVID-19-citokini.

Citokini,-19-ki jih povzroča COVID, zadostujejo za spodbujanje izražanja APOL1 v mikroorganoidih ledvic, pridobljenih iz človeških iPSC, prek poti JAK-STAT. Mikroorganoid človeških ledvic je dokazana platforma za modeliranje bolezni človeških ledvic in olajšanje kliničnega prevajanja. Vprašali smo, ali so rezultati, ki smo jih dobili iz primarnih človeških podocitov in GEC, posplošljivi in ​​potrjeni z modelom mikroorganoidov ledvic, pridobljenim iz človeka. Zato smo ustvarili mikroorganoide ledvic iz induciranih pluripotentnih matičnih celic (iPSC) afroameriškega nosilca genotipa G1G2 APOL1, da bi raziskali regulacijo, izražanje in rezultate APOL1 v tem modelu (slika 4A). Mikroorganoide ledvic smo gojili v IFN 10ng/mL ali kombinaciji osmih citokinov (IFN , IFN , IFN , IL-18, IL-8, IL-6, TNF, IL{{18 }} ) vsak pri 10 ng/ml v odsotnosti ali prisotnosti baricitiniba, 10 µM 24 ur. Teh osem citokinov je bilo izbranih zaradi njihove opažene regulacije izražanja APOL1 v prejšnjih poskusih. Podociti in tubularne epitelne celice v mikroorganoidih ledvic so bili potrjeni z markerji (slika 4B). V skladu z literaturo (27) so bile endotelne celice premalo zastopane v mikroorganoidih ledvic (podatki niso prikazani). Odkrili smo, da je bila bazalna ekspresija proteina APOL1 nizka v mikroorganoidih. Zdravljenje z IFN je povzročilo znatno ekspresijo APOL1, z največjo intenzivnostjo, ki je bila lokalizirana na področjih markerja podocitov, podokaliksina. Koktajl citokinov je povzročil preveliko in močno izražanje APOL1 v celotni mikroorganoidni strukturi v primerjavi z drugimi zdravljenji. Skupine, zdravljene z IFN plus baricitinibom in vsemi citokini plus baricitinibom, niso pokazale ekspresije APOL1, kar je skladno s popolno inhibicijo učinka citokinov. Ekspresija APOL1 v ledvičnih mikroorganoidnih podocitih je spominjala na tisto, opaženo v podocitih bolnikov s COVAN. Vendar pa so za razliko od ledvic COVAN, v katerih v zdravih tubularnih epitelijskih celicah niso opazili pomembne ekspresije APOL1, ledvične mikroorganoidne E-Cadherin-pozitivne tubularne epitelijske celice izražale APOL1. Ta razlika je lahko posledica razlik v membranskih citokinskih receptorjih ali epigenetskih dejavnikih, ki vplivajo na izražanje beljakovin v nezrelih tubulih mikroorganoidov ledvic. Če povzamemo, človeški mikroorganoidi ledvic, pridobljeni iz iPSC, gojeni s citokini, induciranimi s COVID-19-, kažejo močno uravnavanje patogenega proteina G1G2 APOL1 in izražanje je bilo blokirano z inhibicijo signalizacije JAK-STAT.

S citokini inducirano signaliziranje JAK-STAT-APOL1 je zmanjšalo sposobnost preživetja ledvičnih mikroorganoidnih podocitov, ki jih je rešil JAK-inhibitor. Na koncu smo vprašali, ali G1G2 APOL1, izražen v ledvičnih mikroorganizmih, poslabša sposobnost preživetja podocitov. Domnevali smo, da bi s citokini inducirana različica proteina APOL1 povzročila izgubo podocitov - značilni fenotip COVAN. Da bi preizkusili to hipotezo, smo izolirali podocite iz mikroorganoidov ledvic, ustvarjenih iz iPSC nosilca G1G2. Podocite smo 96 ur gojili v IFN (10 ng/mL) ali kombinaciji osmih citokinov (10 ng/mL vsakega), v prisotnosti in odsotnosti baricitiniba (10 µM) (sliki 5A in B). Zdravljenje s citokini je močno povzročilo izražanje APOL1 in to izražanje je blokiral baricitinib, skladno z našimi prejšnjimi poskusi (slika 5C). V skladu s tem je zdravljenje s citokini povzročilo znatno izgubo podocitov, kot je razvidno iz testa viabilnosti in celotnega celičnega ATP (sliki 5D in 5E). Zanimivo je, da je baricitinib popolnoma rešil s citokini povzročeno izgubo podocitov. Ti rezultati skupaj podpirajo sklep, da citokini, ki jih povzroča COVID-19-, sprožijo signalizacijo JAK-STAT-APOL1, kar nato povzroči poškodbo in izgubo podocitov. Zaščitni učinek inhibicije JAK na sposobnost preživetja podocitov močno podpira to hipotezo.

Diskusija

Glavni zaključki trenutne študije so, da več citokinov, ki jih povzroča COVID-19- poleg interferonov, deluje sinergistično prek signalizacije JAK-STAT za spodbujanje izražanja patogenega APOL1, kar povzroči poškodbo in izgubo podocitov, ki jo blokira zaviranje JAK. Na podlagi serije primerov prvič dokazujemo, da je beljakovina APOL1 obilno izražena v podocitih in GEC bolnikov z diagnozo COVID-19, vendar ne v glomerulih zdravih kontrolnih oseb niti COVID-19-pozitivnih, ampak COVAN-negativna kontrola. V treh eksperimentalnih modelih dokazujemo, da rekombinantni citokini, regulirani navzgor pri okužbi s COVID-19, zadoščajo za spodbujanje robustne ekspresije APOL1, in nepričakovano, da je močan sinergizem, ki ga ustvari kombinacija citokinov, posredovan pretežno prek skupne znotrajcelične signalne poti. Skupaj naši eksperimentalni dokazi močno podpirajo vzročno razmerje med signalizacijo JAK-STAT-APOL1, ki jo povzročajo citokini, in in vivo COVAN glomerularnim fenotipom ter podpirajo nadaljnje preiskave tega terapevtskega cilja.

Povečana pogostnost visokorizičnega genotipa APOL1 (77,8 %) med bolniki s COVAN, o kateri poročamo tukaj, je v korelaciji z nedavnim mednarodnim večcentralnim patološkim pregledom, ki je poročal o visokotveganem genotipu APOL1 pri 91,7 % bolnikov s COVAN (3). Glede na to, da je pogostnost visokorizičnega genotipa APOL1 v splošni afroameriški populaciji 13 % (28), je odkritje pogostnosti 77-90 % v COVAN pomembno in primerljivo s pogostnostjo 60-70 %, o kateri so poročali v Nefropatija, povezana s HIV (HIVAN) (28-31). Obstoj preostalih 20-30 % primerov COVAN (in HIVAN), ki nimajo genotipov APOL1 z visokim tveganjem, kaže na možnost APOL{20}}neodvisnega patomehanizma ali možnost, da v nekaterih primerih COVID-19-inducirana suprafiziološka ekspresija G0 APOL1 lahko povzroči tudi podocitopatijo. Razčlenitev teh možnosti bo zahtevala nadaljnje študije. Kljub temu smo pred tem dokazali včloveška embrionalna ledvica(HEK) z ekspresijskim sistemom APOL1, ki ga inducira tetraciklin, da je citotoksičnost APOL1 odvisna tako od različice kot od odmerka (32, 33). O od odmerka odvisni citotoksičnosti APOL1 so poročali tudi drugi preiskovalci v podobnih celičnih sistemih (34). Poleg tega transgeni mišji modeli APOL1 niso samo potrdili vzročne povezave med aleli tveganja APOL1 in poškodbo podocitov, ampak so dokazali, da je stopnja podocitopatije povezana z ravnmi izražanja APOL1 (10, 12-14, 35) . Naše odkritje, da je osem od devetih primerov COVAN pokazalo močno glomerularno izražanje APOL1 v primerjavi s kontrolami, in dokazi, da izražanje endogenih alelov tveganja APOL1 povzroča podocitopatijo v mikroorganoidih človeških ledvic, podpirajo vzročno povezavo med APOL1 in podocitopatijo. Nasprotno pa pomanjkanje APOL1 v glomerulih COVID-19 pozitivne, vendar AKI-negativne G0G0 obdukcijske kontrole kaže, da okužba s COVID-19 brez indukcije APOL1 ni zadosten dejavnikbolezen COVAN.