Meta-analiza rezultatov kvantifikacije NAD(P)(H) kaže variabilnost med tkivi sesalcev
Jun 01, 2023
Nikotinamid adenin dinukleotid (NAD plus) igra pomembno vlogo pri presnovi energije in signalnih poteh, ki nadzorujejo ključne celične funkcije. Thepovečano zanimanje za NAD plus metabolizeminTerapije za krepitev NAD plusje okrepil potrebo po natančni kvantifikaciji NAD plus. Da bi preučili objavljene meritve NAD (P) (H) v tkivih sesalcev, smo izvedli ametaanaliza obstoječih podatkov. Iskanje po bazi podatkov Ovid MEDLINE je identificiralo članke z rezultati kvantifikacije NAD(P)(H), pridobljenimi iz tkiv sesalcev, objavljenih med letoma 1961 in 2021. Pregledali smo 4890 zapisov in izluščili kvantitativne podatke termetode kvantifikacije, predanalitične pogoje in značilnosti subjekta. Ekstrahirane fiziološke koncentracije NAD(P)(H) vrazlična tkivaod miši, podgan in ljudi, je razkril pomembno variabilnost med in znotraj metode, ki se je razširila na nedavne objave. To poudarja razmeroma nizek potencial za medeksperimentalne analize za kvantitativne podatke NAD(P)(H) in pomen standardizacije za metode kvantifikacije NAD(P)(H) inpredanalitičnih postopkovza prihodnje predklinične inklinične študije.
Kliknite tukaj, če želite pridobiti lastnosti Cistanche proti oksidaciji in izdelke proti staranju
Nikotinamid adenin dinukleotid ima dvojno vlogo kot aredukcija–oksidacija (redoks)koencim, v svojem oksidiranem (NAD(P) plus ) inreducirane (NAD(P)H) oblike, in kot akosubstrat (NAD(P) plus ) za encime, ki sodelujejo pri deacilaciji1, mono- in poli-ADP-ribozilacija 2,3 in ustvarjanje sekundarnih prenašalcev sporočil na osnovi adenina 4–7. Razmerje NAD(P) plus /NAD(P)H je pomemben pokazatelj intracelularnega redoks stanja in ima ključno vlogo pri uravnavanju ključnih presnovnih poti8,9. Na primer, NAD plus je bistvenega pomena za glikolizo, skupaj s ciklom trikarboksilne kisline (TCA), da se zagotovijo redukcijski ekvivalenti med nastajanjem adenozin trifosfata (ATP), glavnega vira energije za celico8,9. Ko je NAD plus omejen, se lahko regenerira tudi iz NADH s fermentacijo piruvata, da se proizvede laktat v celicah sesalcev, s čimer se ohrani celično redoks ravnovesje25. NAD plus in NADH se lahko tudi fosforilirata v NADP oziroma NADPH z NAD plus kinazami (NADK) 10,11. NADPH je bistvenega pomena za redukcijsko biosintezo, prenos signala, celične antioksidativne odzive in zlasti redukcijo glutationa12–14. V citosolu se NADP plus med drugimi reakcijami reducira v NADPH z glukoza-6-fosfat dehidrogenazo in 6-fosfoglukonat dehidrogenazo pentozofosfatne poti (PPP)13. Medtem ko v mitohondrijih proizvodnjo NADPH vzdržujejo različne reakcije, vključno s tistimi, ki so odvisne od aktivnosti encima nikotinamid nukleotidne transhidrogenaze (NNT) in izocitrat dehidrogenaze (IDH2)15. Posledično je bilo dokazano, da status NAD(P)(H) vpliva na celično signalizacijo in metabolizem, energijsko homeostazo, mitohondrijsko biogenezo, odzive na oksidativni stres ter vzdrževanje in popravljanje DNK 16–18. Nadalje, ker je napredovanje s starostjo povezanih bolezni, kot so debelost19, nealkoholna bolezen zamaščenih jeter20,21, nevrodegeneracija22, mitohondrijske23 in kardiovaskularne24 bolezni ter mišična atrofija ali distrofija25, povezano s spremembami metabolitov, povezanih z NAD plus, pristopi ki so namenjeni vzdrževanju NAD in homeostaze, so trenutno v preiskavi.
Poleg običajnih redoks prehodov se lahko NADP plus porabi z izmenjavo njegove nikotinamidne skupine z nikotinsko kislino v reakciji, ki jo katalizirajo cADPR sintaze, kot je CD38, da nastane drugi posrednik NAADP, ki sodeluje pri mobilizaciji kalcija, izločanju hormonov in imunskih celicah. širjenje6,7,26. NAD plus se lahko zaužije tudi, ko deluje kot ko-substrat za tvorbo nikotinamida (NAM), ki se lahko uporabi kot substrat za regeneracijo NAD plus preko poti reševanja NAM. NAM je mogoče tudi metilirati, da nastane 1-metil NAM (meNAM), ki se lahko nadalje oksidira v produkte razgradnje N1-metil-2-piridon-5-karboksamid (2py) in N1-metil-4-piridon-3-karboksamid (4py). Končno se lahko metilirani kataboliti odstranijo iz telesa z urinom27,28. Skupina NAD plus se lahko zmanjša tudi s porabo NADP plus prek reakcije bazne izmenjave za tvorbo drugega posrednika NAADP14. Vzdrževanje bazena NAD plus torej zahteva biosintezo po Preiss-Handlerjevi poti (začenši s skupno molekulo vitamina B3 niacin (NA; nikotinska kislina)), pot biosinteze de novo (začenši z aminokislino triptofan (Trp)) ali regeneracija iz pretvorbe NAM preko reševalne poti v NMN nato v NAD plus. Nazadnje je pot reševanja pomembna tudi za biosintezo NAD plus iz nikotinamid ribozida (NR), alternativne oblike vitamina B3, ki ga najdemo v živilih, po njegovi fosforilaciji z nikotinamid ribozid kinazo v NMN in nato pretvorbo v NAD plus prek poti reševanja. .
Razumevanje dinamike metaboloma NAD plus je zato postalo bistveno in na koncu zahteva strogo kvantifikacijo metabolitov, da bi bolje razumeli zlivanje metabolitov NAD plus med normalno fiziologijo ali z napredovanjem bolezni ali zdravim staranjem. Jasna slika teh sprememb je bistvenega pomena za povezovanje sprememb v metabolomu NAD plus s spodnjimi encimskimi ali redoks reakcijami, ki so ključ do sprememb fenotipov tkiv. Glede na veliko količino predhodno sporočenih kvantitativnih podatkov o NAD plus presnovkih pri sesalcih, vključno z naraščajočim številom poročil pri ljudeh, je nujno in pravočasno povzeti te spremembe med zdravjem in boleznijo. Številne študije so preučevale komponente NAD plus metaboloma pri glodavcih in ljudeh v različnih presnovnih stanjih, starostih in boleznih, vendar se zanašajo na različne metode za pripravo vzorcev ali kvantifikacijo. Priprava vzorca je pomembna za metabolite, ki sodelujejo v redoks reakcijah zaradi možne razgradnje in medsebojnih pretvorb pod določenimi pogoji29,30. Za kvantifikacijo se domneva, da sta tekočinska kromatografija, povezana z masno spektrometrijo (LC–MS) in magnetnoresonančno spektrometrijo (MRS), občutljivi in specifični metodi31–33, medtem ko so testi encimskega kroženja pogostejši. Kvantitativne metode LC-MS zahtevajo celovito vključitev kontrol kakovosti za posamezne merjene metabolite in za skupni matrični učinek vzorcev, učinek, ki pojasnjuje različne masne spektrometrične odzive za dani analit pri merjenju v različnih raztopinah. Brez teh kontrol je LC-MS v najboljšem primeru polkvantitativna. V tej študiji smo ugotovili precejšnje razlike v merah NAD(P)(H) med študijami na glodalcih in ljudeh, pri čemer smo poudarili potrebo po ustreznih metodah poročanja ter standardizirani obdelavi vzorcev in analitičnih protokolih. Na splošno so primerljivi nabori podatkov NAD(P)(H) v študijah potrebni za smiselno interpretacijo obstoječih in prihodnjih podatkov na področju NAD plus biologije.
Rezultati
Meta-analiza običajnih kvantifikacijskih metod, skupaj z vrstami, spolom in proučevanimi tkivi.
V preteklosti so zgodnje metode, uporabljene za kvantifikacijo NAD(P)(H), temeljile na spektrofotometričnih ali fluorometričnih lastnostih teh metabolitov34,35. V zadnjem času se metode encimskega kroženja, povezane s spektrofotometrično ali fluorometrično detekcijo, pogosteje uporabljajo za razlikovanje ravni koencimov NAD(P)(H)36–38. Naraščajoče potrebe po visoki občutljivosti in ločljivosti pri kvantificiranju teh koencimov, skupaj s potrebo po merjenju drugih metabolitov, povezanih z NAD plus, so privedle do uporabe tehnik tekočinske kromatografije visoke ločljivosti (HPLC) in LC–MS. Od teh pristopov je LC-MS postala prednostna metoda, saj masna spektrometrija v kombinaciji s tekočinsko kromatografijo omogoča specifično identifikacijo eluiranih spojin skupaj z dodatno koristjo vključitve izotopskih presnovkov NAD(P)(H) kot notranjega povečanja kakovosti. kontrole. Kljub prednostim pred klasičnimi spektrofotometričnimi ali fluorometričnimi testi HPLC in LC-MS ostajata draga in dolgotrajna, kar pojasnjuje, zakaj testi encimskega cikla vztrajajo v nedavnih študijah.
Z uporabo sistematičnega pristopa je bilo od 241 primernih študij (dopolnilni material 2) za nadaljnjo analizo izbranih 205 študij, ki so vključevale kvantitativno metaanalizo koncentracij NAD(P)(H) v tkivih miši, podgan in ljudi. Od teh študij je 46,7 odstotka uporabilo teste encimskega kroženja, od katerih je vključevalo kolorimetrično (40,9 odstotka) ali fluorometrično (5,8 odstotka) odkrivanje, medtem ko je 17,8 odstotka uporabilo metode HPLC (skupaj z UV ali fluorescenčnimi detektorji) in 13,2 odstotka uporabilo teste LC-MS ( Slika 1a). Večina študij ni vključevala podrobnega opisa postopkov ekstrakcije metabolitov. Vendar so običajno uporabljeni postopki ekstrakcije vključevali ekstrakcijske pufre s površinsko aktivnimi snovmi ali brez njih (Triton®, Tris, dodecil trimetil amonijev bromid) ali polarna organska topila, kot so acetonitril, metanol, etanol ali kloroform. Prejšnje študije so pokazale, da so bili inaktivacija encimov ter optimalni pH in temperaturni pogoji učinkoviti pri ohranjanju stabilnosti različnih oblik NAD(P)(H)30,39,40. Ko so bili razkriti, so bili vzorci obdelani pri nizkih temperaturah in v vključenih študijah niso bili omenjeni nobeni redoks dodatki. Redoks reakcije so bile omejene z inaktivacijo encimov v vzorcih pred meritvami metabolitov NAD(P)(H), običajno z obarjanjem s topili, kot so etanol, metanol, acetonitril ali perklorova kislina (PCA). Vendar pa je bila uporaba PCA redka zaradi kislinsko labilne narave reduciranih oblik (tj. NADH in NADPH), pa tudi zaradi potrebe po dodatni stopnji nevtralizacije. Med študijami, ki so poročale o uporabi PCA med ekstrakcijo metabolita (5,4 odstotka), jih je 3,7 odstotka poročalo samo o rezultatih NAD(P) plus ali uporabilo drugo metodo ekstrakcije brez kisline za pravilno kvantifikacijo NAD(P)H. Samo 1,7 odstotka študij je poročalo o rezultatih NADH, celotnega NAD(H) in/ali NAD plus /NADH z uporabo samo ekstrakcije PCA. Morebitne pristranskosti teh študij ni bilo mogoče analizirati zaradi omejenih podatkov.
Primerjave povprečnih fizioloških vrednosti NAD(P)(H) v tkivih za glodavce in ljudi.
Za pomoč pri identifikaciji pričakovanih srednjih fizioloških ravni NAD(P)(H) za najpogosteje proučevana mišja, podgana in človeška tkiva smo zbrali podatke iz vseh kontrolnih kohort in kohort divjega tipa iz vsake od vključenih študij (dopolnilni material 2 ). Natančneje, zabeležili smo povprečne vrednosti NAD (P) (H), normalizirane na maso tkiva ali, v primeru krvi, volumen. Podatki iz študij, ki so normalizirale ravni metabolitov na vsebnost beljakovin, so bili vključeni v naš zbrani nabor podatkov (dopolnilni material 2), vendar niso bili uporabljeni za nadaljnjo analizo glede na majhno število prijavljenih rezultatov. Poleg tega smo, kadar je bilo mogoče, izračunali razmerja NAD(P) plus /NAD(P)H, kot odraz redoks stanja, kot tudi skupne ravni NAD(P)(H) (NAD(P) plus plus NAD (P)(H)), ki so običajni izhodi poročanja za popravke NAD(P)(H). Izvlečeni podatki so vključevali tudi vrsto, seve, starost, spol, metodo kvantifikacije, prehrano in razpored hranjenja, vrsto vzorca, metodo zbiranja vzorcev in čas žetve (pred ali po zakolu).
Metaanaliza podatkov NAD(H) je identificirala povprečne fiziološke koncentracije za NAD plus in NADH v mišjih (sl. 2a,b, dopolnilna slika 1a,b) in podganah (dodatna slika 2a,b) tkivih živali mlajši od 14 mesecev za miši in 18 mesecev za podgane. Ekstrahiran razpon fizioloških vrednosti razmerja NAD plus /NADH in skupne ravni NAD(H) (NAD plus plus NADH) so bili narisani za miši (sl. 2c, d) in podgane (dodatna slika 2c, d). Za razliko od študij na miših večina sporočenih podatkov o podganah ni vključevala starosti živali; vendar smo se odločili vključiti te podatke pod pogojem, da študija njihovih kohort ni razvrstila kot stare. Od najpomembnejših raziskanih tkiv ta meta-analiza kaže, da je srednja raven NAD plus za jetra (596 nmol/g, n=26) višja od vseh drugih tkiv pri miših, medtem ko je presenetljivo skeletne mišice (162,8 nmol /g, n=9) ima eno najnižjih medianih vrednosti na gram tkiva (slika 2a). Ti rezultati lahko nakazujejo zmanjšano učinkovitost pri ekstrakciji NAD in metabolita zaradi zelo vlaknaste narave mišice ali da obstajajo pomembne razlike v presnovi mišičnega NAD plus v primerjavi z drugimi visoko presnovnimi tkivi, kot sta jetra in ledvica.
Kljub maloštevilnim kvantitativnim študijam staranja so bile ravni NAD plus pri starih miših v povprečju znižane v jetrih, mišicah in pigmentiranem epiteliju mrežnice (RPE) v primerjavi z njihovimi mladimi kohortami in v primerjavi s povprečjem vseh študij, izvedenih z mlajšimi mišmi. starejši od 14 mesecev (dodatna slika 3). Meta-analiza NADH in razmerja NAD plus/NADH pri starih živalih ni bila mogoča, saj je le ena od teh kvantitativnih študij opravila te meritve.
Ti podatki kažejo na pomanjkanje kvantitativnih podatkov NAD(H) pri starajočih se živalih.
Pri podatkih, pridobljenih iz študij na zdravih ljudeh, so se starostni razponi med študijami zelo razlikovali (od 15 do 92,3 leta) in v večini primerov podatki niso bili stratificirani po teh starostih. Najpogosteje merjena človeška tkiva so vključevala skeletne mišice in komponente krvi zaradi njihove manj invazivne narave zbiranja (sl. 3a–d). Rezultati iz drugih človeških tkiv (n= 1–2) so prikazani na dodatni sliki 4. Ta analiza je pokazala mediano koncentracijo NAD plus 44,62 nmol/ml (n=23) v polni krvi s podobnimi Koncentracije NAD plus, sporočene za rdeče krvne celice pri 46,96 nmol/ml (n=7) (slika 3a; dodatna tabela 1). Vendar pa so bile ravni NAD plus v krvni plazmi bistveno nižje z mediano 0.37 nmol/ml (n=8) (slika 3a). Srednja raven NAD plus, ugotovljena v skeletnih mišicah ljudi, je bila 191,9 (n=4) nmol/g v mokrih mišičnih pripravkih v primerjavi s 1713 (n=3) nmol/g v liofiliziranih pripravkih, nizka temperatura proces dehidracije, ki verjetno koncentrira metabolite (slika 3a). V pogosteje raziskanih tkivih za meritve NADH je bila mediana ravni človeških rdečih krvnih celic, plazme in liofiliziranih skeletnih mišic 1,75 nmol/ml (n =7), 0,39 nmol/ml (n=8) oziroma 136,8 nmol/g (n=6) (slika 3b). Ustrezna mediana razmerja NAD plus /NADH je bila 23,65 (n=8), 1,57 (n=7) in 12,7 (n=3) (slika 3c). Zanimivo je, da je bilo mediano razmerje NAD plus /NADH za rdeče krvne celice (23,65) in liofilizirane skeletne mišice (12,7) (slika 3c) nekajkrat večje od večine tkiv miši in podgan (slika 2c in dopolnilna slika 2c) , kar kaže na visoko oksidativno redoks stanje z obilico razpoložljivega NAD plus v teh človeških tkivih. V primeru mišičnega tkiva bi to lahko imelo posledice pri obravnavi translacijskega potenciala študij na glodavcih, ki so odkrile prednosti povečanja ravni NAD plus v mišicah. Vendar pa je povišano razmerje NAD plus /NADH v mišicah lahko tudi posledica zapoznelih postopkov zamrzovanja vzorcev v kliničnem okolju, kar lahko vodi do nefizioloških sprememb v redoks statusu vzorca.
Zbrane so bile fiziološke ravni NADP(H) v tkivih glodalcev, pri čemer je bila najpogostejša meritev v jetrih. Mišja jetra so pokazala mediano vrednost 124,2 nmol/g NADP plus (n=13) in 140,2 nmol/g NADPH (n=4) (sl. 4a,b ), medtem ko so podganja jetra pokazala mediano 95,11 nmol/g NADP plus (n=10) in 240,7 nmol/g NADPH (n=9) (dodatna slika 5a,b). Mediano razmerje NADP plus /NADPH, izpeljano iz študij, ki so merile oba metabolita, je bilo nižje od 1 v večini tkiv miši in podgan (slika 4c, dopolnilna slika 5c). Srednja skupna raven NADP(H) (NADP plus plus NADPH) v jetrih miši in podgan je bila 244,4 (n=3) (slika 4d) in 342,1 (n=9) (dodatna slika 5d) , oz. Pri ljudeh so bile najpogostejše meritve NADP(H) izvedene v rdečih krvnih celicah in so pokazale mediano vrednost 33,2 nmol/ml za NADP plus (n=14) in 22,4 nmol/ml za NADPH (n{{30} }) iz neujemajočih se študij z mediano razmerja NADP plus/NADPH 1,27 in mediano skupnega NADP(H) 52,0 nmol/ml iz študij, ki so merile oba metabolita (n=11) (slika 4e– h). Na splošno je količina razpoložljivih podatkov za NADP(H) redka pri vseh vrstah, kar vodi do manjšega zaupanja v mediane vrednosti za vsako tkivo.
Analiza pristranskosti in variabilnosti kvantifikacijskih metod NAD(P)(H).
Glede na to, da je večina študij, vključenih v to metaanalizo, preučevala ravni NAD plus v vzorcih jeter glodalcev (sl. 1c,e), smo uporabili fiziološke ravni NAD plus v jetrih miši in podgan, da bi ugotovili morebitno pristranskost v rezultatih, ki ustrezajo metodi kvantifikacije (sl. 5a,b). Povprečna starost miši, vključenih v to analizo, je bila 17,9 tednov (razpon: 2–55 tednov), pri čemer 6 študij ni razkrilo starosti živali. Pri podganah večina študij ni razkrila starosti živali, razen treh, ki so bile stare od 2 dni do 8 mesecev. Nobena študija ni poročala o uporabi starih živali. V mišjih jetrih je velik razpon prijavljenih koncentracij za NAD plus obsegal od 1,8 do 1132 nmol/g jeter s srednjo vrednostjo 596.0 (n=26) (slika 5a) , medtem ko so se koncentracije NADH gibale od 0.9 do 109 nmol/g tkiva s srednjo vrednostjo 66,43 (n=6) (dopolnilna slika 6a). Pomembno je, da je bil izračunan koeficient variacije 52,5 odstotka oziroma 76,5 odstotka za povprečne fiziološke rezultate NAD plus oziroma NADH v mišjih jetrih, merjeno z več metodami kvantifikacije, kar kaže na obseg variabilnosti med študijami. Kot je bilo predvideno iz teh rezultatov, je povprečno razmerje NAD plus /NADH v mišjih jetrih (3,41 plus /- 3,16 SD, n=19) pokazalo enako velik razpon variabilnosti s CV 92,7 odstotka (dodatna slika 6c) . Podobno variabilnost v merah NAD plus in NADH so opazili tudi v jetrih podgan (CV=42.6 odstotkov za NAD plus in CV=44.4 odstotkov za NADH). Ustrezne koncentracije za NAD plus in NADH v jetrih podgan so bile od 159 do 796 (n=16) oziroma od 65 do 265 (n=12) nmol/g (slika 5b, dopolnilna slika 6b). ), medtem ko so razmerja NAD plus /NADH pokazala CV 50.1 odstotka (povprečje: 3,219 plus /− 1,612 SD, n=23) (dodatna slika 6d). Podatki o srednjih vrednostih in standardnih odstopanjih za NAD plus, NADH, skupni NAD(H) in razmerju NAD plus/NADH v jetrih miši in podgan, razvrščeni po metodi kvantifikacije, so prikazani v dodatni tabeli 2. Glede ravni NADP(H) in razmerju NADP plus/NADPH so podobno variabilnost opazili v jetrnih tkivih. Ravni NADP plus so bile od 50,4 do 247,4 nmol/g tkiva za miši (dopolnilna slika 8a) in od 45,7 do 171 nmol/g tkiva za podgane (dopolnilna slika 8b), medtem ko so ravni NADPH se je gibala od 28 do 236,9 nmol/g tkiva za miši (dopolnilna slika 8c) in od 90 do 409 nmol/g tkiva za podgane (dopolnilna slika 8d). Nazadnje se je razmerje NADP plus /NADPH gibalo od 0,12 do 0,55 v mišjih jetrih (dopolnilna slika 8e) in od 0,12 do 1,44 v jetrih podgan (dopolnilna slika 8f).
v največjem razponu rezultatov (1,8 do 1132,3 nmol/g). Celo najnovejše pregledane študije LC-MS so ponazorile obseg teh vrednosti NAD plus, vključno z vrednostmi 1,8 nmol/g41 in 33,8 nmol/g42 ter veliko višjimi vrednostmi 946,3 nmol/g43 in 1132,3 nmol/g44. Poleg tega se zdi, da velik razpon vrednosti LC-MS NAD plus ni bil v korelaciji s študijami, ki so izključevale interne standarde, označene z izotopi (slika 5a), metodo, uporabljeno za izboljšanje identifikacije metabolita in točnosti kvantificirane vrednosti . Vendar sta bili dve ugotovljeni študiji LC-MS, ki sta se zanašali samo na zunanjo standardno krivuljo za NAD plus kvantifikacijo, namesto da bi vključili notranjo kontrolo, v povprečju nižji od povprečja za vse meritve (slika 5a). Poleg tega so študije z normalizacijo internega standarda uporabljale različne vrste internih standardov, kot je vključitev enega samega označenega referenčnega metabolita45,46 ali označenih izvlečkov metabolitov iz kvasovk43,44 ali celičnih kultur41. Zanimivo je, da so te študije, ki so uporabljale standarde, pridobljene iz ekstrakta kvasa ali celične kulture, zagotovile najvišje ali najnižje meritve, pridobljene s LC-MS, za ravni NAD plus v jetrih. To potencialno poudarja, kako lahko celični izvlečki standardov, bogatih z izotopi, prispevajo k variabilnosti meritev NAD plus, saj bi lahko matrični učinek dodanega standardnega kvasa ali celičnega izvlečka motil učinkovitost ionizacije in posledično izmerjene koncentracije ciljnih metabolitov.
Omejitve te analize pristranskosti kvantifikacije in variabilnosti vključujejo morebitne razlike v okolju, genetskem ozadju, žrtvovanju, spolu in starosti. Vsi podatki za to analizo so pridobljeni od živali na dieti s hrano, vendar se lahko razlikujejo po vrsti. Ob žrtvovanju so poročali o razlikah v stanju, ko je žival sita ali na tešče, in času dneva za žrtvovanje. Poleg tega, čeprav je bila večina študij na miših izvedena na ozadju C57BL/6, je bil za podgane v študijah uporabljen večji razpon ozadij (Wistar: 38 odstotkov, Albino Wistar: 25 odstotkov in 6 odstotkov za kapucato Wistar, Sprague–Dawley, Holtzman, ACI, Long-Evans in Zucker podgane). V študijah jeter pri miših ni bilo statističnih razlik med vrednostmi moških in žensk za ravni NAD plus, NADH ali celotnega NAD(H) ali za razmerje NAD plus /NADH (dodatna slika 7). Vendar pa ne moremo sklepati zaradi omejenega števila ženskih kohort.
Vprašaj za več:
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950
