Večkomponentni režimi cepljenja proti Chlamydia Trachomatis s prvim pospeševanjem inducirajo odzive protiteles in celic T ter pospešijo očistek okužbe v modelu primatov, ki niso človek

Mednarodna prednostna naloga je razvoj cepiva proti spolno prenosljivim boleznimOkužbe s Chlamydia trachomatisza boj proti nadaljnjemu globalnemu širjenju okužbe. Theoptimalno imunizacijostrategijo je treba še v celoti pojasniti. Namen te študije je bil ocenitistrategije imunizacijev modelu nečloveških primatov (NHP). Cynomolgus macaques (Macaqua fascicularis) so bili imunizirani po različnih večkomponentnihprimarno okrepljeno imunizacijourniki in nato izzvani s C. trachomatis SvD v spodnjem genitalnem traktu. Imunizacijski antigeni so vključevali rekombinantni proteinski antigen CTH522 z adjuvansom CAF01 ali aluminijevim hidroksidom, antigen MOMP DNA in vektorske antigene MOMP (HuAd5 MOMP in MVA MOMP).

Kliknite tukaj, če želite dobiti zeliščno Cistanche za preprečevanjeOkužbe s Chlamydia trachomatis

Vsi antigenski konstrukti so bili visoko imunogeni, kar je povzročilo pomembne sistemske odzive IgG, specifične za C. trachomatis. Zlasti skupine, cepljene s proteinom CTH522, so dvignile hiter in močan specifični IgG v serumu. Kartiranje specifičnih epitopov celic B znotraj MOMP je pokazalo, da so vse cepljene skupine prepoznale epitope v bližini ali znotraj variabilnih domen (VD) MOMP z doslednim odzivom VD4 pri vseh živalih. Poleg tega bi lahko serum vseh cepljenih skupin in vitro nevtraliziral tako SvD, SvE kot SvF. Odzivi protiteles so se odrazili na vaginalni in očesni sluznici, ki je pokazala zaznavne ravni IgG. Cepiva so sprožila tudi celično posredovane odzive, specifične za C. trachomatis, kar je razvidno iz in vitro stimulacije in znotrajceličnega obarvanja mononuklearnih celic periferne krvi s citokini (PBMC). Na splošno so skupine, cepljene z beljakovinami (CTH522), vzpostavile večnamenski odziv celic T CD4, medtem ko so skupine, cepljene z DNK in vektorjem, vzpostavile tudi odziv celic T CD8. Po vaginalnem izzivu s C. trachomatis SvD je več cepljenih skupin pokazalopospešeno očiščenje okužbe, predvsem pa skupina DNA, okrepljena s CTH522 z adjuvansom CAF01, da bi dosegliuravnotežen CD4/CD8T-celični odziv v kombinaciji z anodziv IgG, pokazalpospešeno očiščenje okužbe.

KLJUČNE BESEDE cepivo, okužba,imunologija, bakterije, limfociti CD4/CD8,Chlamydia trachomatis

Uvod

Genitalne okužbe s Chlamydia trachomatis letno povzročijo približno 131 milijonov novih primerov po vsem svetu (1) in predstavljajo velik svetovni zdravstveni problem, saj lahko povzročijohudi zapletikot je medeničnavnetna bolezen, zunajmaternične nosečnosti, inneplodnost(2, 3). Antibiotiki še vedno nudijo učinkovito zdravljenje okužb s C. trachomatis. Ker pa je okužba v do 75 odstotkih primerov asimptomatska, jevečina okužb ostane nezdravljena, prenos pa ni prekinjen (3). Splošno sprejeto je, da je najučinkovitejše orožje proti nadaljnjemu širjenju okužb s klamidijo profilaktično cepivo (4).

Kljub večletnim raziskavam cepiva še ni na trgu. To je deloma posledica zapletenega dvofaznega življenjskega sloga C. trachomatis. Edinstveni dvofazni življenjski cikel C. trachomatis z znotrajceličnim in zunajceličnim stadijem predstavlja izziv za imunski sistem. Menijo, da mora biti zaščitna imunost poleg protiteles, specifičnih za serotip, sestavljena iz celično posredovanih imunskih (CMI) odzivov (5–13). Poleg tega ustvarjanje mukozne imunosti v genitalnem traktu predstavlja dodaten izziv za cepivo.

V tej študiji smo testirali različne strategije cepiva v modelu okužbe s klamidijo NHP. Strategije so bile namenjene induciranju protiteles, celic T CD4 in/ali odziva celic T CD8. Poleg tega so nekatera cepiva namenjena ustvarjanju odziva sluznice. Antigeni, izbrani za to študijo, so temeljili na glavnem proteinu zunanje membrane. Najprej je bil ustvarjen soglasni antigen MOMP (Con E), ki temelji na približno 1500 sekvencah serovarja E ompA, da se zagotovi visoka pokritost z epitopom proti najbolj razširjenim sevom C. trachomatis (14). Drugič, uporabljen je bil sintetični fuzijski protein CTH522. CTH522 je rekombinantna, inženirsko izdelana različica MOMP, ki obsega heterologne imunske ponovitve regij VD4 iz štirih genitalnih serovarjev Ct (D, E, F in G) (11). Strategija za rekombinantnim fuzijskim proteinom je induciranje okrepljenih odzivov na zaščitne epitope in induciranje navzkrižne zaščite serovarjev (11).

Druga ključna značilnost trenutnega poskusa je bila vzporedna ocena CTH522 v dveh izrazito različnih adjuvantnih sistemih (AlOH in CAF01), v kombinaciji z intranazalnim ojačevalcem. Ta kombinacija je bila preizkušena na miših in mini prašičih, kjer se je izkazala za visoko imunogeno z induciranjem visokih titrov nevtralizirajočih protiteles, celic CD4 in T, ki proizvajajo IFN-g, ter pospešenega očistka genitalne okužbe s C. trachomatis (11–13). , 15). Poleg tega je ta primerjava odražala nedavno prvo klinično preskušanje pri ljudeh, kjer sta se obe formulaciji izkazali za imunogeni in kjer je bil CAF01 boljši pri induciranju nevtralizirajočih serumskih protiteles in imunskih odzivov, posredovanih s celicami Th1 (16). Da bi inducirali močne celične imunske odzive in zlasti odzive celic T CD8 v kombinaciji z odzivi celic T CD4, so del živali okrepili z imunogenom CT522/CAF01 po pripravi z adeno vektorjem pAL1112 (HuAd5-MOMP), MVA pox vektor ali plazmidna DNA pcDNA3.1, ki dovaja antigen MOMP Con E (14, 17). Vsi trije vektorji so se izkazali za imunogene v NHP in nedavno je bilo dokazano, da je strategija imunizacije, ki združuje ta tri cepiva in končno obnovitveno cepljenje z adjuvansom induciranim z beljakovinskim antigenom, izboljšala imunske odzive in dosledno povečala očistek intravaginalne C. trachomatis pri mišji C. model okužbe s trachomatis (14).

V tej študiji dokazujemo, da različne kombinacije večkomponentnih imunizacijskih strategij z beljakovinskimi cepivi, DNA cepivi in ​​rekombinantnimi virusnimi vektorskimi cepivi v modelu nečloveških primatov (NHP) povzročijo različne imunske odzive. Poleg tega opažamo, da je režim, ki uporablja pripravo DNA in beljakovine (CTH522/CAF01), povečal pospešen očistek bakterij po genitalnem izzivu s Chlamydia trachomatis.

Rezultati

Vsi režimi cepljenja so se izkazali za varne in so povzročili pomembne sistemske odzive protiteles

Skupaj 30 makakov vrste Cynomolgus je bilo cepljenih po različnih režimih cepljenja s prvim pospeškom, vključno s cepivi proti beljakovinam, DNK in vektorskim cepivom ter različnimi načini dajanja, kot je prikazano na sliki 1 in dodatnih slikah 6-10). Vse živali so med študijo ostale zdrave in niso razvile merljivih škodljivih učinkov imunizacije. Poleg tega nismo opazili bistvenih nihanj v teži ali temperaturi živali (dodatni sliki 1, 2).

V določenih časovnih točkah po imunizacijah smo zbrali serum in z ELISA ovrednotili nivoje CTH522 specifičnih IgG v serumu. Vseh 5 cepljenih skupin je pokazalo pomemben serumski odziv CTH522 IgG (slika 2). Vendar je bila kinetika v 5 cepljenih skupinah nekoliko drugačna. Vse živali v skupinah CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 in CTH522/CAF01 plus IN so povečale pomemben titer IgG po samo 1 intramuskularni (IM) imunizaciji in titer IgG je ostal pomemben do zadnje točke vzorčenja (slike 2A- C). Serumske ravni IgG so naraščale nekoliko počasneje v skupinah DNA plus CTH522 in vektorji plus CTH522, kjer je bila pri vseh živalih serokonverzija v 8. tednu oziroma 4. tednu (sliki 2D, E).

Skupine CTH522/AlOH plus IN, CTH522/CAF01 plus IN in CTH522/CAF01 so znatno povečale serumski IgG po 3. poživitvenem cepivu IM v 16. tednu (sliki 2A C). Skupine DNA plus CTH522 in vektorji plus CTH522 so znatno zvišale serumske ravni IgG po IM pospeševalniku protein/CTH522/CAF01 v 20. tednu (sliki 2D, E). Pri odzivih protiteles v serumu po trikratnem intramuskularnem cepljenju s CTH522, formuliranim z adjuvansom CAF01 ali AlOH (sliki 2A, B), in intranazalnih (IN) obnovitvenih imunizacijah brez adjuvansa pri CTH522/AlOH plus IN in IN niso opazili pomembnih razlik. Skupine CTH522/CAF01 plus IN niso povzročile pomembnega povečanja titrov protiteles IgG v serumu (sliki 2A, B).

Kinetika serumskega odziva IgG je odražala kinetiko/ravni v vaginalnih tekočinah, kar kaže, da protitelesa, odkrita na vaginalni površini, verjetno izhajajo iz obtoka. Podobno so ravni očesnih IgG prav tako sledile ravnim IgG v serumu in, kot so opazili v serumu, je pokazalo, da je ojačevalnik IM v skupinah DNA/vektorjev povečal titer očesnih IgG (dodatna slika 3).

Odzivi serumskih protiteles so usmerjeni proti variabilnim domenam 1, 3 in 4 v zaporedju MOMP

Nato so ovrednotili nadaljnjo razjasnitev specifičnega prepoznavanja epitopa s serumskimi protitelesi po različnih režimih cepljenja. Serum smo analizirali v 24. tednu, to je po intranazalnih poživitvenih cepivih v skupinah 1 in 2 ter po IM poživitvenih cepivih v DNA in vektorskih skupinah (skupini 4 in 5). Te analize so bile izvedene s peptidnim nizom, ki pokriva CTH522 in je sestavljen iz 15 mernih peptidov s prekrivanjem 14 aminokislin.

SLIKA 1 Načrt študije. Slika prikazuje uporabljene skupine, cepiva in načine dajanja (intramuskularno, IM ali intranazalno, IN).

SLIKA 2 (A–F) Odzivi serumskih protiteles CTH522 IgG. Makaki Cynomolgus so bili imunizirani po različnih režimih začetnega pospeševanja (n=5 na skupino) in serum je bil zbran vsak drugi teden. Specifična protitelesa IgG CTH522 v serumu so bila ocenjena z ELISA in tukaj izražena kot titer na lestvici log10. Sive puščice označujejo cepljenja. Vsaka vrstica predstavlja eno žival. Statistična pomembnost je označena z zvezdicami *p < 0,05 in **p < 0,01.

Na splošno so bili prepoznani peptidi locirani blizu in znotraj variabilnih domen (VDs 1,3,4) MOMP. Skupina CTH522/AlOH je celo pokazala nekaj prepoznavnosti regije VD2. Vse živali so vzpostavile močan odziv na regijo VD4, ki vsebuje ohranjen nevtralizirajoči epitop VD4 (11). Skupina DNA je pokazala najožjo prepoznavnost znotraj VD (slika 3), medtem ko je vektorska skupina pokazala nekoliko širši vzorec prepoznavanja. Skupini CTH522/CAF01 in CTH522/AlOH sta pokazali najširše priznanje, zlasti proti SvF in SvG.

Serumska protitelesa so lahko nevtralizirala SvD, SvE, SvF in vitro

Za ovrednotenje sposobnosti s cepivom induciranih protiteles za zaviranje okužbe s C. trachomatis njegovih ciljnih celic je bil izveden in vitro nevtralizacijski test. S tem testom smo pregledali nevtralizacijo tako SvD, SvE kot SvF. Za test je bil uporabljen serum iz 24. tedna, serum iz naivne skupine pa je bil uporabljen kot kontrola. Vseh pet cepljenih skupin je pokazalo sposobnost nevtralizacije vseh treh serovarjev (slika 4). Proti SvD je skupina CTH522/AlOH plus IN pokazala najvišji 50-odstotni nevtralizacijski titer, medtem ko je proti SvE skupina DNA/CTH522, ki ji je tesno sledila skupina CTH522/AlOH plus IN, pokazala najvišje nevtralizacijske titre. Čeprav so vse skupine lahko nevtralizirale SvF, so bili 50-odstotni nevtralizacijski titri za vse skupine nekoliko nižji proti temu serovarju v primerjavi s SvD in SvE. Skupina z vektorji in CTH522 je pokazala najnižje 50-odstotne nevtralizacijske titre vseh cepljenih skupin.

Različni režimi cepljenja so povzročili različne T-celične profile

Za ovrednotenje odzivov T-celic, povzročenih s cepljenjem, so bile PBMC zbrane med študijskim obdobjem in kriokonzervirane. PBMC iz tedna 0/izhodišča in 22. tedna so bile ponovno stimulirane s peptidnimi združitvami (MOMP) in ovrednotene za znotrajcelične citokine z obarvanjem znotrajceličnih citokinov (ICS) in drugo citometrijo. PBMC so bili obarvani na naslednje celične markerje: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 in citokine: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }A. Strategija preklopa je prikazana na dodatnih slikah 4, 5. Stimulacija PBMC s peptidnim bazenom MOMP je povzročila pomemben odziv. Odstotek antigen specifičnih celic CD154 plus CD4 plus T, ki izražajo kombinacije IL2, IFN-g in TNF-a, se je povečal 2 tedna po zadnji imunizaciji (W22) v vseh cepljenih skupinah (slika 5). Večina teh celic T je bila multifunkcionalnih v smislu, da so izražale več citokinov. Odstotek antigen specifičnih celic CD137 in CD8 T, ki proizvajajo citokine, se je povečal samo v skupini DNK in vektorjev (W22) (slika 6, ki prikazuje multifunkcionalnost celic CD137 in CD8 plus T). notri

SLIKA 3 Preslikava epitopov v serumu v 24. tednu. Makaki Cynomolgus so bili imunizirani po različnih režimih začetnega pospeševanja (n=5 na skupino) in serum je bil zbran v 24. tednu. Odzivi peptidnega niza IgG na prekrivanje CTH522 15mer peptidi so predstavljeni kot mediani signal za vsako skupino s peptidi VD1 (oranžni), VD2 (zeleni), VD3 (modri) in VD4 iz SvD, E, F in G (rdeči), označeni z barvami.

SLIKA 4 In vitro serumska nevtralizacija C. trachomatis SvD, SvE in SvF. Cynomolgus macaques so bili imunizirani po različnih režimih začetnega pospeševanja (n=5 na skupino) in serum je bil zbran po končanem urniku imunizacije (24. teden). C. trachomatis SvD, SvE in SvF smo inkubirali s serumom vsake živali in sposobnost serumskih protiteles za zaviranje okužbe ovrednotili z inkubacijo mešanice protiteles in bakterij na HaK celice in obarvanjem za vključke. Črna črta prikazuje SvD, siva črta SvE in temno siva pikčasta črta SvF. Črtkana rdeča črta označuje recipročni 50-odstotni nevtralizacijski titer vsakega serovarja.

SLIKA 5 Odzivi CD4 T celic. Multifunkcionalne analize 22. teden. Proizvodnja citokinov s celicami CD4 plus T, testirana z ICS. Predstavljeni so večnamenski odzivi po stimulaciji z nabori prekrivajočih se peptidov iz MOMP. Velikost vsake torte je sorazmerna z odstotkom celic CD154 plus CD4 plus T, ki izražajo vsaj en citokin, vključno z IFN-g, TNF-a in IL-2, ter deležem celic, ki izražajo IFN-g in /ali citokini TNF-a in/ali IL-2 so prikazani v vsaki torti.

S cepljenjem povzročeno pospešeno odstranjevanje vaginalne okužbe s C. trachomatis SvD

Za ovrednotenje zaščitne učinkovitosti imunskih odzivov, povzročenih s cepivom, so bile živali izzvane z vaginalno okužbo s 5x107 IFU C. trachomatis SvD. Po inokulaciji je bila vaginalna klamidijska obremenitev določena s PCR detekcijo klamidijske DNA v vaginalnih brisih (slika 7). Okužba je bila pri vseh živalih očiščena do 5. tedna v skupini DNA plus CTH522/CAF01 in skupini Vector plus CTH522, do 6. tedna v skupini CAF01/CTH522 in do 8. tedna v skupini CTH522/Alum plus Skupina IN (slika 7). V kontrolni skupini je v 8. tednu 80 odstotkov živali odpravilo okužbo in 1 žival je ostala pozitivna na PCR v 9. tednu. Poživilo IN v skupini CTH522/CAF01 plus IN ni povečalo zaščite (slika 7). Log-rank (Mantel-Cox) test, ki je primerjal vse skupine, je pokazal vrednost P 0,0994 in s primerjavo vsake skupine posebej s kontrolnimi skupinami je samo skupina DNA-CTH522 pokazala vrednost P pod 0,05 (P vrednost=0.0257).

Diskusija

Ta študija je bila zasnovana za induciranje celične imunosti (CD4 in CD8) v kombinaciji s humoralno imunostjo in za prilagajanje fenotipa adaptivne imunosti s cepivi proti klamidiji na osnovi MOMP. Ocenjujemo imunogenost in zaščitno učinkovitost kombiniranih večkomponentnih imunizacijskih strategij z obema proteinskima cepivoma (CTH522, Con E), DNA cepivom in rekombinantnim virusnim vektorjem (MVA MOMP) ter cepivi na osnovi adeno vektorja pri primatih razen človeka ( NHP).

Podatki so pokazali, da so bili vsi imunizacijski režimi imunogeni in so povzročili tako celični kot humoralni odziv, sestavljen iz nevtralizirajočih protiteles (slike 2-4). Proteinsko cepivo CTH522, formulirano s CAF01 ali AlOH, je pokazalo hitro indukcijo sistemskega antigen-specifičnega IgG (slika 2). Nismo opazili nobenih pomembnih razlik med odzivi, povzročenimi s cepivi z adjuvansi AlOH in CAF01, kar je v skladu z odzivi, opaženimi pri ljudeh s temi adjuvansi (16). Režima cepljenja z DNA in vektorjem sta povzročila tudi pomembne titre sistemskih protiteles, specifičnih za antigen, ki so se izrazito povečali po imunizaciji s spodbujevalnim proteinom (slika 2). V skladu z našimi rezultati je prejšnja študija na miših tudi pokazala, da so režimi cepljenja proti beljakovinam povzročili višje ravni protiteles, specifičnih za antigen, v primerjavi z antigeni DNA in vektorskega cepiva ter tudi učinkovito povečali titre za te skupine (15).

MOMP vsebuje štiri VD, ki so izpostavljeni na površini infektivne oblike Ct. Te regije so glavna tarča protitelesno odvisne imunosti, tako prek nevtralizirajočih protiteles kot imunosti, ki jo posreduje Fc receptor (18). Prejšnje študije so pokazale, da je posvojitveni prenos nevtralizirajočega seruma, povzročenega s cepivom, izrazito zmanjšal zgodnje izločanje bakterij po okužbi s C. trachomatis (6, 11, 19–21). Tako se zdi, da imajo protitelesa vlogo pri nevtralizaciji/nadzoru začetnega inokuluma, verjetno v sodelovanju s celično imunostjo. S podrobnim preslikavo epitopov celic B smo ugotovili prepoznavanje VD regij 1, 3, 4 v vseh skupinah cepiva. Skupine DNK in vektorjev so prav tako prepoznale regije VD1, 3 in 4. Vendar so te skupine pokazale nekoliko ožje prepoznavanje znotraj teh VD v primerjavi s skupinama CAF01 in AlOH, kar verjetno odraža, da antigen Con E v vektorskih skupinah ne vsebuje regije VD4 SvF in G (slika 3). Prepoznavanje regije VD4 je bilo v korelaciji s sposobnostjo vseh strategij cepiva, da inducirajo nevtralizirajoča protitelesa proti SvD, SvE in SvF.

Parenteralna imunizacija s CTH522 v CAF01 in AlOH je povzročila pomembne ravni mukoznih protiteles (IgG) v genitalnem traktu in očesu ter ravni v korelaciji s serumskimi titri (dodatna slika 3, 18. teden). Sama DNA in vektorska cepiva niso inducirala mukoznega IgG, kar odraža nižje serumske titre v primerjavi s samimi beljakovinami. Vendar pa so po pospeševalnem dajanju CTH522/CAF01 IM te skupine znatno povečale serumsko Ab. ravni in tako vaginalnih kot očesnih IgG, enako kot sam protein (dodatna slika 3, 18. teden). Vzporedna ocena CTH522 v različnih začetnih adjuvansnih sistemih (AlOH in CAF01), ki ji je sledilo dvakratno intranazalno povečanje z antigenom, ni imelo učinka povečanja ravni protiteles na sluznici (dodatna slika 3, 22. teden). Tako se skupne ravni IgG v serumu odražajo na sluznici za vse skupine. Nedavno preskušanje I. faze pri ljudeh je ovrednotilo tudi vzporedno oceno CTH522 v AlOH in CAF01, čemur je sledilo dvakratno intranazalno povečanje. Tudi titri IgG na sluznici so dobro korelirali s koncentracijami IgG v serumu (16). Vendar pa je v nasprotju z ugotovitvami v modelu NHP preskušanje na ljudeh pokazalo učinek povečanja IN v skupini CAF01, kar je povzročilo povišane ravni IgG in IgA. Na žalost ocena IgA v trenutni študiji ni bila mogoča zaradi omejenega materiala in lažno pozitivnih signalov, ki so posledica navzkrižno reagirajočega sekundarnega protitelesa, uporabljenega v testu. Obe študiji sta uporabili napravo VaxINator, ki je zasnovana za atomizacijo nosnih zdravil za adsorpcijo na sluznici. Vendar pa je nosna votlina pri ljudeh veliko bolj prostorna kot pri NHP in lahko bi špekulirali, da bi to lahko vplivalo na enakomerno porazdelitev in privzem antigena.

Več študij pri ljudeh in glodalcih je pokazalo pomen imunosti celic Th1 T in efektorskega citokina IFN-g (8, 22–27). Nasprotno pa je manj znanega o zaščitni vlogi celic T CD8 (28–33). Vse skupine s cepivom so inducirale celice CD4 T, vendar sta le skupini DNA in vektorja pokazali celični odziv CD8 T (sliki 6 in 7). Na podlagi izmerjenih citokinov so bile celice CD8 T sestavljene iz omejenega števila podskupin v primerjavi s celicami CD4 T, ki bi jih lahko razdelili na 6 ali več podskupin, od katerih je večina proizvedla več citokinov (slika 7). Celice CD4 T so pokazale več podskupin, ki izražajo IL-2-, kot celice T CD8, ki so primarno vključevale samo eno podskupino, ki izraža IL-2-, tisto, ki izraža IL-2 skupaj z IFN-g in TNF- a (slika 6). V celicah CD8 T je prevladovala velika populacija, ki je proizvajala samo IFN-g, medtem ko je druga prevladujoča podskupina celic T CD8 proizvajala tako IFN-g kot TNF-a. Ta citokinski vzorec med celicami T CD4 in T celicami CD8 ni drugačen od tistega, kar so opazili pri miših pri testiranju strategij cepiva, ki lahko inducirajo T celice CD4 in CD8 (34).

Podobna strategija, ki je vključevala cepljenje z DNA, ki mu je sledilo krepitev z imunostimulirajočimi kompleksi (ISCOM) proteina MOMP (35), je povzročila močno zaščito pred okužbo pljuč s Chlamydia muridarum. V tej študiji je DNA MOMP (ali MOMP/ISCOMS) povzročil znatno manjšo zaščito (35). Druga študija je pokazala, da cepljenje miši s plazmidi DNA MOMP brez podenotnega cepiva ni zaščitilo pred genitalnim izzivom C. trachomatis (36), kar kaže, da DNK strategiji koristi dopolnitev s podenotnim cepivom, ki inducira CD4 T celice in protitelesa. . Opozoriti je treba, da so cepiva z DNK v kliničnih preskušanjih na ljudeh pokazala relativno nizke profile imunogenosti, kar bo morda treba obravnavati v prihodnjih študijah (37).

Čeprav je odmerek okužbe s Ct, uporabljen v tej študiji, višji od odmerka, doživetega z naravno okužbo pri ljudeh, je bil izbran tako, da zagotovi, da so okužene vse živali, kar je pomembno glede na majhno število živali v vsaki skupini. Odmerek je v skladu z odmerkom, uporabljenim v prejšnjih študijah, ki je znašal od 106 do 108 (38, 39). Znižanje odmerka v našem modelu je povzročilo povečano variacijo glede vnosa okužbe (podatki niso prikazani). Uporabljeni so bili tudi nižji večkratni odmerki (40, 41). Vendar to ni optimalen protokol, če je cilj preizkusiti zaščitno učinkovitost cepiv, zlasti če naravna imunost posreduje pri zaščiti, preden je protokol okužbe zaključen. Špekuliramo lahko, da uporaba velikega odmerka morda zahteva imunski odziv, ki vključuje vse krake imunskega sistema, kot so antigen specifične celice CD4 T, celice CD8 T in nevtralizirajoča protitelesa, da bi lahko zmanjšali bakterijsko stopnje. To bi tudi pojasnilo, zakaj nevtralizirajoča protitelesa, inducirana v vseh skupinah, niso privedla do znatne zaščite v vseh skupinah [čeprav smo opazili trend zgodnje zaščite v večini skupin, kjer naj bi imela protitelesa pomembno vlogo (slika 7)] . Trenutno poskušamo razviti bolj fizično relevanten model.

Naši podatki skupaj so pokazali, da lahko antigen CTH522, formuliran v adjuvansu CAF01 ali AlOH, inducira večnamenske celice T in nevtralizirajoča protitelesa v NHP. Poleg tega so naši rezultati pokazali, da strategija heterolognega cepiva, sestavljena iz cepiva DNA in cepiva podenote CTH522/CAF01, predstavlja obetavno strategijo cepiva za indukcijo večplastnega imunskega odziva z visoko stopnjo nevtralizirajočih Abs v kombinaciji z močnimi odzivi T celic CD4 in CD8, ki lahko znatno pospeši očistek okužbe s C. trachomatis.

Vprašaj za več:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: plus 86 15292862950

Trgovina Wecistanche

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop