1. DEL Vodni izvlečki Herba Cistanche so spodbujali črevesno gibljivost pri podganah z zaprtjem, ki jih je povzročil loperamid, tako da so izboljšali intersticijske celice Cajala.

Shuai Yan, 1,2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Wang, 1 Hong-li Dong, 1 Shu-guang Zhen, 1 Ben-sheng Wu, 1 in Hai-hua Qian3

1 Bolnišnica Suzhou oftradicionalna kitajska medicina,Suzhou, Jiangsu 215009, Kitajska

2 Univerza v NanjinguTradicionalna kitajska medicina, Nanjing, Jiangsu 210023, Kitajska

3Oddelek za anorektalno kirurgijo, Jiangsu Provincial Hospital ofTradicionalna kitajska medicina, Nanjing, Jiangsu 210029, Kitajska

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

Prejeto 24. maja 2017; Spremenjeno 5. oktobra 2017; Sprejeto 25. oktobra 2017; Objavljeno 28. decembra 2017

Akademska urednica: Samra Bashir

Avtorske pravice © 2017 Shuai Yan et al. To je članek z odprtim dostopom, ki se distribuira pod licenco Creative Commons Attribution, ki dovoljuje neomejeno uporabo, distribucijo in reprodukcijo v katerem koli mediju, če je izvirno delo pravilno citirano.

Tradicionalna kitajska medicinaporočali so, da ima dobre učinke pri zdravljenju funkcionalnega zaprtja. To delo je poskušalo dokazati učinke vodnih izvlečkov Herba Cistanche (AEHC) na zdravljenje STC in določiti možne mehanizme z modelom počasnega prehodnega zaprtja (STC), ki ga povzroča loperamid. Za identifikacijo in potrditev bioaktivnih komponent v AEHC je bila izvedena HPLC. Ugotovljeno je bilo, da je AEHC oslabil odzive STC na podlagi povečane količine blata, vsebnosti vlage in hitrosti črevesnega tranzita ter serumskih ravni GAS, MTL, SS in CGRP. Povečale so se tudi ravni beljakovin in mRNA c-kita, ki označuje intersticijske celice Cajal (ICC). Medtem se je povečala samo raven beljakovin SCF, liganda ofc-kita. Analiza naših podatkov je pokazala, da bi lahko AEHC očitno izboljšal delovanje ICC prek signalne poti, ki vključuje PI3K, SCF in c-kit, ter izboljšal indekse gibljivosti debelega črevesa, kot so GAS, MTL, SS in CGRP. Zanimivo je omeniti, da se je AEHC izkazal za učinkovitega pri zaprtju, zato so potrebni nadaljnji poskusi, da se razjasnijo natančni vključeni mehanizmi.

Za več informacij se obrnite na:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola ima številne učinke, kliknite tukaj za več informacij

1. Uvod

Zaprtje je pogosta funkcionalna bolezen prebavil in javnozdravstveni problem, za katerega je značilno nenehno oteženo, redko ali nepopolno odvajanje blata [1]. Prevalenca zaprtja se giblje od 0,7 do 81 odstotkov po vsem svetu, zlasti pri starejših [2, 3]. Počasno zaprtje (STC) je pogosta gastrointestinalna težava pri 13–37 odstotkih bolnikov s kroničnim na zdravljenje odpornim zaprtjem [4, 5]. Epidemiološki podatki kažejo na večjo pojavnostSTCmed mladimi ženskami kot moškimi [6].STCpovzroča nerešljivo zaprtje, ki kaže malo odziva na konzervativno zdravljenje in nagnjenost k nevrodegenerativnim motnjam. Ni tako preprosta kot funkcionalna bolezen, zahteva invazivno in agresivno zdravljenje [7].

Številna sedanja kemična zdravila, kot so osmotska ali sekretorna odvajala in sredstva za povečanje prostornine, se univerzalno uporabljajo za

zdravijo zaprtje [8], čeprav je njihova uporaba omejena zaradi visokih stroškov in abdominalnih stranskih učinkov, kot so bolečine, krči in napenjanje [9]. Trenutno je regulacija gastrointestinalnega trakta primarni fokus terapij zaprtja. Cisaprid je bil najprej ustvarjen kot pospeševalno sredstvo za zdravljenje bolezni želodca, vendar so ga kasneje umaknili zaradi tveganja srčnih aritmij [10].

Tegaserod je selektivni 5-antagonist receptorjev hidroksitriptamina, ki lahko stimulira črevesno peristaltiko in izločanje [11, 12]. Prukaloprid je nov derivat dihidro benzofuran karboksamida in 5- agonist receptorjev HT z visoko selektivnostjo in specifičnostjo, ki lahko poveča gibljivost želodca, tankega črevesa in debelega črevesa ter deluje hitreje v dinamiki [13–15]. Kot derivat prostaglandina E1 lahko lubiproston selektivno aktivira kanal CIC za spodbujanje gastrointestinalnega izločanja in poveča učinke črevesnega prenosa [16].

Cistancheima učinek tonifikacijeledvicain lahko tudi zdravizaprtje

Gibljivost pri zaprtju je zelo razširjena težava, vendar njena etiologija še ni jasna. Kljub temu so prepričljivi dokazi pokazali prispevek intersticijskih celic Cajala (ICC) k patogenezi zaprtja [17]. ICC se nahaja med živčnimi končiči in gladkimi mišičnimi celicami v prebavnem traktu. ICC je na splošno priznan kot srčni spodbujevalnik za delovanje prebavil in kot posrednik živčno-mišičnega prenosa [18]. Študije so pokazale, da je gostota ICC v debelem črevesu bolnikov s počasnim prehodnim zaprtjem izjemno nižja v primerjavi s tistimi pri normalnih bolnikih [19]. V skladu s tem lahko upadajoče število ICC povzroči pomanjkanje počasne valovne aktivnosti, kar vpliva na kontraktilni odziv in povzroči zapozneli prehod pri bolnikih s počasnim prehodom zaprtja. Za to točko je izboljšanje ICC z uporabo farmacevtskih izdelkov lahko ključnega pomena za zdravljenje počasnega prehodnega zaprtja.

Različna zeliščna zdravila in tradicionalna kitajska formula Mula so pred kratkim pritegnila pozornost kot novodobna zdravila za zdravljenje kroničnega zaprtja, ki je posledica izboljšane proizvodnje blata [20, 21]. Herba Cistanche je tradicionalno zdravilo rastlinskega izvora, ki se uporablja pri zdravljenju kronične ledvične bolezni, ženske neplodnosti, obilne menoragije in impotence [22, 23]. Herba Cistanche preprečuje apoptozo možganskih nevronov z izražanjem dejavnikov, povezanih z apoptozo, in nevrotrofičnih dejavnikov v celicah MES23.5 [24]. Herba Cistanche je dokazala tudi farmacevtski potencial pri zdravljenju sindroma pomanjkanja ledvic Yang-Qi. Nedavna študija je pokazala, da Herba Cistanche poveča mitohondrijsko dihanje in status antioksidanta glutationa v kardiomiocitih H9c2 [25].

TCM meni, da je zaprtje tesno povezano z ledvicami. Ledvica se odpre na zunanjih spolovilih in anusu in skrbi za uriniranje in defekacijo. Prevoz odpadkov je odvisen od spodbujanja ledvičnega qija in hranjenja ledvičnega yina. Če je ledvični jang pomanjkljiv ali ognjena vrata življenja ugasnejo, bo hladna kongestija debelega črevesa povzročila stagnacijo odpadkov. Zaprtje povzroča tudi suho odvajanje blata, saj pomanjkanje ledvične esence ne ustvari dovolj tekočine [26].

HerbaCistancheje pogosta poenotena rastlina, ki je sladkega in slanega okusa ter tople narave. Pripisuje meridianom debelega črevesa in ledvic, lahko tonizira ledvični jang in navlaži črevesje za lajšanje zaprtja. Ta ena sama rastlina in njenakitajskiFarmacevtski pripravki so bili široko uporabljeni za zdravljenje zaprtja z izjemno učinkovitostjo [27].

Na Kitajskem so učinki HerbaCistanchezabeležene so bile korenine pri zaprtju [28, 29], ki jih Shen Nongova kitajska Materia Medica imenuje "posušena sočna stebla vrste Cistanche" [30]; vendar znanstvenih dokazov o vplivu korenin Herba Cistanche na zaprtje doslej ni, klinično učinkovit odmerek je 20 g na dan priKitajska farmakopeja, klinični učinek pa se z odmerkom ne poveča več.

Ker je Herba Cistanche tako redka [31], je standardizirano njeno klinično odmerjanje za zdravljenjeSTCz eksperimentalno študijo ne le preprečuje neuspešno zdravljenje zaradi neustreznega odmerjanja, ampak tudi ščiti bolnike stran od ekonomske izgube in celo nesreče z zdravili zaradi prekomerne uporabe. Upamo

rezultati bi lahko postavili znanstvene temelje za nova zdravila za zaprtje. Zato je v tej študiji pomembno raziskati funkcijo vodne Herba Cistanche pri promociji črevesja in njeno delovanje na ICC.

Cistanchelahko ozdravizaprtje

2. Materiali in metode

2.1. Priprava vodnega izvlečka Herba Cistanche.

Vse Herba Cistanche so bile kupljene pri Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Kitajska), ki so bile pridelane, zbrane in predelane v skladu s standardnimi etnobotaničnimi praksami iz plantaž na območju Sinkiang na Kitajskem. Identiteto rastline je morfološko ugotovil profesor Tu Lin Lu z Univerze kitajske medicine Nanjing, Nanjing, Kitajska. Vzorec vavčerja (NUCMCHS-2015628) je bil deponiran na Visoki šoli za zdravstvene vede, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Kitajska.

Rezine Herba Cistanche, težke 500 g, smo zmečkali z električnim mešalnikom in ekstrahirali v 5000 ml destilirane vode, nakar smo vodni ekstrakt čistili pri 100 C 2 uri z uporabo krožne ekstrakcijske opreme

membranske pore (Millipore, Billerica, MA, ZDA) in ostanek, dobljen iz ekstraktov, raztopimo v 4000 ml vode. Po ekstrakciji z refluksom smo ekstrakte zbrali in uparili, da smo dobili končni vzorec izdelka. Vodne ekstrakte smo koncentrirali v suhe pelete (1 g/ml) z uporabo a

za nadaljnjo uporabo. Trdne vzorce smo rekonstituirali v destilirani vodi, da smo dobili potrebne odmerke 10, 20 in 40 mg/kg telesne teže za poskus.

2.2. Živali.

Eksperimentalni protokol, uporabljen v tej študiji, je na podlagi etičnih postopkov in znanstvene oskrbe pregledala in odobrila bolnišnica Suzhou vTradicionalna kitajska medicina- Odbor za institucionalno oskrbo in uporabo živali, Suzhou, Kitajska (SHTCM-IACUC; številka odobritve: PNU- 2016-0003). Vsi podganji samci (sev Sprague Dawley) z ag so bili kupljeni pri Šanghajskem laboratorijskem raziskovalnem centru za živali v skladu s smernicami Nacionalnega inštituta za zdravje. Živali so imele prost dostop do standardne prehrane (AIN-93 M) in vode iz pipe ad libitum in so bile nameščene posamično v odstotkih relativne vlažnosti iz nerjavečega jekla ter izpostavljene 12-urni naravni svetlobi in 12-urni temi na dan.

2.3 Načrt eksperimenta.

Loperamid je bil uporabljen za indukcijo zaprtja pri podganah v skladu s prejšnjimi študijami [32, 33]. Skupaj 60 podgan je bilo naključno razdeljenih v 5 skupin (na skupino): A: normalna skupina (NG), B: modelna skupina (skupina, zdravljena z vehiklom Lop plus), C: skupina podgan z zaprtjem, zdravljenih z nizko vsebnostjo vodnega ekstrakta Herba Cistanche (skupina, zdravljena z Lop plus LAEHC), D: skupina podgan z zaprtjem, zdravljenih s srednjim vodnim izvlečkom Herba Cistanche (skupina, zdravljena z Lop in MAEHC), in E: skupina podgan z zaprtjem, zdravljenih z visoko vsebnostjo vodnega izvlečka Herba Cistanche (skupina, zdravljena z zdravilom Lop in HAEHC). Skupina A je bila zdravljena z navadno fiziološko raztopino (10 ml/kg); Skupina B je bila zdravljena z loperamidom

(4 mg/kg); Skupina C je bila zdravljena z loperamidom (4 mg/kg) in nizkim vodnim ekstraktom Herba Cistanche (1 g/kg); Skupina D je bila zdravljena z loperamidom (4 mg/kg) in srednjim vodnim ekstraktom Herba Cistanche (2 g/kg), skupina E pa z loperamidom (4 mg/kg) in visokim vodnim ekstraktom Herba Cistanche (4 g/kg). kg). Vsem podganam iz normalne skupine so injicirali 0,9-odstotni natrijev klorid, medtem ko so druge injicirali loperamid v 0,9-odstotnem natrijevem kloridu dvakrat na dan 3 zaporedne dni, da bi povzročili zaprtje. Vodni izvleček Herba Cistanche je bil suspendiran v vodi in je bil dajan peroralno enkrat na dan od 4. do 18. dne v skupini C, skupini D in skupini E, medtem ko sta skupini A in B prejeli dosledno količino vode z gavažo.

2.4. Kromatografski pogoj.

Profiliranje HPLC je bilo izvedeno v sistemu tekočinske kromatografije Shimadzu (Tokio, Japonska), sestavljenem iz črpalke LC-20AT in

smo spremljali pri 330 nm pri 30 C. Izokratična mobilna faza je bila sestavljena iz metanola 0,1 odstotka mravljinčne kisline (80 : 20, v/v) in je tekla pri pretoku 1,0 ml/min . Kromatografsko ločevanje je bilo

velikost delcev 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Kitajska).

2.5. Analiza vadbe, vnosa hrane, vnosa vode, telesa

Gumijev (vodno suspenzijo 20 odstotkov oglja in 10 odstotkov gumijev) smo dajali peroralno v volumnu 25 ml/kg vsaki živali. Po 30 minutah so bile živali humano žrtvovane z izpahom materničnega vratu in razrezane. Prehodili smo tanko črevo od pilorusa do slepega črevesa in izmerili razdaljo, ki jo pokriva moka iz oglja, ter skupno dolžino tankega črevesa. Za posamezno podgano je bil odstotek črevesnega prehoda izračunan kot odstotek razdalje, ki jo je prepotovala moka iz oglja glede na celotno dolžino tankega črevesa. Naslednja enačba izračuna stopnjo črevesnega prehoda (v odstotkih): razdalja, ki jo prepotuje oglje/razdalja od pilorusa do slepega črevesa 100 odstotkov.

2.6. Odvzem vzorcev krvi in ​​tkiv. Na koncu poskusnega obdobja so bile podgane izpostavljene 12-urnemu postu, vendar jim je bil omogočen prost dostop do vode. Vse podgane smo nato 30 minut kasneje anestezirali z intraperitonealno injekcijo natrijevega pentobarbitala (50 mg/kg) in jih postavili na mizo z uravnano temperaturo. Vzorce krvi smo zbrali in centrifugirali pri 3500 obratih na minuto 15 minut, da smo dobili serum. Debelo črevo smo takoj razdelili in splaknili z običajno fiziološko raztopino pri 4 °C ter nato razdelili na dva dela. En fragment je bil fiksiran v 10-odstotnem formalinu in obdelan v razcepljenem parafinu za kasnejšo imunohistokemijsko (IHC) analizo, medtem ko je bil drugi del teže in las. Spremembe v vadbi, vnosu hrane, vode

shranjevali pri 80 C, dokler niso bili testirani. vnos, telesno težo in dlako so opazovali in beležili dnevno v celotnem poskusnem obdobju. Opazili smo "spremembe v vadbi" po posebnih korakih: lastno izdelana škatla (60 cm visoka, 50 cm dolga in 80 cm široka s temno obrobno steno) se uporablja za test na prostem; bela podlaga je bila s črno črto razdeljena na diamante (12 cm) v temni in tihi sobi; 100 W žarnica je visela 1 m nad sredino škatle; podgane so bile postavljene na sredino škatle 4., 6., 12. in 18. dan modeliranja. Število kvadratov, skozi katere so podgane šle v 5 minutah, je bilo uporabljeno kot rezultat vodoravnega gibanja, čas pokončnega položaja podgan v 5 minutah pa je bil uporabljen kot rezultat navpičnega gibanja. Vodoravni in gibalni rezultati ter navpični gibalni rezultati kažejo na količino vadbe podgan. Vsaka podgana je bila izmerjena enkrat [34, 35].

Cistanchelahko razbremenizaprtje

2.7. Merjenje fekalnih parametrov.

Na zadnji dan peroralnega dajanja smo pelete svežega blata iz vsake SD podgane zbirali v epruvete z okroglim dnom za 6 ur in zabeležili skupno težo vsake skupine. Za določitev vsebnosti fekalne vlage smo uporabili električno tehtnico za sušenje peletov blata, dokler ni bila dosežena konstantna teža, in izmerili suho težo. Vsebnost vlage

2.8. Ocena GAS, MTL, SS in CGRP.

Koncentracije gastrina (GAS), motilina (MTL), somatostatina (SS) in peptida, povezanega z genom kalcitonina (CGRP) v serumu so bile ocenjene z ELISA z uporabo komercialno dostopnih kompletov.

2.9. Histološka analiza.

Prečna črevesa, zbrana pri podganah SD, so bila 12 ur fiksirana z 10-odstotnim formalinom, vstavljena

m debele rezine, ki so bile obarvane s hematoksilinom in eozinom (H&E, Sigma-Aldrich, MO, ZDA). Morfološke značilnosti teh odsekov so opazovali pod svetlobnim mikroskopom, nato pa so izmerili dolžino resic, debelino kripte in debelino mišic z uporabo Leica Application Suite (Leica Microsystems, Švica).

2.10. Imunohistokemijska analiza.

Sledili smo metodam Zhu et al. (2016) [36]; neobarvani 5 m odseki so bili

obarvan s kunčjim anti-c-kitom (1:100) pri 4 C čez noč. Uporabljena je bila metoda sekundarnega protitelesa in kompleksa avidin-biotin-peroksidaza v skladu z navodili proizvajalca. Za odpravo nespecifične vezave je bila uporabljena imunoglobulinsko negativna kontrola. Izrazne ravni c-kita

2.11. Analiza stopnje črevesnega prehoda.

Razmerje črevesnega prehoda je bilo izvedeno v skladu s predhodno prijavljenimi protokoli [36]; na kratko, po 14 dneh zdravljenja so bile vse podgane SD podvržene 12-urnemu postu, vendar jim je bil omogočen prost dostop do vode.

Verižna reakcija s polimerazo v realnem času. Ravni genske ekspresije mRNA c-kit, SCF in PI3K v debelem črevesu so bile določene s kompletom za ekstrakcijo celotne RNK (TIANGEN Biotech,

Peking, Kitajska) v skladu s protokoli proizvajalca. PCR v realnem času je bil izveden s sistemom ABI StepOnePlus Real-Time PCR (ABI). SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japonska) je bil uporabljen za odkrivanje produktov PCR. Reakcije so bile izvedene v treh izvodih. Nato je bilo tkivo svežega debelega črevesa podgan, ki je tehtalo 0,5 g, homologno

l) smo ekstrahirali v skladu z navodili proizvajalca z uporabo reagenta TRIzol (Invitrogen, ZDA). Komplet za reverzno transkripcijo-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) smo uporabili za sintezo prve verige cDNA v skladu s protokolom proizvajalca. Vsi ciljni parametri so prikazani v tabeli 1. Protokol cikla je bil pod naslednjimi pogoji: 95 C za 5 minut (denaturacija DNA), čemur je sledilo 40 ciklov 95 C za 15 s, 60 C za 20 s in 72 C za 40 s. Na koncu ciklov pomnoževanja je bila izvedena analiza talilne krivulje.

2.12. Western blot analiza.

Vsebnost beljakovin c-kit in SCF v homogenatih vzorcev debelega črevesa je bila ocenjena z Western blotom. Na kratko, skupne beljakovine homogenatov so bile določene s testom bicinhoninske kisline (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, ZDA). Natrijev dodecil sulfat-poliakrilamidni gel (SDS-PAGE) je bil uporabljen za ločevanje proteinov v sistemu za elektroforezo BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, ZDA). Proteine ​​smo nato prenesli na membrane iz poliviniliden difluorida (PVDF). Po 2-urnem zdravljenju z blokirnim pufrom v TBS, ki je vseboval 5 odstotkov nemastnega mleka pri sobni temperaturi, smo PVDF membrane inkubirali čez noč z 1 : 1000 razredčenim anti-c-kitom (Santa Cruz, CA, ZDA), 1 : 500 razredčenim anti-c-kitom. SCF (Sigma, MO,

ZDA) in 1: 8000 razredčenih protiteles proti aktinu (Kangchen, Šanghaj, Kitajska). Vezavo primarnega protitelesa smo odkrili z uporabo ustreznega sekundarnega protitelesa, konjugiranega s HRP (Beyotime, Jiangsu, Kitajska). Za detekcijo kemiluminiscence sta bila uporabljena izboljšan komplet za kemiluminiscenco (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, ZDA) in Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong). Kot nadzor obremenitve je bil uporabljen gospodinjski prolaktin. Količina ekspresije beljakovin je predstavljena glede na ravni aktina.

2.13. Statistična analiza.

Podatki meritev so bili sporočeni kot povprečna standardna napaka povprečja (SEM) in analizirani s SPSS

16.0 programska oprema (SPSS, Chicago, IL, ZDA). Za določitev pomembnih razlik v vseh parametrih je bila uporabljena enosmerna analiza variance (ANOVA), ki ji je sledil Duncanov test večkratnega razpona. Vrednosti so veljale za statistično pomembne pri

Cistanchedecokcija je dobro zdravilo za zdravljenjezaprtje

3. Rezultati

3.1. Sestava in funkcionalne sestavine Herba Cistanche.

Kot je prikazano na sliki 1, korenine Herba Cistanche vsebujejo visoke koncentracije več bioaktivnih sestavin, povezanih z odvajalnimi učinki. Koncentraciji celotnega ehinakozida in skupnega verbaskozida sta bili 0,64 mg/g oziroma 0,16 mg/g. S tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC) sta bila v LP ob ustreznem retenzijskem času odkrita dva vrha, ki kažeta na visoke ravni ehinakozida in verbaskozida.

3.2. Splošno opazovanje.

Podgane SP niso poginile ves čas poskusa, kar kaže na boljšo varnost in delovanje živalskega modela. V primerjavi s skupino A so podgane v modelni skupini pokazale puhasto dlako, utrujenost, suho blato in

poslabšala s podaljšanjem časa modeliranja.

3.3. Vpliv AEHC na število blata in vsebnost vlage pri podganah z zaprtjem, ki jih povzroča loperamid.

V primerjavi z običajnimi iztrebki so bili iztrebki v skupinah B, C, D in E suhi, majhni in trdi ter pred zdravljenjem niso bili zapečeni.

navsezadnje so podganam injicirali loperamid (zdravljene z zdravilom so ublažile simptome kot telo in 3(b)).

teža se med vsemi poskusnimi skupinami ni pomembno razlikovala, čeprav je skupina E pokazala nekoliko nižjo telesno težo kot druge skupine (slika 2(a)). Poleg tega so podgane SD z zaprtjem pojedle znatno manj hrane kot skupina A ( ), medtem ko razlike med skupinami B, C, D in E (slika 2(b)) niso bile pomembne. Tudi poraba vode se ni spremenila med skupinama A in skupino B. Poleg tega ni bilo zaznati bistvenega povečanja porabe vode v

da zdravljenje z AEHC ni povzročilo nobene spremembe. Čeprav je bila tudi stopnja črevesnega tranzita v skupinah C, D in bistveno višjaSkupine C, D in E so imele bistveno nižje razmerje kot skupina A.

3.4. Učinek AEHC na hitrost prehoda skozi tanko črevo pri podganah z zaprtjem, ki jih povzroča loperamid.

Kot je razvidno iz slike 4, med petimi skupinami niso zaznali razlik v osnovnem času prehoda skozi tanko črevo. Skupina B ima izrazito nižje pogonsko razmerje prahu oglja v primerjavi s skupino A (𝑃 < 0.01).="" čeprav="" je="" bila="" stopnja="" črevesnega="" tranzita="" v="" skupinah="" c,="" d="" in="" e="" tudi="" bistveno="" višja="" kot="" v="" skupini="" b="" (𝑃=""><0,05), so="" imele="" skupine="" c,="" d="" in="" e="" bistveno="" nižja="" razmerja="" kot="" skupina="">

3.5. Poseg z AEHC delno izboljša funkcijo indeksa gibljivosti debelega črevesa.

Serumske ravni GAS in MTL, dobljene pri podganah skupine B, so se znatno znižale v primerjavi s tistimi iz skupine A (𝑃 < {{0}}.01="" oz.).="" po="" drugi="" strani="" pa="" imajo="" skupine="" c,="" d="" in="" e="" (𝑃="">< 0.05="" oz.)="" dejansko="" višje="" ravni="" gas="" in="" mtl="" zaradi="" uporabe="" izvlečkov="" herba="" cistanche="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" b="" vrednosti="" ss="" pri="" podganah="" skupine="" b="" so="" bile="" višje="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" skupine="" c,="" d="" in="" e="" imajo="" oslabljene="" ravni="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (slika="" 5).="" v="" primerjavi="" s="" podganami="" z="" zaprtjem="" so="" bile="" ravni="" cgrp="" pri="" normalnih="" podganah="" skupine="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" in="" v="" skupinah="" c,="" d="" in="" e,="" ki="" so="" prejemale="" zdravilo="" herba="" cistanche,="" konstantne="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Histološka sprememba debelega črevesa.

Da bi raziskali, ali lahko zdravljenje z AEHC povzroči strukturno spremembo tkiva debelega črevesa, so izmerili dolžino resic, debelino plasti kripte in debelino mišic v prečnem kolonu podgan v petih skupinah po barvanju s H&E. Če primerjamo patologijo debelega črevesa podgan v vsaki skupini, je bila sluznica debelega črevesa gladka in vsebuje majhne arterije in majhne vene v submukozi ter veliko število maščobnih celic. Poleg tega je bila mišična plast sestavljena iz gladkih mišičnih celic in subseroza je bila popolna. Povprečna dolžina resic je bila bistveno krajša v skupini B kot v skupini A (𝑃 < {{0}}.01).="" vendar="" se="" je="" povprečna="" dolžina="" resic="" v="" skupini="" c="" močno="" povečala="" za="" več="" kot="" 30="" odstotkov="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" b="" (sliki="" 6="" in="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" medtem="" se="" povprečna="" dolžina="" resic="" močno="" poveča="" v="" skupinah="" d="" in="" e="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" b="" (sliki="" 6="" (a)="" in="" 6="" (b))="" (𝑃="">< 0,01).="" poleg="" tega="" je="" bila="" sprememba="" debeline="" mišic="" zelo="" podobna="" dolžini="" resic.="" v="" skupini="" b="" debelina="">

je bila dramatično tanjša v primerjavi s skupino A. Vendar se je raven debeline mišic v skupinah C, D in E povečala za 30–35 odstotkov v primerjavi s skupino B (sliki 6 in 7). Na splošno te ugotovitve kažejo, da lahko AEHC poveča dolžino resic in debelino mišic v debelem črevesu zaprtih podgan.

3.7. Dajanje zdravljenja z AHEC Povečano izražanje beljakovin c-Kit in SCF.

Njegovo imunoreaktivnost so odkrili v debelem črevesu, saj so bile celice v vseh skupinah pozitivne na c-kit. Kot je prikazano na sliki 8, je bila raven izražanja c-kit v skupini B nižja kot v skupini A (𝑃 < 0.05).="" stopnja="" izražanja="" c-kita="" v="" skupini="" c="" je="" bila="" višja="" kot="" v="" skupini="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" medtem="" ko="" je="" bilo="" več="" c-kita="" prisotnega="" v="" skupinah="" d="" in="" e="" kot="" v="" skupini="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" po="" 2-tedenskem="" zdravljenju="" z="" različnimi="" koncentracijami="" vodnega="" izvlečka="" herba="" cistanche="" so="" z="" western="" blot="" analizo="" odkrili="" ravni="" ekspresije="" beljakovin="" c-kit="" in="" scf.="" western="" blot="" analiza="" je="" pokazala,="" da="" so="" bile="" ravni="" izražanja="" c-kit="" in="" scf="" izjemno="" nižje="" po="" zdravljenju="" z="" loperamidom="" v="" debelem="" črevesu="" podgan="" (slika="" 9).="" slika="" 8(e)="" prikazuje,="" da="" se="" je="" zmanjšan="" c-kit="" pri="" podganah="" z="" zaprtjem="" znatno="" povečal="" za="" 31,2="" odstotka="" po="" zdravljenju="" podgan="" s="" 500="" µg/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" poleg="" tega="" je="" zdravljenje="" s="" 100="" in="" 200="" g/ml="" aehc="" zvišalo="" ravni="" izražanja="" proteina="" c-kit.="" ekspresija="" proteina="" scf="" se="" je="" znatno="" povečala="" za="" 20,1,="" 24,7="" in="" 8,4="" odstotka="" pri="" zdravljenju="" s="" 100,="" 200="" oziroma="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (slika="" 9).="" 3.8.="" vpliv="" aehc="" na="" ekspresijo="" mrna="" c-kit,="" scf="" in="" pi3k.="" da="" bi="" raziskali,="" ali="" lahko="" zdravljenje="" z="" aehc="" vpliva="" na="" regulacijo="" mrna,="" povezane="" z="" mišično="" kontrakcijo,="" so="" opazili="" spremembe="" v="" nivojih="" ekspresije="" c-kit,="" scf="" in="" pi3k="" v="" debelem="" črevesu="" podgan="" z="" zaprtjem="" z="" uporabo="" specifičnih="" primerjev.="" rezultati="" so="" pokazali,="" da="" so="" bile="" ravni="" mrna="" c-kit="" v="" skupini="" b="" znatno="" nižje="" v="" primerjavi="" s="" skupino="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" medtem="" ko="" so="" bile="" ravni="" mrna="" v="" skupinah="" c,="" d="" in="" e="" višje="" kot="" v="" skupini="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (slika="" 10).="" pregledali="" smo="" tudi="">

izražanje SCF, liganda kit. Ekspresija mRNA SCF pri podganah skupine B je bila znatno nižja kot v skupini A, medtem ko je zdravljenje z AEHC v skupinah C, D in E povečalo ekspresijo mRNA SCF (slika 10). Poleg tega smo preučili učinek AEHC na izražanje gena PI3K. Na 14. dan je bila raven izražanja gena PI3K znatno višja v skupinah C, D in E kot v skupini B (𝑃 <>