Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Kliknite tukaj za 1. del

Diskusija

V tej študiji so bili feniletanoidni glikozidi pridobljeni izCistanche tubulosa ni vplivalo na viabilnost celic na celicah RBL{{0}}H3 in celicah KU812 pri zdravljenju z 1.0-10.0 µg/mL. ampak,akteozidje bil citotoksičen pri zdravljenju z 100,0 µg/mL (Slika 2B), kot so poročali Saracoglu et al. [30], ki so to pokazaliakteozidizoliran odPhlomic Armeniacain Scutellaria salviifolia sta pokazala citotoksične učinke na celične linije dRLh-84, S-180, P-388/D1 z IC₅₀30-221 µg/mL pri različnih številih celic. Naš rezultat je pokazal, da je inhibicijski učinekakteozidna sposobnost preživetja celic pri zdravljenju s 100 µg/mL, lahko vpliva njegova apoptotična aktivnost.

Alergijska reakcija takojšnjega tipa je vpletena v številne alergijske bolezni, kot so astma, alergijski rinitis in sinusitis. Mastociti igrajo ključno vlogo pri vnetnih in takojšnjih alergijskih odzivih. Naši podatki kažejo, da ima akteozid največji zaviralni učinek na sproščanje -heksosaminidaze iz z IgE senzibiliziranih, z antigenom stimuliranih celic RBL-2H3 v primerjavi z drugimi feniletanoidnimi glikozidi pri zdravljenju z 1.0 ug/mL ( Slika 3). Inhibicijski učinek akteozida na sproščanje -heksosaminidaze pri zdravljenju z 10.0 ug/mL je bil manjši kot pri zdravljenju z 1,0 ug/mL. Kot Sugisawa et al. [31], je to lahko prispevalo k H₂O₂indukcija pri visokih koncentracijah akteozida_,ki bi lahko regulirali kalcijeve signale in degranulacijo na celicah RBL{{0}}H3 [32], vplivali na sproščanje -heksosaminidaze pri 10,0 ug/mLakteozidzdravljenje.

Cistanche deserticola ima številne učinke, kliknite tukaj za več informacij

Degranulacija mastocitov je tesno povezana s [Ca^{2 plus}]i. Inhibicija Ca^{2 plus}influks s protialergijskimi zdravili ima ključno vlogo pri zaviranju degranulacije v mastocitih. [33-34]. Naši rezultati kažejo, da znotrajcelični [Ca^{2 plus}]i raven je bila nižja v celicah RBL-2H3, zdravljenih z akteozidom, stimuliranih z DNP-BSA (Slika 4), kar je skladno z drugimi poročili [34-35], ti rezultati pa se ujemajo s tistimi na sliki 3. Na podlagi teh opažanj menimo, da je zmanjšanje znotrajceličnega [Ca^{2 plus}]i sodeluje pri zaviralnem učinkuakteozidna sproščanje -heksosaminidaze. Dušikov oksid (NO) in H₂O₂sta dve glavni reaktivni kisikovi vrsti (ROS), znani pri uravnavanju kalcijevega signala in degranulacije mastocitov. ROS so potrebni za izločanje -heksosaminidaze in dotok kalcija, nikotinamid adenin dinukleotid fosfat (NADPH) oksidaza pa je v glavnem odgovorna za proizvodnjo ROS v celicah RBL-2H3, ki jih posreduje IgE [29, 32]. Trajno zvišanje citosolnega kalcija prek vnosa kalcija iz skladišča je bilo popolnoma odpravljeno, ko je bila proizvodnja ROS blokirana. Poleg tega je ROS nekoliko povezan z ß-heksosaminidazo in sproščanjem histamina z aktivacijo protein kinaze C (PKC) in stimulacijo IgE v celicah RBL-2H3 [34]. Nadalje, Suzuki et al. [36] so ugotovili, da obstaja pomembna korelacija med inhibicijskimi učinki na sproščanje histamina in 1, 1-difenil-2-piratskim l-hidroksilom (DPPH) ali aktivnostmi odstranjevanja radikalov superoksidnega aniona s kurkuminom povezanih antioksidantov. spojine. Po drugi strani,akteozidima lastnosti lovljenja prostih radikalov na NO radikale in DPPH radikale [9, 37]. Prav tako je akteozid pokazal čistilno aktivnost v aktiviranih človeških levkocitih [38]. Ena od možnosti je, da lahko na zaviralni učinek akteozida na intracelularno sproščanje kalcija vpliva njegova aktivnost NADPH oksidaze pri lovljenju prostih radikalov.

Akteozid je odvisno od odmerka zaviral sproščanje histamina na celici KU812 A23187 in PMA stimulirani (slika 4A).Akteozidinhibiran z glutamatom induciran znotrajcelični Ca^{2 plus}dotoki, ki povzročijo prekomerno proizvodnjo NO in zmanjšano tvorbo ROS [37]. Tako PKC kot Ca^{2 plus}signalne poti so potrebne za sproščanje histamina in levkotrienov iz mastocitov in sistemov glodalcev [39]. To smo domnevaliakteozidima lahko zaviralni učinek na sproščanje histamina preko Ca^{2 plus}priliv. V ta namen smo uporabili A21387 plus PMA za stimulacijo celic KU812 in dokazali učinek zaviranja sproščanja histamina zakteozid. Ta rezultat je podprl našo hipotezo, da lahko akteozid zmanjša sproščanje histamina iz celic KU812 z inhibicijo Ca^{2 plus}influks ali aktivacija PKC.

Nedvomno se domneva, da stimulacija mastocitov s spojino 48/80 sproži aktivacijo signalne transdukcijske poti, ki vodi do sproščanja histamina. Senyshyn et al. [40] so identificirali rekombinantno podenoto G, ki izrazito sinergizira aktivacijo fosfolipaze D s spojino 48/80 v permeabiliziranih bazofilnih celicah. S spojino 48/80-inducirano izločanje je povezano s prehodnim povečanjem citosolnega Ca^{2 plus}. To izločanje sta blokirala kelator kalcija in zaviralec PKC. V tej študiji smo to opaziliakteozidzaviral degranulacijo bazofilnih celic, ki jo je povzročila spojina 48/80-. Vendar pa je bil zaviralni učinek akteozida na sproščanje histamina pri 0.1 ug/mL zdravljenju večji kot pri zdravljenju z 1.0-10.0 ug/mL (slika 4B). Kot Lau et al. [41] so dokazali zaviralni učinekakteozidna sproščanje histamina, ki ga povzroča spojina 48/80, je lahko vključeno v protivnetni učinek akteozida proti edemu, povezanemu s prepustnostjo žil. Možno,akteozidlahko ima več različnih načinov zaviranja sproščanja kemičnega mediatorja iz bazofilnih celic, kar kaže na zapletenost njegovega delovanja. Da pa bi razkrili mehanizem zaviranja sproščanja histamina s tem receptom, je treba izvesti nadaljnje študije.

Med citokini, ki jih proizvajajo bazofilne celice, so ključne molekule TNF-, IL-4, IL-13 in IL-5. Zmanjšanje protivnetnih citokinov iz mastocitov ali bazofilnih celic je eden od ključnih kazalcev zmanjšanih alergijskih simptomov [42]. Kar zadeva TNF-, je proizvodnja večinoma regulirana s Ca^{2 plus}dotok, vendar je proces sproščanja reguliran z dodatnimi mehanizmi, ki morda vključujejo aktivacijo PKC v celicah KU812. Zaviranje [Ca^{2 plus}]i influks je vključen v izražanje citokinov v mastocitih in bazofilnih celicah [34, 43]. Naš rezultat je pokazal, da je 1.0 in 10.0 µg/mLakteozidzmanjšana proizvodnja TNF- in IL-4 iz A23187 in PMA stimuliranih celic KU812 po zdravljenju 16 ur. Akteozid lahko zavira nastajanje TNF- in IL-4 z zmanjšanjem [Ca^{2 plus}] I raven v A23187 plus PMA stimuliranih celicah KU812. Poleg tega so naši rezultati pokazali, da jeakteozidima protialergijski učinek v pozni fazi. Za prihodnost je potrebna potrditev učinka akteozida z uporabo mastocitov ali bazofilnih celic, ki izražajo FcεRI.

Na koncu prvič poročamo, da so akteozid, ehinakozid incistanozidIzvleček izCistanche tubulosa lahko zavre sproščanje -heksosaminidaze iz celic RBL-2H3, senzibiliziranih z IgE, stimuliranih z BSA. Poleg tega lahko akteozid zavira sproščanje histamina, proizvodnjo TNF- in IL-4 na način, ki je odvisen od odmerka, na celicah KU812, stimuliranih z A23187 in PMA. Ti rezultati kažejo na toakteozidbi lahko bil dober kandidat za terapevtsko zdravljenje različnih alergijskih bolezni. Podroben mehanizem za protialergijskim učinkom akteozida je predmet prihodnje študije.

Reference

1 Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Feniletanoidni aminoglikozidi in acilirani oligosladkorji z vazorelaksantnim delovanjem izCistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475

2 Kobayashi H, Oguchi H, Takizawa N, Miyase T, Ueno A, Usmanghani K, Ahmad M. Novi feniletanoidni glikozidi izCistanche tubulosa (SCHRENK) KAVELJ. f. I. Chem Pharm Bull 1987; 35: 3309–3314

3 Tanaka J, su MH, Shimoda H. UčinekCistanche tubulosa izvleček na različne možganske bolezni. Slog hrane 21 2008; 12: 24–26

4 Tanaka J, Su MH, Shimoda H. Funkcije proti staranjuCistanche tubulosaekstrakt. Slog hrane 21 2008; 12: 27–29

5 Tanaka J, Kikuchi M, Shan SJ, Su MH, Shimoda H. Funkcije ekstrakta Cistanche tubulosa za lepoto in rast las. Slog hrane 21 2008; 12: 29–32

6 Tanaka J, Shan SJ, Su MH, Shimoda H. Učinek na presnovo maščobCistanche tubulosa ekstrakt. Slog hrane 21 2008; 12: 30–33

7 Yoshizawa F, Deyama T, Takizawa N, Usmanghani K, Ahmad M. Sestavine Cistanche tubulosaSchrenk (Hook) f. I I. Izolacija in struktura novega feniletanoidnega glikozida in novega neolignanskega glikozida. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930

8 Xiong Q, Tezuka Y, Kaneko T, Li H, Tran LQ, Hase K, Namba T, Kadota S. Zaviranje dušikovega oksida s feniletanoidi v aktiviranih makrofagih. Eur J Clin Pharmacol 2000; 14: 137–144

9 Sahpaz S, Garbacki N, Tits M, Bailleul F. Izolacija in farmakološka aktivnost fenilpropanoidnih estrov iz Marrubium vulgare. J Ethnopharmacol 2002; 79: 389–392

10 He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ,torPF. Ehinakozid izzove od endotelija odvisno relaksacijo v aortnih obročih podgan preko poti NO-cGMP. Planta Med 2009; 75: 1400–1404

11 Zhang HQ,WengXJ, Chen LL, Li X. Vpliv akteozida Cistanche tubulosa (Schenk) Whight na aktivnost telomeraze in imunost starajočih se miši. kitajski J Pharmacol Toxicol 2008; 22: 270–273

12 Lee JH, Lee JY, Kang HS, Jeong H, Moon CH, Whang WK, Kim SS, Sim C. Učinek akteozida na sproščanje histamina in sproščanje arahidonske kisline v mastocitih RBL-2H3. J Arch Pharm Res 2006; 29: 508–513

13 Diaz AM, Abad MJ, Fernandez L, Silvan AM, Santos JD, Bermejo P. Fenilpropanoidni glikozidi iz Scrophularia scorodonia: in vitroprotivnetnodejavnost. Life Sci 2004; 74: 2515–2526

14 Beaven MA, Metzger H. Transdukcija signala s Fc receptorji: primer FcεRI. Immunol Today 1993; 14: 222–226

15 Srivastava D, Arora N, Singh BP.Sodobni imunološki pristopi k zdravljenju alergijskega rinitisa in bronhialne astme. Inflamm Res 2009; 58: 523–536

16 Pelletier C, Guerin-Marchand B, Iannascoli F, Marchand B, David AW, Blank U. Specifične signalne poti pri regulaciji sinteze TNF-mRNA in izločanja TNF-ja v mastocitih RBL-2H3, stimuliranih z visoko -afinitetni IgE receptor C. Inflamm Res 1998; 47: 493–500

17 Schiwartz LB, Lewis RA, Seldin D, Austen KF. Kislinske hidrolaze in triptaze iz sekretornih granul razpršenih človeških pljučnih mastocitov. J Immunol 1981; 126: 1290–1294

18 Cheong H, Choi EJ, Yoo GS, Kim KM, Ryu SY. Desacetilmatricarin, antialergijska komponenta izTaraxacum Platycerium. Planta Med 1998; 64: 577–578

19 Ortega E, Schweitzer-Stenner R, Pecht I. Možne orientacijske omejitve določajo sekretorne signale, ki jih povzroča agregacija receptorjev IgE na mastocitih. EMBO J 1988; 7: 4101–4109

20 Funaba M, Ikeda T, Abe M. Degranulacija v celicah RBL-2H3: regulacija po poti kalmodulina. Cell Biol Int 2003; 27: 879–885

21 Ohno Y, Tanno K, Yamauchi K, Takishima T. Ekspresija genov in proizvodnja faktorja tumorske nekroze s celično linijo bazofilne levkemije podgan (RBL-2H3) s proženjem receptorja IgE. Imunologija 1990; 70: 88–93

22 Butterfield JH, Weiler D, Dewald G, Gleich GJ. Vzpostavitev nezrele linije mastocitov pri bolniku z levkemijo mastocitov. Leuk Res 1988; 12: 345–355

23 Hosoda M,YamayaM, SuzukiT, YamadaN, Kamanaka M, Sekizawa K, Butterfield JH,Watanabe T, Nishimura H, Sasaki H. Učinki okužbe z rinovirusi na proizvodnjo histamina in citokinov s celičnimi linijami človeških mastocitov in bazofilcev. J Immunol 2002; 169: 1482–1491

24 Galli SJ, Kalesnikoff J, Grimbaldeston MA, Piliponsky AM, Williams CM, Tsai M. Mastociti kot "nastavljive" efektorske in imunoregulacijske celice: nedavni napredek. Annu Rev Immunol 2005; 23: 749–786

25 Galli SJ, Gordon JR, Wershil BK. Proizvodnja citokinov z mastociti in bazofili. Curr Opin Immunol 1991; 3: 865–872

26 YamadaP, Isoda H, Han J,TaloreteTP,AbeY. Zaviralni učinek fulvične kisline, ekstrahirane iz kanadskegaSphagnumšote na sproščanje kemičnega mediatorja s celicami RBL-2H3 in KU812. Biosci Biotechnol Biochem 2007; 71: 1294–1305

27 Aase F, Arna, S. Dantrolen preprečuje citotoksičnost glutamata in Ca^{plus 2}sproščanje iz znotrajceličnih zalog v kultiviranih cerebralnih kortikalnih nevronih. J. Neurochem 1991; 56: 1075–1078

28 Yamada P, Zarrouk M, Kawasaki K, Isoda H, Zaviralni učinek različnih tunizijskih oljčnih olj na sproščanje kemičnih mediatorjev in proizvodnjo citokinov z bazofilnimi celicami. J Etnofarmakol 2008; 116: 279–287

29 Kim Y, Lee YS, Hahn JH, Choe J, Kwon HJ, Ro JY, Jeoung D.Hialuronska kislina cilja na CD44 in zavira signalizacijo FcεRI, ki vključuje PKCδ, Rac1, ROS in MAPK, da doseže antialergijski učinek. Mol Immunol 2008; 45: 2537–2547

30 Saracoglu I, Inoue M, Calis I, Ogiwara Y. Študije o sestavinah s citotoksično in citostatično aktivnostjo dveh turških zdravilnih rastlinPhlomis ArmeniacainScutellaria salviifolia. Biol Pharm Bull 1995; 18: 1396–1400

31 Sugisawa A, Umegaki K. Fiziološka koncentracija (-)-epigalokatehin -3-O-galata (EGCg) preprečuje kromosomske poškodbe, ki jih povzročajo reaktivne kisikove vrste v celicah WIL2-NS. J Nutr 2002; 132: 1836–1839

32 Suzuki Y, Yoshimaru T, Matsui T, Inoue T, Niide O, Nunomura S, Ra C. Fc epsilon RI signaliziranje mastocitov aktivira znotrajcelično proizvodnjo vodikovega peroksida: vloga pri regulaciji kalcijevih signalov. J Immunol 2003; 171: 6119–6127

33 Oka T, Sato K, Hori M, Ozaki H, Karaki H. Z navzkrižnim povezovanjem povzročeno sestavljanje aktina s FcεRI posreduje signalizacijo kalcija v mastocitih RBL-2H3. Br J Pharmacol 2002; 136: 837–846 34Tasaka K, Mio M, Okamoto M. Znotrajcelično sproščanje kalcija, ki ga povzročajo sproščalci histamina, in njegovo zaviranje z nekaterimi antialergijskimi zdravili. Ann Allergy 1986; 56: 464–469

35 Horiuti TM, Zaitsu M, Lambert KC, Grady JJ, Estes DM, Curran EM, Brooks Npr., WatsonCS, Goldblum RM. Estrogeni potencirajo sintezo in sproščanje mediatorjev alergije iz mastocitov s povečanjem intracelularnega kalcija. J Allergy Clin Immunol 2005; 115: 189

36 Suzuki M, NakamuraT, Iyoki S, Fujiwara A,WatanabeY, Mohri K. Isobe K, Ono K,Yano S. Razjasnitev protialergijskih aktivnosti spojin, povezanih s kurkuminom, s posebnim poudarkom na njihovih antioksidativnih aktivnostih. Biol Pharm Bull 2005; 28: 1438–1443

37 Koo KA, Kim SH, Oh TH, Kim YC. Akteozid in njegovi aglikoni ščitijo primarne kulture kortikalnih celic podgan pred ekscitotoksičnostjo, ki jo povzroča glutamat. Life Sci 2006; 79: 709–716

38 Lin LC,WangYH, Hou YC, Chang S, LiouKT,Chou YC,WangWY,Shen YC. Zaviralni učinek fenilpropanoidnih glikozidov in iridoidnih glukozidov na proizvodnjo prostih radikalov in ekspresijo b2 integrina v človeških levkocitih. J Pharm Pharmacol 2006; 58: 129–135

39 Kim M, Shichijo M, Miura T, Serizawa I, Inagaki N, Nagai H. pribl^{2 plus}in signaliziranje proteinske kinaze C za sproščanje histamina in sulfidolevkotrienov iz človeških gojenih mastocitov. Biochem Biophys Res Commun 1999; 257: 895–900

40 Senyshyn J, Baumgartner RA, Beaven MA. Kvercetin senzibilizira celice RBL-2H3 na polibazične sekretagoge mastocitov s povečanim izražanjem G_iProteini, ki vežejo GTP, povezani s signalno potjo fosfolipaze C. J Immunol 1998; 160: 5136–5144

41 Lau CW, Chen ZY, Wong CM, Yao XQ, He ZD, Xu HX, Huang Y. Oslabljena relaksacija, posredovana z endotelijem, z akteozidom v aorti podgan: Vloga endotelnega [Ca^{2 plus}] I in pot dušikovega oksida/ciklične GMP. Life Sci 2004; 75: 1149–1157

42 Paul WE, Seder RA, Plaut M. Proizvodnja limfokinov in citokinov s celicami FcεRI. Adv Immunol 1993; 53: 1–29

43 Jeong HJ, Hong SH, Lee DJ, Park JH, Kim KS, Kim HM. Vloga Ca^{2 plus}na izločanje TNF- in IL-6 iz mastocitov RBL-2H3. Cell Signal 2002; 14: 633–639

Izvleček Cistanche tubulosa