Delež koncentrata v prehrani krav molznic v zgodnji laktaciji ima kontrastne učinke na globalne transkriptomske profile levkocitov v obtoku, zdravje in plodnost glede na pariteto

Povzetek:Funkcionalnost krožečih levkocitov pri kravah molznicah je po telitvi zavrta, negativna energijska bilanca pa je dejavnik tveganja. Transkriptomske profile levkocitov so ločeno primerjali pri 44 večkratnih (MP) in 18 prvorodnih (PP) holštajn-frizijskih kravah, ki so prejemale diete z različnim deležem koncentrata, da bi preverili, ali je mogoče imunsko disfunkcijo omiliti z ustrezno prehrano. Po telitvi so krave ponudili bodisi (1) nizek koncentrat (LC); (2) diete s srednjim koncentratom (MC) ali (3) diete z visokim koncentratom (HC) z razmerjem koncentrata v travni silaži 30 %:70 %, 50 %:50 % oziroma 70 %:30 %. Zbrani podatki o fenotipu krav so vključevali metabolite v obtoku, mlečnost ter podatke o zdravju in plodnosti. Opravljeno je bilo sekvenciranje RNA krožečih levkocitov po 14 dneh v mleku. HC dieta je izboljšala energetsko ravnovesje v obeh starostnih skupinah. Pri PP je bilo več različno izraženih genov kot pri kravah MP (460 proti 173, primerjava HC proti LC) z malo prekrivanj. Krave MP na dieti LC so pokazale povečano regulacijo komplementa in koagulacijske kaskade ter prirojenih imunskih obrambnih mehanizmov proti patogenom in so imele trend več primerov mastitisa in slabše plodnosti. Nasprotno pa so krave PP na dieti HC pokazale večji imunski odziv na podlagi izražanja genov in fenotipskih podatkov ter daljšega intervala od telitve do spočetja. Levkociti krav MP in PP so se torej različno odzvali na dieto med starostjo, oskrbo s hranili in imunostjo, kar je vplivalo na njihovo zdravje in kasnejšo plodnost.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Ključne besede:poporodna imunosupresija; prirojena imunost; metabolizem; levkociti; laktacijske diete; transkriptom; razmnoževanje; krave

1. Uvod

Za krave molznice je v zgodnjem obdobju po porodu značilna imunosupresija, ki vpliva na prirojeno in adaptivno imunost, vključno s celično posredovano in humoralno imunostjo. Krožeči levkociti se med vnetjem rekrutirajo v tkiva, kot sta mlečna žleza in endometrij. Prejšnje študije pa so pokazale zmanjšanje tako števila levkocitov kot njihove funkcionalne zmogljivosti v peripartalnem obdobju [1,2]. Učinki, o katerih so poročali, vključujejo oslabljeno fagocitozo in aktivnost oksidativnega izbruha [3–5], zmanjšano odzivnost T-celic v obtoku na mitogene dejavnike in zmanjšano proizvodnjo imunoglobulina s celicami B [6,7]. Vzroki so večfaktorski, vendar se zdi, da so povezani z delitvijo hranil v korist proizvodnje mleka na začetku laktacije, kar ogroža imunsko funkcijo [8–10]. Levkociti za svoje vzdrževanje in delovanje potrebujejo zadostno količino glukoze, različnih maščobnih kislin in holesterola ali oksisterolov [8,11,12]. Vendar je razpoložljiva oskrba s hranili prednostno usmerjena v mlečno žlezo po telitvi, kar zahteva približno 25 % več presnovljive energije in beljakovin, kot jih zagotovi vnos krme [8,13,14]. Poleg tega so za porod značilni vnetni procesi, povezani s spremembami v izločanju različnih prostaglandinov, steroidov in citokinov ter morebitne poškodbe med samim postopkom poroda [15–17]. Vnetni odzivi na telitev in presnovki, sproščeni med mobilizacijo tkiva, imajo močne anoreksične učinke, dodatno zmanjšujejo vnos in poslabšajo negativno energijsko bilanco (NEB) [18]. Ko vnos krme ne more zadostiti naraščajočim potrebam po energiji, krave vstopijo v obdobje NEB, pri čemer nekateri posamezniki postanejo presnovno neuravnovešeni [19–21]. NEB je povezan z inzulinsko rezistenco, zmanjšano ekspresijo receptorja jetrnega rastnega hormona (GH) in nižjo sintezo IGF-1 v jetrih [22,23]. Ločitev GH z inzulinom pri kravah po porodu je prilagoditev, ki daje prednost oskrbi z glukozo v tkivih, kot so epitelne celice dojke, v katerih je privzem neodvisen od inzulina [8]. V tej situaciji je tekmovanje za oskrbo z energijo med mlečno žlezo in imunskim sistemom neizogibno, saj sta oba odvisna od istih bistvenih substratov in sta oba glavna porabnika energije. Kvidera idr. [24] so dokazali, da je za aktiviranje popolnega imunskega odziva pri kravah potrebno 2,5 do 3,1 kg glukoze na dan. To je podobno ocenjeni potrebi po 2,7 kg/dan glukoze, ki jo prevzamejo epitelijske celice dojke za proizvodnjo mleka 40 kg/dan [8].

Mobilizacija tkiv je povezana tudi s povečanimi koncentracijami neesterificiranih maščobnih kislin (NEFA), beta-hidroksibutirata (BHB) in zmanjšanim IGF-1 v obtoku, kar vse prispeva k imunski disfunkciji [5,9,10,20]. ]. Na primer, naša nedavna študija je pokazala, da je bila adhezija levkocitov med celicami zavrta, ko je koncentracija NEFA presegla 750 µM [25]. Čeprav je mobilizacija tkiva normalna prilagoditev sesalcev za podporo laktaciji, so številne študije pokazale, da ima huda NEB velik vpliv na kasnejšo sposobnost krave, da pravočasno zanosi [26]. To je lahko posledica različnih dejavnikov, vključno z zamudami pri obnovi ustreznega materničnega okolja [2]; podaljšano obdobje anovulacije [27], slabo intrafolikularno okolje [28] in slabša kakovost oocitov [29]. Telice molznice običajno telijo pri približno 90 % svoje zrele telesne teže [30]. Naša prejšnja študija je pokazala, da so imele prvorodne (PP) krave višje koncentracije inzulina, IGF-1 in leptina v krvnem obtoku, nižje koncentracije presnovkov v krvi (BHB, NEFA in sečnine) in višje koncentracije glukoze kot mnogorodne (MP ) krave vsaj 7 tednov po telitvi [31,32]. To kaže, da je v zgodnji laktaciji pri kravah PP manj odklopa somatotrofne osi v primerjavi s kravami MP, kar je povezano s šibkejšim določanjem prednosti hranil v mlečni žlezi, kar omogoča nadaljnjo rast. Profili izražanja genov v krožečih levkocitih se razlikujejo tudi med kravami PP in MP med zgodnjo laktacijo [33].

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Optimiziranje prehranjevanja v sušnem obdobju lahko poveča vnos suhe snovi (DMI), zmanjša incidenco periparturientne bolezni in izboljša plodnost [34]. Obstajajo splošne smernice za zmanjšanje tveganja bolezni v zvezi s hranjenjem in upravljanjem [35]. Vendar pa je na voljo malo informacij o dietnih formulacijah za posamezno kravo s presnovnim neravnovesjem v poporodnem obdobju, ki lahko izboljšajo imunsko funkcijo, zmanjšajo pojavnost bolezni in izboljšajo poznejše reproduktivne sposobnosti. Oblikovanje diet z visokim potencialom vnosa hranil je praktičen pristop [36]. V tej študiji so bile krave v zgodnji laktaciji ponujene diete z nizko (LC), srednjo (MC) ali visoko koncentratno (HC) dieto na podlagi deležev koncentrata v travni silaži ter učinkov na presnovno zdravje in bolezen ter sistemsko imunost ( z ocenjevanjem globalnih profilov izražanja genov v obtoku levkocitov). Podatki za krave PP in MP so bili analizirani ločeno, da bi se izognili kakršnim koli zmedenim učinkom zaradi paritete. Naša hipoteza je bila, da bi diete z visoko koncentracijo izboljšale delovanje imunskega sistema in koristile plodnosti.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

2. Rezultati

2.1. Vpliv diete na vnos suhe snovi, mlečnost, energijsko ravnovesje in metabolite v krvi

Parametri mleka, telesna teža (BW), DMI, ocena telesne kondicije (BCS), energijska bilanca (EBAL) in presnovki v krvi za krave MP in PP pri približno 14 dneh v mleku (DIM) so povzeti v tabeli 1. DMI za krave MP se je pomembno razlikovalo med tremi dietnimi skupinami z vrstnim redom HC > MC > LC (p < 0.01–0.0{{11 }}1). Mlečnost pri kravah MP, ki so prejemale HC diete, je bila znatno višja od tistih, ki so prejemale LC diete (p < 0.05). Razlika v energijsko popravljeni mlečnosti (ECM) med skupinama LC in HC je bila pomembna (p < 0.05), z vmesnimi vrednostmi v skupini MC. Vrednosti EBAL v vseh treh skupinah MP so bile negativne, vendar so bile tiste pri kravah MC in HC bistveno boljše (manj negativne) kot pri kravah LC (p < 0,01). Krožeče koncentracije tako glukoze (p < 0,01) kot IGF-1 (p < 0,001) pri kravah HC so bile značilno višje kot pri kravah LC. Krave MP, ki so bile na dieti s HC, so prav tako proizvedle manj sečnine v obtoku (p <0,001), BHB (p <0,05) in NEFA kot tiste, ki so bile na dieti z LC s koncentracijami LC > MC > HC, čeprav so razlike v koncentracijah NEFA med dietnimi skupinami niso bili statistično pomembni.

Tabela 1. Skupni vnosi suhe snovi, parametri mleka, telesna teža, energijska bilanca, ocena telesne kondicije in metaboliti v krvi približno 14 dni po telitvi, analizirani glede na pariteto in prehrano 1,2

Pri kravah PP so imele tiste, ki so prejemale dieto MC ali HC, višji DMI kot tiste, ki so prejemale dieto LC (p < {{0}}.01). Mlečnost ni bila bistveno drugačna. EBAL je bil pozitiven pri kravah z MC ali HC dieto, medtem ko je bil pri tistih z LC dieto negativen. Razlike v EBAL med kravami HC in LC PP so bile pomembne (p < 0,05). Od izmerjenih metabolitov so se med skupinami razlikovale le koncentracije sečnine, ki so bile nižje pri kravah HC (LC > MC > HC, p < 0,001 za LC v primerjavi s HC ali MC).

2.2. Vpliv diet na vnetne parametre

Učinki prehrane na vnetne parametre, izmerjene v maternici in mlečni žlezi, so predstavljeni v tabeli 2. Pri kravah PP je bilo razmerje med polimorfonuklearnimi levkociti in materničnimi epitelijskimi celicami (PMN: UEC), zbranimi iz maternice s pomočjo citoščetke, bistveno višje za krave na HC v primerjavi z LC dieto (p < 0.05). Pri kravah MP je bil trend v isti smeri, z LC < MC < HC, vendar ni dosegel statistične pomembnosti. V mleku so imele krave MP na dieti LC bistveno višji SCC kot tiste na dieti MC ali HC (p < 0,05), medtem ko je bil pri kravah PP neznačilni trend v nasprotni smeri. . Koncentracije mlečne N-acetil- -d-glukozaminidaze (NAGase) in laktat dehidrogenaze (LDH), mlečnih encimov, ki kažejo na mastitis, so sledile enakim splošnim trendom kot vrednosti SCC, vendar ni bilo pomembnih razlik. Ti rezultati so bili podprti z zdravstvenimi kartoni. Pri kravah MP na dieti HC ni prišlo do nobenega primera mastitisa (0/15), medtem ko so pri 4/14 (28,6 %) krav na dieti LC v 16 dneh po telitvi diagnosticirali klinični mastitis. Trend je bil ponovno v nasprotni smeri pri kravah PP z eno od šestih (16,7 %) na dieti LC s kliničnim mastitisom v primerjavi z enim primerom kliničnega in dvema primeroma subkliničnega mastitisa na dieti HC (50 %).

Tabela 2. Parametri vnetja približno 14 dni po telitvi glede na pariteto in prehrano 1,2.

2.3. Podatki o plodnosti

Podrobnosti o podatkih o plodnosti so podane v tabeli 3. Pri kravah MP so tiste na dieti LC potrebovale nekoliko dlje časa, da so zanosile in so potrebovale več storitev na spočetje kot krave HC (2,4 ± 0,42 v primerjavi z 1,6 ± 0.23), čeprav več krav HC ni bilo postreženih (odločitev vodstva) ali pa sploh niso zanosile (6{{10}}.0% v primerjavi z 71,4 %). Vendar nobena od teh razlik ni bila pomembna. Za krave PP je veljalo ravno obratno, pri kravah LC je bil najkrajši interval do spočetja 29 dni (p < {{20}},05), pri čemer je pet od šestih živali spočelo svojo prvo serijo. . V nasprotju s tem polovica skupine HC bodisi ni prejela (n=2) bodisi ni uspela zanositi (n=1), pri čemer so trije, ki so zanosili, zahtevali 2,0 ± 0,41 storitve na spočetje. To je povzročilo, da je imela skupina HC znatno višjo oceno "in calf by" (ICB) (p < 0,05).

Tabela 3. Podatki o plodnosti glede na pariteto in prehrano 1,2

2.4. Transkriptomski profili levkocitov pri kravah z različnimi deleži koncentrata

Referenčni goveji genom ARS-UCD 1.2, ki ga zagotavlja RefSeq (https://www. ncbi.nlm.nih.gov/assembly, dostopan 1. maja 2022), vsebuje 35.158 genov, od katerih je bilo 19.001 levkocitnih genov mogoče kvantificirati, ko se sekvenciranje glasi v datotekah FASTQ so bile vanj preslikane. Vulkanske ploskve, ki prikazujejo profile izražanja pri kravah MP in PP, ki so prejemale tri različne diete, so predstavljene na sliki 1. Pri kravah MP je bilo 173 različno izraženih genov (DEG) v primerjavi med HC in LC, 126 med MC in LC in 68 za HC proti MC (dodatna datoteka S1A–C). Vennov diagram je pokazal, da noben gen (skupni DEG) ni bil pomemben v vseh treh primerjavah prehrane (slika 2A). Pri kravah PP je bilo v primerjavi HC proti LC 460 DEG, 178 med MC proti LC in 128 med HC proti MC (dodatna datoteka S2A–C). Samo en skupni gen (DCN, sprememba gube (FC)=−7.3) je bil pomemben v vseh treh prehranskih primerjavah (slika 2B). Ta kodira dekorin, beljakovino, ki igra vlogo pri sestavljanju kolagenskih vlaken. Na splošno je bilo opazno, da je bilo v prehranskih primerjavah ekspresije genov za levkocite pri PP ugotovljeno večje število DEG kot pri kravah MP kljub manjši velikosti skupine, pri čemer je bila večina teh genov reguliranih na HC dieti. Poleg tega je bilo malo prekrivanja genov, identificiranih med različnimi starostnimi skupinami, kot je prikazano v Vennovih diagramih na sliki 3. To nakazuje, da so imele diete različne učinke na transkriptom levkocitov pri PP in MP kravah. V obeh starostnih skupinah so bile največje razlike ugotovljene med kravami na LC in HC dietah, zato smo se v nadaljnjih analizah osredotočili na to primerjavo.

Slika 1. Grafi vulkanov prikazujejo profile izražanja pri kravah MP in PP, ki so prejemale tri različne diete. (A) MP krave HC proti LC, (B) MP krave HC proti MC, (C) MP krave MC proti LC, (D) PP HC proti LC, (E) PP HC proti MC in (F) ) PP MC proti LC. HC: visok koncentrat (n=6 pri kravah PP in n=14 pri kravah MP), MC: srednji koncentrat (n=5 pri kravah PP in n=15 pri kravah MP ) in LC: nizek koncentrat (n=6 pri PP kravah in n=14 pri MP kravah). Spremembe zgiba so bile dnevnik2-pretvorjene. Zelene pike označujejo znižano regulirane gene s p (BH) < 0.05 in kratne spremembe Manjše ali enake −1,5, rdeče pike pa označujejo regulirane gene s p (BH) < {{ 16}}.05 in kratne spremembe Večje ali enako 1,5. Oranžne pike označujejo gene s p (BH) < 0,05, a absolutne spremembe < 1,5.

Slika 2. Vennovi diagrami, ki prikazujejo različno izražene gene s krožečimi levkociti med tremi prehranskimi skupinami pri (A) kravah z več parami (MP) in (B) kravah prvorotkah (PP). HC: visok koncentrat (n=6 pri kravah PP in n=14 pri kravah MP), MC: srednji koncentrat (n=5 pri kravah PP in n=15 pri kravah MP ) in LC: nizek koncentrat (n=6 pri PP kravah in n=14 pri MP kravah).

Slika 3. Vennovi diagrami, ki prikazujejo različno izražene gene s krožečimi levkociti med kravami PP in MP v primerjavi (A) visokega koncentrata (HC) z nizkim koncentratom (LC); (B) HC z srednjim koncentratom (MC) in (C) MC z LC. HC: n=6 pri kravah PP in n=14 pri kravah MP, MC: n=5 pri kravah PP in n=15 pri kravah MP in LC: n {{5 }} pri kravah PP in n=14 pri kravah MP

2.5. Primerjava profilov ekspresije genov levkocitov med kravami večkratnicami, ki so prejemale diete z visoko ali nizko koncentracijo

Prvih 20 navzgor in navzdol reguliranih DEG, razvrščenih po vrednostih p (prilagojeno BH) pri kravah MP, hranjenih s HC, v primerjavi s tistimi, hranjenimi z LC dieto, je podanih v dodatni datoteki S1D, E. Med navzgor reguliranimi DEG je bila večina vključenih v GO funkcije procesa imunskega sistema, metabolizma in odziva na dražljaje, pri čemer imajo številni kodirni proteini več vlog. Na primer, ALAS2 (kodira 50 -aminolevulinat sintazo 2) ima vlogo pri presnovnem procesu, odzivu na dražljaje in razvojnem procesu. COL1A1 (veriga kolagena tipa I alfa 1) in DAB2 sodelujeta pri metabolizmu, odzivu na dražljaje, večceličnem organizmu, gibanju in razvoju. Prvih 20 znižano reguliranih genov ponazarja jasno temo sprememb v imunosti s 14 povezanimi DEG. Od teh DMTB1, FGA, FGB in TF kodirajo protimikrobne peptide, ALB in TF kodirata negativne proteine ​​akutne faze (APP), FGA in FGG pa kodirata pozitivne APP. Osem genov igra vlogo pri presnovi, 10 pa jih je vključenih v odziv na dražljaje.

rastlina cistanche krepi imunski sistem

Levkocitne DEG, izpeljane iz primerjave HC s skupino LC, so bile nato podvržene analizi obogatitve GO. 76 reguliranih DEG je bilo znatno obogatenih z 208 funkcijami, od katerih je 20 najboljših na podlagi rezultatov obogatitve prikazanih na sliki 4A. Ti so bili povezani z različnimi vidiki celičnega delovanja, z vezavo rastnega faktorja, pridobljenega iz trombocitov, na vrhu. Številne funkcije so bile povezane s presnovo beljakovin in aminokislin (ki vključuje APLP1, COL1A1, COL1A2, COL3A1, HTR1B in P2RY12 v večini), biomineralizacijo in predelavo kolagena (ki vključuje COL1A1, COL1A2, SPP1 in TUFT1) in celično komunikacijo. V nasprotju s tem so imele najvišje funkcije 97 znižanih DEG jasno temo različnih procesov imunske obrambe (slika 4B), ki so bili pretežno povezani z 20 DEG. Od teh je bil FGA (pozitiven APP) znižan za 85-krat v primerjavi HC proti LC. Orodje brskalnika GO je povzelo biološke funkcije tako navzgor kot navzdol reguliranih DEG v osem pomembnih kategorij (tabela 4). Razen biomineralizacije so bile vse druge biološke funkcije, zlasti tiste, povezane z imunsko obrambo, pretežno povezane z znižanimi DEG.

Slika 4. Top 20 funkcij GO, povezanih z DEG, izpeljanimi iz primerjav HC in LC. (A) MP navzgor regulirani DEG, (B) MP znižani DEG, (C) PP navzgor regulirani DEG in (D) PP znižani DEG.

Tabela 4. Povzetek glavnih funkcij obogatitve GO z levkocitnimi DEG v primerjavi med kravami večkratnicami, ki so v zgodnji laktaciji prejemale hrano z visoko (n=14) in nizko (n=14) koncentratom.

Tabela 4. Nadaljevanje

Kombinirani navzgor in navzdol regulirani DEG (n=173) so bili znatno obogateni s 23 potmi KEGG, ki so bile v glavnem povezane z različnimi imunskimi in presnovnimi procesi (tabela 5). Komplementne in koagulacijske kaskade so bile na vrhu z osmimi znižanimi DEG (CFB, FGA, FGB, FGG, KNG1, PROC, SERPINA1 in VTN). Vnetna pot signalizacije, podobne NOD, je bila povezana s šestimi DEG (IFNB1, MAPK10, OAS1X, OAS1Y, OAS1Z in OAS2), od katerih so bile vse razen MAPK10 znižane. Pot prebave in absorpcije beljakovin je vsebovala šest DEG, od katerih so bili trije (COL1A1, COL1A2 in COL3A1) regulirani navzgor in trije znižani (CELA2A, COL5A3 in ELN). Pet znižanih DEG je bilo vključenih v signalno pot receptorjev, aktiviranih s proliferatorjem peroksisoma (PPAR) (APOA2, APOC3, FABP1, HMGCS2 in PCK1). Poti interakcije med zunajceličnim matriksom in receptorjem, žariščne adhezije in sfingolipidnega signaliziranja so vključene v vzdrževanje celične in tkivne strukture.

Tabela 5. Pomembne poti, ugotovljene z obogatitvijo poti KEGG, povezane z različno izraženimi geni levkocitov pri kravah, ki so bile večkrat rojene, na dieti z visoko vsebnostjo koncentrata (n=14) v primerjavi s tistimi na dieti z nizko vsebnostjo koncentrata (n=14).

2.6. Primerjava vzorcev izražanja genov za levkocite med prvorotkami, ki so prejemale diete z visoko ali nizko koncentracijo

Prvih 20 levkocitnih DEG v obtoku pri kravah PP, hranjenih s HC, v primerjavi z dietami LC, je navedenih v dodatni datoteki S2D, E. Imunski in presnovni procesi so prevladovali nad biološkimi funkcijami najvišje reguliranih DEG, ki vsebujejo 11 oziroma 12 DEG. Med njimi so ACSL6, MMP9 in SLC11A1 vključeni v proliferacijo levkocitov, ACSL6, ADGRG3, COL1A2, DUSP1, HCK, MMP9 in PADI4 pa v razvojnem procesu. SLC40A1 je glavni prenašalec železa, ki ima ključno vlogo pri uravnavanju celične in sistemske ravni železa. Nekateri od teh DEG kodirajo proteine ​​z več funkcijami. Na primer, MMP9, DUSP1, SLC11A1 in COL1A2 so povezani z večino zgornjih funkcij GO. Biološke funkcije DEG, reguliranih od zgoraj navzdol, so bile bolj raznolike. V proces imunskega sistema je bilo vključenih osem DEG, pet jih je igralo vlogo pri presnovi, dva pa sta bila povezana tako s proliferacijo levkocitov kot z razvojnim procesom (EPCAM in FCRL3). Spet nekateri DEG, na primer CD96 in FCRL3, kodirajo proteine ​​z več vlogami.

Pri kravah PP je bilo 382 reguliranih DEG, izpeljanih iz primerjave HC proti LC, pomembno povezanih s 690 funkcijami GO, pri čemer je prvih 20 predstavljenih na sliki 4C. Vse to je vključevalo 116 DEG (dodatna datoteka S2F) z različnimi imunskimi aktivnostmi. Glavna funkcija je bila signalna pot receptorja celične površine. To je bilo povezano s 43 DEG, ki so vključevali gene, ki kodirajo številne receptorje za imunske ligande, kot so CXCR1, CXCR2, IL17RD in IL1RAP. Ta funkcija je imela šest pomembnih podfunkcij, vključno z lipopolisaharidno (LPS) posredovano signalno potjo (PTAFR, TLR4 in SCARB1) in signalno potjo receptorja celične površine, ki je regulirana z imunskim odzivom. Najvišja podfunkcija znotraj regulacije procesa večceličnih organizmov je bila regulacija proizvodnje citokinov s 24 navzgor reguliranimi DEG, kot so MARK13, LTF in TLR4. Bilo je manj znižanih DEG (samo 78), ki so bili povezani z 298 pomembnimi funkcijami GO, z nižjimi rezultati obogatitve in bolj raznolikimi biološkimi procesi. Slika 4D prikazuje 20 najboljših funkcij. Številni od teh so bili povezani z vidiki imunosti, kot so celična adhezija, regulacija proizvodnje mediatorja imunskega odziva, odziv na LPS in odziv na molekule bakterijskega izvora. Drugi so bili povezani z vzdrževanjem homeostaze, kot so celična površina, citoliza, transmembranski transport in endopeptidaza serinskega tipa. Povzetek pomembnih bioloških funkcij, povezanih z navzgor in navzdol reguliranimi DEG, je ustvaril sedem kategorij (tabela 6), s procesom imunskega sistema na vrhu in večino drugih funkcij, povezanih tudi z imunsko obrambo. Na primer, gibanje je bilo obogateno z DEG s kemotaktičnimi in imunskimi lastnostmi ter interakcijo med vrstami med organizmi, kar vključuje ubijanje napadenih patogenov. Tako celični proces kot biološka regulacija sta bila povezana z velikim številom DEG. Celični proces (n=239 DEG) je vključeval številne podfunkcije, povezane s celično adhezijo, ubijanjem celic, aktivacijo imunskih celic in proliferacijo celične populacije. Biološka regulacija (125 DEG) vključuje tudi številne imunske aktivnosti, kot so regulacija procesa imunskega sistema, gibanja in odziva na dražljaje. Vse te funkcije so vsebovale pretežno regulirane DEG na dieti HC.

Tabela 6. Povzetek glavnih funkcij obogatitve GO z DEG v primerjavi med kravami prvorotkami, ki so jim bile v zgodnji laktaciji dane diete z visoko (n=6) in nizko (n=6) koncentratom.

Tabela 6. Nadaljevanje

Kombinirani navzgor in navzdol regulirani DEG (460) pri kravah PP so bili obogateni s 35 pomembnimi potmi KEGG (tabela 7). Mnogi so bili povezani s presnovnimi procesi, ki vključujejo aminokisline (valin, levcin, izolevcin, arginin in glutation), beljakovine, lipide (arahidonska kislina, glicerolipid in holesterol), vitamin B6 in nekatere hormone (aldosteron, kortizol, ščitnični in rastni hormon). ). Te presnovne poti so bile pretežno obogatene z DEG, reguliranimi na dieti HC. Na primer, biosinteza aminokislin je bila povezana s petimi reguliranimi DEG (ARG2, ASS1, GPT2, SDS in SDSL), pot sinteze, izločanja in delovanja rastnega hormona je bila obogatena s šestimi reguliranimi (ADCY6, CREB3L2, CREB5, FOS). , MAPK13 in SOCS3) in enega znižano reguliranega (BCAR1) DEG, presnova arahidonske kisline pa je vsebovala pet reguliranih DEG (CYP2J2, GGT5, GPX3, PLB1 in TBXAS1). Več poti, povezanih z imunskim/vnetnim procesom, je bilo prav tako znatno obogatenih, spet predvsem z navzgor reguliranimi DEG. Te so vključevale signalne poti kemokina, MAPK in TNF ter kaskade komplementa in koagulacije. Na primer, signalna pot kemokinov je vsebovala osem navzgor reguliranih (ADCY6, CCL16, CCR1, CXCL13, CXCR1, CXCR2, GNG7 in HCK) in dva znižano reguliranih DEG (BCAR1 in CCR5), signalna pot TNF je vsebovala šest navzgor reguliranih DEG (CREB3L2, CREB5). , FOS, MAPK13, MMP9 in SOCS3), signalne poti MAPK pa so vsebovale 12 reguliranih DEG, vključno z IL1A, MAP3K6 in MAPK13.

Tabela 7. Pomembne poti, ugotovljene z obogatitvijo Keggove poti, povezane z diferencialno izraženimi geni levkocitov pri prvorotkah, ki so bile na dieti z visoko vsebnostjo koncentrata (n=6) v primerjavi s tistimi, ki so bile na dieti z nizko vsebnostjo koncentrata (n=6).

3. Razprava

Poporodne krave molznice imajo homeostatske mehanizme za nadzor porazdelitve hranil med laktacijo in drugimi pomembnimi življenjskimi funkcijami, kot sta imunost in rast [8]. Mobilizacija tkiv je normalna prilagoditev sesalcev za podporo laktaciji, vendar pri nekaterih kravah pride do presnovnega neuravnoteženosti [35,37]. Takšne živali doživljajo prekomerno mobilizacijo maščobnega tkiva, insulinsko rezistenco in sistemsko vnetje, kar prispeva k oslabljeni imunosti, ki jo pogosto opazimo v tem času [38]. To je povezano z vnetnimi mediatorji, kot sta TNF in IL6 [39,40]. 14. dan po telitvi, ko so bili v tej študiji zbrani vzorci levkocitov v obtoku, so bile celice torej izpostavljene obdobju vnetne stimulacije. Z uporabo sekvenciranja naslednje generacije in bioinformatske analize smo dokazali, da so diete z različnimi deleži koncentrata povzročile različne učinke na transkriptom levkocitov v obtoku pri kravah PP in MP v zgodnji laktaciji. To je bilo povezano z razlikami v njihovem zdravju in plodnosti. Te informacije so našemu prejšnjemu poročilu o učinkih prehrane na proizvodnjo mleka in imunost dodale nove ugotovitve [32].

3.1. Primerjava učinkov prehrane z visoko in nizko vsebnostjo koncentrata pri kravah večkratnicah

Krave MP na dieti HC so imele višji DMI kot krave MC in LC, kar je bilo povezano z višjimi koncentracijami glukoze in IGF v obtoku{{0}}. To je vodilo do tega, da so bile krave HC v manj hudi NEB in so proizvedle več mleka. Prehrana HC je bila oblikovana tako, da izpolnjuje potrebe po energiji in beljakovinah za laktacijo in vzdrževanje telesne homeostaze, meritve metabolitov pa so potrdile, da je njihov presnovni status res boljši kot pri kravah LC, z manjšo zahtevo po mobilizaciji tkiva za izpolnitev potreb po energiji. To naj bi pripomoglo k hitrejšemu reševanju poporodnih vnetnih procesov, saj je veliko vnetnih bolezni v zgodnji laktaciji povezanih ali povzročenih s presnovnimi motnjami [38], pred tem pa smo pokazali, da je bilo vnetje maternice hitreje rešeno pri kravah z boljšim statusom energetske bilance. [2]. V tej študiji ni bilo razlike v razmerju med PMN in epitelnimi celicami v lumnu maternice glede na prehrano pri kravah MP. Ta indeks se pogosto jemlje kot pokazatelj citološkega endometritisa [41]. Razlike glede na prehrano pa so opazili v mlečni žlezi, saj so imele krave LC višji SCC, kar je bilo povezano z večjim deležem njih, ki so imeli klinični mastitis med prvimi 16 DIM (28,6 % v primerjavi z 0 % v LC v primerjavi z HC skupine).

Večina DEG, identificiranih v analizi transkriptoma levkocitov, je bila vključena v imunske in/ali presnovne procese, kot je bilo pričakovano v populaciji imunskih celic. Najpomembnejša pot KEGG je bila kaskada komplementa in koagulacije, ki je vključevala šest najbolj močno znižanih genov pri kravah HC. Od teh CFB kodira faktor komplementa B, komponento alternativne poti aktivacije komplementa. FGA, FGB in FGG kodirajo tri podenote koagulacijskega faktorja fibrinogena, ključne sestavine krvnega strdka, ki je pomemben tudi pri vezavi bakterij na trombocite [42]. Oblika kininogena z visoko molekulsko maso, ki jo kodira KNG1, je prav tako bistvena za koagulacijo krvi, kininogen pa sprošča bradikinin, peptid z različnimi funkcijami, vključno z antibakterijskim in protiglivičnim delovanjem. Vitronektin, kodiran z VTN, sodeluje tudi pri uravnavanju koagulacijske poti in celjenju ran, medtem ko njegova domena, ki veže heparin, zagotavlja protimikrobne lastnosti. PROC kodira plazemski glikoprotein, katerega aktivirana oblika vsebuje domeno serinske proteaze, ki deluje pri razgradnji aktiviranih oblik koagulacijskih faktorjev V in VIII, medtem ko SERPINA1 kodira inhibitor serinske proteaze, katerega tarče vključujejo plazmin, trombin in aktivator plazminogena. Uravnavanje kaskade komplementa in koagulacije je bilo prej prikazano v tkivu dojke kot zgodnji odziv gostitelja na E. coli ali Staph. okužba z aureusom [43]. Ker je bila ta pot bolj izražena pri kravah na dieti LC, to podpira dokaze o večji incidenci mastitisa pri teh živalih.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Druga najpomembnejša funkcija, ki jo je povzel brskalnik GO, je bil proces ubijanja patogenov (medvrstna interakcija med organizmi), ki je bil povezan s 14 znižanimi DEG pri kravah HC (tabela 4). To je vključevalo številne gene, vključene v protivirusno aktivnost (IFI6, IFNB1, ISG15, MX2, OAS1Y, OAS1Z, OAS2 in RSAD2), ki so bili izraženi na nižjih ravneh. Od teh IFNB1 kodira interferon beta 1, medtem ko so vsi drugi geni, stimulirani z interferonom [44, 45]. Vsi so tudi del signalne poti NOD podobnega receptorja (NLR). NLR so citosolni receptorji za prepoznavanje vzorcev, ki jih aktivirajo različne nesamostojne komponente, vključno z bakterijskim peptidoglikanom, ki lahko sprožijo NF-kapa B-/AP-1-odvisno izražanje vnetnih citokinov, izražanje interferonov tipa I, avtofagijo in vnetje [46]. Naša nedavna študija je pokazala, da je bila ta pot regulirana navzgor v levkocitih krav, okuženih z E. coli [47]. Drug identificiran gen je bil MPO, ki kodira mieloperoksidazo, encim, shranjen v azurofilnih granulah PMN in makrofagov. Med vnetnimi procesi se sprošča v zunajcelično tekočino in se uporablja kot označevalec vnetja in oksidativnega stresa [48]. IL1R2 kodira člana družine receptorjev za interlevkin 1 in je bil eden od najbolj izrazito znižanih DEG, ugotovljenih pri kravah MP. Ta lahko veže IL1A, IL1B in receptor interlevkina 1 tipa I (IL1R1/IL1RA), vendar deluje kot vabni receptor za zaviranje aktivnosti liganda.

Gen z najpomembnejšo diferencialno ekspresijo med kravami MP na različnih dietah je bil FCER1A, z nižjo ekspresijo pri kravah HC. Ta kodira podenoto receptorja IgE, ki je pobudnik alergijskih odzivov, ki bi se lahko razvili za spodbujanje obrambe gostitelja pred paraziti s sproščanjem mediatorjev, kot je histamin [49]. Zanimivo je, da je bil FCER1A eden od le 18 genov, katerih raven izražanja je bila ugotovljena kot diskriminatorna med plodnostjo govejih telic [50]. Njegova natančna vloga pri govedu ostaja nedoločena, toda v preskušanju cepiva na teletih, eksperimentalno okuženih z gospodarsko pomembno parazitsko ogorčico Ostertagia ostertagi, je bila raven izražanja v krvi pozitivno povezana s številom mastocitov in negativno s številom črvov [51]. Trije drugi regulirani geni pri kravah HC z določeno imunsko funkcijo so bili ALAS2, GZMB in LIF. ALAS2 kodira 50 -aminolevulinat sintazo 2, mitohondrijsko lociran encim, specifičen za eritroid, ki katalizira prvo in hitrost omejujočo stopnjo v biosintezni poti hema. Hem je bistveni kofaktor v različnih ključnih procesih, vključno s transportom kisika, medtem ko so mutacije v tem genu povezane z različnimi človeškimi boleznimi, vključno z anemijo [52]. GZMB kodira predprotein, ki ga izločajo naravne celice ubijalke in citotoksični T-limfociti in je obdelan za ustvarjanje aktivne proteaze, ki inducira apoptozo ciljne celice in tudi obdeluje citokine in razgrajuje proteine ​​zunajceličnega matriksa [53]. Inhibitorni faktor citokinske levkemije, kodiran z LIF, je bil prvotno identificiran z vpletenostjo v diferenciacijo makrofagov, vendar se je tudi pokazalo, da ima pomembno vlogo pri razvoju zarodkov in vzpostavitvi brejosti pri različnih vrstah, vključno z govedom [54].

DEG, pridobljeni iz primerjave HC proti LC pri kravah MP, so bili prav tako obogateni z več pomembnimi potmi, povezanimi s presnovo glukoze, beljakovin in maščobnih kislin. Ti so vključevali štiri znižane DEG, vključene v signalne poti PPAR (APOA2, APOC3, FABP1 in PCK1). V tej študiji so bile v populaciji levkocitov odkrite tri glavne izooblike PPAR (A, D, G). Čeprav prehrana ni vplivala na izražanje samih PPAR, lahko ta pot vpliva na izražanje genov, ki sodelujejo pri presnovi glukoze in lipidov, diferenciaciji adipocitov in vnetnih odzivih [55, 56] ter prispeva k presnovni prilagoditvi na omejeno oskrbo s hranili z induciranje genov, vključenih v -oksidacijo [57]. Presnovna pot retinola je bila prav tako zmanjšana pri HC kravah, z nižjo ekspresijo RBP4 in TTR (kodira protein, ki veže retinol oziroma transtiretin), ki oba delujeta kot prenašalca retinola v krvi. Interakcija retinola s signalno potjo PPAR vpliva na transkripcijo mnogih drugih genov na nižji stopnji [58]. APOA2 in APOC3 skupaj z APOH sta tudi del presnovne poti holesterola. Holesterol je glavna sestavina plazemske membrane in vpliva na njeno organizacijo in delovanje [59,60]. Nedavne študije so poudarile nastajajočo vlogo holesterola kot pomembnega modulatorja prirojene in prilagodljive imunske aktivnosti [61].

Pot glikolize/glukoneogeneze je bila povezana s tremi znižanimi DEG pri kravah, hranjenih s HC (ADH1C, ALDOB in PCK1). Od teh PCK1 kodira fosfoenolpiruvat karboksikinazo 1, ki deluje kot glavna kontrolna točka za regulacijo glukoneogeneze. Ta encim skupaj z GTP katalizira tvorbo fosfoenolpiruvata iz oksaloacetata s sproščanjem ogljikovega dioksida in GDP. Aktivacija imunskih/vnetnih poti spodbuja transkripcijo glukoneogenih genov preko toll-like receptorja 4 (TLR4) [62]. To lahko povzroči, da imunske celice preklopijo svoj metabolizem glukoze iz oksidativne fosforilacije v glikolizo, da proizvedejo energijo in hranila, potrebna za proliferacijo in proizvodnjo imunskih molekul [12,63]. To vodi do povečanega povpraševanja po glukozi, ki tekmuje s potrebo po proizvodnji laktata [64].

Če povzamemo, razlike v izražanju genov med kravami MP na dietah HC in LC dokazujejo večjo uravnano imunsko aktivnost in vnetje pri kravah LC. To je spremljala večja pojavnost mastitisa. Nasprotno pa so bili geni, ki kodirajo nekatere beljakovine, ki bi lahko koristile zdravju in plodnosti, kot sta ALAS2 in LIF, pri kravah HC povečani. To podpira izmerjene presnovne indekse, ki kažejo, da je bil izboljšan status EBAL pri kravah MP na dietah s HC, kar je verjetno pomagalo zaščititi pred razvojem nalezljive ali presnovne bolezni.

3.2. Primerjava učinkov prehrane z visoko in nizko vsebnostjo koncentrata pri kravah prvorotnicah

Podobno kot krave MP so imele tudi krave PP na dieti HC višji DMI, za približno 4 kg/dan, vendar se mlečnost ni bistveno povečala. Ni bilo pomembnih razlik v koncentracijah glukoze, NEFA, BHB ali IGF-1 v obtoku, le sečnina je bila višja na dieti LC. V nasprotju s tem so bile pomembnejše razlike v izražanju genov za levkocite med dietnimi skupinami kot pri kravah MP, s 460 proti 173 DEG, ugotovljenih v primerjavi HC proti LC, od tega je bilo 83 % povečanih pri kravah PP na dieti HC. Le majhen delež DEG se je prekrival med obema starostnima skupinama (slika 3), kar kaže na to, da so bile spremembe v delovanju levkocitov na dieto z zgodnjo laktacijo bolj občutljive pri kravah PP kot pri kravah MP. Pričakovali smo, da bo prehrana s HC koristila kravam PP s povečanjem DMI in popolnim izpolnjevanjem izračunanih prehranskih potreb po nerazgradljivih in presnovljivih beljakovinah. EBAL je bil res izboljšan na dieti HC, vendar je analiza izražanja genov pokazala veliko večjo regulacijo genov, ki sodelujejo pri imunski obrambi. Krave, hranjene z HC, so imele tudi višje razmerje PMN: UEC v maternici skupaj s številčno večjim SCC in več primeri mastitisa. To nakazuje, da so bili dejansko bolj kot manj nagnjeni k boleznim. Prej smo ugotovili, da so imeli nevtrofilci, zbrani pri kravah PP v tej študiji v prvih treh tednih laktacije, znatno višji fagocitni indeks in indeks oksidativnega izbruha v primerjavi s kravami MP, vendar 2-način učinkov prehrane in paritete na o teh meritvah niso poročali [32].

Procesi imunskega sistema, ugotovljeni v primerjavi HC proti LC, so vključevali regulacijo celičnih površinskih receptorjev in signalnih poti za prepoznavanje vzorcev, kemotakso, proizvodnjo citokinov in migracijo levkocitov pri kravah, hranjenih s HC. Identificirani DEG so bili povezani z različnimi imunskimi obrambnimi mehanizmi, vključno z različnimi protimikrobnimi peptidi (AMP) (CATHL6, CXCL13, DEFB1, LTF, PGLYRP1, PGLYRP4, SA100A8, SA100A9, S100A1 in SLC11A1). Ti ne morejo le neposredno ubiti napadenih organizmov, ampak tudi pomagajo z modulacijo drugih imunskih in protimikrobnih procesov [65–67]. Povečana regulacija protimikrobnih peptidov v transkriptomskih profilih levkocitov je bila predhodno dokazana pri kravah s kliničnim mastitisom [47,68] in metritisom/endometritisom [69,70]. Funkcija adhezije levkocitov je bila povezana s 16 reguliranimi in petimi znižanimi DEG pri živalih, hranjenih s HC. Adhezija levkocitov na stene kapilar je ključni prvi korak pri omogočanju njihove transmigracije iz krvi in ​​prometa proti mestom poškodbe tkiva, okužbe in vnetja [71]. Interakcije celica-celica in celica-matriks vplivajo na fenotip levkocitov, disregulacija adhezijskih poti pa lahko privede do vztrajne aktivacije levkocitov z nerazrešenim vnetjem [72]. Od identificiranih povečano reguliranih DEG so ADAM8, ANGPTL3, CD24, ICAM3 in THY1 vključeni v ekstravazacijo [73,74], medtem ko imajo FN1, NRP1, TNFAIP6 in VCAN potencialno vlogo pri prometu z levkocitnimi celicami in delujejo v vnetih tkivih [72, 75]. Tudi geni, ki kodirajo kemokinske receptorje CXCR1 in CXCR2, so bili regulirani navzgor pri kravah, hranjenih s HC; oba sta pomembna pri spodbujanju kemotakse PMN proti mestom okužbe kot tudi pri aktiviranju biokemičnih procesov, ki ubijajo invazivne bakterije [76].

Od znižano reguliranih genov, povezanih z adhezijo pri kravah, hranjenih z HC, BCAR1 kodira večnamenski protein, znan kot cas, ki sodeluje pri celični gibljivosti, apoptozi in nadzoru celičnega cikla [77]. Polimorfizmi v BCAR1 so bili prej povezani s SCC in odpornostjo proti mastitisu [78]. ADGRG1 (znan tudi kot GPR56) kodira receptor, vezan na protein G, ki veže kolagen 3 in transglutaminazo 2, obe komponenti tkivne strome. Pokazalo se je, da ima ADGRG1 vlogo pri človeških celicah naravnih ubijalk (NK), v katerih zavira njihovo citotoksičnost [79]. Njegovo lastno izražanje je znižano po aktivaciji, ki jo povzročajo citokini, kar bi bilo v skladu s tukaj prikazanimi rezultati. Protein CD96 deluje tudi kot inhibitorni receptor kontrolne točke na celicah NK [80]. Prejšnje študije o spremembah v transkriptomu levkocitov v prehodnem obdobju so prav tako odkrile spremembe v izražanju genov v zvezi s transendotelijsko migracijo, čeprav z različnimi zaključki, poročajo bodisi o aktivaciji po telitvi [81] bodisi o inhibiciji [82]. Naša analiza je odkrila tudi številne razlike v signalnih poteh znakov metabolizma aminokislin pri kravah PP na dieti HC v primerjavi s tistimi na dieti LC, povezanih z encimi, ki jih kodira pet nadreguliranih DEG (ARG2, ASS1, GPT2, SDS in SDSL). . Od teh ASS1 kodira arginin sukcinat sintazo 1, ki katalizira predzadnji korak biosintetske poti arginina, medtem ko ARG2 kodira arginazo, ki katalizira hidrolizo arginina v ornitin in sečnino. L-arginin se lahko pretvori tudi v dušikov oksid, signalno molekulo, ki ima ključno vlogo pri patogenezi vnetja [83]. Glutaminsko-piruvična transaminaza 2 (GPT2) je mitohondrijski encim, ki katalizira reverzibilno transaminacijo med alaninom in 2-oksoglutaratom, da nastaneta piruvat in glutamat. Ta gen je reguliran navzgor v pogojih presnovnega stresa in igra vlogo pri spodbujanju glukoneogeneze iz presnove aminokislin [84]. Serin dehidrataza (SDS) kodira encim, ki pretvori L-serin v piruvat in amoniak, medtem ko serin dehidrataza (SDSL) naj bi bila vključena v pot biosinteze izolevcina iz treonina.

Pot presnove holesterola je bila povezana s štirimi reguliranimi DEG na dieti HC (ANGPTL3, LRP1, SCARB1 in SORT1). To lahko privede do kopičenja holesterola v levkocitih krav, hranjenih z HC, in spodbuja vnetje, vključno s povečanjem signalizacije TLR, aktivacijo vnetja in večjo proizvodnjo monocitov in nevtrofilcev v kostnem mozgu in vranici [85]. Pot presnove arahidonske kisline s petimi reguliranimi DEG (kot je navedeno prej) vodi do proizvodnje kaskade pro- in protivnetnih produktov, kot so prostaglandini in levkotrieni [86]. Presnovna pot glicerolipidov je bila povezana s štirimi reguliranimi DEG (DGAT2, DGKG, GK in GPAT3), ki kodirajo lipogene gene, vključene v sintezo triacilglicerola. Njegovo kopičenje lahko povzroči aktivacijo levkocitov in vnetje [87,88]. Vse te ugotovitve potrjujejo sklep, da je prehrana s HC pospešila presnovne poti levkocitov pri PP kravah na način, ki je povečal njihov imunski/vnetni odziv. Prejšnje delo pri kravah je bilo osredotočeno predvsem na suho obdobje in je pokazalo, da prekomerno hranjenje in visok BCS v tem času spodbuja poznejšo mobilizacijo lipidov in povečan vnetni odziv v peripartalnem obdobju [34]. V tej študiji razmerje materničnega PMN: UEC in trend k višjemu SCC podpira domnevo, da je prišlo do povečane migracije levkocitov v maternico in mlečno žlezo pri PP kravah, ki so prejemale HC dieto. Čeprav je to bistvena sestavina imunske obrambe, lahko čezmerna aktivacija prispeva k hipervnetju. Za potrditev teh ugotovitev je potrebna nadaljnja študija z večjim vzorcem.

3.3. Podobnosti v odzivu na prehrano pri kravah mnogorodnicah in prvorotkah

In terms of metabolic changes, both the MP and PP cows had higher circulating concentrations of urea when on the LC diet. Blood urea in both late pregnancy and early lactation may rise following mobilization of amino acids stored in skeletal muscle [89] or when dietary protein supply exceeds energy availability or protein needed [90], so these situations could have applied here. Elevated levels of urea have been associated with reduced fertility, but only at >4,5 mmol/L, kar je višje od koncentracij, ki so bile dosežene pri živalih, hranjenih s LC v tej študiji [91]. V zvezi s podatki o transkripciji genov za levkocite je zanimivo omeniti, da so bili DEG, izpeljani iz primerjave HC proti LC v obeh starostnih skupinah, obogateni s potjo prebave in absorpcije beljakovin, pri kateri imajo geni, ki kodirajo različne izooblike kolagena, pomembno vlogo. . Med njimi so bili trije regulirani kolagenski geni (COL1A1, COL1A2 in COL3A1) pri kravah MP in PP ter en gen za kolagen z znižano reguliranostjo (COL5A3) pri kravah MP. Njihove ekspresijske vrednosti v vzorcih so bile majhne, ​​razlike pa pomembne. Del te RNK lahko izvira iz fibrocitov, celične populacije, ki obsega le 0.1–0.5 % neeritrocitnih celic v periferni krvi [92,93]. Kolagen je dolgo uveljavljen ojačevalec imunskega sistema, ki sodeluje pri številnih imunskih/vnetnih procesih [93,94]. Njegova povečana proizvodnja v krožeči krvi z dieto HC lahko zato vpliva na delovanje levkocitov.

3.4. Posledice za plodnost

Številne prejšnje študije so poročale, da medsebojno povezani presnovni in imunski status ter pojavnost bolezni pri kravah v zgodnji laktaciji močno vplivajo na njihovo poznejšo plodnost (npr. [38,95]). Naše lastno delo je pokazalo, da je bilo manj verjetno, da bodo krave MP z nizko koncentracijo IGF-1 pri 14 DIM sploh zanosile [37]. Pred kratkim smo poročali, da je 63 % krav z nizkim IGF-1 v tem času imelo več kot eno zdravstveno težavo v svojih prvih 35 DIM v primerjavi s samo 26 % krav z visokim IGF-1. To je vključevalo več živali z okužbami maternice in kliničnim mastitisom [10]. Foley et al. [69] so razlikovali med zdravimi kravami, ki so lahko obnovile homeostazo v 3 tednih po telitvi, in drugimi, ki so doživele hujši in dolgotrajnejši vnetni odziv, ki je nato razvil klinični endometritis. Povezavo s periferno krvjo so dokazali Galvão et al. [96], ki je pokazal, da so imeli nevtrofilci pri kravah s slabšim EBAL nižjo vsebnost glikogena pri sedmih DIM in da so te živali imele več bolezni maternice, kar je lahko povezano z zmanjšano razpoložljivostjo oksidativnih goriv za imunske odzive. Klinični mastitis v zgodnji laktaciji je povezan tudi s povečano stopnjo izgube zarodkov pred implantacijo, z nekaterimi znaki, da nizek BCS dodatno poveča tveganje [97]. Predlagali so številne mehanizme, povezane s proizvodnjo citokinov in prostaglandinov ter drugih vnetnih mediatorjev, ki bi lahko vplivali na jajčnik in/ali povzročili neugodno maternično okolje [98, 99]. Podatki o plodnosti, pridobljeni pri kravah v naši študiji, so podprli ugotovitve v zvezi z njihovim imunskim statusom in zdravjem v zgodnji laktaciji. Krave MP na dieti LC so zahtevale številčno več S/C v skladu z njihovim slabšim EBAL skupaj z dokazi iz analize transkriptoma levkocitov o aktivnejši imunski obrambi v teku, kar je podprto z njihovo večjo pojavnostjo mastitisa. V nasprotju s tem so krave PP na dieti HC potrebovale znatno dlje, da so zanosile in jih je manj zanosilo v primerjavi s kravami, hranjenimi z LC. Imeli so več dokazov o vnetju v zgodnji nosečnosti, čeprav je bil njihov izračunani EBAL boljši. Trenutno so osnovni mehanizmi, ki povzročajo njihovo slabo zdravstveno stanje in plodnost, negotovi, čeprav smo našli tudi dokaze, ki temeljijo na globalnem izražanju genov o povečanem jetrnem vnetju in fibrozi (Cheng, Little, Ferris, Takeda, Ingvartsen, Crowe in Wathes, neobjavljena opažanja) .

3.5. Omejitve študije

Na voljo je bilo manj krav PP na skupino, kar je zmanjšalo statistično moč analiz v zvezi s fenotipi. Zato je potrebna nadaljnja študija z večjim vzorcem, da se potrdijo učinki prehrane na razmnoževanje in bolezni. V tej študiji smo ekstrahirali vso RNK iz polne periferne krvi z uporabo Tempusovih epruvet in njegovega izolacijskega sistema. To omogoča enostavno zbiranje za obsežno študijo na kmetiji, vendar ne ločuje vrst celic, ki bodo vključevale limfocite T in B, naravne celice ubijalke, trombocite, monocite, granulocite (nevtrofilce, eozinofilce in bazofilce) in fibrocite. Na predstavljene podatke o izražanju genov so torej poleg njihovih posameznih transkripcijskih sprememb vplivali možni učinki zdravljenja na relativne deleže posameznih vrst celic. Ti rezultati prav tako temeljijo na ravneh transkripcije genov in ne vključujejo informacij o njihovi posttranslacijski obdelavi, ki bo prav tako vplivala na količino proizvedenega funkcionalnega proteina.

4. Materiali in metode

4.1. Živali in diete

Vsi postopki so bili izvedeni v skladu z Zakonom o živalih (znanstveni postopki) iz leta 1986 in so bili zajeti v dovoljenju projekta Ministrstva za notranje zadeve številka PPL2754 in potrdilu o imenovanju za ustanovo. Delo je odobril tudi Odbor za etiko in dobro počutje Inštituta za agroživilstvo in bioznanosti (AFBI, Belfast, Severna Irska, Združeno kraljestvo). Dvainšestdeset krav molznic Holstein-Friesian je bilo izbranih iz črede AFBI. Med njimi je bilo 18 krav PP (1. laktacija) in 44 MP z laktacijskimi številkami 2–7 (3,5 ± 1,28) in vse krave so bile po pregledu veterinarja zdrave. Masa pri telitvi je bila 680 ± 62 (povprečje ± STD) kg za krave MP in 550 ± 39 kg za krave PP. Po telitvi so bile krave PP in MP ločeno razvrščene v tri prehranske skupine, pri čemer je bila porazdelitev v vsaki starostni skupini uravnotežena glede na predvideno sposobnost prenosa maščobe in beljakovin (kg), TW pred telitvijo in BCS. Krave MP so bile tudi uravnotežene glede paritete in prejšnje 305-dnevne mlečnosti laktacije. Kravam so ponudili bodisi (1) nizek koncentrat (LC, 30 % koncentrat plus 70 % travna silaža, n=6 za PP in n=14 za MP); (2) srednji koncentrat (MC, 50 % koncentrat plus 50 % travna silaža, n=6 za PP in n=15 za MP) ali (3) visok koncentrat (HC, 70 % koncentrat plus 30 % travna silaža, n=6 za PP in n=15 za MP) diete (odstotki na osnovi suhe snovi). Koncentrat za vsako zdravljenje je bil oblikovan tako, da se doseže skupna koncentracija surovih beljakovin (CP) v prehrani za vsako od LC, MC in HC (152, 152 oziroma 154 g/kg suhe snovi), medtem ko je izračunana skupna presnovljiva energija s hrano ( ME) so bile vsebnosti 12,0, 12,4 in 12,8 MJ/kg suhe snovi. Ocenjeno je bilo, da diete zagotavljajo 1556, 1997 in 2420 g/dan učinkovitih vampnih razgradljivih beljakovin; 559, 733 in 888 g/dan prehranskih nerazgradljivih beljakovin in 1346, 1817 oziroma 2275 g/dan presnovljivih beljakovin za LC, MC oziroma HC. Dostop do obrokov za zdravljenje je nadzoroval krmilni sistem Calan Broadbent (American Calan Inc., Northwood, NH, ZDA), povezan z elektronskim identifikacijskim sistemom, ki je omogočal dnevno beleženje vnosa posameznih krav. Diete za vsako zdravljenje so bile ponujene v 107 % vnosa prejšnjih dni, da se zagotovi uživanje ad libitum. Vsem kravam je bilo ponujeno tudi dodatnih 0,5 kg koncentrata ob vsaki molži prek sistema za krmljenje v salonu, da bi ohranili učinkovit pretok krav. Ta študija je bila del širšega projekta in vse podrobnosti o ponujenih dietah, upravljanju hranjenja in sestavi krme so bile opisane prej [32].

4.2. Zbiranje podatkov o fenotipu krave

Telesna teža je bila zabeležena dvakrat tedensko s tehtnico. BCS je bil ocenjen na okoli 14 DIM [100]. Vse krave so molzli dvakrat na dan in beležili njihove dnevne donose. Vzorce mleka smo dvakrat tedensko analizirali s srednjo infrardečo analizo za koncentracije beljakovin, maščob in laktoze ter prešteli somatske celice mleka. Dodatne jutranje vzorce mleka (2 × 8 ml) smo zbrali dvakrat tedensko in shranili pri –18 ◦C za analizo LDH (EC. 1.1.1.27) in NAGase (EC 3.2.1.30) z uporabo fluorometričnih testov [101]. Energijsko popravljena mlečnost (ECM; kg/dan) je bila izračunana po metodah, uporabljenih v naši skupini [32]. EBAL vsake krave je bil ocenjen z metodo, opisano prej [102].

Klinični mastitis je bil diagnosticiran s standardnimi metodami, ki temeljijo na dnevnih opazovanjih nenormalnih sprememb v videzu mleka (npr. kosmiči, strdki), kakovosti, količini mleka in vnetnih odzivih dojke (rdečina, oteklina, vročina ali bolečina). Odčitki SCC v mleku skupaj s kliničnimi diagnozami so bili uporabljeni za kategorizacijo krav v tri skupine. Zdrave krave so bile opredeljene kot tiste, ki imajo SCC < 100,000 celic/mL mleka in nimajo kliničnih simptomov. Za subklinično mastitične krave so opredelili SCC med 100,000 in 400,000 celic/ml mleka in brez očitnih kliničnih simptomov. Krave, pri katerih je bil diagnosticiran klinični mastitis, so imele SCC > 400,000 celic/ml mleka in so kazale nekatere od zgornjih kliničnih simptomov. Krave so bile osemenjene ob opazovanem estrusu z uporabo običajne prakse v čredi, podatki o plodnosti za čas naslednje laktacije ali dokler žival ni bila izločena, pa so bili pridobljeni iz evidenc črede. Sporočeni podatki so vključevali dneve do prve uporabe (DFS), dneve do spočetja (dnevi odprti), storitve na zanositev in delež krav, ki so spočele. Poleg tega so bili podatki o spočetju ocenjeni z 4-točko v teletu po rezultatu (ICB) kot (1)<100 days, (2) 100–200 days, (3) >200 dni ali (4) ni uspela zanositi ali je bila izločena.

4.3. Citološka analiza maternice

Vzorec maternične citoščetke (Minitube, Minitüb GmbH, Tiefenbach, Nemčija) je bil odvzet vsaki kravi pri približno 14 DIM za oceno citologije endometrija, kot je opisano prej [103]. Dvojno varovano citoščetko smo ročno vodili skozi maternični vrat v maternico, notranjo zaščito smo ekstrudirali iz zunanje zaščite in ščetko nežno zavrteli proti steni endometrija. Krtačo smo nato umaknili v notranjo zaščito in jo odstranili. Predmetna stekelca za citološko preiskavo smo pripravili tako, da smo cytobrush navrnili na čisto stekleno mikroskopsko stekelce in vzorec fiksirali s Fisherbrand™ CytoPrep™ Cytology Fixative (Fishers Scientific, Blanchardstown, Irska). Fiksna stekelca so bila poslana na UCD School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Irska v obdelavo in obarvana z modificiranim barvilom Giemsa. Citološko oceno smo izvedli s štetjem UEC PMN pri 400-kratni povečavi (Leitz Labourlux-S, Wetzlar, Nemčija) in določitvijo njihovega razmerja, s povprečnim številom 10 močnih polj na diapozitiv.

4.4. Analiza metabolitov v obtoku in IGF-1

14 ± 2 (povprečje ± STD) dni po telitvi je bilo zbranih 10 ml vzorcev krvi iz jugularne vene vseh krav v epruvete Na heparina za plazmo in navadne epruvete za serum. Po ločitvi plazme ali seruma s centrifugiranjem so bili do analize shranjeni pri –20 ◦C. Koncentracije plazemske glukoze, sečnine, BHB, NEFA in holesterola so bile izmerjene z metodami, opisanimi prej [20, 25]. Na kratko, serumska koncentracija NEFA je bila določena z metodo ACS-ACOD z uporabo kompletov NEFA C (Wako, Neuss, Nemčija). Glukozo v plazmi smo kvantificirali z encimsko metodo (ADVIA 1800 Clinical Chemistry System, Siemens Healthcare Diagnostics, Ballerup, Danska). Serumski BHB smo določili z merjenjem absorbance pri 340 nm zaradi produkcije NADH pri alkalnem pH v prisotnosti BHB dehidrogenaze. Serumsko sečnino smo analizirali s spektrofotometrijo. Intra- in inter-testni koeficienti variacije (CV) so bili v vseh primerih pod tremi oziroma štirimi odstotki za nizke in visoke kontrolne vzorce. Koncentracije serumskega IGF-1 so kvantificirali z radioimunološkim testom po ekstrakciji s kislim etanolom [104]. CV znotraj testa je bil 12,4, 7,5 in 9,9 % za nizke, srednje in visoke kontrolne vzorce.

4.5. Ekstrakcija RNK krvi

Vzorce krvi za ekstrakcijo RNA smo zbrali z jugularno venepunkcijo pri vseh kravah pri 14 ± 2 DIM v epruvete za krvno RNA Tempus (Thermo-Fisher Scientific, Loughborough, UK). Epruvete so bile takoj po zbiranju močno stresane 15–20 sekunde, nato zamrznjene in shranjene pri –80 ◦C za ekstrakcijo RNK. RNA polne krvi je bila ekstrahirana z uporabo kompletov za izolacijo RNA Tempus Spin (Thermo-Fisher) po navodilih proizvajalca, kot je opisano prej [20]. Za oceno količine in celovitosti RNA je bil uporabljen Agilent BioAnalyzer 2000 (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK) z Agilent RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies UK Ltd., Cheadle, UK). Poleg tega sta bili količina in čistost potrjeni z NanoDrop 1000 (Thermo Fischer). Podatki o kakovosti so povzeti v dodatni datoteki S3. To je pokazalo, da so imeli vsi vzorci RNA primerno celovitost (številka RIN > 8,7, 9,3 ± 0,3) in čistost (260/280 med 2,01 in 2,15, povprečje ± STD 2,10 ± 0,03), tako da nobena žival ni bila odstranjena iz analize. RNA je bila shranjena pri -80 ◦C za kasnejše sekvenciranje RNA.

4.6. Sekvenciranje, kartiranje in kvantifikacija RNA

Ekstrahirano levkocitno RNA smo sekvencirali na platformi Illumina NextSeq 500, kot je opisano prej [68]. Na kratko, z uporabo delovne postaje za ravnanje s tekočino epMotion (Eppendorf, Hamburg, Nemčija) je bilo 750 ng celotne RNA reverzno prepisano v knjižnice sekvenciranja cDNA s kompletom Illumina TruSeq Stranded Total RNA Library Prep Ribo-Zero Gold (Illumina, San Diego, CA, ZDA). ). Združene knjižnice cDNA so bile sekvencirane na sekvencerju Illumina NextSeq 500 pri enokončnih odčitkih dolžine 75 nukleotidov, da so dosegli povprečno 33,5 milijona odčitkov na vzorec. Neobdelane datoteke FASTQ so bile deponirane v Evropski nukleotidni arhiv (E-MTAB-9347 in E-MTAB-9431). Vse analize sekvenciranja so bile izvedene z uporabo CLC Genomic Workbench v21 (Qiagen, Manchester, UK). Vsak vzorec je vseboval odčitke s štirih stez in so bili združeni v eno datoteko fastq. Kakovost neobdelanih in obrezanih datotek fastq je bila ocenjena po Illumina Pipeline 1.8 in vsa neuspešna branja so bila odstranjena. Odčitki so bili nato preslikani v sklop referenčnega genoma Bos taurus (ARS-UCD1.2, ki ga je zagotovil RefSeq na https://www.ncbi.nlm.nih.gov/assembly, dostopno 1. januarja 2021) in kvantificirani kot odčitki na gen, branja na milijon kilobaz (RPKM) in prepisov na milijon kilobaz (TPM). Te so bile shranjene kot datoteke genske ekspresije (GE) v CLC Genomics Workbench za uporabo za naslednjo analizo diferencialne genske ekspresije.

4.7. Analiza diferencialne ekspresije genov med prehranskimi skupinami

Pred analizo diferencialne ekspresije za prehranski učinek smo uporabili analizo glavnih komponent (PCA) z vrednostmi RPKM za identifikacijo izstopajočih vrednosti in to je pokazalo, da sta bili dve kravi (Blood020009, MP in Blood020103, PP) populacijski izstopajoči in so bili zato izključeni iz nadaljnje analize (dodatna datoteka S4A). Analiza glavnih komponent je tudi pokazala, da je prišlo le do omejenega prekrivanja celotnega vzorca izražanja genov med kravama PP in MP (dodatna datoteka S2B). To je podprlo prvotno zasnovo študije za analizo vsake starostne skupine posebej. Datoteke GE, pridobljene iz vseh posameznih vzorcev, so bile zato ločene po starostnih skupinah (PP, n=5–6 na skupino in MP, n=14–15 na skupino). DEG med prehranskimi skupinami pri kravah PP ali MP so identificirali s CLC Genomics Workbench V21 prek enosmernega postopka, podobnega ANOVA. Stopnje lažnih odkritij (FDR) za večkratne teste so bile prilagojene z Benjamini–Hochbergom (BH) in pomembnost je bila obravnavana pri p < 0,05. Spremembe gub (FC) so bile izračunane kot razmerje genske ekspresije skupine z višjim koncentratom proti skupini z nižjim koncentratom (npr. HC proti LC, MC proti LC ali HC proti MC), če je vrednost skupine z višjim koncentratom je bil večji od tistega v skupini z nižjim koncentratom (pozitivna sprememba gub, upregulacija). Če je bila vrednost skupine z nižjim koncentratom večja od vrednosti skupine z višjim koncentratom, je bilo uporabljeno razmerje med skupino z nižjim koncentratom in skupino z višjim koncentratom (npr. LC proti HC, MC proti HC in LC proti MC ) (negativna sprememba gube, regulacija navzdol). Za nadaljnjo analizo so bili izbrani DEG, regulirani navzgor in navzdol z absolutno kratno spremembo, večjo ali enako 1,5 med prehranskimi skupinami.

4.8. Analiza obogatitve genske ontologije (GO).

DEG-ji, izpeljani iz primerjav parov med prehranskimi skupinami, so bili vneseni v Partek Genomics Suite V7.1 (Partek Incorporation, Chesterfield, MO, ZDA) za analizo obogatitve GO za raziskovanje bioloških funkcij in interakcij med DEG-ji in povezano kjotsko enciklopedijo Poti genov in genomov (KEGG) z genomom Bos taurus ARS-UCD1.2. Uporabljen je bil Fisherjev natančen test s prilagoditvijo BH, statistična značilnost pa je bila upoštevana pri p < 0,05.

4.9. Statistična analiza podatkov o fenotipih

Podatki, pridobljeni za vse krave, so bili najprej razdeljeni po starostni skupini (krave PP in MP) v skladu z načrtom študije. Vrednosti DMI, BW, parametrov mleka, EBAL, BCS, metabolitov v obtoku (glukoza, sečnina, BHB, NEFA, holesterol in IGF{{0}}), SCC (logaritemsko transformirano) in število materničnih celic in njihova razmerja so bila povzeta kot povprečje ± standardna napaka povprečja (SE). Statistična analiza je bila uporabljena za primerjavo razlik med prehranskimi skupinami z uporabo enosmerne ANOVA, vgrajene v programski paket SPSS V28 (Chicago, IL, ZDA). Homogenost variance za vsako spremenljivko je bila testirana z Levenovo statistiko pred ANOVO. Rezultati so pokazali, da homogenost med skupinami za ECM, EBAL, glukozo, sečnino, BHB in IGF-1 pri kravah PP ni bila dosežena, zato je bila za te spremenljivke uporabljena logaritemska transformacija. Kjer je ANOVA pokazala pomembnost, so bile izvedene večkratne primerjave s Fisherjevo metodo LSD, da bi ugotovili vir razlik. Ker po logaritemski transformaciji ni bilo mogoče doseči homogenosti variance za podatke o SCC mleka in citologiji maternice, so bile te spremenljivke testirane z uporabo Kruskal–Wallisove enosmerne ANOVA z Dunnovimi večkratnimi primerjavami. Podatke o plodnosti smo testirali z Wilcoxonovo metodo. V vseh primerih je bila pomembnost upoštevana pri p < 0,05.

5. Sklepi

Ta študija podpira prejšnje delo pri dokazovanju jasnih povezav med presnovnim statusom krav v zgodnji laktaciji in njihovim imunskim delovanjem. Večina prejšnjih raziskav, namenjenih izboljšanju poporodnega zdravja z boljšo prehrano, se je osredotočila na predporodno obdobje in pokazala, da prekomerno hranjenje in visok BCS v tem času spodbujata kasnejšo mobilizacijo lipidov in povečan vnetni odziv v peripartalnem obdobju [34]. Namesto tega smo ocenili, ali je mogoče spremeniti imunsko delovanje po telitvi s spremembo laktacijske prehrane. Ugotovili smo, da je odziv na vključitev dodatnega koncentrata, ki je zagotavljal prehrano, oblikovano tako, da ustreza energijskim in beljakovinskim zahtevam živali, povzročil različne učinke na transkriptom levkocitov pri kravah MP in PP. Pri kravah MP je bila prehrana s HC očitno koristna, saj so imeli levkociti krave LC povečano regulacijo komplementa in koagulacijske kaskade ter prirojene imunske obrambne mehanizme proti patogenom. V nasprotju s tem so levkociti pri kravah PP na dieti s HC pokazali večji imunski/vnetni odziv in imele so višje razmerje PMN: UEC, kar kaže na povečano migracijo levkocitov v maternico. Te krave so imele kasneje daljši interval od telitve do spočetja, kar kaže na slabšo plodnost. Nadaljnje delo z večjim številom krav je upravičeno, da se potrdi ugotovitev o vplivu prehrane na plodnost in da se bolje razume, kako se presnovni odzivi prehrane po porodu razlikujejo pri mlajših živalih.

Reference

1. Mallard, BA; Dekkers, JC; Irska, MJ; Leslie, KE; Sharif, S.; Vankampen, CL; Wagter, L.; Wilkie, BN. Sprememba imunske odzivnosti v peripartalnem obdobju in njene posledice na zdravje krav molznic in telet. J. Dairy Sci. 1998, 81, 585–595. [CrossRef] [PubMed]

2. Wathes, DC; Cheng, Z.; Chowdhury, W.; Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Morris, DG; Patton, J.; Murphy, JJ. Negativna energijska bilanca spremeni globalno izražanje genov in imunske odzive v maternici krav molznic po porodu. Physiol. Genom. 2009, 39, 1–13. [CrossRef]

3. Ingvartsen, KL; Moyes, K. Prehrana, imunska funkcija in zdravje goveda molznic. Animal 2013, 7 (Suppl. 1), 112–122. [CrossRef] [PubMed]

4. Kehrli, ME, Jr.; Nonnecke, BJ; Roth, JA Spremembe v funkciji govejih nevtrofilcev v periparturientnem obdobju. Am. J. Vet. Res. 1989, 50, 207–214. [PubMed]

5. Ster, C.; Loiselle, MC; Lacasse, P. Vpliv koncentracije neesterificiranih maščobnih kislin v serumu po telitvi na funkcionalnost govejih imunskih celic. J. Dairy Sci. 2012, 95, 708–717. [CrossRef] [PubMed]

6. Lacetera, N.; Scalia, D.; Bernabucci, U.; Ronchi, B.; Pirazzi, D.; Nardone, A. Delovanje limfocitov pri prekomerno kondicioniranih kravah okoli poroda. J. Dairy Sci. 2005, 88, 2010–2016. [CrossRef] [PubMed]

7. Nonnecke, BJ; Kimura, K.; Goff, JP; Kehrli, ME, Jr. Učinki mlečne žleze na funkcionalne zmogljivosti populacij mononuklearnih levkocitov v krvi iz periparturientnih krav. J. Dairy Sci. 2003, 86, 2359–2368. [CrossRef]

8. Habel, J.; Sundrum, A. Neusklajenost porazdelitve glukoze med različnimi življenjskimi funkcijami v prehodnem obdobju krav molznic. Živali 2020, 10, 1028. [CrossRef]

9. Horst, EA; Kvidera, SK; Baumgard, LH Vabljeni pregled: Vpliv imunske aktivacije na prehodno zdravje in uspešnost krav - kritična ocena tradicionalnih dogem. J. Dairy Sci. 2021, 104, 8380–8410. [CrossRef]

10. Wathes, DC; Becker, F.; Buggiotti, L.; Crowe, MA; Ferris, C.; Foldager, L.; Grelet, C.; Hostens, M.; Ingvartsen, KL; Marchitelli, C.; et al. Povezave med koncentracijami IGF-1 v obtoku, statusom bolezni in transkriptomom levkocitov pri kravah molznicah v zgodnji laktaciji. Prežvekovalci 2021, 1, 147–177. [CrossRef]

11. Dimeloe, S.; Burgener, AV; Grahlert, J.; Hess, C. T-celični metabolizem, ki ureja aktivacijo, proliferacijo in diferenciacijo; modularni pogled. Imunologija 2017, 150, 35–44. [CrossRef] [PubMed]

12. Loftus, RM; Finlay, DK Imunometabolizem: celični metabolizem postane imunski regulator. J. Biol. Chem. 2016, 291, 1–10. [CrossRef] [PubMed]

13. Bauman, DE; Currie, WB Razdelitev hranil med nosečnostjo in dojenjem: pregled mehanizmov, ki vključujejo homeostazo in homeorezo. J. Dairy Sci. 1980, 63, 1514–1529. [CrossRef] [PubMed]

14. Drackley, nagrada JK ADSA Foundation Scholar. Biologija krav molznic v prehodnem obdobju: zadnja meja? J. Dairy Sci. 1999, 82, 2259–2273. [CrossRef] [PubMed]

15. Jabbour, HN; Prodaja, KJ; Catalano, RD; Norman, JE Vnetne poti pri ženskem reproduktivnem zdravju in boleznih. Reprodukcija 2009, 138, 903–919. [CrossRef]

16. Pascottini, OB; LeBlanc, SJ Modulacija imunske funkcije v peripartum govejega maternice. Teriogenologija 2020, 150, 193–200. [CrossRef]

17. Sheldon, IM; Lewis, GS; LeBlanc, S.; Gilbert, RO Opredelitev poporodne bolezni maternice pri govedu. Theriogenology 2006, 65, 1516–1530. [CrossRef]

18. Kuhla, B. Pregled: Provnetni citokini in vnetje hipotalamusa: Posledice nezadostnega vnosa krme pri prehodnih kravah molznicah. Žival 2020, 14, s65–s77. [CrossRef]

19. Ingvartsen, KL; Moyes, KM. Dejavniki, ki prispevajo k imunosupresiji pri kravah molznicah med porodnim obdobjem. Jpn. J. Vet. Res. 2015, 63 (Dodatek 1), S15–S24.

20. Wathes, DC; Cheng, Z.; Salavati, M.; Buggiotti, L.; Takeda, H.; Tang, L.; Becker, F.; Ingvartsen, KI; Ferris, C.; Hostens, M.; et al. Odnosi med presnovnimi profili in izražanjem genov v jetrih in levkocitih krav molznic v zgodnji laktaciji. J. Dairy Sci. 2021, 104, 3596–3616. [CrossRef]

21. Pinedo, P.; Melendez, P. Bolezni jeter, povezane s presnovnimi neravnovesji pri kravah molznicah. vet. Clin. N. Am. Hrana Anim. Prakt. 2022, 38, 433–446. [CrossRef] [PubMed]

22. Fenwick, MA; Fitzpatrick, R.; Kenny, DA; Diskin, MG; Patton, J.; Murphy, JJ; Wathes, DC Medsebojna razmerja med negativno energijsko bilanco (NEB) in regulacijo IGF v jetrih krav molznic v laktaciji. Domest. Anim. Endocrinol. 2008, 34, 31–44. [CrossRef] [PubMed]

23. Kobayashi, Y.; Boyd, CK; Bracken, CJ; Lamberson, WR; Keisler, DH; Lucy, MC Zmanjšana ribonukleinska kislina prenašalca rastnega hormonskega receptorja (GHR) v jetrih periparturientnega goveda je posledica specifične znižane regulacije GHR 1A, ki je povezana z zmanjšanim inzulinu podobnega rastnega faktorja I. Endocrinology 1999, 140, 3947–3954. [CrossRef]

24. Kvidera, SK; Horst, EA; Abuajamieh, M.; Mayorga, EJ; Fernandez, MV; Baumgard, LH Potrebe po glukozi aktiviranega imunskega sistema pri kravah pasme Holstein v laktaciji. J. Dairy Sci. 2017, 100, 2360–2374. [CrossRef] [PubMed]

25. Cheng, Z.; Wylie, A.; Ferris, C.; Ingvartsen, KL; Wathes, DC; Gplus, EC Vpliv prehrane in ravni neesterificiranih maščobnih kislin na globalne transkriptomske profile v mononuklearnih celicah periferne krvi v obtoku pri kravah molznicah v zgodnji laktaciji. J. Dairy Sci. 2021, 104, 10059–10075. [CrossRef]

26. Wathes, DC; Fenwick, M.; Cheng, Z.; Bourne, N.; Llewellyn, S.; Morris, DG; Kenny, D.; Murphy, J.; Fitzpatrick, R. Vpliv negativne energijske bilance na cikličnost in plodnost pri visokoproizvodnih kravah molznicah. Theriogenology 2007, 68 (Suppl. 1), S232–S241. [CrossRef]

27. Santos, JE; Bisinotto, RS; Ribeiro, ES Mehanizmi, na katerih temelji zmanjšana plodnost pri anovularnih kravah molznicah. Teriogenologija 2016, 86, 254–262. [CrossRef]

28. Pascottini, OB; Leroy, J.; Opsomer, G. Neprilagojenost na prehodno obdobje in posledice na plodnost krav molznic. Reprod. Dom. Anim. 2022, 57 (Suppl. 4), 21–32. [CrossRef]

29. Leroy, JL; Valckx, SD; Jordanens, L.; De Bie, J.; Desmet, KL; Van Hoeck, V.; Britt, JH; Marei, WF; Bols, PE Prehrana in presnovno zdravje mater v povezavi s kakovostjo jajčnih celic in zarodkov: kritični pogledi na to, kar smo se naučili iz modela krave molznice. Reprod. Fertil. Dev. 2015, 27, 693–703. [CrossRef]

30. Coffey, MP; Hickey, J.; Brotherstone, S. Genetski vidiki rasti holstein-frizijskih krav molznic od rojstva do zrelosti. J. Dairy Sci. 2006, 89, 322–329. [CrossRef]

31. Wathes, DC; Cheng, Z.; Bourne, N.; Taylor, VJ; Coffey, MP; Brotherstone, S. Razlike med prvorotkami in večkratnicami molznicami v medsebojnih razmerjih med presnovnimi lastnostmi, mlečnostjo in oceno telesne kondicije v periparturientnem obdobju. Domest. Anim. Endocrinol. 2007, 33, 203–225. [CrossRef] [PubMed]

32. Little, MW; Wylie, ARG; O'Connell, NE; Welsh, MD; Grelet, C.; Bell, MJ; Gordon, A.; Ferris, CP Imunološki učinki spreminjanja vsebnosti koncentrata v prehrani na osnovi travne silaže za krave holštajn frizijske pasme v zgodnji laktaciji. Žival 2019, 13, 799–809. [CrossRef] [PubMed]

33. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Salavati, M.; Wathes, CD; Genotip plus okolje, C. Primerjava transkriptoma v krožečih levkocitih v zgodnji laktaciji med prvorotkami in večkratrotkami zagotavlja dokaze za spremembe, povezane s starostjo. BMC Genom. 2021, 22, 693. [CrossRef] [PubMed]

34. Cardoso, FC; Kalscheur, KF; Drackley, JK Pregled simpozija: Prehranske strategije za izboljšano zdravje, proizvodnjo in plodnost v prehodnem obdobju. J. Dairy Sci. 2020, 103, 5684–5693. [CrossRef] [PubMed]

35. Ingvartsen, KL Bolezni, povezane s hranjenjem in upravljanjem pri kravah v prehodnem obdobju. Anim. Feed Sci. Technol. 2006, 126, 175–213. [CrossRef]

36. Ferris, CP; Gordon, FJ; Patterson, DC; Mayne, CS; McCoy, MA Kratkoročna primerjava učinkovitosti štirih travniških sistemov proizvodnje mleka za krave molznice, ki telijo jeseni. Travna krma Sci. 2003, 58, 8. [CrossRef]

37. Taylor, VJ; Cheng, Z.; Pushpakumara, PG; Beever, DE; Wathes, DC Razmerja med plazemskimi koncentracijami inzulinu podobnega rastnega faktorja-I pri kravah molznicah ter njihovo plodnostjo in mlečnostjo. vet. Rec. 2004, 155, 583–588. [CrossRef]

38. LeBlanc, SJ Interakcije metabolizma, vnetja in zdravja reproduktivnega trakta v poporodnem obdobju pri govedu molznicah. Reprod. Domc. Anim. 2012, 47 (Suppl. 5), 18–30. [CrossRef]

39. Vailati-Riboni, M.; Kanwal, M.; Bulgari, O.; Meier, S.; Duhovnik, NV; Burke, CR; Kay, JK; McDougall, S.; Mitchell, MD; Walker, CG; et al. Ocena telesne kondicije in raven prehrane pred porodom vplivata na regulatorje transkriptoma maščobnega tkiva metabolizma in vnetja pri pašnih kravah molznicah v prehodnem obdobju. J. Dairy Sci. 2016, 99, 758–770. [CrossRef]

40. Trevisi, E.; Minuti, A. Ocena prirojenega imunskega odziva pri periparturientni kravi. Res. vet. Sci. 2018, 116, 47–54. [CrossRef]

41. Druker, SA; Šišič, R.; van Straten, M.; Goshen, T.; Kedmi, M.; Raz, T. Citološka diagnoza endometritisa pri primiparous v primerjavi z večkratnimi kravami molznicami. J. Dairy Sci. 2022, 105, 665–683. [CrossRef] [PubMed]

42. Hamzeh-Cognasse, H.; Laradi, S.; Osselaer, JC; Cognasse, F.; Garraud, O. Zmanjšanje patogena Amotosalen-HCl-UVA ne spremeni presnove topnega liganda CD40, liganda Ox40 in interkeukina-27 po shranjevanju, citokinov, ki so na splošno povezani z resnimi neželenimi dogodki. Vox Sang. 2015, 108, 205–207. [CrossRef] [PubMed]

43. de Greeff, A.; Zadoks, R.; Ruuls, L.; Toussaint, M.; Nguyen, TK; Downing, A.; Rebel, J.; Stockhofe-Zurwieden, N.; Smith, H. Zgodnji odziv gostitelja v mlečni žlezi po eksperimentalnem izzivu Streptococcus uberis pri telicah. J. Dairy Sci. 2013, 96, 3723–3736. [CrossRef] [PubMed]

44. Cheng, Z.; Chauhan, L.; Barry, AT; Abudureyimu, A.; Oguejiofor, CF; Chen, X.; Wathes, DC Okužba z virusom akutne goveje virusne driske zavira izražanje genov, stimuliranih z interferonom tau, v govejem endometriju. Biol. Reprod. 2017, 96, 1142–1153. [CrossRef]

45. Schoggins, JW Z interferonom stimulirani geni: Kaj vse počnejo? Annu. Rev. Virol. 2019, 6, 567–584. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Ohto, U. Aktivacijski in regulacijski mehanizmi NOD podobnih receptorjev, ki temeljijo na strukturni biologiji. Spredaj. Immunol. 2022, 13, 953530. [CrossRef]

47. Cheng, Z.; Palma-Vera, S.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Becker, F.; Werling, D.; Wathes, DC; Gplus, EC Transkriptomska analiza krožečih levkocitov, pridobljenih med okrevanjem po kliničnem mastitisu, ki ga povzroča Escherichia coli pri kravah molznicah Holstein. Živali 2022, 12, 2146. [CrossRef]

49. Loria, V.; Dato, I.; Graziani, F.; Biasucci, LM Myeloperoxidase: nov biomarker vnetja pri ishemični bolezni srca in akutnih koronarnih sindromih. Mediat. vnetje. 2008, 2008, 135625. [CrossRef]

50. Olivera, A.; Beaven, MA; Metcalfe, DD Mastociti kažejo na njihov pomen za zdravje in bolezen. J. Alergijska klinika. Immunol. 2018, 142, 381–393. [CrossRef]

50. Dickinson, SE; Griffin, BA; Elmore, MF; Kriese-Anderson, L.; Elmore, JB; Dyce, PW; Rodning, SP; Biase, profili transkriptoma FH v perifernih belih krvnih celicah v času umetne oploditve razlikujejo goveje telice z različnim potencialom plodnosti. BMC Genom. 2018, 19, 129. [CrossRef]

51. Van Meulder, F.; Van Coppernolle, S.; Borloo, J.; Rinaldi, M.; Li, RW; Chiers, K.; Van den Broeck, W.; Vercruysse, J.; Claerebout, E.; Geldhof, P. Eksocitoza zrnc granulizina in grancima B kot potencialni ključni mehanizem pri imunosti, povzročeni s cepivom, pri govedu proti nematodi Ostertagia ostertagi. Okužiti. Imun. 2013, 81, 1798–1809. [CrossRef] [PubMed]

52. Taylor, JL; Brown, BL Strukturna osnova za disregulacijo sintaze aminolevulinske kisline pri človeških boleznih. J. Biol. Chem. 2022, 298, 101643. [CrossRef] [PubMed]

53. Trapani, JA; Sutton, VR Granzyme B: Pro-apoptotične, protivirusne in protitumorske funkcije. Curr. Opin. Immunol. 2003, 15, 533–543. [CrossRef] [PubMed]

54. Campanile, G.; Baruselli, PS; Limone, A.; D'Occhio, MJ Lokalno delovanje citokinov in imunskih celic v komunikaciji med zasnovo in maternico v kritičnem obdobju zgodnjega razvoja zarodka, pritrditve in implantacije - Posledice za preživetje zarodka pri govedu: pregled. Teriogenologija 2021, 167, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

55. Bougarne, N.; Weyers, B.; Desmet, SJ; Deckers, J.; Ray, DW; Staels, B.; De Bosscher, K. Molekularna dejanja PPARalpha pri presnovi lipidov in vnetju. Endocr. Rev. 2018, 39, 760–802. [CrossRef]

56. Sobolev, VV; Čepourina, E.; Korsunskaya, IM; Geppe, NA; Chebysheva, SN; Soboleva, AG; Mezentsev, A. Vloga transkripcijskega faktorja PPAR-gama v patogenezi psoriaze, kožnih celic in imunskih celic. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 9708. [CrossRef]

57. Pesem, S.; Attia, RR; Connaughton, S.; Niesen, MI; Ness, GC; Elam, MB; Hori, RT; Cook, GA; Park, EA Receptor alfa, aktiviran s peroksisomskim proliferatorjem (PPARalfa) in koaktivator PPAR gama (PGC-1alfa) inducirata karnitin palmitoiltransferazo IA (CPT-1A) prek neodvisnih genskih elementov. Mol. Celica. Endocrinol. 2010, 325, 54–63. [CrossRef]

59. Ziouzenkova, O.; Plutzky, J. Presnova retinoidov in odzivi jedrskih receptorjev: novi vpogled v usklajeno regulacijo kompleksa PPAR-RXR. FEBS Lett. 2008, 582, 32–38. [CrossRef]

59. Espenshade, PJ; Hughes, AL Regulacija sinteze sterola v evkariontih. Annu. Rev. Genet. 2007, 41, 401–427. [CrossRef]

60. Van Meer, G.; Voelker, DR; Feigenson, GW Membranski lipidi: kje so in kako se obnašajo. Nat. Rev. Mol. Celica. Biol. 2008, 9, 112–124. [CrossRef]

61. Aguilar-Ballester, M.; Herrero-Cervera, A.; Vinue, A.; Martinez-Hervas, S.; Gonzalez-Navarro, H. Vpliv metabolizma holesterola na delovanje imunskih celic in aterosklerozo. Hranila 2020, 12, 2021. [CrossRef] [PubMed]

63. Mamedova, LK; Yuan, K.; Laudick, AN; Fleming, SD; Mašek, DG; Bradford, BJ Tollu podobna signalizacija receptorja 4 je potrebna za indukcijo izražanja glukoneogenega gena s palmitatom v celicah človeškega jetrnega karcinoma. J. Nutr. Biochem. 2013, 24, 1499–1507. [CrossRef] [PubMed]

63. Soto-Heredero, G.; Gomez de Las Heras, MM; Gabande-Rodriguez, E.; Oller, J.; Mittelbrunn, M. Glikoliza - ključni igralec pri vnetnem odzivu. FEBS J. 2020, 287, 3350–3369. [CrossRef] [PubMed]

65. Kominsky, DJ; Campbell, EL; Colgan, SP Presnovni premiki v imunosti in vnetju. J. Immunol. 2010, 184, 4062–4068. [CrossRef]

65. Afacan, NJ; Yeung, AT; Pena, OM; Hancock, RE Terapevtski potencial obrambnih peptidov gostitelja pri okužbah, odpornih na antibiotike. Curr. Pharm. des. 2012, 18, 807–819. [CrossRef]

66. Auvynet, C.; Rosenstein, Y. Večnamenski obrambni peptidi gostitelja: protimikrobni peptidi, majhni, a veliki igralci v prirojeni in prilagodljivi imunosti. FEBS J. 2009, 276, 6497–6508. [CrossRef]

67. Hilchie, AL; Wuerth, K.; Hancock, RE Imunska modulacija z večplastnimi kationskimi obrambnimi (protimikrobnimi) peptidi gostitelja. Nat. Chem. Biol. 2013, 9, 761–768. [CrossRef]

68. Cheng, Z.; Buggiotti, L.; Salavati, M.; Marchitelli, C.; Palma-Vera, S.; Wylie, A.; Takeda, H.; Tang, L.; Crowe, MA; Wathes, DC; et al. Globalni transkriptomski profili krožečih levkocitov pri kravah v zgodnji laktaciji s kliničnim ali subkliničnim mastitisom. Mol. Biol. Rep. 2021, 48, 4611–4623. [CrossRef]

69. Foley, C.; Chapwanya, A.; Callanan, JJ; Whiston, R.; Miranda-CasoLuengo, R.; Lu, J.; Meijer, WG; Lynn, DJ; O'Farrelly, C.; Meade, KG Integrirana analiza lokalnih in sistemskih sprememb pred razvojem poporodnega citološkega endometritisa. BMC Genom. 2015, 16, 811. [CrossRef]

70. Machado, VS; Silva, TH Prilagodljiva imunost v poporodni maternici: potencialna uporaba cepiv za nadzor metritisa. Teriogenologija 2020, 150, 201–209. [CrossRef]

71. Ley, K.; Hoffman, HM; Kubes, P.; Cassatella, MA; Zychlinsky, A.; Hedrick, CC; Catz, SD Neutrofili: Nova spoznanja in odprta vprašanja. Sci. Immunol. 2018, 3, eaat4579. [CrossRef] [PubMed]

72. Wahl, SM; Feldman, GM; McCarthy, JB Regulacija adhezije in signalizacije levkocitov pri vnetju in bolezni. J. Leukoc. Biol. 1996, 59, 789–796. [CrossRef] [PubMed]

73. Schubert, K.; Polte, T.; Bonisch, U.; Šader, S.; Holtappels, R.; Hildebrandt, G.; Lehmann, J.; Simon, JC; Anderegg, U.; Saalbach, A. Thy-1 (CD90) uravnava ekstravazacijo levkocitov med vnetjem. EUR. J. Immunol. 2011, 41, 645–656. [CrossRef] [PubMed]

74. Dreymueller, D.; Pruessmeyer, J.; Schumacher, J.; Fellendorf, S.; Hess, FM; Seifert, A.; Babendreyer, A.; Bartsch, JW; Ludwig, A. Metaloproteinaza ADAM8 spodbuja rekrutacijo levkocitov in vitro in pri akutnem vnetju pljuč. Am. J. Physiol. Pljučna celica. Mol. Physiol. 2017, 313, L602–L614. [CrossRef]

76. Kostelnik, KB; Barker, A.; Schultz, C.; Mitchell, TP; Rajeeve, V.; Beli, IJ; Aurrand-Lions, M.; Nourshargh, S.; Cutillas, P.; Nightingale, TD Dinamično trgovanje in promet JAM-C je bistvenega pomena za migracijo endotelijskih celic. PLoS Biol. 2019, 17, e3000554. [CrossRef] [PubMed]

76. Stillie, R.; Faruk, SM; Gordon, JR; Stadnyk, AW Funkcionalni pomen izražanja dveh tipov receptorjev IL-8 na PMN. J. Leukoc. Biol. 2009, 86, 529–543. [CrossRef]

77. Bouton, AH; Riggins, RB; Bruce-Staskal, PJ Funkcije adapterskega proteina Cas: konvergenca signala in določanje celičnih odzivov. Oncogene 2001, 20, 6448–6458. [CrossRef]

78. Chen, X.; Cheng, Z.; Zhang, S.; Werling, D.; Wathes, DC S kombinacijo študij asociacij na celotnem genomu in analiz podatkov o diferencialni genski ekspresiji identificiramo kandidatne gene, ki vplivajo na mastitis, ki ga povzročata dva različna patogena pri kravah molznicah. Odpri J. Anim. Sci. 2015, 5, 358–393. [CrossRef]

79. Chang, GW; Hsiao, CC; Peng, YM; Vieira Braga, FA; Kragten, NA; Remmerswaal, EB; van de Garde, MD; Straussberg, R.; Konig, GM; Kostenis, E.; et al. Receptor GPR56/ADGRG1, povezan z adhezijskim proteinom G, je inhibitorni receptor v človeških celicah NK. Celica. Rep. 2016, 15, 1757–1770. [CrossRef]

80. Bi, J.; Tian, ​​Z. Disfunkcija celic NK in imunoterapija kontrolnih točk. Spredaj. Immunol. 2019, 10, 1999. [CrossRef]

81. Minuti, A.; Gallo, A.; Lopreiato, V.; Bruschi, S.; Piccioli-Cappelli, F.; Uboldi, O.; Trevisi, E. Vpliv velikosti legla na presnovni in aminokislinski profil pred porodom pri kuncih. Žival 2020, 14, 2109–2115. [CrossRef] [PubMed]

82. Crookenden, MA; Moyes, KM; Kuhn-Sherlock, B.; Lehnert, K.; Walker, CG; Loor, JJ; Mitchell, MD; Murray, A.; Dukkipati, VSR; Vailati-Riboni, M.; et al. Transkriptomska analiza krožečih nevtrofilcev pri kravah molznicah, ki so se peripartalno pasele s presnovnim stresom. J. Dairy Sci. 2019, 102, 7408–7420. [CrossRef] [PubMed]

83. Sharma, JN; Al-Omran, A.; Parvathy, SS Vloga dušikovega oksida pri vnetnih boleznih. Inflammopharmacology 2007, 15, 252–259. [CrossRef] [PubMed]

84. Martino, MR; Gutierrez-Aguilar, M.; Yiew, NKH; Lutkewitte, AJ; Singer, JM; McCommis, KS; Ferguson, D.; Liss, KHH; Yoshino, J.; Renkemeyer, MK; et al. Utišanje alanin transaminaze 2 v diabetičnih jetrih zmanjša hiperglikemijo z zmanjšanjem glukoneogeneze iz aminokislin. Cell Rep. 2022, 39, 110733. [CrossRef] [PubMed]

85. Tall, AR; Yvan-Charvet, L. Holesterol, vnetje in prirojena imunost. Nat. Rev. Immunol. 2015, 15, 104–116. [CrossRef]

86. Wathes, D.; Cheng, Z.; Mareiy, W.; Fouladi-Nasht, A. Polinenasičene maščobne kisline in plodnost pri samicah sesalcev: posodobitev. CABI Rev. 2013, 8, 1–14. [CrossRef]

87. Alipour, A.; van Oostrom, AJ; Izraeljan, A.; Verseyden, C.; Collins, JM; Frayn, KN; Plokker, TW; Elte, JW; Castro Cabezas, M. Aktivacija levkocitov z lipoproteini, bogatimi s trigliceridi. Arterioskler. Thromb. Vasc. Biol. 2008, 28, 792–797. [CrossRef]

88. Castoldi, A.; Monteiro, LB; van Teijlingen Bakker, N.; Sanin, DE; Rana, N.; Corrado, M.; Cameron, AM; Hassler, F.; Matsushita, M.; Caputa, G.; et al. Sinteza triacilglicerola poveča vnetno funkcijo makrofagov. Nat. Komun. 2020, 11, 4107. [CrossRef]

89. Bell, AW Regulacija presnove organskih hranil med prehodom iz pozne nosečnosti v zgodnjo laktacijo. J. Anim. Sci. 1995, 73, 2804–2819. [CrossRef]

90. Moore, DAPSU; Varga, G. BUN in MUN: Testiranje dušika sečnine pri govedu molznicah. Kompendij 1996, 18, 712–720.

91. Wathes, DC; Bourne, N.; Cheng, Z.; Mann, GE; Taylor, VJ; Coffey, MP Večkratne korelacijske analize presnovnih in endokrinih profilov s plodnostjo pri prvorotkah in večkratnicah. J. Dairy Sci. 2007, 90, 1310–1325. [CrossRef] [PubMed]

92. Abe, R.; Donnelly, SC; Peng, T.; Bucala, R.; Metz, CN Fibrociti periferne krvi: pot diferenciacije in migracija na mesta rane. J. Immunol. 2001, 166, 7556–7562. [CrossRef] [PubMed]

93. Schreier, S.; Triampo, W. Populacija redkih celic v krvnem obtoku. Kaj je to in za kaj je dobro? Celice 2020, 9, 790. [CrossRef] [PubMed]

94. Lynn, AK; Yannas, IV; Bonfield, W. Antigenost in imunogenost kolagena. J. Biomed. Mater. Res. 2004, 71, 343–354. [CrossRef]

95. Roche, JR; Burke, CR; Crookenden, MA; Heiser, A.; Loor, JL; Meier, S.; Mitchell, MD; Phyn, CVC; Turner, SA Plodnost in prehodna krava molznica. Reprod. Fertil. Dev. 2017, 30, 85–100. [CrossRef]

97. Galvao, KN; Flaminio, MJ; Brittin, SB; Šper, R.; Fraga, M.; Caixeta, L.; Ricci, A.; Stražar, CL; Butler, WR; Gilbert, RO Povezava med boleznijo maternice in indikatorji nevtrofilcev in sistemskega energijskega statusa pri kravah Holstein v laktaciji. J. Dairy Sci. 2010, 93, 2926–2937. [CrossRef]

97. Dahl, MO; Maunsell, FP; De Vries, A.; Galvao, KN; Risco, CA; Hernandez, JA. Dokazi, da lahko mastitis povzroči izgubo brejosti pri kravah molznicah: sistematični pregled opazovalnih študij. J. Dairy Sci. 2017, 100, 8322–8329. [CrossRef]

98. Hansen, PJ; Soto, P.; Natzke, RP Mastitis in plodnost pri govedu – možna vpletenost vnetja ali imunske aktivacije v embrionalno smrtnost. Am. J. Reprod. Immunol. 2004, 51, 294–301. [CrossRef]

99. Malinowski, E.; Gajewski, Z. Mastitis in motnje plodnosti pri kravah. Pol. J. Vet. Sci. 2010, 13, 555–560.

100. Edmonson, AJ; Lean, IJ; Weaver, LD; Farver, T.; Webster, GA Tabela točkovanja telesne kondicije za krave molznice Holstein. J. Dairy Sci. 1989, 72, 11. [CrossRef]

101. Larsen, T.; Rontved, CM; Ingvartsen, KL; Vels, L.; Bjerring, M. Aktivnost encimov in beljakovine akutne faze v mleku, ki se uporabljajo kot indikatorji akutnega kliničnega mastitisa, ki ga povzroča E. coli LPS. Žival 2010, 4, 1672–1679. [CrossRef] [PubMed]

102. Krogh, MA; Hostens, M.; Salavati, M.; Grelet, C.; Sorensen, MT; Wathes, DC; Ferris, CP; Marchitelli, C.; Signorelli, F.; Napolitano, F.; et al. Spremembe biomarkerjev v krvi in ​​mleku med in znotraj črede pri kravah Holstein v zgodnji laktaciji. Žival 2020, 14, 1067–1075. [CrossRef] [PubMed]

103. Buggiotti, L.; Cheng, Z.; Wathes, DC; Gplus, EC Rudarjenje nepreslikanih odčitkov v podatkih govejega RNA-Seq razkriva razširjenost virusa govejega herpesa -6 pri evropskih kravah molznicah in s tem povezane spremembe v njihovem fenotipu in transkriptomu levkocitov. Virusi 2020, 12, 1451. [CrossRef] [PubMed]

104. Beltman, ME; Forde, N.; Furney, P.; Carter, F.; Roche, JF; Lonergan, P.; Crowe, MA Karakterizacija genske ekspresije endometrija in presnovnih parametrov pri govejih telicah, ki dajejo žive ali nežive zarodke 7. dan po osemenitvi. Reprod. Fertil. Dev. 2010, 22, 987–999. [CrossRef] [PubMed]