Zaščitni učinek izvlečka djulisa (Chenopodium Formosanum) proti staranju kože, ki ga povzročajo UV žarki in staranje, z zmanjševanjem oksidativnega stresa in razgradnje kolagena 2. del

3. Razprava

Fibroblasti igrajo ključno vlogo pri presnovi dermalnega zunajceličnega matriksa, vključno s sintezo kolagena, elastičnih vlaken in glikozaminoglikana za tvorbo gostega vezivnega tkiva [33]. Kopičenje UV in AGE stresa povzroča razgradnjo kolagena in se medsebojno moti med intrinzičnim in ekstrinzičnim staranjem [3,34]. V zadnjih letih poteka razvoj naravnih izdelkov ali materialov z antioksidativnimi, anti-fotostaranjem in antiglikacijskimi aktivnostmi za izboljšanje staranja kože.

Glikozid cistanche lahko tudi poveča aktivnost SOD v srčnem in jetrnem tkivu ter znatno zmanjša vsebnost lipofuscina in MDA v vsakem tkivu, učinkovito lovi različne reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂ itd.) in ščiti pred povzročeno poškodbo DNK z OH-radikali. Cistanche feniletanoidni glikozidi imajo močno sposobnost lovljenja prostih radikalov, večjo redukcijsko sposobnost kot vitamin C, izboljšajo aktivnost SOD v suspenziji semenčic, zmanjšajo vsebnost MDA in imajo določen zaščitni učinek na delovanje membrane semenčic. Cistanche polisaharidi lahko povečajo aktivnost SOD in GSH-Px v eritrocitih in pljučnem tkivu eksperimentalno starajočih se miši, ki jih povzroča D-galaktoza, pa tudi zmanjšajo vsebnost MDA in kolagena v pljučih in plazmi ter povečajo vsebnost elastina. dober čistilni učinek na DPPH, podaljša čas hipoksije pri starajočih se miših, izboljša aktivnost SOD v serumu in upočasni fiziološko degeneracijo pljuč pri eksperimentalno starajočih se miših. Pri celični morfološki degeneraciji so poskusi pokazali, da ima Cistanche dobro antioksidativno sposobnost in ima potencial, da postane zdravilo za preprečevanje in zdravljenje bolezni staranja kože. Hkrati ima ehinakozid v Cistanche pomembno sposobnost čiščenja prostih radikalov DPPH in ima sposobnost čiščenja reaktivnih kisikovih vrst ter preprečuje razgradnjo kolagena, ki jo povzročijo prosti radikali, ima pa tudi dober učinek popravljanja na poškodbe anionov prostih radikalov timina.

Kliknite Anti-Aging Cistanche Para Que Serve

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Chenopodium formosanum (CF) je avtohtona žitna rastlina, gojena v Tajvanu, ki se večinoma goji v stanovanjskih območjih staroselcev. Poleg uporabe žit je uporaba CF, ki temelji na antioksidativnih lastnostih, pritegnila vse večjo pozornost [28–30,35]. Polifenoli so dobro znani antioksidanti in zaščitniki kože, saj imajo močno aktivnost lovljenja prostih radikalov [36], zmanjšujejo vnetje in absorbirajo UV-sevanje, da zagotovijo zaščito kože pred fotofotozaščito [37,38]. Rutin je flavonoid, ki je široko razširjen v sadju in zelenjavi, ter reprezentativni polifenol pri CF, kot so pokazale prejšnje študije [21, 22]; več poročil je pokazalo biološke učinke rutina na staranje kože, ki ga povzroči ROS [39], in predlagalo, da rutin učinkovito zavira tvorbo AGE pri sintezi kolagena [40]. Za CF je bilo indicirano, da ščiti kožo pred UV-povzročenimi epidermalnimi poškodbami in vnetjem v keratinocitih in mišjih modelih, rutin pa je glavna sestavina CF, ki je prispevala k zaščitnemu učinku [19]. V tej študiji so rezultati pokazali, da so imele celice HaCaT, zdravljene s CF, višjo stopnjo preživetja in manjšo proizvodnjo interlevkina -6, MMP-1 in ROS v pogojih, obsevanih z UVB. Prejšnja študija je uporabila keratinocite, izpostavljene UVB sevanju, za posnemanje modela fotostaranja kože, fibroblasti pa so bili uporabljeni v tej študiji za raziskovanje mehanizmov in učinkov intrinzičnih dejavnikov (AGE) in zunanjih dejavnikov (UV) na staranje kože usnjice. Rezultati te študije so pokazali, da je CF zmanjšal UV-inducirano citotoksičnost in zagotovil dobro aktivnost odstranjevanja ROS, rezultati pa so bili skladni s Hongovo študijo [19]. Ta študija je upoštevala več dejavnikov staranja kože in raziskala anti-glikacijski učinek CF na intrinzično staranje, ugotovitve pa so dodatno potrdile, da ima CF odlično zaščito kože z ublažitvijo oksidativnega stresa in razgradnje kolagena.

20-Hidroksiekdizon je bioaktivna spojina, ki spada med fitoekdisteroide in jo pogosto najdemo v Chenopodium formosanum [21–24]. Microsorum grossum (Polypodiaceae) je ena najpogosteje uporabljenih praproti v polinezijski tradicionalni medicini, njeni izvlečki listov in korenike pa vsebujejo 20-hidroksiekdizon kot glavne bioaktivne sestavine. Znano je, da ima Microsorum grossum UVB-zaščitne učinke na človeške dermalne fibroblaste z uravnavanjem antioksidativnega encima HO-1 in zaviranjem prezgodnjega staranja, ki ga povzroča stres [41]. Chenopodium quinoa (Amaranthaceae) je semenski pridelek, ki ga domorodci v Andih v Južni Ameriki imenujejo "zlato zrno", vključno z 20-hidroksiekdizonom, za katerega je bilo dokazano, da zavira znotrajcelično proizvodnjo ROS in aktivnost MMP [42]. Poleg tega ima 20-hidroksiekdizon, izoliran iz semen C. quinoa, močno zaviralno aktivnost proti kolagenazi in prostim radikalom DPPH ter močno sposobnost keliranja železovih ionov [43]. Številne prejšnje študije so poročale, da izvleček CF vsebuje rutin in 20-hidroksiekdizon kot svojo bogato bioaktivno sestavino, druge rastline, ki vsebujejo te spojine, pa imajo podobno delovanje in potencial za nego kože. Primarna prednost botaničnih zdravil je njihova kompleksna sestava in sinergistični učinek sorodnih spojin z več aktivnostmi za večjo učinkovitost [44]. Rastlinski izvlečki predstavljajo obetavno prihodnost v negi kože zaradi svoje privlačnosti kot naravnih izdelkov, dojemanja kot varnega ter številčnosti in trajnosti.

ROS so stranski produkti rednega oksidativnega delovanja celic v transportni verigi elektronov reakcije aerobne presnove. Prekomerna izpostavljenost ultravijoličnim žarkom in drugi okoljski stresorji preobremenijo kožno antioksidativno sposobnost, kar dodatno inducira proizvodnjo ROS, fragmentacijo DNA, lipidno peroksidacijo in apoptozo [45,46]. Visoke ravni ROS sprožijo kaskade signalov staranja v kožnih celicah in s tem spodbujajo staranje celic, celo smrt [47]. Glede na rezultate celičnega testa je izvleček CF brez citotoksičnih učinkov na fibroblaste pomembno rešil UV-inducirano celično citotoksičnost in pokazal dobro fotoprotektivno aktivnost. Poleg tega se je ROS, ki nastane v fibroblastih, znatno povečal z UV-sevanjem ali z zdravljenjem z AGEs in oboje je učinkovito zaviral ekstrakt CF. Močno aktivnost CF pri lovljenju radikalov so potrdili tudi z različnimi antioksidativnimi testi. Polifenoli so sposobni donirati elektrone prostim radikalom in jih pretvoriti v bolj stabilne nereaktivne vrste zaradi prisotnosti hidroksilnih skupin v obročni strukturi [48,49]. CF, bogat s polifenoli, lahko prepreči poškodbe kože, ki jih povzročajo ROS, tako da prekine verižno reakcijo prostih radikalov. Več z antioksidanti povezanih spojin v izvlečku CF zagotavlja sinergistični učinek za izboljšanje celotne aktivnosti izvlečka CF in naredi izvleček CF močan antioksidant za zaščito kože pred oksidativnim stresom.

Koža ima endogeni antioksidativni obrambni sistem za spopadanje z oksidativnim stresom, ki ga povzroča staranje. Nrf2 je transkripcijski faktor, ki deluje proti oksidativnemu stresu, Keap1 pa je senzor tlaka, ki uravnava izražanje Nrf2 [8]. Ko neravnovesje znotrajceličnega tlaka povzroči spremembo konfiguracije Keap1 in izgubi sposobnost vezave na Nrf2, se Nrf2 premakne v jedro in poveča raven intrinzičnih antioksidativnih encimov, da prepreči oksidativno poškodbo in izvaja fotozaščitno aktivnost [50,51]. Rezultati so pokazali, da lahko ekstrakt CF sproži signalno pot Nrf2 in antioksidativni obrambni sistem, ko celice stimulira oksidativni stres, ki ga povzroči UV. Izvleček CF je povečal ekspresijo Nrf2 in HO-1. Celične obrambne lastnosti izvlečkov CF je mogoče razložiti z njihovo sposobnostjo, da neposredno nevtralizirajo ROS ali posredno povečajo izražanje celičnih obrambnih proteinov. Na podlagi zgornjih rezultatov lahko izvleček CF zmanjša znotrajcelični oksidativni stres in se uporablja kot fotozaščita. Poleg neposrednega učinka na nastajanje ROS je izvleček CF tudi zaščitil fibroblaste pred UV-poškodbami z izboljšanjem intracelularnih antioksidativnih obrambnih mehanizmov prek Nrf2 in njegovega ciljnega faktorja HO-1.

Fotostaranje povzroča neravnovesje med kopičenjem in razgradnjo ECM po ponavljajoči se UV absorpciji. UV-sevanje poškoduje spremembe kožnega kolagena in pospeši nastajanje ROS, ki nato deluje na celice in komponente matriksa, da posreduje pri nadaljnjem prometu [33,47]. ROS in oksidativni stres povzročita poškodovano kožo z aktivacijo signalizacije AP-1 in zvišanjem več MMP. Med normalnim vzdrževanjem tkiva se kolagen nenehno presnavlja. Vendar pa je znano, da UV-sevanje inducira tri različne MMP, kolagenazo (MMP-1), stromelizin (MMP-3) in želatinazo (MMP-9), da zlomijo kolagen in elastična vlakna, kar ima za posledico razdrobljenost in neorganizacijo [52,53]. TIMP so zaviralci MMP in homeostaza med tema dvema proteinoma igra pomembno vlogo pri funkcionalni in strukturni celovitosti ECM [54–56]. V tej študiji je izvleček CF zaviral AP-1, ki ga povzroča UVB, ter fosforilacijo proteinov ERK in p38 v fibroblastih človeške kože. Poleg tega je zdravljenje z izvlečkom CF blokiralo z UVB povzročeno razgradnjo kolagena z zaviranjem izražanja MMP-1, -3 in -9 v fibroblastih človeške kože in induciranjem izražanja TIMP-1 proti aktivnosti MMP . Pot TGF je glavna pot, ki uravnava biosintezo prokolagena in proizvodnjo ROS [57]. Oksidativni stres zavira signalizacijo TGF z znižanjem regulacije Smad3, kar prispeva k izgubi vsebnosti kolagena v postarani koži [4]. Rezultati so pokazali, da je izvleček CF povečal izražanje TGF- in Smad3, da se poveča skupna vsebnost kolagena. Na podlagi zgornjih rezultatov je izvleček CF izboljšal z UVB povzročeno razgradnjo kolagena z odstranjevanjem ROS, inhibicijo MMP in regulacijo TGF.

Eden od dejavnikov intrinzičnega staranja kože je postopno kopičenje AGE skozi celotno življenjsko dobo. RAGE spada v superdružino imunoglobulinskih receptorjev celične površine, ki medsebojno deluje z več ligandi, zlasti s CML, enim od produktov glikacije Maillardove reakcije [58]. RAGE je močno izražen v kožnih keratinocitih in fibroblastih z interakcijo z AGE, ki mu sledi UVB sevanje [59] in povečan na koži, izpostavljeni soncu [60]. UV-inducirana oksidacija pospeši tvorbo človeškega kožnega elastina pri aktinični elastozi, AGE pa se kopičijo na kožnem kolagenu in elastinu, kar moti normalno delovanje kože [61]. Aktivacija RAGE zmanjša sintezo kolagena tipa I in proizvodnjo matriksa v fibroblastih [62]. Prejšnja študija je omenila, da izvleček CF zavira tvorbo AGE v brezceličnem sistemu [32], vendar podroben antiglikacijski mehanizem v dermalnih fibroblastih ostaja nejasen. Na podlagi rezultatov te študije smo domnevali, da sta preprečevanje razgradnje kolagena z blokiranjem interakcije AGE-RAGE in zmanjšanje proizvodnje ROS v celicah možni antiglikacijski poti ekstrakta CF.

Znano je, da so biološki izdelki, ki jih povzroča glikacija, povezani s staranjem kože, sladkorno boleznijo in napredovanjem nekaterih tumorjev. Med procesom staranja kopičenje AGE spremeni mehanske lastnosti kože s povečanjem togosti [34]. Zato velja, da je prisotnost AGEs eden od dejavnikov za zapoznelo celjenje ran in izgubo elastičnosti zaceljene kože. Navzkrižni pogovor med RAGE in TGF- 1 vpliva na celjenje ran pri sladkorni bolezni z uravnavanjem kroženja kolagena in proizvodnje citokinov v celicah fibroblastov, zdravljenih z AGEs [63]. V tej študiji izvleček CF ne le spodbuja sintezo pro-kolagena v fibroblastih, ampak tudi izboljša razgradnjo kolagena, ki jo povzroča notranje in zunanje staranje kože. Poleg tega CF ekstrahira povečano ekspresijo TGF in znižano ekspresijo RAGE. Na podlagi zgornjih rezultatov raziskav je mogoče v prihodnosti nadalje raziskati vlogo CF v mehanizmih celjenja ran, povezanih z glikacijskim stresom.

4. Materiali in metode

4.1. Materiali in kemikalije

Reagenti, uporabljeni v celični kulturi, vključno z Dulbeccovim modificiranim Eagleovim medijem (DMEM), fetalnim govejim serumom (FBS), penicilinom-streptomicinom in tripsinom-EDTA, so bili pridobljeni od Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, ZDA) . CML je bil kupljen pri Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, ZDA). Natrijev dodecil sulfat (SDS), 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazolijev bromid ( MTT) in kalijev fosfat-kalijev hidroksid (KH2PO4-KOH) sta bila kupljena pri USB Corporation (Cleveland, OH, ZDA). 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), kalijev fericianid(III) (K3Fe(CN)6), železov klorid (FeCl3), askorbinska kislina, fenazin metosulfat (PMS), - nikotinamid adenin dinukleotid , reduciran dinatrijev hidrat (NADH), nitrotetrazolijev modri klorid (NBT), butiliran hidroksianizol (BHA), 2-deoksi-D-riboza, tiobarbiturna kislina (TBA), trikloroocetna kislina (TCA), manitol, železov klorid ( FeCl2), etilendiamintetraocetna kislina (EDTA), 20, 70 -diklorofluorescin-diacetat (H2DCFDA), 2-propanol in 20-hidroksiekdizon so bili kupljeni pri Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO, ZDA) . Rutin je bil pridobljen pri ACROS Organics (Morris Plains, NJ, ZDA). Acetonitril in mravljično kislino stopnje HPLC smo pridobili pri JT Baker, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, ZDA). Vse druge uporabljene kemikalije so bile analitske stopnje ali višje.

4.2. Priprava izvlečka CF

CF, uporabljen v tej študiji, je bil kupljen v okrožju Pingtung na Tajvanu, izvleček CF pa je dobavil TCI Co., Ltd. (Taipei, Tajvan). O metodi priprave ekstrakta CF so poročali že prej [32]. Na kratko, neoluščeni Chenopodium formosanum smo dodali vodi v razmerju 1:10 (w/v) in ekstrahirali pri treh različnih temperaturah, najprej pri 25 ◦C, nato pri 50 ◦C in nazadnje pri 70 ◦C. Zmes smo centrifugirali pri 4600 × g 20 minut in zbrali supernatant. Prašek ekstrakta CF smo dobili po odstranitvi topila iz supernatanta z liofilizacijo in shranili pri sobni temperaturi.

4.3. HPLC-ESI-MS/MS in kvantitativna analiza MRM

HPLC-ESI masna spektrometrična analiza je bila izvedena s tekočinsko kromatografijo Dionex Ultimate 3{{10}}00 (Thermo Scientific, Waltham, MA, ZDA) v kombinaciji z ionsko pastjo masni spektrometer (HCT Ultra, Bruker Daltonics, Bremen, Nemčija). Metoda ločevanja je bila izvedena, kot so opisali Chen et al., z manjšimi spremembami [22]. Ekstrakt CF smo vbrizgali v kolono Atlantis T3 C18 (2,1 mm ID × 150 mm, velikost delcev 3 µm, Waters Corp., Milford, MA, ZDA), ki je bila povezana z zaščitno kolono (SecurityGuard™ C 18 2.0 mm ID × 4,0 mm, Phenomenex Inc., Torrance, CA, ZDA). Uporabljeni mobilni fazi sta bili: 0,1 % mravljinčne kisline v vodi (topilo A) in 0,1 % mravljinčne kisline v acetonitrilu (topilo B) pri pretoku 0,3 ml/min. Večstopenjsko gradientno eluiranje je bilo izvedeno s 5–45 odstotki B v 15 minutah, 45–95 odstotki B v 5 minutah in končno 95-odstotno B izokratično eluiranje 5 minut.

Masna spektrometrija je bila izvedena s programom Esquire Control (V6.2), LC/MS pa je nadzoroval Hystar (V3.2) (Bruker Daltonics, Bremen, Nemčija). Delovni parametri masnega spektrometra so bili nastavljeni na naslednji način: tlak razpršilnika 30 psi, suh plin 12 L/min, suha temperatura 300 ◦C, kapilarna napetost 3600 V s končno ploščo -500 V. MS/MS je bila uporabljena za vse glavne ione v izbranem masnem območju. Profiliranje spremljanja večkratne reakcije (MRM) je bilo izvedeno z analizo naslednjih ionskih prehodov: prehoda od prekurzorskega iona pri m/z 481 do proizvodnje pri m/z 371 za 20-hidroksiekdizon in prehoda od prekurzorskega iona pri m/z 611 do proizvodnje pri m/z 303 za rutin. Širina ionske izolacije je bila nastavljena na 4 m/z z amplitudo fragmentacije 0,5 V. Spojino smo identificirali in kvantificirali s primerjavo masnih spektrov, dobljenih z ESI-MS/MS, s komercialnimi referenčnimi standardi.

4.4. Merjenje antioksidativne kapacitete

4.4.1. DPPH test lovljenja prostih radikalov

Reakcijske mešanice, ki so vsebovale metanolno raztopino DPPH in serijske raztopine ekstrakta CF 50–500 µg/mL, so bile postavljene v 96- mikroploščo z vdolbinicami in inkubirane 30 minut. Absorbanco smo določili pri 517 nm z uporabo bralnika mikroplošč (Sunrise, Tecan, Salzburg, Avstrija). Kot primerjalno kontrolo smo uporabili askorbinsko kislino (10 µg/mL) [64].

4.4.2. Test zmanjševanja moči

Serijske koncentracije ekstrakta CF (100–1000 µg/mL) smo zmešali s fosfatnim pufrom in K3Fe(CN)6 ter nato inkubirali pri 50 ◦C 20 minut. Dodali smo TCA in reakcijsko zmes centrifugirali pri 3000 obratih na minuto 10 minut. Raztopino FeCl3 smo zmešali s supernatantom in izmerili absorbanco pri 700 nm z uporabo večmodnega čitalnika (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, ZDA). Kot primerjalno kontrolo smo uporabili askorbinsko kislino (100 µg/mL) [64].

4.4.3. Preizkus odstranjevanja superoksidnih anionskih radikalov (O2 −).

Reakcijske mešanice, ki so vsebovale PMS, NADH in NBT, so bile pripravljene v fosfatnem pufru in serijskih raztopinah ekstrakta CF 100–1000 µg/mL. Zmes je reagirala 5 minut in absorbanco smo odčitali pri 560 nm z uporabo bralnika mikroplošč (Sunrise, Tecan, Salzburg, Avstrija). BHA (250 µg/mL) je bil uporabljen kot primerjalna kontrola [65].

4.4.4. Preizkus čiščenja vodikovega peroksida (H2O2).

Aktivnost ekstrakta CF za čiščenje H2O2 je bila izvedena, kot je opisano prej [65]. Raztopini H2O2 smo dodali različne koncentracije ekstrakta CF (200–1500 µg/mL) in reagirali v temi 10 minut. Absorbanco reakcijske zmesi smo zabeležili pri 230 nm z uporabo čitalnika z več načini (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, ZDA), BHA (250 µg/mL) pa smo uporabili kot primerjalno kontrolo.

4.4.5. Preizkus odstranjevanja hidroksilnih radikalov (· OH).

Test smo izvedli z mešanjem razredčin ekstrakta CF (100–1000 µg/mL), pufra KH2PO4- KOH, 2-deoksi-D-riboze, FeCl3, askorbinske kisline, EDTA, H2O2 in deionizirane vode . Po 1-urni inkubaciji pri 37 ◦C smo mešanici dodali TBA in TCA in zmes inkubirali 15 minut pri 100 ◦C in nato 10 minut centrifugirali pri 4000 obratih na minuto in 25 ◦C. Nato smo izmerili absorbanco supernatanta pri 532 nm z uporabo bralnika mikroplošč (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, ZDA). Manitol (2500 µg/mL) je bil uporabljen kot primerjalna kontrola [64].

4.4.6. Test keliranja železovih ionov (Fe2 plus).

Kelacija železovih ionov s CF ekstraktom je bila izvedena po prej opisanem postopku [65]. Ekstrakt CF (100–1000 µg/mL) smo zmešali z raztopino FeCl2 in reakcijo sprožili z dodajanjem ferozina. Ko je mešanica dosegla ravnovesje, smo Fe2 plus -kelatno aktivnost ekstrakta CF spremljali z merjenjem absorbance kompleksa Fe2 plus -ferozin pri 562 nm z uporabo večnačinovnega čitalnika (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, ZDA). Kot primerjalno kontrolo smo uporabili EDTA (100 µM).

4.5. Celična kultura

Celice Hs68 so bile kupljene pri Centru za zbiranje in raziskovanje bioresource (BCRC, Hsinchu, Tajvan). Celice smo vzdrževali v 10-cm posodah za celično kulturo in gojili v DMEM, dopolnjenem z 10 odstotki FBS, 100 U/mL penicilina in 100 µg/mL streptomicina pri 37 ◦C v inkubatorju, ki je vseboval 5 odstotkov CO2. Pri skorajšnjem sotočju (80–90 odstotkov) so bile celice razčlenjene v tripsin-EDTA in subkultivirane [55].

4.6. UV-izpostavljenost in zdravljenje AGEs

Izbira odmerka izpostavljenosti UV za celice Hs68 se je nanašala na prejšnje študije [55,56]. Pred obdelavo smo celice dvakrat splaknili s PBS in obsevali z različnimi odmerki UVB (mJ/cm2). Energijski spekter UVB (280–320 nm) je zagotovil UV Crosslinker CL-1000M (UVP, Upland, CA, ZDA) z vrhom emisije pri 302 nm, čas izpostavljenosti pa je bil 15–30 s. Odmerki sevanja UVB v testu viabilnosti celic so bili 20–100 mJ/cm2 za oceno ustreznega odmerka izpostavljenosti UVB za induciranje citotoksičnosti. Celice Hs68 so bile 2 uri obsevane z visokim odmerkom UVB (80 mJ/cm2), da bi raziskali sposobnost hitrega odstranjevanja radikalov izvlečka CF proti kratkoročno čezmerno proizvedenim znotrajceličnim ROS. Drugi poskusi uporabljajo sevanje UVB (40 mJ/cm2) v celicah Hs68 24 ur za posnemanje celic v pogojih dolgotrajnega oksidativnega stresa. CML je bil dobavljen kot kristalinična trdna snov, vodne raztopine CML pa so bile pripravljene z raztapljanjem spojine v pufru PBS. Celice smo obdelali s 100 µg/mL CML.

4.7. Test viabilnosti celic

Celice Hs68 smo zasejali v 24-plošče z vdolbinicami (4 × 104 celic/vdolbinico), jih pustili, da so se pritrdile čez noč, in obdelali z 1 ml različnih koncentracij ekstrakta CF (50–250 µg/mL), raztopljenega v DMEM 24 h. Ploščam smo dodali raztopino MTT, čemur je sledila inkubacija pri 37 °C 4 ure. Nato smo dodali 2-propanol, da smo raztopili kristale MTT formazana, in absorbanco smo izmerili pri 570 nm z bralnikom mikroplošč (Sunrise, Tecan, Salzburg, Avstrija) [56].

4.8. Merjenje znotrajceličnega ROS

Test temelji na uporabi uveljavljenega nefluorescentnega (H2DCFDA)/fluorescentnega (DCF) sistema, ki meri aktivnost ROS v celici. Celice Hs68 smo zasejali v 24-plošče z vdolbinicami (4 × 104 celic/vdolbinico) in pustili, da so se pritrdile čez noč. Celice so bile inkubirane v mediju brez seruma v prisotnosti različnih koncentracij ekstrakta CF (100–250 µg/mL) po obsevanju UVB ali zdravljenju s CML. Celice smo sprali s PBS in v vsako vdolbinico za 30 minut dodali reagent za odkrivanje ROS DCFDA. Slike so bile zajete s fluorescenčnim mikroskopom (Leica DM IL LED, Leica Microsystems, Wetzlar, Nemčija), fluorescenca (vzbujanje/emisija: 488 nm/520 nm) pa je bila izmerjena z bralnikom mikroplošč (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, ZDA) [55].

4.9. Ekspresija beljakovin z Western blot analizo

Po navedenih obdelavah smo celice Hs68 (5 × 105 celic/posodo) zbrali in homogenizirali s pufrom za ekstrakcijo beljakovin na ledu. Celične lizate smo vrtinčili 30 minut pri 4 °C in centrifugirali, da smo dobili supernatant kot znotrajcelični protein. Pripravljene vzorce, ki so vsebovali enake količine skupnih beljakovin, smo ločili z elektroforezo na SDS-poliakrilamidnih gelih in prenesli na poliviniliden difluoridne bloting membrane. Nespecifična vezava je bila blokirana z nemastnim mlekom v pufru TBST. Membrana je bila inkubirana s primarnimi protitelesi proti c-Jun, c-Fos, MMP-1, MMP-3, TGF-, Smad3 in pro-COL1A1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, ZDA), MMP-9, TIMP-1 in HO-1 (GeneTex, Inc., Irvine, CA, ZDA). Nrf2, Keap1, RAGE, pc-Jun, p-p38, p-ERK in - aktin (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, ZDA) pri 4 ◦C čez noč. Nato smo membrane večkrat sprali s pufrom TBST in kot sekundarno protitelo uporabili ustrezno anti-imunoglobulinsko G-peroksidazo hrena. Blote smo inkubirali z reagentom za detekcijo kemiluminiscence. Imunoreaktivne trakove so zaznali z detekcijskim sistemom ECL western blotting (LAS-4000, Fujifilm, Tokio, Japonska), intenziteto signala pa so kvantificirali s programsko opremo ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, ZDA) [56]. .

4.10. Imunofluorescenčno barvanje

Celice so bile posejane na predmetna stekelca v 6-plošči z vdolbinicami (celice Hs68: 1 × 105 celic/vdolbinico) in pustile, da so se pritrdile čez noč. Celice smo obsevali z UVB (40 mJ/cm2) in obdelali z 1 ml ekstrakta CF, raztopljenega v DMEM. Celice smo sprali s PBS, fiksirali s paraformaldehidom 30 minut in blokirali z uporabo nemastnega mleka s pufrom Triton X-100/PBS (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, ZDA) 60 minut. Vzorci so bili inkubirani s primarnim kunčjim protitelesom proti Nrf2 čez noč pri 4 ◦C. Predmetca smo sprali s PBS in nato inkubirali s sekundarnim protitelesom proti kuncem 2 uri pri sobni temperaturi. Diapozitivi so bili nameščeni z uporabo ProLong® Gold Antifade Mountant z DAPI (Invitrogen, Waltham, MA, ZDA). Vse vzorce smo analizirali s konfokalnim spektralnim mikroskopskim slikovnim sistemom (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemčija) [51].

4.11. Določanje celotne vsebnosti kolagena

Celotna vsebnost kolagena je bila kvantificirana s kompletom Sirius Red Collagen Detection (Chondrex Inc., Redmond, WA, ZDA). Gojišče celične kulture smo zbrali in zmešali s koncentracijskim reagentom. Zmes smo vrtinčili in inkubirali pri 4 ◦C 24 ur. Po inkubaciji smo mešanico centrifugirali pri 10,000 obratih na minuto in supernatant zavrgli. Nato smo v mikrocevko dodali ocetno kislino, da smo pelet raztopili, in dobljeno raztopino uporabili kot testni vzorec. V vsako epruveto smo dodali raztopino Sirius Red za barvanje s kolagenom, jo ​​vrtinčili, inkubirali 20 minut pri sobni temperaturi in centrifugirali. Supernatant smo odstranili s pazljivim pipetiranjem, ne da bi pri tem motili peleto. Pralno raztopino smo dodali v vsako epruveto in zgornje korake enkrat ponovili. Nazadnje smo dodali ekstrakcijski pufer in izmerili absorbanco pri 540 nm z uporabo bralnika mikroplošč (Sunrise, Tecan, Salzburg, Avstrija).

4.12. Statistična analiza

Podatki so predstavljeni kot povprečje ± standardni odklon v vsaj treh neodvisnih poskusih. Vse statistične analize so bile izvedene z uporabo GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, ZDA). Pomembne razlike med skupinami v poskusih so bile analizirane z uporabo enosmerne ANOVA, ki ji je sledil Tukeyjev post-hoc test. Razlike s p < 0.05 so veljale za statistično pomembne.

5. Sklepi

Ta študija razkriva molekularne mehanizme, ki so odgovorni za zaščitni učinek CF proti intracelularnemu nastajanju ROS, ki ga povzroča UV in AGEs, ter razgradnjo kolagena v kožnih fibroblastih. Posledično naša študija zagotavlja trenutno razumevanje in informacije o vlogi ekstrakta CF v celičnem obrambnem sistemu pred oksidativnim stresom prek aktivacije signalne poti Nrf2/HO-1. Poleg tega CF ne le modulira MAPK/AP-1/MMP in TGF-signalne poti, da prepreči izgubo kolagena, ki jo povzroča oksidativni stres, ampak tudi oslabi regulacijo receptorjev za AGE. Izvleček CF se lahko razvije v zdravo hrano ali uporabi v izdelkih za nego kože in kozmetičnih izdelkih kot antioksidant, sredstvo proti fotostaranju in antiglikacijsko sredstvo za upočasnitev staranja v prihodnosti. Regulacijski mehanizmi ekstrakta CF v celicah Hs68 so prikazani na sliki 13.

Dodatni materiali:Naslednje podporne informacije lahko prenesete s spletnega mesta, slika S1: Ionski kromatogram MRM in masni spekter na ESI pozitivnem načinu 20-hidroksiekdizona in rutinskega standarda. Slika S2: Celotni ionski kromatogram (TIC) in ekstrahirani ionski kromatogram (EIC) 20-hidroksiekdizona (m/z 481) in rutina (m/z 611) v ekstraktu CF pod nadzorom MRM.

Avtorski prispevki:Konceptualizacija, J.-LL, K.-CW, C.-YC, Y.-HL in H.-MC; Metodologija, J.-LL, C.-YC in H.-MC; Preiskava, J.-LL in Y.-JL; Viri, Y.-HL; Urejanje podatkov, J.-LL in Y.-JL; Pisanje—izvirni osnutek, J.-LL in H.-MC; Pisanje – pregled in urejanje, J.-LL, Y.-JL; K.-CW, C.-YC in H.-MC; Vizualizacija, J.-LL; Nadzor, K.-CW; Vodstvo projekta, H.-MC Vsi avtorji so prebrali in se strinjajo z objavljeno različico rokopisa.

financiranje: To raziskavo je financirala Kitajska medicinska univerza (CMU106-ASIA-20, CHM106-5- 2 in CMU108-MF-38).

Izjava institucionalnega revizijskega odbora:Se ne uporablja.

Izjava o informirani privolitvi:Se ne uporablja.

Izjava o razpoložljivosti podatkov:Se ne uporablja.

Zahvala: Izvleček Chenopodium formosanum je dobavilo podjetje TCI Co., Ltd. (Taipei, Tajvan). Poskusi in analiza podatkov so bili delno izvedeni z uporabo medicinskih raziskovalnih osnovnih zmogljivosti, Urada za raziskave in razvoj na Kitajski medicinski univerzi (Taichung, Tajvan). Masno spektrometrično analizo je izvedel Proteomics Research Core Laboratory, Urad za raziskave in razvoj na Kitajski medicinski univerzi (Taichung, Tajvan).

Nasprotja interesov:Avtorji izjavljajo, da ni navzkrižja interesov.

Reference

1. Zouboulis, CC; Makrantonaki, E. Klinični vidiki in molekularna diagnostika staranja kože. Clin. Dermatol. 2011, 29, 3–14. [CrossRef] [PubMed]

2. Helfrich, YR; Sachs, DL; Voorhees, JJ Pregled staranja kože in fotostaranja. Dermatol. Nurs. 2008, 20, 177–183. [PubMed]

3. Gkogkolou, P.; Böhm, M. Napredni končni izdelki za glikacijo: ključni akterji pri staranju kože? Dermatoendokrinologija 2012, 4, 259–270. [CrossRef] [PubMed]

4. Tu, Y.; Quan, T. Oksidativni stres in staranje vezivnega tkiva človeške kože. Kozmetika 2016, 3, 28. [CrossRef]

5. Shin, J.-W.; Kwon, S.-H.; Choi, J.-Y.; Na, J.-I.; Huh, C.-H.; Choi, H.-R.; Park, K.-C. Molekularni mehanizmi staranja kože in pristopi proti staranju. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2126. [CrossRef]

6. Dupont, E.; Gomez, J.; Bilodeau, D. Onkraj UV sevanja: koža pod izzivom. Int. J. Cosmet. Sci. 2013, 35, 224–232. [CrossRef]

7. D'Orazio, J.; Jarrett, S.; Amaro-Ortiz, A.; Scott, T. UV sevanje in koža. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 12222–12248. [CrossRef]

8. G ˛egotek, A.; Skrzydlewska, E. Vloga transkripcijskega faktorja Nrf2 pri metabolizmu kožnih celic. Arh. Dermatol. Res. 2015, 307, 385–396. [CrossRef]

9. Silva-Palacios, A.; Ostolga-Chavarría, M.; Zazueta, C.; Königsberg, M. Nrf2: Molekularna in epigenetska regulacija med staranjem. Staranje Res. Rev. 2018, 47, 31–40. [CrossRef]

10. Fisher, GJ; Kang, S.; Varani, J.; Bata-Csorgo, Z.; Wan, Y.; Datta, S.; Voorhees, JJ Mehanizmi fotostaranja in kronološkega staranja kože. Arh. Dermatol. 2002, 138, 1462–1470. [CrossRef]

11. Pittayapruek, P.; Meephansan, J.; Prapapan, O.; Komine, M.; Ohtsuki, M. Vloga matričnih metaloproteinaz pri fotostaranju in fotokarcinogenezi. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 868. [CrossRef] [PubMed]

12. Wautier, M.-P.; Chappey, O.; Corda, S.; Stern, DM; Schmidt, AM; Wautier, J.-L. Aktivacija NADPH oksidaze z AGE povezuje oksidativni stres s spremenjeno ekspresijo genov preko RAGE. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2001, 280, E685–E694. [CrossRef] [PubMed]

13. Oliveira, MIA; Souza, EMd; Pedrosa, FdO; Réa, RR; Alves, AdSC; Picheth, G.; Rego, FGdM RAGE receptor in njegove topne izoforme pri zapletih sladkorne bolezni. J. Bras. Patol. Med. Lab. 2013, 49, 97–108. [CrossRef]

14. Reddy, S.; Bichler, J.; Wells-Knecht, KJ; Thorpe, SR; Baynes, JW N epsilon-(karboksimetil)lizin je prevladujoči antigen končnega produkta napredne glikacije (AGE) v tkivnih beljakovinah. Biokemija 1995, 34, 10872–10878. [CrossRef]

15. Ikeda, K.; Higashi, T.; Sano, H.; Jinnouchi, Y.; Yoshida, M.; Araki, T.; Ueda, S.; Horiuchi, S. N (epsilon)-(karboksimetil)lizinski proteinski adukt je glavni imunološki epitop v proteinih, modificiranih z naprednimi končnimi produkti glikacije Maillardove reakcije. Biokemija 1996, 35, 8075–8083. [CrossRef]

16. Crisan, M.; Taulescu, M.; Crisan, D.; Cosgarea, R.; Parvu, A.; Cãtoi, C.; Drugan, T. Izražanje naprednih končnih produktov glikacije na soncu izpostavljenih in neizpostavljenih kožnih mestih med procesom staranja pri ljudeh. PLoS ONE 2013, 8, e75003. [CrossRef]

17. Jeanmaire, C.; Danoux, L.; Pauly, G. Glikacija med intrinzičnim in aktiničnim staranjem človeške kože: študija modela in vivo in in vitro. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 10–18. [CrossRef]

18. Tsai, P.-J.; Chen, Y.-S.; Sheu, C.-H.; Chen, C.-Y. Vpliv nano mletja na pigment in bioaktivnost Djulisa (Chenopodium formosanum Koidz.). J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 1814–1820. [CrossRef]

19. Hong, Y.-H.; Huang, Y.-L.; Liu, Y.-C.; Tsai, P.-J. Vodni izvleček djulisa (Chenopodium formosanum Koidz.) in njegove bioaktivne komponente blažijo dermalne poškodbe na modelih kože, obsevanih z UVB žarki. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 7368797. [CrossRef]

20. Hsu, B.; Lin, S.; Inbaraj, BS; Chen, B. Istočasno določanje fenolnih kislin in flavonoidov v Chenopodium formosanum Koidz. (julio) s HPLC-DAD-ESI-MS/MS. J. Pharm. Biomed. Analno 2017, 132, 109–116. [CrossRef]

21. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Zaviralni učinki Djulisa (Chenopodium formosanum) in njegovih bioaktivnih spojin na adipogenezo v adipocitih 3T3-L1. Molecules 2018, 23, 1780. [CrossRef] [PubMed]

22. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Chyau, C.-C.; Yang, J.-W.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) in njegove bioaktivne spojine vplivajo na vazodilatacijo, aktivnost angiotenzinske konvertaze in hipertenzijo. Food Biosci. 2019, 32, 100469. [CrossRef]

23. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Wu, Y.-C.; Chu, H.-L.; Duh, P.-D. Delovanje proti raku in posredovanje apoptoze v celicah karcinoma hepatoma, ki jih povzroča julio in njegove bioaktivne spojine. J. Funk. Foods 2020, 75, 104225. [CrossRef]

24. Tu, D.-G.; Chyau, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chu, H.-L.; Wang, S.-C.; Duh, P.-D. Antiproliferativni učinek in posredovanje apoptoze v celicah HepG2 človeškega hepatoma, induciranih z lupino Djulis in njegovimi bioaktivnimi spojinami. Foods 2020, 9, 1514. [CrossRef]

25. Hsu, B.-Y.; Pan, S.-Y.; Wu, L.-Y.; Ho, C.-T.; Hwang, LS Hipoglikemična aktivnost Chenopodium formosanum Koidz. komponente z uporabo testa privzema glukoze z adipociti 3T3-L1. Food Biosci. 2018, 24, 9–16. [CrossRef]

26. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Lin, Y.-C.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) in njegove bioaktivne spojine za obvladovanje hiperlipidemije in hiperglikemije pri miših, hranjenih z visoko vsebnostjo maščob. J. Food Nutr. Res. 2019, 7, 452–457. [CrossRef]

27. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Fu, Z.-H.; Liu, C.-C.; Duh, P.-D. Zaščitni učinek Djulisa (Chenopodium formosanum) in njegovih bioaktivnih spojin proti poškodbi jeter, ki jo povzroča ogljikov tetraklorid, in vivo. J. Funk. Živila 2016, 26, 585–597. [CrossRef]

28. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosaneum) in njegove bioaktivne spojine ščitijo pred oksidativnim stresom v človeških celicah HepG2. J. Funk. Živila 2015, 18, 159–170. [CrossRef]

29. Lin, T.-A.; Ke, B.-J.; Cheng, C.-S.; Wang, J.-J.; Wei, B.-L.; Lee, C.-L. Izvlečki otrobov rdeče kvinoje ščitijo pred poškodbami jeter, ki jih povzroča ogljikov tetraklorid, in fibrozo pri miših z aktivacijo antioksidativnih encimskih sistemov in blokiranjem poti TGF- 1. Hranila 2019, 11, 395. [CrossRef]

30. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Xie, G.-R.; Shih, C.-K. Djulis (Chenopodium Formosanum) preprečuje karcinogenezo debelega črevesa z uravnavanjem antioksidativnih in apoptotičnih poti pri podganah. Hranila 2019, 11, 2168. [CrossRef]

31. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Chien, Y.-H.; Hsia, S.-M.; Chen, J.-H.; Shih, C.-K. Sinbiotična kombinacija Djulis (Chenopodium formosanum) in Lactobacillus acidophilus zavira karcinogenezo debelega črevesa pri podganah. Hranila 2020, 12, 103. [CrossRef] [PubMed]

32. Lin, Y.-K.; Chung, Y.-M.; Lin, Y.-H.; Lin, Y.-H.; Hu, W.-C.; Chiang, C.-F. Zdravstvene funkcionalne lastnosti neoluščenega rdečega julija (Chenopodium formosanum) pri preprečevanju staranja. Int. J. Food Prop. 2021, 24, 833–844. [CrossRef]

33. Naylor, EC; Watson, RE; Sherratt, MJ Molekularni vidiki staranja kože. Maturitas 2011, 69, 249–256. [CrossRef] [PubMed]

34. Fournet, M.; Bonté, F.; Desmoulière, A. Poškodba glikacije: možno središče večjih patofizioloških motenj in staranja. Staranje Dis. 2018, 9, 880. [CrossRef] [PubMed]

35. Tsai, P.-J.; Sheu, C.-H.; Wu, P.-H.; Sun, Y.-F. Toplotna in pH stabilnost betacianin pigmenta Djulis (Chenopodium formosanum) v Tajvanu in njihova povezava z antioksidativno aktivnostjo. J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 1020–1025. [CrossRef]

36. McClain, GE; Watson, RR Vloga polifenolov pri zdravju kože. V Bioaktivni prehranski dejavniki in rastlinski izvlečki v dermatologiji; Springer: Berlin/Heidelberg, Nemčija, 2013; strani 169–175.

37. Nichols, JA; Katiyar, SK Fotozaščita kože z naravnimi polifenoli: protivnetni, antioksidativni in mehanizmi popravljanja DNA. Arh. Dermatol. Res. 2010, 302, 71–83. [CrossRef]

38. Afaq, F.; Katiyar, SK Polifenoli: fotozaščita kože in zaviranje fotokarcinogeneze. Mini Rev. Med. Chem. 2011, 11, 1200–1215.

39. Choi, SJ; Lee, S.-N.; Kim, K.; Joo, DH; Shin, S.; Lee, J.; Lee, HK; Kim, J.; Kwon, SB; Kim, MJ Biološki učinki rutina na staranje kože. Int. J. Mol. Sci. 2016, 38, 357–363. [CrossRef]

40. Cervantes-Laurean, D.; Schramm, DD; Jacobson, EL; Halaweish, I.; Bruckner, GG; Boissonneault, GA Zaviranje tvorbe naprednega končnega produkta glikacije na kolagenu z rutinom in njegovimi metaboliti. J. Nutr. Biochem. 2006, 17, 531–540. [CrossRef]

41. Ho, R.; Teai, T.; Meybeck, A.; Raharivelomanana, P. UV-zaščitni učinki fitoekdisteroidov iz ekstraktov Microsorum grossum na človeške dermalne fibroblaste. Nat. Prod. Komun. 2015, 10, 1934578X1501000110. [CrossRef]

42. Graf, BL; Cheng, DM; Esposito, D.; Šertel, T.; Poulev, A.; Plundrich, N.; Itenberg, D.; Dajan, N.; Lila, M.; Raskin, I. Spojine, izlužene iz semen kvinoje, zavirajo aktivnost matrične metaloproteinaze in intracelularne reaktivne kisikove vrste. Int. J. Cosmet. Sci. 2015, 37, 212–221. [CrossRef] [PubMed]

43. Nsimba, RY; Kikuzaki, H.; Konishi, Y. Ekdisteroidi delujejo kot zaviralci kolagenaze telečje kože in oksidativnega stresa. J. Biochem. Mol. Toxicol. 2008, 22, 240–250. [CrossRef]

44. Schmidt, B.; Ribnicky, DM; Poulev, A.; Logendra, S.; Cefalu, WT; Raskin, I. Naravna zgodovina botanične terapevtike. Metabolizem 2008, 57, S3–S9. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Poljšak, B.; Dahmane, R. Prosti radikali in zunanje staranje kože. Dermatol. Res. Prakt. 2012, 2012, 135206. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​De Jager, T.; Cockrell, A.; Du Plessis, S. Ultravijolična svetloba inducirana generacija reaktivnih kisikovih vrst. Adv. Exp. Med. Biol. 2017, 996, 15–23.

47. Rittié, L.; Fisher, GJ Kaskade signalov, ki jih povzroča UV-svetloba, in staranje kože. Staranje Res. Rev. 2002, 1, 705–720. [CrossRef]

49. Leopoldini, M.; Russo, N.; Toscano, M. Molekularna osnova mehanizma delovanja naravnih polifenolnih antioksidantov. Food Chem. 2011, 125, 288–306. [CrossRef]

49. Sandoval-Acuña, C.; Ferreira, J.; Speisky, H. Polifenoli in mitohondriji: Posodobitev njihovih vedno bolj nastajajočih neodvisnih dejanj odstranjevanja ROS. Arh. Biochem. Biophys. 2014, 559, 75–90. [CrossRef]

50. Wu, P.-Y.; Liu, J.-L.; Liu, Y.-J.; Chien, T.-Y.; Hsu, H.-C.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Fisetin uravnava ekspresijo Nrf2 in z vnetjem povezano signalno pot, da prepreči poškodbe kože, ki jih povzroči UVB, pri miših brez dlake. Int. J. Mol. Sci. 2017, 18, 2118. [CrossRef]

51. Kuo, Y.-H.; Chiang, H.-L.; Wu, P.-Y.; Chu, Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Zaščita pred kožno apoptozo in karcinogenezo, ki jo povzroča ultravijolično sevanje A, z učinki zmanjšanja oksidativnega stresa N-(4-bromofenetil) kafeamida, derivata propolisa. Antioksidanti 2020, 9, 335. [CrossRef]

52. Quan, T.; Qin, Z.; Xia, W.; Shao, Y.; Voorhees, JJ; Fisher, GJ Metaloproteinaze, ki razgrajujejo matriks pri fotostaranju. J. Raziskovanje. Dermatol. Symp. Proc. 2009, 14, 20–24. [CrossRef] [PubMed]

53. Brenneisen, P.; Sies, H.; Scharffetter-Kochanek, K. Ultravijolično-B obsevanje in matrične metaloproteinaze: od indukcije prek signalizacije do začetnih dogodkov. Ann. NY Acad. Sci. 2002, 973, 31–43. [CrossRef] [PubMed]

54. Kanaki, T.; Makrantonaki, E.; Zouboulis, CC Biomarkerji staranja kože. Rev. Endocr. Metab. Disord. 2016, 17, 433–442. [CrossRef] [PubMed]

55. Wu, P.-Y.; Lin, T.-Y.; Hou, C.-W.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. 1,2-bis[(3-metoksifenil)metil]etan-1,2- dikarboksilna kislina zmanjša fotopoškodbe, ki jih povzročajo UVB, in vitro in in vivo. Antioksidanti 2019, 8, 452. [CrossRef] [PubMed]

56. Lin, T.-Y.; Wu, P.-Y.; Hou, C.-W.; Chien, T.-Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Zaščitni učinki sezamina proti vnetju kože, ki ga povzroča UVB, in fotopoškodbi in vitro in in vivo. Biomolecules 2019, 9, 479. [CrossRef] [PubMed]

57. Kim, YI; Kim, KS; Ahn, HJ; Kang, IH; Shin, MK Zmanjšana matrična metaloproteinaza in transkripcija kolagena, posredovana s potjo TGF-/Smad v pasiranih normalnih človeških dermalnih fibroblastih. J. Cosmet. Dermatol. 2020, 19, 1211–1218. [CrossRef]

59. Kislinger, T.; Fu, C.; Huber, B.; Qu, W.; Taguchi, A.; Du Yan, S.; Hofmann, M.; Yan, SF; Pischetsrieder, M.; Stern, D. N(epsilon)-(karboksimetil)lizin adukti proteinov so ligandi za receptor za napredne končne produkte glikacije, ki aktivirajo celične signalne poti in modulirajo izražanje genov. J. Biol. Chem. 1999, 274, 31740–31749. [CrossRef]

59. Han, AR; Nam, MH; Lee, KW Plantamajozid zavira ekspresijo MMP-1, ki jo povzročajo UVB in napredni končni produkti glikacije, tako da zavira poti MAPK in NF-κB v celicah HaCaT. Photochem. Photobiol. 2016, 92, 708–719. [CrossRef]

60. Lohwasser, C.; Neureiter, D.; Weigle, B.; Kirchner, T.; Schuppan, D. Receptor za končne produkte napredne glikacije je močno izražen v koži in ga regulirajo končni produkti napredne glikacije in faktor tumorske nekroze alfa. J. Raziskovanje. Dermatol. 2006, 126, 291–299. [CrossRef]

61. Mizutari, K.; Ono, T.; Ikeda, K.; Kayashima, K.; Horiuchi, S. Foto-izboljšana modifikacija elastina človeške kože v aktinični elastozi z N(epsilon)-(karboksimetil)lizinom, enim od produktov glikoksidacije Maillardove reakcije. J. Invest. Dermatol. 1997, 108, 797–802. [CrossRef]

62. Owen, WF, Jr.; Hou, F.; Stuart, RO; Kay, J.; Boyce, J.; Chertow, GM; Schmidt, AM Beta 2-mikroglobulin, modificiran z naprednimi končnimi produkti glikacije, modulira sintezo kolagena s človeškimi fibroblasti. Kidney Int. 1998, 53, 1365–1373. [CrossRef] [PubMed]

64. Serban, AI; Stanca, L.; Geicu, OI; Munteanu, MC; Dinischiotu, A. Navzkrižni pogovori RAGE in TGF- 1 uravnavajo menjavo zunajceličnega matriksa in sintezo citokinov v celicah fibroblastov, izpostavljenih AGE. PLoS ONE 2016, 11, e0152376.

64. Liu, Y.-J.; Lyu, J.-L.; Kuo, Y.-H.; Chiu, C.-Y.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. Učinek 3, 4-dihidroksibenzalacetona proti melanogenezi prek znižane regulacije zorenja in transporta melanosomov v B16F10 in človeških epidermalnih melanocitih. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 2823. [CrossRef] [PubMed]

65. Huang, Y.-H.; Wu, P.-Y.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Zaščitni učinki in mehanizmi metanolnega ekstrakta Terminalia catappa L. na oksidativni stres, ki ga povzroča vodikov peroksid, v fibroblastih človeške kože. BMC komplement Altern. Med. 2018, 18, 266. [CrossRef]

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】