Označevalci kakovosti Cistanches Herba na podlagi razmerja med spektrom antioksidantov in učinkom Ⅱ

3 rezultati

3.1 Vzpostavitev zemljevida prstnih odtisov

Pripravite 10 serij preskusnih raztopin v skladu z metodo pod 2.1, za detekcijo uporabite kromatografske pogoje pod 2.2, pridobite prstne odtise vsake serije vzorcev (slika 1) in izberite vrh št. 11 (C11) kot referenčni vrh prstni odtis. Uvozite datoteko data.AIA s tekočo fazo prstnega odtisa testnega izdelka Cistanche deserticola v programsko opremo "Traditional Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System" (različica 2012). Sedemnajst skupnih kromatografskih vrhov je bilo umerjenih v skupnem načinu in v primerjavi z mešanim referenčnim standardnim spektrom (slika 2) je bilo identificiranih skupno 10 skupnih vrhov.

3.2 Raziskave antioksidativnega učinka Cistanche deserticola

3.2.1 Vpliv Cistanche deserticola na sposobnost preživetja celic HEK 293.

V primerjavi s celicami v normalni skupini Cistanche deserticola ni povzročila citotoksičnosti pri masni koncentraciji 50~100 ug·mL–1, stopnje preživetja celic pa so bile večje od 90 %. Ko se je koncentracija Cistanche deserticola povečevala, se je viabilnost celic zmanjšala. Zato je bila za nadaljnje dajanje izbrana Cistanche deserticola z masno koncentracijo 100 µg·mL–1.

3.2.2 Učinek Cistanche deserticola na ROS, induciran s H2O2 v celicah HEK 293

ROS IC50 Cistanche deserticola pri različnih koncentracijah je bil izračunan s programsko opremo GraphPad Prism 8. Rezultati so prikazani na sliki 3 in tabeli 2.

Za več informacij o cistanche si poglejmo, kako razlikovati kakovost cistanche. Kakovost Cistanche je odvisna od vsebnosti aktivnih sestavin Echinacoside in Acteoside, višja vsebnost pomeni močnejše delovanje, danes vzamemo 30% Echinacoside in 12% Acteoside Cistanche Supplements kot primer, ki nam daje razlago, na splošno imenujemo cistanche v tem članku.

KAKO ČASA TRAJA, DA CISTANCHE ZAČNE DELOVATI?

3.2.3 Učinek Cistanche deserticola na H2O2-inducirano SOD celic HEK 293

Kot je prikazano na sliki 4, je bila aktivnost SOD v celicah modelne skupine v primerjavi z normalno skupino znatno zmanjšana, aktivnost SOD skupine, ki je prejemala Cistanche deserticola, pa se je povečala v različnih stopnjah (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Učinek Cistanche deserticola na H2O2-inducirano CAT v celicah HEK 293

Kot je prikazano na sliki 5, lahko H2O2 povzroči znatno zmanjšanje znotrajcelične aktivnosti encima CAT (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Presejanje Q-markerja Cistanche deserticola na podlagi korelacijske analize spektralne učinkovitosti

3.3.1 PCA uporablja lastno vrednost > 1 in stopnjo prispevka kumulativne variance > 85 % kot standard za ekstrakcijo 4 glavnih komponent. Graf melišča (Slika 6) prvih treh glavnih komponent ima strmejšo krivuljo, kar pomeni, da je njen prispevek višji. velik. Kumulativna stopnja variance prispevka štirih glavnih komponent je 87,640 %, kar kaže, da lahko te štiri glavne komponente predstavljajo 87,640 % informacij izvirnih spremenljivk. Začetne lastne vrednosti in stopnje prispevkov variance so prikazane v tabeli 3. Matrika zasukanih komponent je pridobljena z metodo maksimalne variance Kaiserjeve normalizacije, glejte tabelo 4. Glede na obremenitveno vrednost vsakega kromatografskega vrha na štirih glavnih komponentah so informacije, ki jih odraža vsaka glavno komponento je mogoče ekstrahirati. To pomeni, da večja kot je vrednost obremenitve, večji je vpliv kromatografskega vrha na glavno komponento. V glavni komponenti 1 imajo vrhovi 1 do 3, 5, 7, 11 in 13 do 15 največje absolutne obremenitve; v glavni komponenti 2 imata vrhova 6 in 16 največje absolutne obremenitve; vrh 17 pojasnjuje informacije o glavni komponenti 3, vrh 8 ima največji vpliv na glavno komponento 4, zato je bilo 13 kemičnih komponent vrhov 1~3, 5~8, 11, 13~17 izbranih kot glavna snovna osnova Cistanche deserticola za nadaljnjo analizo spektralne učinkovitosti.

3.3.2 PCC

ROS IC50 je negativen pokazatelj učinkovitosti zdravila, zato negativni korelacijski koeficient pomeni, da je odvisna spremenljivka pozitivno povezana z učinkovitostjo zdravila. Korelacijski koeficienti 13 kromatografskih vrhov Cistanche deserticola so vsi negativni, kar kaže, da so vsi pozitivno povezani z odstranitvijo ROS IC50, med katerimi so bili vrhovi 14 in 3, 7, 11, 1 in 13 izjemno močno povezani z ROSIC50 (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

S kombinacijo rezultatov PCC za ROS IC50, SOD in CAT so bili vrhovi 1~3, 5, 7, 11 in 13~15 izbrani kot skupina aktivnih sestavin za Cistanche deserticola za izvajanje antioksidativnih učinkov.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 so: 5, 13, 14, 11, 7 (slika 7C). Spojine, predstavljene z vrhovi 1~3, 5, 7, 11 in 13~15, so bile v modelu PLS presejane kot potencialne antioksidantne aktivne komponente.

3.4 Preverjanje aktivnosti Q-markerja Cistanche deserticola

3.4.1 Vpliv učinkovin na citotoksičnost HEK 293

Na podlagi rezultatov korelacijske analize spektra in učinkov je bilo za preverjanje aktivnosti izbranih 6 sestavin, vključno z genipinsko kislino, 8-epistrihnojsko kislino, ehinaceozidom, verbaskozidom, antocinozidom A in izorbaskozidom. Šest učinkovin Cistanche deserticola ni pokazalo citotoksičnosti v koncentracijah od 0.781 do 3.125 µmol·mL–1, stopnje preživetja celic pa so bile vse večje od 90%. Ko se koncentracija poveča, je viabilnost celic zavrta. Zato so bile naslednje koncentracije odmerjanja izbrane kot 0,781, 1,563 in 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Pari učinkovin

Antioksidativni učinek H2O2-induciranih celic HEK 293 je bil preverjen z odkrivanjem čistilnega učinka vsake aktivne sestavine na znotrajcelični ROS in zmožnostjo uravnavanja aktivnosti encimov SOD in CAT, da se preveri, ali ima antioksidativni učinek. V poskusu odstranjevanja ROS so bile razlike med skupinama s srednjimi in visokimi odmerki genipinske kisline ter modelno skupino statistično značilne (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.