Vloga alternativnega spajanja pri uravnavanju odziva gostitelja na virusno okužbo

Povzetek: Pomen transkripcijske regulacije gostiteljskih genov pri prirojeni imunosti proti virusni okužbi je splošno priznan. V zadnjem času so post-transkripcijski regulativni mehanizmi postali cenjeni kot dodatna in pomembna plast regulacije za natančno nastavitev imunskega odziva gostitelja. Tukaj pregledamo funkcionalni pomen alternativnega spajanja pri prirojenih imunskih odzivih na virusno okužbo. Opisujemo, kako več osrednjih komponent interferonskih poti tipa I in III kodira spojene izoforme za uravnavanje aktivacije in delovanja IFN. Poleg tega so obravnavane funkcionalne vloge faktorjev spajanja in modulatorjev v protivirusni imunosti. Nazadnje razpravljamo o tem, kako se poti celične smrti uravnavajo z alternativnim spajanjem, pa tudi o potencialni vlogi te uredbe na imunost gostitelja in virusno okužbo. Skupaj te študije poudarjajo pomen spajanja RNA pri uravnavanju interakcij med gostiteljem in virusom in kažejo na vlogo pri zniževanju protivirusne prirojene imunosti; to je lahko ključnega pomena za preprečevanje patološkega vnetja.

Ključne besede: alternativno spajanje; protivirusni odziv; prirojena imunost; poti celične smrti

koristi dodatka cistanche - kako okrepiti imunski sistem

1. Uvod

Odziv gostitelja na virusno okužbo je večplasten in vključuje indukcijo protivirusnega transkripcijskega programa, vključno z izražanjem interferonov (IFN) in citokinov, ter aktivacijo poti celične smrti (apoptoza, nekroptoza in piroptoza). Med temi potmi je veliko korakov strogo reguliranih na več ravneh, da se zagotovi tkivna homeostaza. V tem pregledu razpravljamo o funkcionalnih vlogah alternativnega spajanja in različnih spojenih izoform pri oblikovanju imunosti gostitelja proti virusni okužbi. Spajanje predmesenger RNA je pomemben korak zorenja RNA, ki vključuje združevanje eksonov in odstranitev intronov. Velika večina transkriptov, ki jih proizvede RNA polimeraza II (RNAP II), vključno z večino mRNA, vsebuje introne in jih je zato treba spojiti. Spajanje poteka v celičnih jedrih z enim od dveh makromolekularnih ribonukleoproteinskih kompleksov, znanih kot glavni in manjši spliceosom [1]. Ocenjuje se, da je več kot 90 % izraženih človeških genov podvrženih alternativnemu spajanju (AS) [2], ki omogoča posameznim genom, da ustvarijo več različnih mRNA, ki lahko kodirajo različne proteine, s čimer se močno razširi kompleksnost proteoma. Opisanih je bilo veliko vrst dogodkov AS, ki vključujejo predvsem kasetne eksone, medsebojno izključujoče eksone, alternativno uporabo 50 mest spajanja, alternativno uporabo 30 mest spajanja in zadrževanje introna. Ker je dogodke mogoče regulirati na prostorsko-časovni način [1] s kombiniranim delovanjem cis-elementov (npr. ojačevalcev spajanja eksonov (ESE)) in transfaktorjev (npr. RNA vezavnih proteinov) [3]. Nenormalno spajanje je bilo povezano s številnimi boleznimi [4, 5], kar dodatno poudarja pomen tega zelo reguliranega procesa. Izooblike AS in mRNA igrajo pomembno vlogo v skoraj vseh celičnih procesih in poteh, zato ni presenetljivo, da je bilo ugotovljeno, da sta obe ključni za učinkovit protivirusni odziv.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

2. Alternativno spajanje RNA in njene izooblike pri odzivih IFN tipa I in III

Protivirusni odziv se začne, ko receptorji za prepoznavanje celičnih vzorcev (PRR) zaznajo s patogenom povezane molekularne vzorce (PAMP). Gen I, inducibilen s citosolno retinojsko kislino (RIG-I) in protein 5, povezan z diferenciacijo melanoma (MDA-5), zaznavata dvojnoverižno RNA (dsRNA) (RIG-I specifično zazna 50 -trifosfat ali {{8 }}difosfat molekul RNA) in se podvržejo konformacijskim spremembam, da se povežejo s spodnjim mitohondrijskim protivirusnim signalnim proteinom (MAVS). Nato se MAVS poveže s TANK vezavno kinazo 1 (TBK1) in I-kappa-B kinazo epsilon (IKKε), kar spodbuja fosforilacijo interferonskega regulatornega faktorja 3 (IRF3) in interferonskega regulatornega faktorja 7 (IRF7). Ta dva transkripcijska faktorja se premestita v jedro in poganjata transkripcijo in proizvodnjo mRNA interferonov tipa I in tipa III (IFN). Senzor citosolne DNK, ciklična GMP-AMP sintaza (cGAS), lahko zazna DNK v citoplazmi kot PAMP, ko virusi DNK okužijo celice in proizvedejo ciklični dinukleotid 20,30 -ciklični GMP–AMP (20,{{21 }}cGAMP) [6]. Ta sekundarni prenašalec nato aktivira ER-rezidenčni stimulator interferonskih genov (STING) in vodi do TBK1-odvisne fosforilacije IRF3 za proizvodnjo IFN tipa I in III. Pomembno je omeniti, da se je pokazalo, da se cGAS odziva tudi na okužbo z virusom RNA, verjetno zaradi citoplazemskega sproščanja mitohondrijske DNA gostitelja [7]. Poleg tega lahko membransko vezan Toll-like receptor 3 (TLR3) prepozna dsRNA v endosomskih predelih. Odkrivanje liganda s TLR3 sproži njegovo povezavo z adapterjem za interferon (TRIF), ki vsebuje TIR-domeno, in inducira fosforilacijo IRF3, odvisno od TBK1/IKKε. Vsi ti procesi dosežejo vrhunec v transkripcijski indukciji genov za IFN tipa I in III ter proizvodnji teh IFN (slika 1).

Slika 1. Alternativno spajanje v odzivu IFN tipa I in tipa III gostitelja. Izooblike AS, ki uravnavajo protivirusni odziv, so prikazane zeleno, tiste, ki uravnavajo protivirusni odziv, pa rdeče.

Na novo sintetizirani IFN tipa I in III se izločata in aktivirata signalizacijo navzdol na avtokrino in parakrino odvisen način. Ta dva razreda IFN se vežeta na različne membranske receptorje. IFN tipa I se vežejo na podenoti receptorja interferona alfa in beta 1 in 2 (IFNAR1 in IFNAR2), medtem ko IFN tipa III izkoriščajo receptor 1 interferona lambda (IFNLR1) in podenoto beta receptorja interlevkina 10 (IL10-RB) [8 ]. Ko se ti receptorji vežejo na svoje ligande, konformacijske spremembe rekrutirajo znotrajcelične kinaze, ki nato fosforilirajo signalni pretvornik in aktivator transkripcije 1 (STAT1) ter signalni pretvornik in aktivator transkripcije 2 (STAT2). Fosforilirana STAT1 in STAT2 se povežeta z interferonskim regulatornim faktorjem 9 (IRF9), da tvorita kompleks ISGF3, ki se prenese v jedro in aktivira na stotine genov, stimuliranih z IFN (ISG), da vzpostavi celično protivirusno stanje. Geni PRR kodirajo več variant spoja za uravnavanje njihovih funkcij. Poročali so, da se spojena varianta RIG-I brez eksona 2 izraža skupaj z izoobliko polne dolžine po zdravljenju z IFN in okužbi z virusom Sendai (SeV) [9]. Ta varianta spoja ima izbris v svoji N-terminalni domeni CARD in ta izbris preprečuje vseprisotnost RIG-I s tripartitnim motivom, ki vsebuje 25 (TRIM25), kar je predpogoj za aktivacijo RIG-I. Posledično se je pokazalo, da ta varianta spoja deluje kot prevladujoča negativna oblika RIG-I. Ektopična ekspresija te variante spoja RIG-I zavira transkripcijo IFN, ki jo povzroči SeV. Pokazalo se je, da ima TLR3 več izooblik [10,11]. Izoforma, ki nima transmembranske domene in večina prvotne intracelularne domene TIR, igra zaviralno vlogo pri odzivu IFN [10]. Negativne regulativne učinke te izooblike TLR3 lahko povzroči konkurenca za vezavo liganda, ker ima ta izoforma TLR3 vezavna mesta dsRNA, medtem ko nima citoplazmatske domene TIR, potrebne za transdukcijo signala. Te izooblike PRR kažejo na obstoj negativne povratne zanke, ki natančno prilagodi protivirusni odziv IFN. Ključni signalni efektorski proteini navzdol do virusnih senzorjev pri odzivih tipa I in tipa III izražajo tudi različne izooblike AS in mnogi od njih delujejo na dominanten negativen način. Opazili so več izooblik MAVS: MAVS 1a, 1b in 1c [12]. MAVS 1a nastane s preskokom eksona 2 in kodira okrnjeni MAVS zaradi prezgodnjega stop kodona. Ta skrajšani protein ima nedotaknjeno N-terminalno domeno CARD in njegova prekomerna ekspresija blokira transkripcijo IFN, verjetno z ločitvijo proteinov faktorja 2 (TRAF2), povezanih z receptorjem TNF. MAVS1b, ki nima eksona 3, prav tako kodira okrnjeni protein s prezgodnjim stop kodonom zaradi premika okvirja. Vendar pa lahko ta MAVS1b aktivira transkripcijo IFN in zavira replikacijo virusa vezikularnega stomatitisa (VSV), kar kaže na dvosmerni mehanizem, s katerim je regulirana aktivnost MAVS. Poleg tega ima STING, spodnji efektor cGAS, spojeno izoformo, imenovano MRP [13]. V primerjavi s STING MRP ne vsebuje eksona 7 in zato nima C-terminalne interakcijske domene TBK1. Pokazalo se je, da lahko MRP dimerizira s STING in blokira interakcijo STING-TBK1. Ta interferenca v povezavi STING-TBK pojasnjuje, zakaj MRP zavira IFN-transkripcijo, ki jo posreduje STING. V skladu s to ugotovitvijo, knock-down MRP zmanjša replikacijo VSV, verjetno z de-represijo odzivov IFN gostitelja. Zanimivo je, da čeprav MRP blokira signalno pot IFN, ki jo posreduje STING in ki jo povzroči okužba s SeV, MRP poveča odziv IFN, ki ga povzroča virus herpes simpleks tipa 1 (HSV-1). Tako se zdi, da ima MRP različne vloge pri odzivu na okužbe z virusi RNA in DNA. TRIF je kritičen adapter za signalno pot, ki jo sproži TLR3-. Različico spoja, ki nima osrednje domene TIR, imenovano TRIS, so opazili v širokem spektru celičnih linij [14]. Prejšnje študije so pokazale, da je TRIF povezan s TLR3 prek njihovih ustreznih domen TIR [15]; zato se pričakuje, da bo TRIS s pomanjkanjem TIR deloval kot zaviralec signalizacije, ki jo posreduje TLR3-. Vendar prekomerna ekspresija TRIS-a, čeprav v manjši meri kot TRIF, aktivira transkripcijo IFN-ja in uniči transkripcijo IFN-inducirane s poli (I:C), ki jo povzroči TRIS. Ti rezultati kažejo na presenetljivo, vendar neodvečno vlogo TRIS-a v signalizaciji, ki jo posreduje TLR3-. Faktor 3, povezan z receptorjem faktorja tumorske nekroze (TRAF3), je pomožni protein v poteh RIG-I-MAVS in je podvržen AS v T-celicah [16]. Ta dogodek preskakovanja eksona 8 v TRAF3 primarno posredujejo CUGBP ElavLike Family Member 2 (CELF2) in heterogeni jedrski ribonukleoprotein C (hnRNP C) proteini [17]. Kljub temu je treba vlogo tega dogodka AS pri protivirusnem odzivu gostitelja še določiti.

koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti

Ugotovljeno je bilo tudi, da imajo nove spojene izooblike TBK1 in IKKε negativne regulativne vloge med odzivom IFN. TBK1s, varianta spojenega transkripta TBK1, nima eksona 3–6, ki kodira domeno serin/treonin kinaze, ki posreduje fosforilacijo IRF3 in IRF7. Dodatni funkcionalni in biokemični testi kažejo, da TBK1 zavirajo transkripcijo IFN z blokiranjem interakcije med RIG-I in MAVS [18]. Zanimivo je, da TBK1 niso obilno izraženi v neokuženih celicah. Po okužbi s SeV, zlasti v poznejših časovnih točkah, postane izraz TBK1 izrazitejši. Ta zapoznela regulacija nakazuje, da so celice razvile strategijo za negativno regulacijo aktivacije IFN, ko je virusna okužba očiščena. Poleg tega je pri okužbi z virusom influence A (IAV) opažena spojena izoforma, vendar je treba njen funkcionalni pomen še opredeliti [19]. Kar zadeva IKKε, ta gen izraža dve spojeni različici, IKKε sv1 in IKKε sv2, ki se razlikujeta v karboksilnih regijah v primerjavi z IKKε polne dolžine [20]. Tako IKKε sv1 kot sv2 tvorita dimerja z IKKε polne dolžine in zavirata signalizacijo IRF3, ki jo povzroča IKKε polne dolžine, vključno z njegovo vlogo pri spodbujanju protivirusne aktivnosti. Zanimivo je, da so opazili, da okužba z virusom denge (DENV) poveča izražanje teh dveh izooblik [21], kar kaže, da je ta flavivirus razvil sposobnost motenja prirojene imunosti z uravnavanjem AS. Pri sesalcih so opisali več izooblik IRF3 in IRF7. IRF3a je različica IRF3 AS [22, 23], ki uporablja alternativni ekson 3a in proizvaja N-terminalni skrajšani protein zaradi uporabe drugačnega začetnega kodona. IRF3a nima funkcionalne vezavne domene DNA in se zato ne veže na IFN-promotor. Zato IRF3a zavira transkripcijsko aktivnost IRF3 [22]. Druga spojena izoforma, IRF3-CL, je zapis, pridobljen iz alternativnega mesta spajanja 30, 16 nukleotidov pred eksonom 7 glavnega zapisa IRF3 [24]. IRF3-CL si deli N-terminalno regijo z IRF3, vendar se razlikuje na C-koncih. Ta izoforma negativno uravnava aktivnost IRF3 in se izraža vseprisotno. Nasprotno pa je izražanje IRF3-nirs3 omejeno na specifična tkiva [25]. Zdi se, da se ta izoforma izraža v celicah človeškega hepatocelularnega karcinoma, ne pa tudi v primarnih človeških hepatocitih. Transkripti IRF-nirs3 ne vsebujejo eksona 6 in ta izključitev ima za posledico protein, ki nima osrednje asociacijske domene IRF, kar je kritično za njegovo homodimerizacijo ali heterodimerizacijo z IRF3 ali drugimi IRF. Kot je bilo pričakovano, je čezmerna ekspresija IRF3-nirs3 zatrla transkripcijo IFN in olajšala replikacijo virusa [25]. Identificirane so dodatne spojene izooblike IRF3 z različnimi stopnjami zmožnosti zaviranja transkripcijske aktivacije, ki jo posreduje IRF3-[26]. Nazadnje je bilo dokazano, da heterogeni jedrski ribonukleoprotein A1 (hnRNPA1) ter s serinom in argininom bogati faktor spajanja 1 (SRSF1) spodbujata vključitev eksona 2 in eksona 3 IRF3 ter ustvarjata IRF3 polne dolžine, ki je potreben za IFN- transkripcijska aktivacija [27]. Izčrpavanje hnRNPA1 ali SRSF1 povzroči zmanjšanje aktivacije IFN, ki jo povzroči poli (I:C). Pred kratkim se je izkazalo, da izražanje IRF7 uravnava mehanizem zadrževanja intronov prek proteina BUD13 [28]. BUD13 zavira zadrževanje introna 4 v zapisu IRF7. Posledično nastane zrel transkript IRF7 in protein IRF7 se prevede v podporo odzivu IFN. V podporo tej ugotovitvi knock-down BUD13 poveča zadrževanje introna transkripta IRF7, za katerega se zdi, da je degradiran z nesmiselno posredovanim razpadom (NMD). Posledično se raven proteina IRF7 zmanjša, da se olajša replikacija virusa [28]. Poročali so o več drugih različicah transkripta IRF7, nekatere pa lahko povzroči okužba z respiratornim sincicijskim virusom (RSV) [29,30]. Večina genov za IFN tipa I je brez intronov, medtem ko imajo geni za IFN tipa III običajno več intronov, kar kaže na potencialni regulativni mehanizem AS. Nedavno odkriti IFNL4, IFN tipa III, je kodiran z genom, ki obsega pet eksonov, opaženih pa je bilo več različic transkripta [31]. Funkcionalna karakterizacija kaže, da izooblike IFNL4 polne dolžine, vendar ne krajše, kažejo protivirusno aktivnost [32]. Presenetljivo je, da so genetske variante v eksonu 1, ki negativno korelirajo z izražanjem funkcionalnega IFNL4, povezane z očistkom virusa hepatitisa C (HCV) [31,33]. Proteini IFN tipa I in III izvajajo svoje funkcije (npr. sprožitev proizvodnje protivirusnih ISG) tako, da se vežejo na svoje ustrezne receptorje, ki se izražajo kot različne izooblike. IFNAR1 in IFNAR2 tvorita receptorski kompleks za IFN tipa I, IFNAR2 pa proizvaja tri različice mRNA AS, vključno z dvema membransko vezanima izoformama (IFNAR2b in 2c) in topno izoformo (IFNAR2a) [34]. Transfekcija človeških IFNAR1 in IFNAR2c, vendar ne IFNAR2b, je rekonstituirala protivirusni odziv IFN [35]. To je skladno s podatki, da lahko IFNAR2b deluje kot dominanten, negativen regulator odzivov IFN [36]. V človeških celicah so opisali več različic spoja IFNLR1, s katerimi IL-10RB tvori receptor IFN tipa III [37–39]. Membransko vezan IFNLR1 je funkcionalna receptorska podenota, medtem ko topna spojena izoforma, ki nima transmembranske domene, ki kodira ekson 6, služi kot prevladujoča negativna oblika. Dodatek rekombinantnega topnega IFNLR1 je zmanjšal transkripcijo ISG, ki jo povzročajo IFN tipa III, v mononuklearnih celicah periferne krvi (PBMC) in v celicah Huh7.5 [40]. Po vezavi IFN tipa I in III na njihove receptorje se fosforilirana STAT1 in STAT2 končno preneseta v jedro, ki poganja izražanje ISG. STAT1 ima dve izoobliki [41], alfa in beta, ki se razlikujeta v C-terminalni trans-aktivacijski domeni. Sprva je veljalo, da je STAT1 alfa edina funkcionalna izooblika, STAT1 beta pa domnevno deluje kot dominantni negativni regulator [42,43]. Kljub temu nedavne študije kažejo, da STAT1 alfa in beta aktivirata prekrivajoč se, a neredundančen nabor genov, ki so pomembni pri uravnavanju imunosti [44]. Poleg teh dveh izooblik se proteini SM virusa Epstein-Barr (EBV) povezujejo s faktorjem spajanja gostitelja SRSF3 in spodbujajo uporabo kriptičnega mesta spajanja 50, kar ustvarja različico transkripta STAT1 alfa0 [45,46]. Vloga transkripta STAT1 alpha0 in ali je preveden ali ne, še ni jasno. Glede na pomen STAT1 in STAT2 pri spodbujanju izražanja ISG za vzpostavitev protivirusnega stanja je bilo nenormalno spajanje teh genov povezano z oslabljeno imunostjo in hudimi virusnimi boleznimi [47–49]. Na primer, homozigotna mutacija, ki vodi do preskoka STAT1 eksona 3, povzroči njegovo zmanjšano izražanje in fosforilacijo. Bolniki, homozigoti za to mutacijo, kažejo močno dovzetnost za okužbo [49]. Mutacija v intronu 4 STAT2 povzroči nenormalno spajanje in verjetno povzroči NMD. Ekspresije proteina STAT2 ni mogoče zaznati v homozigotnih pacientovih celicah, eksogena ekspresija STAT2 pa reši fenotip in inducira protivirusno stanje [48]. Začenjajo se pojavljati dokazi, ki kažejo, da delovanje ISG ureja AS. OAS1 je ključna komponenta v RNaseL 2-5protivirusnem sistemu. Nedavno poročilo kaže, da ima gen Oas1g (mišji homolog človeškega OAS1) alternativno mesto spoja 50 v intronu med eksonom 3 in eksonom 4, uporaba tega alternativnega spoja 50 pa vodi do nefunkcionalne različice mRNA, ki je namenjeno razgradnji [50]. Zanimivo je, da odstranitev tega alternativnega mesta spoja 50 poveča izražanje Oas1g in zavira virusno okužbo. MxA je še en dobro znan ISG, ki omejuje različne viruse. Zanimivo je, da virusna okužba HSV-1 inducira nastajanje varMxA [51]. Ta zapis ima izbrisane eksone 14–16 in kodira protein, ki podpira replikacijo HSV-1. Pojav izključitvenih izooblik eksona MxA so opazili tudi v celicah, okuženih z DENV [21]. Njegova regulativna funkcija pri replikaciji DENV čaka na nadaljnje preiskave. Če povzamemo, se različne izooblike ključnih komponent v odzivih IFN tipa I in tipa III izražajo za uravnavanje prirojene imunosti v odzivu gostitelja (slika 1). Zanimivo je, da večina dogodkov AS zmanjša protivirusni odziv, kar kaže na to, da posttranskripcijska regulacija deluje tako, da uravnoteži transkripcijsko uravnavanje protivirusnega stanja. To bi pomenilo, da bi napake v posttranskripcijski regulaciji protivirusnega prirojenega imunskega odziva povzročile avtoimunost in patološka vnetna stanja.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

3. Druge prirojene imunske poti, na katere vpliva alternativno spajanje RNA

Protein promielocitne levkemije (PML), član družine proteinov TRIM, je ključna sestavina struktur, znanih kot jedrska telesa PML, ki imajo pomembno vlogo pri prirojeni imunski signalizaciji [52,53]. Gen PML je sestavljen iz devetih eksonov in je podvržen obsežnemu AS, kar ustvarja več različic transkripta [54]. Te izooblike imajo skupne aminoterminalne regije, vendar se razlikujejo na C-koncu. Pomembno je, da se zdi, da imajo različne vloge pri moduliranju odziva IFN. Poročali so, da izoforma PML IV poveča aktivnost IRF3 in tako sodeluje pri proizvodnji IFN med okužbo z VSV [55]. V skladu s to ugotovitvijo je prekomerna ekspresija izoforme IV PML zadostna za zatiranje replikacije DENV [56]. Podobno izoforma II PML spodbuja aktivacijo IFN [57] in doseže to izboljšanje s povezovanjem z različnimi transkripcijskimi kompleksi. Pomanjkanje izoforme II PML je zmanjšalo pridobivanje IRF3 in STAT1 na promotor IFN oziroma elemente ISRE. Nasprotno, za razliko od izoforme PML II, knock-down izoforme PML V ni vplivalo na aktivacijo IFN, ki jo sproži poli (I: C), kar kaže, da izoforma PML V ni potrebna za to regulacijo odziva IFN [ 57]. Zanimivo je, da je okužba z virusom herpes simplex tipa 2 (HSV{18}}) povzročila preklop izoforme PML II v izoformo PML IV s povečanjem uporabe introna 7a prek virusnih proteinov ICP27 [58]. To je v skladu z virusno strategijo za antagoniziranje gostiteljskega odziva IFN na replikacijo virusa, saj izoforma II in izoforma IV spodbujata aktivacijo IFN. Obnova izoforme II PML v celicah, porušenih s PML, pa olajša replikacijo HSV2. Izčrpavanje izoforme II PML s siRNA je zmanjšalo infektivnost HSV2, kar nakazuje, da je izoforma II PML faktor pro-HSV2. Ti rezultati kažejo na zapleteno in morda paradoksalno vlogo PML v interakcijah med gostiteljem in virusom. Zinc finger protein (ZFR) sodeluje pri več celičnih funkcijah in je močan modulator spajanja. ZFR nadzoruje signalizacijo IFN s preprečevanjem aberantnega spajanja in nesmiselnega razpada makroH2A1 mRNA variant histona [59]. V celicah, ki izražajo ZFR, ZFR spodbuja uporabo makroH2A1 eksona 6a, kar vodi do proizvodnje makroH2A1 polne dolžine, ki zavira IFN-promotor in preprečuje aktivacijo transkripcije. V celicah, osiromašenih z ZFR, medsebojno izključujoča uporaba eksona 6b povzroči spojen prepis, namenjen NMD. Posledično se IFN-promotor sprosti iz represije in je lahko dostopen transkripcijskim faktorjem za izražanje genov. Dosledno bodisi knock-down ZFR bodisi makroH2A1 poveča transkripcijo IFN-a. Poleg tega izčrpavanje ZFR omejuje replikacijo virusa [59]. hnRNP M spada v družino povsod izraženih heterogenih jedrskih ribonukleoproteinov (hnRNP) in vpliva na obdelavo pred mRNA in več drugih vidikov metabolizma in transporta mRNA. Pred kratkim se je pokazalo, da ima hnRNP M sposobnost zaviranja imunosti prek različnih mehanizmov. Prvič, ta protein sodeluje z RIG-I, da oslabi imunsko zaznavanje [60]. Poleg tega hnRNP M spodbuja zadrževanje introna za zmanjšanje številčnosti transkriptov IL-6. Na splošno posledično izčrpavanje hnRNP M oslabi imunost gostitelja in olajša replikacijo virusa [61].

4. Alternativno spajanje uravnava poti smrti gostiteljskih celic, ki se aktivirajo med virusno okužbo

Opisanih je bilo več programov celične smrti in molekularni mehanizmi teh programov se prekrivajo, vendar precej razlikujejo [62]. Tukaj razpravljamo o regulaciji AS apoptoze, nekroptoze in piroptoze v kontekstu interakcij med gostiteljem in virusom (slika 2). Virusi v veliki meri sodelujejo s celičnimi intrinzičnimi in ekstrinzičnimi apoptotičnimi potmi [63,64], spojene izooblike apoptotičnih faktorjev pa lahko igrajo ključno vlogo pri določanju celične usode [65,66]. Apoptoza je na splošno zasnovana kot nevnetna vrsta programirane celične smrti, za katero so značilne morfološke spremembe, vključno s krčenjem celic, jedrsko kondenzacijo in nastajanjem mehurčkov v plazemski membrani. Intrinzična apoptoza je primarno nadzorovana v mitohondrijih. Motnje znotrajcelične homeostaze (npr. poškodba DNA ali oksidativni stres) in pro-apoptotični dražljaji povzročijo indukcijo permeabilizacije mitohondrijske zunanje membrane (MOMP) s proteinoma BAX ali BAK. V odsotnosti apoptotičnih dražljajev te proteine ​​v neaktivnem stanju zasežejo anti-apoptotični člani družine proteinov BCL2. MOMP sprosti citokrom c v citoplazmo in sproži tvorbo apoptozomskega proteinskega kompleksa, ki vsebuje apoptotični proteazni aktivirajoči faktor 1 (APAF1) in kaspazo 9, članico celičnih cistein-asparaginskih proteaz. Aktivirana kaspaza 9 nato cepi kaspazi 3 in 7, kar sproži pot, ki vodi do celične smrti. Zanimivo je, da virusna okužba aktivira netranskripcijske interakcije IRF3–Bax in povzroči MOMP in celično smrt [67,68]. Virusna okužba lahko sproži tudi zunanjo apoptozo [63]. Zunanja pot se primarno sproži z vezavo ligandov na različne receptorje smrti, aktiviranje kaspaze 8 in vodi do aktivacije kaspaze 3 in apoptoze.

Slika 2. Alternativno spajanje uravnava poti smrti gostiteljskih celic, ki se aktivirajo med virusno okužbo.

Nekroptoza je vnetna vrsta celične smrti, za katero je značilno otekanje celic, izguba prepustnosti plazemske membrane in sproščanje citosolne vsebine v zunajcelični prostor [77]. Nekatere virusne okužbe sprožijo nekroptozo preko membransko vezanih receptorjev (npr. TLR3 [78,79]) ali citosolnih senzorjev (npr. ZBP1 [80–82]) in dosežejo vrhunec z aktivacijo in fosforilacijo proteina, podobnega domeni mešane linije kinaze (MLKL). ), ki tvori homotrimerni kompleks, ki se premakne na plazemsko membrano, kjer tvori pore in inducira celično lizo [83,84]. MLKL ima dve izoobliki, MLKL1 in MLKL2 [85]; MLKL2 je močnejši induktor nekroptoze kot MLKL1 [86]. To povečanje aktivnosti je mogoče pripisati spremenjeni domenski strukturi MLKL2. MLKL2 nima eksonov 4-8 in zato MLKL2 nima večine C-terminalne psevdokinazne domene, za katero se verjame, da služi kot zaviralna funkcija. Dodatne ključne komponente v poti nekroptoze vključujejo serin/treonin-protein kinazo 1 (RIPK1), ki deluje z receptorjem, in serin/treonin-protein kinazo 3 (RIPK3), ki deluje z receptorjem, in poročali so, da oba gena kodirata različice transkripta. Presejanje celotnega genoma CRISPR je identificiralo PTBP1 kot nov regulator spajanja RIPK1 pri nekroptozi [87]. PTBP1 zavira alternativno vključitev eksona med kanoničnima eksonoma 4 in 5 in spodbuja izražanje proteina RIPK1 v polni dolžini za indukcijo celične smrti. V skladu s preskakovanjem eksona, ki ga posreduje PTBP1-, je bil identificiran značilen trakt, bogat s CU, v intronu, ki meji na mesto spajanja 30 [87]. Nazadnje ima RIPK3 dve varianti spoja, RIPK3 beta in RIPK3 gama, za kateri se zdi, da obe zavirata celično smrt [88]. Piroptozo, ki je tudi vnetna oblika celične smrti, povzroči aktivacija inflammasoma in je kritična za protivirusni odziv [89,90]. Ta smrtna pot se sproži z odkrivanjem PAMP ali z nevarnostjo povezanih molekularnih vzorcev (DAMP) z inflammasomskimi proteini, ki so večinoma člani družine Nod-like receptorjev (NLR) [91]. Pozneje rekrutiranje z apoptozo adapterja povezanega pegastega proteina, ki vsebuje CARD (ASC) in kaspazo 1, tvori inflamasomski proteinski kompleks. Aktivirana kaspaza 1 bi razcepila plinski dermin D (GSDMD) in sprostila domeno GSDMD-N. Domena GSDMD-N se translocira na plazemsko membrano in oligomerizira, da ustvari membranske pore. Ta tvorba por zmoti osmotski potencial, kar povzroči otekanje celic in morebitno lizo. Poleg tega aktivna kaspaza-1 predeluje pro-IL-1 in pro-IL-18 v bioaktivne oblike, kar spodbuja vnetje. Med številnimi NLR je pirinska domena družine NLR, ki vsebuje 3 (NLRP3), pomembna pri protivirusnem odzivu [89] in nedavno se je pokazalo, da je regulirana na ravni spajanja. Nova spojena varianta NLRP3, ki nima eksona 5, kodira del domene LRR [92]. Izbris te regije odpravi njeno interakcijo z proteinom kinaze 7 (NEK7), ki je povezan z NIMA, katerega vezava je predpogoj za aktivacijo NLRP3, in tako naredi NLRP3 ∆exon5 neaktiven. Druga kritična komponenta v inflammasomu je adapter ASC, sestavljen iz N-terminalne PYD domene za povezavo z NLR proteini, povezovalne regije in C-terminalne CARD domene za interakcijo s kaspaznimi proteini. Spojena varianta ASC-b nima eksona 2, ki kodira povezovalec, in je sposobna aktivirati inflamasom NLRP3 [93]. V skladu s tem ima bolnik, ki ima to delecijo eksona 2 ASC, višjo raven proteina IL-1 v serumu [94]. Druga spojena izoforma ASC-c ima delecijo v domeni PYD. Deluje kot dominantni negativni regulator in zmanjša aktivacijo NLRP3 [93].

koristi dodatka cistanche-povečanje imunosti

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5. Sklepi

Virusna okužba sproži nešteto celičnih dogodkov v gostitelju. Večina prejšnjih študij se je osredotočila na vlogo transkripcije pri vzpostavljanju celičnega protivirusnega odziva. V tem pregledu razpravljamo o premalo raziskani vlogi AS pri uravnavanju odziva gostitelja med virusno okužbo. Zdi se, da večina regulativnih dogodkov AS, ki so bili do danes odkriti, negativno modulira protivirusni odziv. To bi pomenilo, da bi napake v posttranskripcijski regulaciji protivirusnega prirojenega imunskega odziva povzročile avtoimunost in patološka vnetna stanja. S pojavom sekvenciranja naslednje generacije so bila narejena nova odkritja, ki opisujejo, kako se stroji za spajanje gostiteljev modulirajo med virusno okužbo [95,96]. Očitno je, da ima AS ključno vlogo pri uravnavanju produktivnega prirojenega imunskega odziva; vendar funkcionalni pomen številnih novih izooblik AS in regulativni mehanizmi, s katerimi nastanejo te spojene različice, ostajajo nepopolno razumljeni. Nadaljnja preiskava bi morala raziskati AS kot pomembno plast regulacije interakcij med virusom in gostiteljem in potencialno identificirati nove cilje za terapevtski razvoj za zdravljenje nalezljivih bolezni.

Reference

1. Wilkinson, ME; Charenton, C.; Nagai, K. Spajanje RNA s spliceosomom. Annu. Rev. Biochem. 2020, 89, 359–388. [CrossRef] [PubMed]

2. Wang, ET; Sandberg, R.; Luo, S.; Khrebtukova, I.; Zhang, L.; Mayr, C.; Kingsmore, SF; Schroth, GP; Burge, CB Alternativna regulacija izoform v transkriptomih človeških tkiv. Narava 2008, 456, 470–476. [CrossRef] [PubMed]

3. Fu, XD; Ares, M., Jr. Kontekstno odvisen nadzor alternativnega spajanja z RNA-vezavnimi proteini. Nat. Rev. Genet. 2014, 15, 689–701. [CrossRef] [PubMed]

4. Evsjukova, I.; Somarelli, JA; Gregory, SG; Garcia-Blanco, MA Alternativno spajanje pri multipli sklerozi in drugih avtoimunskih boleznih. RNA Biol. 2010, 7, 462–473. [CrossRef]

5. Tazi, J.; Bakkour, N.; Stamm, S. Alternativno spajanje in bolezen. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 14–26. [CrossRef]

6. Hopfner, KP; Hornung, V. Molekularni mehanizmi in celične funkcije signalizacije cGAS-STING. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2020, 21, 501–521. [CrossRef]

7. Sonce, B.; Sundstrom, KB; Chew, JJ; Bist, P.; Gan, ES; Tan, HC; Goh, KC; Chawla, T.; Tang, CK; Ooi, EE virus denge aktivira cGAS s sproščanjem mitohondrijske DNK. Sci. Rep. 2017, 7, 3594. [CrossRef]

8. Lazear, HM; Schoggins, JW; Diamond, MS skupne in različne funkcije interferonov tipa I in tipa III. Imuniteta 2019, 50, 907–923. [CrossRef]

9. Gack, MU; Kirchhofer, A.; Shin, YC; Gostilna, KS; Liang, C.; Cui, S.; Myong, S.; Ha, T.; Hopfner, KP; Jung, JU Vloge RIG-I N-terminalne tandemske kartice in variante spoja pri transdukciji protivirusnega signala, posredovani s TRIM25-. Proc. Natl. Akad. Sci. ZDA 2008, 105, 16743–16748. [CrossRef]

10. Seo, JW; Yang, EJ; Kim, SH; Choi, IH Zaviralno alternativno spojeno izoformo Tollu podobnega receptorja 3 inducirajo interferoni tipa I v celičnih linijah človeških astrocitov. BMB Rep. 2015, 48, 696–701. [CrossRef]

11. Yang, E.; Shin, JS; Kim, H.; Park, HW; Kim, MH; Kim, SJ; Choi, IH Kloniranje izoforme TLR3. Yonsei Med. J. 2004, 45, 359–361. [CrossRef] [PubMed]

12. Lad, SP; Yang, G.; Scott, DA; Chao, TH; Correia Jda, S.; de la Torre, JC; Li, E. Identifikacija variant spajanja MAVS, ki ovirajo signalizacijo poti RIGI/MAVS. Mol. Immunol. 2008, 45, 2277–2287. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, H.; Pei, R.; Zhu, W.; Zeng, R.; Wang, Y.; Wang, Y.; Lu, M.; Chen, X. Alternativna izoforma MITA za spajanje antagonizira indukcijo IFN-jev tipa I, ki jo posreduje MITA. J. Immunol. 2014, 192, 1162–1170. [CrossRef]

14. Han, KJ; Yang, Y.; Xu, LG; Shu, HB. Analiza variante spoja TRIF brez TIR razkriva nepričakovan mehanizem signalizacije, posredovane s TLR3-. J. Biol. Chem. 2010, 285, 12543–12550. [CrossRef] [PubMed]

15. Oshiumi, H.; Matsumoto, M.; Funami, K.; Akazava, T.; Seya, T. TICAM-1, adapterska molekula, ki sodeluje pri indukciji interferona beta, ki jo posreduje Tollu podobni receptor 3-. Nat. Immunol. 2003, 4, 161–167. [CrossRef]

16. Michel, M.; Wilhelmi, I.; Schultz, AS; Preussner, M.; Heyd, F. Alternativno spajanje faktorja 3 (Traf3), ki ga povzroča receptor tumorske nekroze, nadzoruje nekanonično pot jedrskega faktorja kapa B in ekspresijo kemokinov v človeških T celicah. J. Biol. Chem. 2014, 289, 13651–13660. [CrossRef]

17. Schultz, AS; Preussner, M.; Bunse, M.; Karni, R.; Heyd, F. Alternativno spajanje eksona 8 TRAF3, odvisno od aktivacije, nadzorujeta vezava CELF2 in hnRNP C na zgornji intronski element. Mol. Cell Biol. 2017, 37, e00488-16. [CrossRef]

18. Deng, W.; Ši, M.; Han, M.; Zhong, J.; Li, Z.; Li, W.; Hu, Y.; Yan, L.; Wang, J.; Zdravo.; et al. Negativna regulacija signalne poti IFN-beta, ki jo sproži virus, z alternativnim spajanjem TBK1. J. Biol. Chem. 2008, 283, 35590–35597. [CrossRef]

19. Fabozzi, G.; Oler, AJ; Liu, P.; Chen, Y.; Mindaye, S.; Dolan, MA; Kenney, H.; Guček, M.; Zhu, J.; Rabin, RL; et al. Dvojno zaporedje RNK, specifično za verige bronhialnih epitelijskih celic, okuženih z virusi influence A/H3N2, razkriva spajanje genskega segmenta 6 in nove interakcije med gostiteljem in virusom. J. Virol. 2018, 92, e00518-18. [CrossRef]

20. Koop, A.; Lepenies, I.; Braum, O.; Davarnia, P.; Scherer, G.; Fickenscher, H.; Kabelitz, D.; Adam-Klages, S. Nove variante spoja človeškega IKKepsilon negativno uravnavajo aktivacijo IRF3 in NF-kB, ki jo povzroča IKKepsilon. EUR. J. Immunol. 2011, 41, 224–234. [CrossRef]

21. De Maio, FA; Risso, G.; Iglesias, NG; Šah, P.; Pozzi, B.; Gebhard, LG; Mammi, P.; Mancini, E.; Yanovsky, MJ; Andino, R.; et al. Protein NS5 virusa denge vdre v celični spliceosom in modulira spajanje. Patog PLoS. 2016, 12, e1005841. [CrossRef] [PubMed]

22. Karpova, AY; Ronco, LV; Howley, PM Funkcionalna karakterizacija interferonskega regulatornega faktorja 3a (IRF-3a), alternativne spojene izooblike IRF-3. Mol. Cell Biol. 2001, 21, 4169–4176. [CrossRef]

23. Karpova, AY; Howley, PM; Ronco, LV Dvojna uporaba akceptorskega/donorskega mesta spajanja ureja alternativno spajanje gena IRF-3. Genes Dev. 2000, 14, 2813–2818. [CrossRef]

24. Li, C.; Ma, L.; Chen, X. Regulatorni faktor interferona 3-CL, izoforma IRF3, antagonizira aktivnost IRF3. Cell Mol. Immunol. 2011, 8, 67–74. [CrossRef] [PubMed]

25. Marozin, S.; Altomonte, J.; Stadler, F.; Thasler, WE; Schmid, RM; Ebert, O. Zaviranje odziva IFN-beta pri hepatocelularnem karcinomu z alternativno spojeno izoformo regulatornega faktorja IFN-3. Mol. Ther. 2008, 16, 1789–1797. [CrossRef] [PubMed]

26. Li, Y.; Hu, X.; Pesem, Y.; Lu, Z.; Ning, T.; Cai, H.; Ke, Y. Identifikacija novih alternativnih variant spajanja regulatornega faktorja interferona 3. Biochim. Biophys. Acta 2011, 1809, 166–175. [CrossRef] [PubMed]

27. Guo, R.; Li, Y.; Ning, J.; Sonce, D.; Lin, L.; Liu, X. HnRNP A1/A2 in SF2/ASF uravnavata alternativno spajanje regulacijskega faktorja interferona -3 in vplivata na imunomodulatorne funkcije v človeških celicah nedrobnoceličnega pljučnega raka. PLoS ONE 2013, 8, e62729. [CrossRef]

28. Frankiw, L.; Majumdar, D.; Burns, C.; Vlah, L.; Moradian, A.; Sweredoski, MJ; Baltimore, D. BUD13 spodbuja odziv interferona tipa I s preprečevanjem zadrževanja introna v Irf7. Mol. Celica 2019, 73, 803–814. [CrossRef]

29. Xu, X.; Mann, M.; Qiao, D.; Brasier, AR Alternativna obdelava mRNA prirojenih odzivnih poti pri okužbi z respiratornim sincicijskim virusom (RSV). Virusi 2021, 13, 218. [CrossRef]

30. Zhang, L.; Pagano, JS Struktura in funkcija IRF-7. J. Interferon Cytokine Res. 2002, 22, 95–101. [CrossRef]

31. Prokunina-Olsson, L.; Muchmore, B.; Tang, W.; Pfeiffer, RM; Park, H.; Dickensheets, H.; Hergott, D.; Porter-Gill, P.; Mumi, A.; Kohaar, I.; et al. Različica pred IFNL3 (IL28B), ki ustvarja nov interferonski gen IFNL4, je povezana z oslabljenim očistkom virusa hepatitisa C. Nat. Genet. 2013, 45, 164–171. [CrossRef]

32. Hong, M.; Schwerk, J.; Lim, C.; Kell, A.; Jarret, A.; Pangallo, J.; Loo, YM; Liu, S.; Hagedorn, CH; Gale, M., Jr.; et al. Med virusno okužbo gostitelj zavre izražanje interferona lambda 4. J. Exp. med. 2016, 213, 2539–2552. [CrossRef]

33. Fang, MZ; Jackson, SS; O'Brien, TR IFNL4: Pomembne različice in povezani fenotipi. Gene 2020, 730, 144289. [CrossRef] [PubMed]

34. Lutfalla, G.; Nizozemska, SJ; Cinato, E.; Monneron, D.; Reboul, J.; Rogers, NC; Smith, JM; Stark, GR; Gardiner, K.; Mogensen, KE; et al. Mutantne celice U5A dopolnjuje receptorska podenota interferona alfa beta, ki nastane z alternativno obdelavo novega člana genske skupine citokinskih receptorjev. EMBO J. 1995, 14, 5100–5108. [CrossRef]

35. Cohen, B.; Novick, D.; Barak, S.; Rubinstein, M. Ligand-inducirana povezava komponent interferonskega receptorja tipa I. Mol. Cell Biol. 1995, 15, 4208–4214. [CrossRef] [PubMed]

36. Gazziola, C.; Cordani, N.; Carta, S.; De Lorenzo, E.; Colombatti, A.; Perris, R. Relativne endogene ravni izražanja izooblik IFNAR2 vplivajo na citostatični in pro-apoptotični učinek IFNalpha na celice pleomorfnega sarkoma. Int. J. Oncol. 2005, 26, 129–140.

37. Sheppard, P.; Kindsvogel, W.; Xu, W.; Henderson, K.; Schlutsmeyer, S.; Whitmore, TE; Kuestner, R.; Garrigues, U.; Birks, C.; Roraback, J.; et al. IL-28, IL-29 in njihov citokinski receptor razreda II IL-28R. Nat. Immunol. 2003, 4, 63–68. [CrossRef] [PubMed]

38. Dumoutier, L.; Lejeune, D.; Hor, S.; Fickenscher, H.; Renauld, JC Kloniranje novega tipa II citokinskega receptorja, ki aktivira signalni pretvornik in aktivator transkripcije (STAT)1, STAT2 in STAT3. Biochem. J. 2003, 370, 391–396. [CrossRef] [PubMed]

39. Witte, K.; Gruetz, G.; Volk, HD; Looman, AC; Asadullah, K.; Sterry, W.; Sabat, R.; Wolk, K. Kljub ekspresiji receptorja IFN-lambda imajo krvne imunske celice, vendar ne keratinociti ali melanociti, oslabljen odziv na interferone tipa III: Posledice za terapevtske aplikacije teh citokinov. Geni Imun. 2009, 10, 702–714. [CrossRef]

40. Santer, DM; Minty, GES; Golec, DP; Lu, J.; Maj, J.; Namdar, A.; Shah, J.; Elahi, S.; Ponosen, D.; Joyce, M.; et al. Diferencialna ekspresija spojenih različic interferona-lambda receptorja 1 določa obseg protivirusnega odziva, ki ga sproži interferon-lambda 3 v človeških imunskih celicah. Patog PLoS. 2020, 16, e1008515. [CrossRef]

41. Schindler, C.; Fu, XY; Improta, T.; Aebersold, R.; Darnell, JE, Jr. Proteini transkripcijskega faktorja ISGF-3: En gen kodira proteina 91-in 84-kDa ISGF-3, ki ju aktivira interferon alfa. Proc. Natl. Akad. Sci. ZDA 1992, 89, 7836–7839. [CrossRef] [PubMed]

42. Baran-Marszak, F.; Feuillard, J.; Najjar, I.; Le Clorennec, C.; Bechet, JM; Dusanter-Fourt, I.; Bornkamm, GW; Rafael, M.; Fagard, R. Diferencialne vloge STAT1alpha in STAT1beta pri zaustavitvi celičnega cikla, ki jo povzroča fludarabin, in apoptozi v človeških celicah B. Blood 2004, 104, 2475–2483. [CrossRef] [PubMed]

43. Walter, MJ; Poglej, DC; Tidwell, RM; Roswit, WT; Holtzman, MJ Ciljno zaviranje od interferona gama odvisne medcelične adhezijske molekule -1 (ICAM-1) z uporabo dominantno negativnega Stat1. J. Biol. Chem. 1997, 272, 28582–28589. [CrossRef]

44. Semper, C.; Leitner, NR; Lassnig, C.; Parrini, M.; Mahlakoiv, T.; Rammerstorfer, M.; Lorenz, K.; Rigler, D.; Muller, S.; Kolbe, T.; et al. STAT1beta ni dominantno negativen in lahko prispeva k prirojeni imunosti, odvisni od interferona gama. Mol. Cell Biol. 2014, 34, 2235–2248. [CrossRef] [PubMed]

45. Verma, D.; Swaminathan, S. Protein SM virusa Epstein-Barr deluje kot alternativni faktor spajanja. J. Virol. 2008, 82, 7180–7188. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Verma, D.; Bais, S.; Gaillard, M.; Swaminathan, S. Protein SM virusa Epstein-Barr uporablja celični faktor spajanja SRp20 za posredovanje alternativnega spajanja. J. Virol. 2010, 84, 11781–11789. [CrossRef]

47. Du, Z.; Fan, M.; Kim, JG; Eckerle, D.; Lothstein, L.; Wei, L.; Pfeffer, LM Na interferon odporna celična linija Daudi z okvaro Stat2 je odporna na apoptozo, ki jo povzročajo kemoterapevtiki. J. Biol. Chem. 2009, 284, 27808–27815. [CrossRef]

48. Hambleton, S.; Goodbourn, S.; Mladi, DF; Dickinson, P.; Mohamad, SM; Valappil, M.; McGovern, N.; Cant, AJ; Hackett, SJ; Ghazal, P.; et al. Pomanjkanje STAT2 in dovzetnost za virusne bolezni pri ljudeh. Proc. Natl. Akad. Sci. ZDA 2013, 110, 3053–3058. [CrossRef]

49. Vairo, D.; Tassone, L.; Tabellini, G.; Tamassia, N.; Gasperini, S.; Bazzoni, F.; Plebani, A.; Porta, F.; Notarangelo, LD; Parolini, S.; et al. Huda okvara odzivov IFN-gama in IFN-alfa v celicah bolnika z novo spojeno mutacijo STAT1. Kri 2011, 118, 1806–1817. [CrossRef]