Askorbinska kislina uravnava imunost, antioksidacijo in apoptozo pri Abalonu Haliotis Discus Hannai Ino 2. del

3.5. Izražanje imunsko povezanih genov in beljakovin v prebavni žlezi in škrgah abalona

Glikozid cistanche lahko tudi poveča aktivnost SOD v srčnem in jetrnem tkivu ter znatno zmanjša vsebnost lipofuscina in MDA v vsakem tkivu, učinkovito lovi različne reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂ itd.) in ščiti pred povzročeno poškodbo DNK z OH-radikali. Cistanche feniletanoidni glikozidi imajo močno sposobnost lovljenja prostih radikalov, večjo redukcijsko sposobnost kot vitamin C, izboljšajo aktivnost SOD v suspenziji semenčic, zmanjšajo vsebnost MDA in imajo določen zaščitni učinek na delovanje membrane semenčic. Cistanche polisaharidi lahko povečajo aktivnost SOD in GSH-Px v eritrocitih in pljučnem tkivu eksperimentalno starajočih se miši, ki jih povzroča D-galaktoza, pa tudi zmanjšajo vsebnost MDA in kolagena v pljučih in plazmi ter povečajo vsebnost elastina. dober čistilni učinek na DPPH, podaljša čas hipoksije pri starajočih se miših, izboljša aktivnost SOD v serumu in upočasni fiziološko degeneracijo pljuč pri eksperimentalno starajočih se miših. Pri celični morfološki degeneraciji so poskusi pokazali, da ima Cistanche dobro antioksidativno sposobnost in ima potencial, da postane zdravilo za preprečevanje in zdravljenje bolezni staranja kože. Hkrati ima ehinakozid v Cistanche pomembno sposobnost čiščenja prostih radikalov DPPH in ima sposobnost čiščenja reaktivnih kisikovih vrst ter preprečuje razgradnjo kolagena, ki jo povzročijo prosti radikali, ima pa tudi dober učinek popravljanja na poškodbe anionov prostih radikalov timina.

Kliknite na Cistanche Reddit za preprečevanje staranja

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Ravni mRNA ključnih genov v signalni poti toll-like receptorja (TLR) v prebavni žlezi abalona so prikazane v tabelah 6 in 7. Ravni izražanja tlr2 in tlr4 v prebavni žlezi so se znatno zmanjšale (p < { {5}}.05) in so imeli najnižje ravni pri AA1000 in AA500{{43 }} skupin (tabela 6). Raven mRNA-a je bila znatno povečana (p < 0.05), na-b pa stopenjske ravni prehranske AA niso vplivale (p > 0).05 ). Izražanje myd88, adapterske molekule, povezane s potovanjem (tram), kinaze 4, povezane z receptorjem interlevkina 1 (irak4), in faktorja 6, povezanega z receptorjem faktorja tumorske nekroze (traf6), se je po prehranskem dodatku AA znatno zmanjšalo (p <0,05). Na traf4 ni vplivala raven dodatka AA (p > 0,05). Na ravni mRNA iκb kinaze (ikk) in zaviralca nf-κb (iκb) v prebavni žlezi abalona ni vplival prehranski AA (p > 0,05) (tabela 7). Vendar je bila ekspresija p38 mitogen-aktivirane proteinske kinaze (oznaka p38) in junk znatno zmanjšana z naraščajočo prehransko AA (p <0,05). Prehranska AA bi lahko znatno zmanjšala ravni izražanja nf-κb, aktivatorskega proteina 1 (ap-1) in faktorja tumorske nekroze (tnf-) (p < 0,05), raven interlevkina 16 (il 16) pa ni bila podvrženi prehranski AA (p > 0,05). Proteinske ekspresije MyD88, JNK, zrelega IL-1 in jedrskega NF-κB p65 so prikazane na sliki 2. Raven beljakovin MyD88, zrelega IL-1 in jedrnega NF-κB p65 v prebavilih žleze abalona so bile s prehransko AA pomembno znižane (p <0,05). Nasprotno pa AA ni vplivala na raven beljakovin JNK (p > 0,05).

Ravni mRNA tlr2, tlr4 in the-b v škrgah abalona se niso bistveno razlikovale (p > 0.05), raven tar-a pa je bila po stopenjskih ravneh znatno znižana prehranske AA (p < 0.05) (Tabela 8). Poleg tega so bile ravni izražanja myd88, irak4 in traf6 v škrgah morskega ušesa znatno znižane z naraščajočo ravnjo prehranske AA (p < 0.{{20}}5). Namesto tega niso opazili pomembnih razlik v izrazih tram in traf4 (p > {{30}}.05). Prehranska AA je znatno znižala raven mRNA ikk (p <0,05), AA pa ni vplivala na izražanje iκb, oznake p38 in smeti v škrgah (p > 0,05) (tabela 9). Enosmerna ANOVA je pokazala, da so bile ravni izražanja nf-κb, ap-1 in tnf- znatno zmanjšane s prehransko AA (p < 0,05) in ni bilo opaziti pomembne razlike v ravneh il 16 (p > 0,05). Ravni beljakovin MyD88 in jedrskega NF-κB p65 so bile znatno znižane s stopenjskimi ravnmi prehranske AA (p <0,05) (slika 3). Vendar prehranska AA ni vplivala na izražanje beljakovin JNK in zrelega IL-1 v škrgah morskega ušesa (p > 0,05).

Izrazi -defenzina, ustvarjanja mitov 6 in arginaze-I v prebavni žlezi in škrgah abalona so podani v tabeli 10. Ravni -defenzina in arginaze-I v prebavni žlezi so bile znatno povečane po prehranskem AA (p < 0.05), medtem ko prehranski AA ni vplival na izražanje ustvarjanja mitov 6 (p > 0,05). V nasprotju s tem se ravni mRNA -defenzina in arginaze-I v škrgah niso bistveno razlikovale, izražanje ustvarjanja mitov 6 pa je bilo znatno povečano s prehransko AA (p <0,05).

3.6. Izražanje imunsko povezanih genov v prebavni žlezi kot odziv na Vibrio Parahaemolyticus

Stopnje izražanja več kritičnih genov v signalni poti TLR, ki vsebujejo tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 in tnf- v prebavni žlezi abalona po okužbi z V. parahaemolyticus, so predstavljene na sliki 4. Ekspresije mRNA tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 in tnf- so bile po dajanju V. parahaemolyticus znatno povečane (p < 0.05). Kratna sprememba tlr4 je bila največja v skupini AA0 (10.24-krat) 24 ur po okužbi, nato pa se je najvišja raven znižala na 3.{{ 20}}krat v skupini AA5000 ob 6 urah. Raven mRNA myd88 je bila znatno povečana pri 12–72 urah v skupini AA0 (6.86--krat) in pri 6–12 urah v skupini AA5000 (3.88--krat) po V. parahemolitična okužba. Ekspresija tramva v prebavni žlezi abalona po okužbi z V. parahaemolyticus se je znatno povečala od 12 ur do 72 ur v skupini AA0 in od 12 ur do 24 ur v skupini AA5000. Kratna sprememba nf-κb je dosegla najvišjo raven po 48 urah v skupini AA0 (10.55--krat), čemur je sledilo zmanjšanje najvišje ravni po 12 urah v skupini AA5000 (3.{{48). }}fold change). Raven izražanja ap-1 je bila znatno povečana od 6 ur do 72 ur v skupini z AA0 in AA50, preden se je povrnila na normalno raven po 72 urah po neprekinjenem dodajanju AA. Kratna sprememba TNF- je dosegla vrh 24 ur po okužbi z V. parahaemolyticus v skupinah AA0, AA50, AA100, AA200 in AA500 in je imela najvišjo raven po 12 urah v skupinah AA1000 in AA5000.

Rezultati ravni -defensina in mythmaking 6 v prebavni žlezi po okužbi z V. parahaemolyticus so prikazani na sliki 5. Ravni izražanja -defenzina in mythmaking 6 v prebavni žlezi abalona so se po okužbi z V. parahaemolyticus znatno povečali ( p < 0.05). Raven mRNA -defenzina je bila znatno povečana v skupinah AA0, AA50, AA100 in AA200 po 12 urah in 24 urah in je dosegla svoj vrh po 12 urah v skupinah AA200, AA500, AA1000 in AA5000 s 4 .51-krat, 4.74-krat, 5.20-krat oziroma 5.47-krat. Kratka sprememba ustvarjanja mitov 6 v prebavni žlezi abalona je bila znatno povečana z 12 ur na 24 ur v skupinah AA0, AA50, AA100, AA200 in AA500 ter s 6 ur na 72 ur v skupinah AA1000 in AA5000. Najvišjo stopnjo izražanja ustvarjanja mitov 6 so opazili pri 12 urah v skupini AA5000 s 5.82-krat.

3.7. Izražanje genov in beljakovin, povezanih z antioksidacijo in apoptozo, v prebavnih žlezah in škrgah

Ravni mRNA faktorja, povezanega z nf-e2--2 (nrf2), gpx, cat in cuznsod v prebavni žlezi abalona, ​​so bile znatno povišane s stopnjevanimi ravnmi prehranske AA (p < {{4 }}.05) (Tabela 11). V nasprotju s tem so bile ravni mRNA in beljakovin Keap1 po prehranski AA znatno znižane (p < 0.05), AA pa ni vplivala na glutation-s-transferazo (GST) (slika 6, tabela 11) (p > 0.05). V škrgah so bile ravni mRNA nrf2 in gpx znatno povečane s prehransko AA (p < 0,05) (tabela 11). Vendar izrazi keap1, cat, GST in cuznsod v škrgah niso bili predmet stopenjskih ravni prehranske AA (p> 0, 05). Opazili niso pomembnega učinka prehranske AA na izražanje beljakovin Keap1 v škrgah abalona (p > 0,05) (slika 6).

Kar izstopa v tabeli 12, je, da so se stopnje izražanja Bax in kaspaze3 v prebavni žlezi abalona znatno zmanjšale po stopnjevanih ravneh prehranske AA (p < 0.05). Medtem je bila raven mRNA bcl-2 znatno povečana (p < 0.05). Vendar pa prehranska AA ni vplivala na izražanje kaspaze7 (p > 0.{{20}}5). Razcepljena beljakovina kaspaze3 v prebavni žlezi se je znatno zmanjšala po dodatku AA (p <0,05) (slika 6). V škrgah so se ravni mRNA kaspaze7 in bcl-2 znatno zmanjšale oziroma povečale po prehranski AA (p <0,05) (tabela 12). Kljub temu se izrazi Bax in kaspaze3 med vsemi zdravljenji niso bistveno razlikovali (p> 0,05). Poleg tega stopenjske ravni prehranske AA (p > 0,05) niso vplivale na ekspresijo beljakovin razcepljene kaspaze3 v škrgah abalona (slika 6).

4. Razprava

4.1. Vsebnost askorbinske kisline v različnih tkivih

V tej študiji se je vsebnost AA v mišicah, škrgah in prebavnih žlezah povečala z naraščanjem ravni AA v prehrani. Podoben rezultat je bil ugotovljen tudi pri Vunduju (Heterobranchus logfiles), japonski jegulji in Chujevem krokarju (barva Nibea) [27,56,57]. Vsebnost AA je bila največja v škrgah, sledile so prebavne žleze morskega ušesa. Vendar pa vsebnost AA v škrgah, prebavni žlezi in mišicah abalona ni dosegla nasičenosti po 4821,17 mg/kg prehranske AA. Pri kitajskem sesalcu (Myxocyprinus asiaticus) se je vsebnost AA v jetrih znatno povečala s prehransko AA [58]. Povečana vsebnost AA v jetrih kitajskega sesalca po dietni AA je bila povezana z zdravjem jeter. Pri amurju je bila vsebnost AA v glavi ledvic, vranice in kože znatno povišana z naraščajočim dodatkom AA v prehrani [35]. Glavna ledvica, vranica in koža so pomembni imunski organi pri vodnih živalih [59–61]. Ti rezultati kažejo, da je bila povečana vsebnost AA v prebavni žlezi in škrgah abalona tesno povezana z zdravjem abalona po dietni AA in da kopičenje AA odraža ravni izpostavljenosti AA s hrano.

4.2. Vloga askorbinske kisline pri uravnavanju imunosti abalona

Hemociti kot vsestranske celične komponente hemolimfe pri mehkužcih so odgovorni za številne vidike življenja mehkužcev, kot so imunski odziv, biomineralizacija, medcelična komunikacija in regeneracija [62,63]. Zato lahko THC, RB in PA hemolimfe neposredno odražajo imunost organizma. AA je bil tesno povezan s THC, RB in PA hemocitov, kar je povzročilo aktivacijo adaptivnega imunskega sistema [64,65].

V tej študiji so se THC, RB in PA v hemolimfi abalona znatno povečali s prehransko AA. Pokazalo se je, da so stopenjske ravni prehranske AA uspele povečati imunsko funkcijo pri morskem uhu. Podobne rezultate so opazili pri nilski tilapiji in travnati kozici (Penaeus monodon) [64,66]. RB v serumu rdečega močvirskega raka (Procambarus clarkii) in PA v serumu hibridnega sorubimskega soma (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) sta se znatno zmanjšala po visoki stopnji prehranskega dodatka AA (321,38 mg/kg in 850 mg/ kg) [67,68]. Vendar pa pri zdravljenju z visokimi ravnmi prehranskega dodatka AA (4821,17 mg/kg) niso opazili pomembnega zmanjšanja THC, RB in PA v hemolimfi abalona.

Lizocim, C3 in C4 igrajo ključno vlogo pri prirojeni imunosti in ščitijo živali pred patološko okužbo [69–71]. V tej študiji se je LZM v CFH abalona znatno povečal po stopenjskih ravneh prehranske AA. To je bilo podobno rezultatom prejšnjih študij na kobiji (Rachycentron canadum), korejskem morskem morju (Sebastes schlegelii) in kirnji (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. Pomanjkanje AA je zmanjšalo vsebnosti C3 in C4 pri amurju, prehranska AA pa bi lahko znatno izboljšala imunske parametre, kot sta C3 in C4 pri brancinu [35,74]. V tej študiji pa na vsebnost C4 v CFH abalona niso vplivale prehranske ravni AA. Prišlo je do naraščajočega trenda vsebnosti C3 v CFH abalona, ​​čeprav se vsebnost C3 ni bistveno izboljšala s prehransko AA. Ti rezultati so pokazali, da bi prehransko dopolnilo AA lahko povečalo sposobnost za odpravo okužbe patogenov z LZM in C3, ne C4, da bi izboljšali imunske ovire abalona.

Zaradi odsotnosti adaptivne imunosti pri nevretenčarjih je prirojena imunost bistvena za morsko uho [43,49]. TLR igrajo ključno vlogo v prirojenem imunskem sistemu proti različnim mikrobom [75]. TLR-ji, aktivirani s PAMP, rekrutirajo specifične adapterske molekule za aktiviranje transkripcijskih faktorjev, kot sta NF-κB in AP-1, ki določata izid prirojenega imunskega odziva [76]. Signalizacija TLR je razvrščena v dve različni poti: odvisno od MyD88- in MyD88-neodvisno, ki inducirata različne citokine, kot sta TNF- in IL-1 pri sesalcih in drugih vodnih živalih [77,78 ]. Na poti, odvisni od MyD88-, MyD88 sodeluje z IRAK4 in nato s TRAF6 [79]. TRAF6 lahko aktivira TGF- -kinazo 1 (TAK1) in TAK1-vezavne proteine ​​(TAB) [80]. TAK1 aktivira kompleks IKK, ki lahko fosforilira IκB, ki se veže na podenote NF-κB (sestavljene iz p50 in p65) in fosforilira MAPK in JNK, kar spodbuja translokacijo AP-1 v jedro [81]. Uničenje IκB olajša jedrsko translokacijo NF-κB [82]. Jedrni NF-κB in AP-1 ciljata na transkripcijo citokinov, kot sta TNF- in IL-1, ki so dobro znani kot pro-vnetni mediatorji, ki spodbujajo vnetje [76,77,83] . V MyD88-neodvisni poti je TRAM potreben in ima osrednjo vlogo v tej poti [84]. Znotrajcelične komponente za signalno potjo TLR so pogosto in zelo ohranjene med vretenčarji in nevretenčarji [60,85]. Intrahepatična ekspresija TLR4 je bila zmanjšana pri miših, ki so prejemale AA (Mus musculus) [86]. AA je pri miših z inhibicijo signalne poti NF-κB izvajal koristno hepatoprotekcijo pred imunološko poškodbo jeter, ki jo povzroča konkanavalin A [87, 88]. Tako je iz teh rezultatov mogoče sklepati, da lahko AA vpliva na signalno pot TLR. Vendar pa ostaja neznano, kako AA uravnava signalno pot TLR pri vodnih živalih, zlasti pri mehkužcih.

V tej študiji so bile ravni mRNA tlr2 in tlr4 v prebavni žlezi znatno znižane s stopenjsko stopnjo prehranske AA. Domneva se, da je signalno pot TLR sprožil AA v prebavni žlezi abalona (slika 7). Izraza-a in tlr-b sta imela širše zmožnosti prepoznavanja vzorcev in sta bila vključena v protibakterijsko in protivirusno imunost abalona [89]; vendar osnovni mehanizem -a/b še vedno ni znan. Vendar pa prehranski AA ni vplival na raven tlr-b, tlr-a pa je bil v tej študiji znatno povečan z AA. Potrebne so nadaljnje preiskave. Izražanje myd88, irak4 in traf6 ter izražanje beljakovin MyD88 v prebavni žlezi abalona je bilo znižano z dodajanjem AA, na raven traf4 pa prehranski AA ni vplival. TRAF4 deluje kot dušilec signala, ki ga posreduje TLR, tako da zavira TRAF6 [90]. Pokazalo se je, da zaviranje poti TLR s prehransko AA ni bilo posredovano s traf4 v prebavni žlezi abalona. AA ni vplival na raven mRNA iκb v prebavni žlezi. Vendar se lahko NF-κB prenese v jedro šele po razgradnji fosfata IκB [91]. Ekspresije mRNA nf-κb in ekspresija beljakovin jedrske NF-κB p65 v prebavni žlezi so bile znatno zmanjšane s prehransko AA. Ti rezultati kažejo, da bi AA lahko zaviral fosforilacijo proteina IκB, da bi zmanjšal jedrski NF-κB. IKK lahko aktivira NF-κB p65, da sproži kanonično pot NF-κB, IKK pa lahko aktivira NF-κB p52, da sproži nekanonično pot NF-κB [92]. Nakazano je, da bi lahko prehranska AA aktivirala kanonično pot NF-κB v prebavni žlezi abalona. Poleg tega so bili izrazi mRNA tramva, oznake p38, junk, ap-1 in tnf- ter raven beljakovin zrelega IL-1 znatno zmanjšani s prehransko AA. Ti rezultati kažejo, da bi lahko prehranska AA zavirala signalno pot TLR prek Myd88-odvisne poti preko NF-κB, p38 mark/ap-1 in JNK/ap-1 ter Myd{{ 43}}neodvisne poti za ublažitev vnetja v prebavni žlezi abalona. V škrgah je AA vplivala tudi na signalno pot TLR (slika 7). Vendar se ravni mRNA tramva, oznake p38 in ekspresije smeti ter beljakovine zrelega IL-1 niso bistveno razlikovale. Ti rezultati so pokazali, da lahko prehranska AA zavira signalno pot TLR prek Myd88-odvisne poti, ne pa MyD88-neodvisne. Inhibirana pot TLR je ublažila vnetje v škrgah morskega ušesa prek poti NF-κB in p38 mark/ap-1, ne pa poti JNK/ap-1. Prehranska AA je imela močnejši učinek na pot TLR v prebavni žlezi kot tista v škrgah abalona.

【Za več informacij:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】