Spontana granulocitna levkemija pri miših z ničelnim IL-2R NOD/Shi-scid

Povzetek:Tukaj poročamo o primeru spontane granulocitne levkemije pri 51-teden starem samcu NOD/Shi-ScidIL-2R ničelna (NOG) miška. Miška je pokazalaprogresivna anemijaingrobo dihalno gibanje. Makroskopsko je bila vranica razbarvana in povečana. Histološko je kostni mozegprsnicain stegnenica je bila zelo celičasta in skoraj izključno napolnjena sneoplastične celice. Jedra neoplastičnih celic so bila velika, ovalne do rahlo nepravilne oblike in majhno število celic je imeloledvica- ali obročasta jedra.Neoplastične celiceobsežno infiltriralo organe, vidno pa sta bila prizadeta vranica in jetra. Imunohistokemično je bila velika populacija neoplastičnih celic v rdeči pulpi vranice in sinusoidu jeter pozitivna namieloperoksidaza. Na podlagi histoloških značilnosti je bil ta primer diagnosticiran zgranulocitna levkemija. Ta nova informacija ospontani tumorjilahko v pomoč pri ustrezni uporabi tega seva miši v nadaljnjih raziskavah. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ključne besede: granulocitna levkemija, NOG miš, spontani tumor

KLIKNITE TUKAJ ZA NARAVNI ORGANSKI IZVLEČEK CISTANCHE S 25 % EHINAKOZIDA IN 9 % AKTEOZIDA ZA DELOVANJE LEDVIC

Podporna storitev Wecistanche-največjega izvoznika cistanche na Kitajskem:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Trgovina za več podrobnosti o specifikacijah:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontana granulocitna levkemijaredko poročajo pri več vrstah miši, čeprav lahko kemična sredstva in ionizirajoče sevanje povečajo incidenco pri nekaterih vrstah miši1, 2. Miši NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) so hudoživali z imunsko pomanjkljivostjo, in prisotne okvare v T-, B- in naravnih celicah ubijalkah ter slabo delujočih makrofagih in dendritičnih celicah zaradi izločitve IL-2 receptorske verige (IL2R c) v sev NOD-scid3. Ta mišji sev se uporablja za neklinične teste, kot je test tumorigenosti, za oceno kakovosti in varnosti bioloških proizvodov za regenerativno medicino z uporabo celic/tkiv, pridobljenih iz človeka, zaradi izrazito boljšega presadka ksenogenskih celic4–6. Čeprav so stanje imunske pomanjkljivosti in njegove posledice za ksenotransplantate dobro raziskane, je na voljo le malo informacij o spontanih tumorjih, ki se pojavijo pri tej liniji miši, kot je timusni limfom,mlečnižleza adenom/adenokarcinom, bronhioloalveolarni karcinom, rabdomiosarkomin teratom 7. Tukaj poročamo o primeru granulocitne levkemije pri 51-teden starem samcu miši NOG.

Žival je bila pridobljena od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japonska) v starosti 6 tednov in je bila nezdravljena. Žival je bila posamično nameščena v plastični kletki z individualno prezračevanim sistemom kletk (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japonska) v prostoru z okoljsko nadzorovanim pregradnim sistemom, ki je bil vzdrževan pri temperaturi 22 ± 2 stopinji z vlažnost 50 ± 20 % in 12--urni cikel svetloba/tema. Miško smo hranili z avtoklavirano peletirano dieto (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japonska) z avtoklavirano vodo iz pipe in libitumom. Z živaljo so ravnali v skladu s protokolom, ki ga je odobril Odbor za institucionalno oskrbo in uporabo živali CMIC Pharma Science Co., Ltd., ki ga je akreditiral AAALAC International.

Ta miška je pokazala klinične znake oslabitve, kot so anemija, grobo dihanje in zmanjšanje telesne teže med 49. in 51. tednom starosti. Žival je bila evtanazirana v starosti 51 tednov. Pri nekropsiji je bila vranica razbarvana in povečana. V drugih organih niso opazili očitnih nenormalnih grobih ugotovitev. Timus in bezgavka sta bila atrofična, podobna tistim pri normalnih miših NOG.

Vsi vzorci organov in tkiv so bili rutinsko zbrani, fiksirani v 10% nevtralnem pufriranem formalinu, vdelani v parafin in razrezani na približno 3 μm. Za njegovo patološko preiskavo so bili rezi obarvani s hematoksilinom in eozinom (HE). Odseki vranice in jeter so bili imunohistokemično obarvani na kunčje poliklonsko protitelo proti humani mieloperoksidazi (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japonska) kot marker mieloidnih celic, kunčje monoklonsko protitelo proti humanemu CD3 (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japonska). ) kot marker celic T in monoklonsko protitelo kunčjega protičloveškega Pax-5 (Abcam Inc., Cambridge, Združeno kraljestvo) kot marker celic B8. Odseke smo 1 uro inkubirali s protitelesi pri sobni temperaturi in izvedli imunodetekcijo z uporabo Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) s 3,3'-diaminobenzidinom/H2O2 kot kromogenom. Nato so bili imunsko obarvani odsekikontrastno obarvani s hematoksilinom.

Histopatološko je bil kostni mozeg prsnice in stegnenice visoko celični in skoraj izključno napolnjen z neoplastičnimi celicami (slika 1A). Maščobno tkivo je bilo popolnoma premaknjeno. V kostnem mozgu so bila občasna celična žarišča, sestavljena iz eritroidnih in megakariocitnih elementov, ki naj bi bili ostankinormalna hematopoeza. Večina neoplastičnih celic je imela blasten videz, za katerega so značilna velika, ovalna do rahlo nepravilno oblikovana jedra in retikularni kromatin, ki vsebuje eno ali več izrazitih nukleolov. Bilo je majhno število celic z jedri v obliki ledvic ali obroča, prisotnih pa je bilo tudi nekaj celic z režnimi jedri (slika 1B). Granule v citoplazmi neoplastičnih celic niso bile očitne v odsekih, obarvanih s HE. V kostnem mozgu so našli številne mitotične figure, opazili pa so tudi občasna apoptotična telesca. Neoplastične celice so izrazito napadle pokostnico in okoliško skeletno mišico. Prišlo je do obsežne infiltracije neoplastičnih celic v druge organe in tkiva, vidno pa sta bili prizadeti vranica in jetra. V vranici so opazili neoplastične celice v rdeči pulpi (slika 2). Očitna je bila kapsularna infiltracija neoplastičnih celic. Opazili so nekaj razvijajočih se eritroidnih serij in megakariocitov. Občasno so opazili megakariocite, ki vsebujejo eno ali nekaj mieloidnih celic v citoplazmi, kar kaže na emperipolezo. V jetrih so se neoplastične celice difuzno infiltrirale v Glissonovo kapsulo in jetrne sinusoide (slika 3). V nekaterih krvnih žilah so bile vidne tudi neoplastične celice z jedri v obliki ledvic ali obroča. Nekateri hepatociti v periportalnem območju z izrazito infiltracijo neoplastičnih celic so pokazali degeneracijo ali nekrozo, medtem ko je normalna struktura jetrnega lobula ostala nedotaknjena. Infiltracija neoplastičnih celic je bila ugotovljena tudi v drugih organih, vključno z alveolno steno in perivaskularnim predelom pljuč, interstadiom v ledvicah, sinusoidom v nadledvičnih žlezah ter sluznico in submukozo v želodčnem traktu (želodec in črevesje). Imunohistokemično je bila velika populacija neoplastičnih celic v rdeči pulpi vranice (slika 4) in sinusoidu jeter pozitivna na MPO. CD3 in Pax-5 pozitivnih celic niso odkrili. Rezultati imunskega barvanja CD3 in Pax-5 so bili podobni tistim pri vranici normalnih miši NOG, ki so bile histološko hipoplastične in niso pokazale nobenih CD3 ali Pax-5 pozitivnih celic.

Imunohistokemijska preiskava je pokazala, da neoplastične celice izvirajo iz linij mieloidnih celic. Na nekaterih prizadetih območjih, zlasti v vranici in jetrih, je imelo majhno število celic ledvično, obročasto ali lobasto obliko, kar kaže na razlikovanje mieloidnih serij. Te ugotovitve kažejo, da so neoplastične celice izpeljane iz nezrelih granulocitov. Primer hude mielopoeze je lahko razviden iz prisotnosti vseh vrst razvijajočih se mieloidnih serij, v nasprotju s prevlado nezrelih celic pri levkemiji. Poleg tega je progresivna anemija pogost klinični znak granulocitne levkemije, povečanje števila eritroidnih in megakariocitnih celic pa je slabo1. Manjša populacija granulocitov z režnjastimi jedri na prizadetem območju brez očitnega vnetja kaže, da gre v tem primeru za neoplastično in ne za reaktivno mielopoezo.

Pri granulocitni levkemiji lahko kostni mozeg nadomestijo nezrele in zrele mieloidne celice. V prejšnjem poročilu o drugih vrstah miši so se te neoplastične celice popolnoma infiltrirale v jetra, vranico, bezgavke itd.2, te celice v vranici in jetrih pa so bile večinoma v rdeči pulpi in okoli Glissonove kapsule1. Tako je bila porazdelitev levkemičnih celic v tem primeru enaka kot v prejšnjem primeru. Glede na morfologijo celic je granulocitna levkemija pri miših razvrščena v dva tipa: juvenilni tip, ki je primerljiv s človeško akutno mieloično levkemijo, in zrel tip s človeško kronično mieloično levkemijo1. V juvenilnem primeru so v neoplastičnih celicah v kostnem mozgu, vranici in jetrih prevladovale slabo diferencirane celice, medtem ko je mogoče videti mieloidne elemente, ki predstavljajo različne stopnje zorenja, odstotek mieloblastov pa je bil v nekaterih zrelih primerih nizek 2, 9. V tem primeru je v levkemičnih celicah prevladovala nezrela oblika z velikimi, ovalnimi do rahlo nepravilno oblikovanimi jedri. Poleg tega ob upoštevanju kliničnih ugotovitev, da se je akutno razvilo splošno poslabšanje zdravja, vključno s progresivno anemijo in grobim dihanjem; zato se domneva, da je ta primer mladoletnega tipa.

Sl. 1. Histološke slike kostnega mozga stegnenice. O: Neoplastične celice se difuzno razmnožujejo in tako nadomeščajo kostni mozeg. B: Jedra so velika, ovalne do rahlo nepravilne oblike. Majhno število celic ima jedra v obliki ledvic (rumena puščica), obroča (zelena puščica) ali režnja (bela puščica). Mitotična številka je označena z belo puščico. ON madeže. Črna črta =50 μm (A), 10 μm (B).

V prejšnji publikaciji o miših NOG so bile neoplastične lezije na splošno neobičajne; vendar so o limfomu timusa poročali pri 0.82 % v starostni skupini od 16 do 40 tednov7, 10. Kolikor nam je znano, o spontani granulocitni levkemiji pri miših NOG še niso poročali. Pri več vrstah miši, vključno z B6C3F1 in BALB/c, se je granulocitna levkemija pojavila redko2, 11 in o njej niso poročali v primeru teh miši, starih 12 mesecev ali manj. V tem primeru se je granulocitna levkemija razvila pri starosti 51 tednov, kar je bila relativno mlada starost. Te nove informacije o spontanih tumorjih so lahko koristne za ustrezno uporabo tega seva miši v nadaljnjih raziskavah.