Trajen citotoksični odziv mononuklearnih celic periferne krvi necepljenih posameznikov, sprejetih na intenzivno nego zaradi kritičnega COVID-a-19, je bistvenega pomena za preprečitev smrtnega izida

Povzetek: Glavni cilj te študije je bil ugotoviti vpliv citotoksične aktivnosti mononuklearnih celic periferne krvi (PBMC) na izid necepljenih posameznikov s kritičnim COVID-19, ki so bili sprejeti na intenzivno nego. Vzorce krvi 23 osebam smo odvzeli ob sprejemu in nato vsaka 2 tedna 13 tednov do smrti (skupina Exitus) (n=13) ali odpusta (skupina za preživetje) (n=10). Med skupinami nismo našli bistvenih razlik v sociodemografskih, kliničnih ali biokemičnih podatkih, ki bi lahko vplivale na smrtni izid. Vendar se je neposredna celična citotoksičnost PBMC posameznikov iz skupine Exitus proti celicam Vero E6, okuženim s psevdotipom SARS-CoV-2-, znatno zmanjšala po sprejemu (–2.69-krat; p=0). 0234) in po 4 tednih na oddelku za intenzivno nego (–5.58-krat; p=0.0290), v primerjavi s posamezniki, ki so preživeli, in se med hospitalizacijo ni izboljšalo. In vitro zdravljenje z IL-15 teh celic ni obnovilo učinkovite citotoksičnosti v nobenem trenutku do smrtnega izida, pri NKT, CD4+ in CD pa so opazili povečano izražanje markerjev imunske izčrpanosti. 8+ T celice. Vendar pa je zdravljenje z IL-15 PBMC posameznikov iz skupine za preživetje znatno povečalo citotoksičnost v 4. tednu (618-krat; p=0.0303). Posledično so imunomodulatorna zdravljenja, ki lahko premagajo imunsko izčrpanost in povzročijo trajno, učinkovito citotoksično aktivnost, bistvenega pomena za preživetje med hospitalizacijo zaradi kritične bolezni COVID-19.

Ključne besede: SARS-CoV-2; COVID-19; imunski odziv; citotoksični odziv; IL -15

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

1. Uvod

Decembra 2019 so odkrili več primerov atipične virusne pljučnice, povezane z izbruhom na tržnici z morsko hrano v mestu Wuhan (provinca Hubei, Kitajska). Novi koronavirus, ki so ga hitro poimenovali hud akutni respiratorni sindrom, koronavirus 2 (SARS-CoV-2) razširila po vsem svetu in povzročila pandemijo koronavirusne bolezni 2019 (COVID-19) [1]. Od takrat je bilo po vsem svetu prijavljenih približno 626 milijonov primerov COVID-19 in 6,5 milijona povezanih smrti (posodobljeno oktobra 2022) [2]. Različni dejavniki tveganja in sočasne bolezni lahko vplivajo na napredovanje COVID-19 med posamezniki, kar je vplivalo na primerjavo kliničnih podatkov med prizadetimi državami od začetka pandemije [3]. Vendar je bilo ugotovljeno, da se lahko klinične manifestacije COVID-19 razlikujejo od asimptomatske okužbe do sindroma akutne respiratorne stiske (ARDS) [4]. Med različnimi dejavniki tveganja, ki so bili povezani z večjo verjetnostjo razvoja hude oblike COVID-19, so starost, moški spol in predhodne spremljajoče bolezni, kot so sladkorna bolezen, hipertenzija in/ali debelost [5,6]. Huda in kritična bolezen COVID-19 je bila povezana tudi s citopenijo, večinoma limfocitov CD4+ T, pa tudi s čezmerno izčrpanostjo celic naravnih ubijalk (NK) in celic CD8+ T, kar povzroči imunsko oslabljeno stanje, ki ne more očistiti okužbe, poleg razvoja resnih zapletov, kot so citokinska nevihta in trombotični dogodki [7]. Glavni vzrok za razvoj hude oblike bolezni in smrti pri bolnikih s COVID-19 je bil pretiran vnetni odziv, ki lahko spodbudi razvoj šoka in/ali hipercitokinemije z multiorgansko disfunkcijo [4]. Ta sindrom je znan kot citokinska nevihta [8] in je podoben bolezni hemofagocitne limfohistiocitoze (sHLH), ki je sestavljena iz stanja hipervnetja, ki ga sproži virusna okužba [9,10]. To je lahko povezano z dejstvom, da SARS-CoV-2 uporablja receptor angiotenzinske konvertaze 2 (ACE2) za okužbo ciljnih celic. Vezava SARS-CoV-2 na receptor ACE2, ki se široko izraža v celicah različnih tkiv [11], vodi do povečanja angiotenzina II, ki aktivira jedrski faktor-κB (NF-κB). Aktivacija tega bistvenega transkripcijskega faktorja stimulira izražanje vnetnih citokinov, kemokinov in adhezijskih molekul [12]. Kljub temu čezmernemu vnetnemu odzivu se zdi, da je neučinkovito odpraviti okužbo in se lahko zaradi aktivacije T-celic konča z apoptozo [13]. Ta citokinska nevihta je lahko odgovorna za limfopenijo [12,14] in tudi znižane ravni NK in CD8+ T celic z izčrpanim fenotipom in povečano ekspresijo zaviralnih receptorjev, kot je NKG2A v NK celicah in PD{{47 }} v celicah CD8+ T [15,16]. Poleg tega je izražanje degranulacijskih markerjev, kot je CD107a, običajno zmanjšano na površini teh celic [15], kar dokazuje obstoj okvare v zmožnosti odstranjevanja okuženih celic pri posameznikih s hudim in kritičnim COVID-19 [17 ]. Kljub hitremu globalnemu odzivu za razvoj in dajanje učinkovitih cepiv je pojav novih variant, ki se lahko izognejo imunskemu odzivu, ki ga povzroči cepivo, povzročil hiter upad zaščite pred simptomatsko boleznijo [18]. Zato je treba nadaljevati raziskave za učinkovite terapije proti COVID-19. Preizkušenih je bilo več načinov zdravljenja za izboljšanje statusa posameznikov, ki so bili hospitalizirani zaradi hude in kritične bolezni, vendar še ni bilo dokazano, da je nobeno specifično za odstranjevanje okuženih celic ali zmanjšanje stopnje okužbe [15,19]. Zato je podporno zdravljenje, kot sta terapija s kisikom in tekočino, še vedno med najpomembnejšimi strategijami, ki se uporabljajo za obvladovanje teh posameznikov [2,4,16,20]. Nespecifična zdravljenja, kot so kortikosteroidi, so prav tako bila koristna za nadzor in zmanjšanje čezmernega vnetnega odziva [21, 22]. Nedavno je FDA odobrila več zdravil za zdravljenje posameznikov z blagim do zmernim COVID-19, kot so molnupiravir, nirmatrelvir in ritonavir, vendar le v nujnih primerih za tiste posameznike z visokim tveganjem. napredovati v hudo bolezen [23–26]. Molnupiravir kaže protivirusno delovanje širokega spektra zaradi svoje zmožnosti induciranja mutageneze RNA z interferenco z več virusnimi RNA-odvisnimi polimerazami RNA (RdRp), vključno z RdRp, ki ga uporablja SARS-CoV-2 za replikacijo in prepisovanje genom RNA [27]. Dokazano je tudi, da lahko kombinacija nirmatrelvirja in ritonavirja zaustavi širjenje okužbe na živalskih modelih z zaviranjem glavne virusne proteaze 3CLpro SARS-CoV-2- 2 [28]. Vendar pa je treba ta protivirusna zdravila dajati v povezavi z drugimi ukrepi, kot so cepiva, da se sproži močan citotoksični imunski odziv, ki lahko odstrani okužene celice. Večina celic s citotoksično aktivnostjo, kot so limfociti CD8+ T ter celice NK in NKT, za svoje delovanje in homeostatsko regulacijo potrebuje prisotnost interlevkina-15 (IL-15) [29]. IL-15 pripravi celice CD8+ T za njihovo aktivacijo s specifičnimi antigeni ter izboljša citotoksičnost in proliferacijo celic NK. Zato lahko IL-15 okrepi tako prirojene kot adaptivne celične imunske odzive proti okuženim celicam [22, 25]. IL-15 prav tako preprečuje apoptozo celicam NK in T z uravnavanjem antiapoptotičnih dejavnikov, kot je Bcl-2, in znižanjem proapoptotičnih dejavnikov, kot je GSK-3 [26], s čimer se izognemo citopeniji. V skladu s tem je bil IL-15 predlagan kot nov imunomodulatorni citokin v imunoterapiji raka in velja za adjuvans v režimih cepljenja [26,30]. Klinična preskušanja 1. faze s humanim bolusom intravenske infuzije IL-15 (rhIL-15) ali IL-15 superagonista N-803 so pokazala, da lahko ta citokin inducira znatno ekspanzijo in/ali aktivacijo CD4+, CD8+ in efektorskih celic NK in vivo, zato so ga uporabljali za zdravljenje raka ali virusnih okužb, kot je HIV [31–35]. Zato bi lahko bila uporaba imunomodulacijskih učinkovin, kot je IL-15, ki lahko obnovijo citotoksično aktivnost pri posameznikih, hospitaliziranih zaradi kritične bolezni COVID-19, koristna za pomoč pri odstranjevanju virusa iz organizma. V tej opazovalni, longitudinalni študiji smo opisali razvoj citotoksičnega imunskega odziva proti SARS-CoV-2 v mononuklearnih celicah periferne krvi (PBMC), izoliranih pri posameznikih z diagnozo COVID-19, ki so bili sprejeti na intenzivno negovalni enoti (ICU) zaradi resnih zapletov, pa tudi vpliv tega odziva na končni izid v primerjavi z drugimi bistvenimi dejavniki tveganja. Ocenili smo tudi sposobnost teh celic, da se odzovejo na zdravljenje z IL-15 in povečajo njihov citotoksični protivirusni odziv. Rezultati, pridobljeni v tej študiji, lahko prispevajo k boljšemu razumevanju vloge citotoksičnega odziva pri smrtnem izidu COVID-19 in k napredku v smeri razvoja učinkovitih imunomodulatornih zdravljenj, ki spodbujajo očistek virusa.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

2. Materiali in metode

2.1. Študijski predmeti

Za to študijo je bilo izbranih 23 posameznikov s kritičnim COVID-19, ki so bili sprejeti na intenzivno nego bolnišnice Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Španija) od oktobra 2020 do aprila 2021. To obdobje je zajemalo drugi in tretji pandemični val COVID-19 v Španiji (od junija do decembra 2020 oziroma od decembra 2020 do marca 2021). Udeleženci so bili naključno izbrani ob hospitalizaciji v skladu z naslednjimi merili: odobritev informiranega pisnega ali ustnega soglasja s pričo za sodelovanje v študiji, hospitalizacija na oddelku za intenzivno nego zaradi kritičnega COVID-19, pozitiven SARS-CoV-2 Test RT-qPCR v brisu nazofarinksa, opravljen ob sprejemu v bolnišnico v skladu z interno potrjenimi protokoli, starejši od 18 let in necepljeni proti SARS-CoV-2 v času okužbe. Vzorci periferne krvi in ​​klinični podatki so bili zbrani vsaka 2 tedna skupno 13 tednov, vzorci krvi pa so bili obdelani in kriokonzervirani do trenutka analize. To obdobje je bilo izračunano ob upoštevanju, da je bila dolžina bivanja v bolnišnici v Španiji med prvimi valovi pandemije ocenjena na povprečno 35 dni [36], tako da smo lahko izvedli vsaj dva popolna kroga zaposlovanja in spremljanja. Po 13 tednih so bili udeleženci razdeljeni v dve skupini glede na končni izid: smrtni izid (n=13), odslej Exitus; ali odpust iz bolnišnice (n=10), odslej Preživetje.

2.2. Etična izjava

Posamezniki, ki so sodelovali v tej študiji, so bili izbrani iz bolnišnice Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Španija). Vsi so dali informirano pisno soglasje za sodelovanje v študiji ali so bili priča ustni privolitvi s pisnim soglasjem predstavnika, da bi se izognili ravnanju s kontaminiranimi dokumenti. Veljavni španski in evropski zakon o varstvu podatkov zagotavljata zaupnost in anonimnost vseh udeležencev. Protokol za to študijo (CEI PI 32_2020-v2) je bil pripravljen v skladu s Helsinško deklaracijo in sta ga predhodno pregledala in odobrila Etična odbora Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) in sodelujoča bolnišnica.

2.3. Celice

Pet mililitrov polne krvi je bilo zbranih v epruvetah EDTA Vacutainer (Becton Dickinson, Madrid, Španija) in takoj obdelanih za izolacijo PMBC in plazme s centrifugiranjem z gostotnim gradientom Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, ZDA), nato pa so bili kriokonzervirano do analize. Viabilnost celic po odtajanju smo ocenili z optično mikroskopijo in pretočno citometrijo. Celično linijo Vero E6 (ledvica afriške zelene opice) (ECACC 85020206) je prijazno zagotovil dr. Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Španija) in te celice so bile gojene v DMEM, dopolnjenem z 10 % FCS, 2 mM L- glutamin in 100 enot/ml penicilin in streptomicin (Lonza, Basel, Švica).

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

2.4. Psevdotipizirani test okužbe s SARS-CoV-2

Citotoksično aktivnost proti SARS-CoV-2 PBMC udeležencev so analizirali z uporabo celic Vero E6, okuženih z enocikličnim psevdotipiziranim virusom pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S ∆19(G614)_Ren. Ta virus kodira SARS-CoV-2 spike glikoprotein z mutacijo D614G znotraj HIV-1 genoma, kot tudi gen Renilla luciferaze, ustvarjen, kot je opisano prej [37,38]. Različice SARS-CoV-2, ki vsebujejo mutacijo D614G v proteinu spike (S), so začele krožiti zgodaj v pandemiji in hitro postale prevladujoče v mnogih regijah [39,40]. Na kratko, enoplast Vero E6 je bila okužena s pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/jamico ) 48 ur. Nato so bile celice sprane in 1 uro so-kultivirane s PBMC-ji udeležencev (razmerje 1:1), predhodno obdelanih ali ne z IL-15 (13 ng/mL) 48 ur. Odmerek IL-15, uporabljen za to študijo, je bil izbran ob upoštevanju prej opisanega odmerka, ki povzroča največji učinek na proliferacijo NK (10–25 ng/mL) [41], in tudi prednostne ekspanzije spominske citotoksičnosti. CD8+ T celice (manj kot ali enako 5 ng/ml) [42]. Citotoksično aktivnost PBMC na monosloju Vero E6 smo določili po odstranitvi supernatanta s celicami v suspenziji in disociaciji celic Vero E6 s plošče z raztopino tripsina-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Nemčija) in kasnejša kvantifikacija aktivnosti kaspaze-3 v ločenih celicah z luminiscenco z uporabo sistema Caspase-Glo 3/7 Analysis (Promega, Madison, WI, ZDA). Da bi ugotovili, katere populacije citotoksičnih celic so odgovorne za to aktivnost, so bile PBMC zbrane iz supernatanta in nato analizirane s pretočno citometrijo.

2.5. Analiza s pretočno citometrijo

Za barvanje markerjev za fenotipizacijo celične površine so bila uporabljena naslednja konjugirana protitelesa: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC in CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, kupljen pri BD Biosciences (San Jose, CA, ZDA). Za barvanje markerjev izčrpanosti so bila uporabljena naslednja konjugirana protitelesa: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC in PD1-BV650, kupljena pri BD Biosciences, kot tudi CD4-PE, kupljen pri Immunostep SL (Salamanca, Španija) in TIGIT-AlexaFluor700, kupljen pri Thermo Fisher (Waltham, MA, ZDA). Vzorci so bili pridobljeni z uporabo pretočnega citometra BD LSRFortessa X-20 s programsko opremo FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, ZDA) in nato analizirani s programsko opremo FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, Oregon). , ZDA).

2.6. Odkrivanje RNAemije SARS-CoV-2

Celotno RNK smo ekstrahirali iz vzorcev plazme z uporabo QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Madrid, Španija) v avtomatiziranem ekstraktorju QIAcube (Qiagen, Hilden, Nemčija). Odkrivanje RNA SARS-CoV-2 je bilo izvedeno s testom RT-qPCR s tarčami v genih za ovojnico (E) in nukleokapsida (N), kot je opisano prej [43], ki je del Začasnih smernic Svetovnega zdravja Organizacija (WHO) za diagnostično testiranje SARS-CoV- 2 [44]. Vzorci so bili ocenjeni kot pozitivni za analizo, ko je bila vrednost cikla kvantifikacije (Cq) pod 45 ciklov.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

2.7. Statistična analiza

Vse statistične analize in grafike so bile izvedene z uporabo programske opreme GraphPad Prism različice 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, ZDA). Skupinske primerjave so bile izvedene z Mann–Whitneyjevim U-testom, Wilcoxonovim testom ujemajočih se parov s predznakom, enosmerno ANOVA in Tukeyjevim testom večkratnih primerjav. Za ovrednotenje razlik v kliničnih značilnostih med obema skupinama je bil uporabljen Fisherjev natančen test. Vrednosti p < 0.{{10}}5 (dvostransko) so veljale za statistično pomembne. Povprečno in standardni odklon sta bila uporabljena za izračun Cohenove d statistike z uporabo Excelovega kalkulatorja velikosti učinka [45]. Velikost učinka 0.2, 0,5, 0,8 ali večja ali enaka 1,2 je bila pokazatelj majhne, ​​srednje, velike oziroma zelo velike velikosti učinka [46].

3. Rezultati

3.1. Značilnosti udeležencev

Ta opazovalna, longitudinalna študija je vključevala 23 bolnikov z diagnozo COVID-19, ki so bili sprejeti na intenzivno nego zaradi resnih zapletov. Vzorce krvi so zbirali vsaka 2 tedna skupno 13 tednov oziroma do končnega rezultata. Nobeden od udeležencev te študije ni bil cepljen proti COVID-19 v času okužbe in hospitalizacije. Glavne sociodemografske in klinične značilnosti vseh udeležencev so povzete v tabeli 1.

Tabela 1. Demografski in klinični podatki vseh udeležencev iz skupine Exitus in skupine Survival, ki so bili vključeni v to študijo.

Mediana starosti skupine Exitus je bila 65.0 let (IQR 62.0–69.0), medtem ko je bila mediana starosti skupine Survival 63.{{7} } let (IQR 59.0–68,5). Večina udeležencev (73,9 %) je bilo moških, 65,2 % pa jih je imelo vsaj eno sočasno bolezen. Glavne sočasne bolezni so bile dislipidemija (52,2 %), hipertenzija (39,1 %) in sladkorna bolezen (26,1 %). Večina bolnikov je kot standardno zdravljenje prejemala kortikoide (82,6 %), antibiotike (82,6 %) in antikoagulante (82,6 %). Prejeli so tudi druga zdravila, kot sta tocilizumab (17,4 %) in remdesivir (8,7 %). Najpogostejši znaki in simptomi so bili pljučnica (100%), kašelj in izkašljevanje (87.0%), dispneja (87,0%) in zvišana telesna temperatura (87,0%). Med bivanjem na oddelku za intenzivno nego je 12 bolnikov (92,3 %) iz skupine Exitus in 10 bolnikov (100 %) iz skupine Survival potrebovalo invazivno mehansko ventilacijo. V sociodemografskih in kliničnih podatkih med obema skupinama nismo našli pomembnih razlik. Analizirali smo tudi biokemične podatke krvi na začetku (prvi vzorec) med obema skupinama in tudi med skupinama nismo našli pomembnih razlik. Podrobnejše informacije o kliničnih podatkih, hospitalizaciji in biokemijskih podatkih o krvi vsakega udeleženca so prikazane v dodatnih tabelah S1 in S2.

3.2. Dolžina bivanja v bolnišnici in na intenzivni negi

Mediana dolžina bivanja v bolnišnici je bila 59.0 (IQR 36.0–100.0) dni v skupini Exitus in 73. 0 (IQR 44,5–90.{{20}}) dni v skupini za preživetje (slika 1A). Mediana dolžina bivanja na intenzivni negi je bila 49,0 (IQR 25,5–82,0) dni v skupini Exitus in 44,0 (IQR 25,0–66,5) dni v skupini za preživetje (slika 1B). Med obema skupinama niso ugotovili pomembnih razlik v teh parametrih.

Slika 1. Dolžina bivanja v bolnišnici in na intenzivni negi. Dolžina bivanja v bolnišnici (A) in na oddelku za intenzivno nego (B) (dnevi) pri posameznikih s kritičnim COVID-19, ki so bili razdeljeni v dve skupini glede na končni izid: smrtni izid, skupina Exitus (zapolnjene pike); ali okrevanje in odpust iz bolnišnice, skupina za preživetje (prazne pike). Vsaka pika ustreza enemu posamezniku, navpične črte pa predstavljajo povprečje ± standardna napaka povprečja (SEM). Statistična značilnost med skupinami je bila izračunana z Mann–Whitneyjevim U-testom.

3.3. Raven limfocitov periferne krvi

Posamezniki iz skupine Exitus so pokazali limfopenijo (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Slika 2. Število limfocitov v periferni krvi med hospitalizacijo zaradi kritične bolezni COVID-19. Število limfocitov (celic/mm3) je bilo določeno vsaka 2 tedna skupno 13 tednov oziroma do končnega izida v krvnih vzorcih udeležencev skupin Exitus (polne pike) in Survival (prazne pike). Prag za limfopenijo je prikazan pri 1000 celic/mm3 s pikčasto črto. Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistično značilnost med skupinami smo izračunali z Mann–Whitneyevim U-testom, znotraj skupin pa z Wilcoxonovim U-testom.

3.4. Citotoksična aktivnost PBMC proti celicam Vero E6, okuženim s psevdotipiziranim SARS-CoV-2

Ocenili smo citotoksično aktivnost PBMC hospitaliziranih bolnikov v longitudinalnih vzorcih s kvantificiranjem aktivacije kaspaze-3 v monosloju celic Vero E6, okuženih s psevdotipiziranim SARS-CoV-2 po 1-urnem sokulturi ( razmerje 1:1). Citotoksična zmogljivost PBMC, izoliranih iz posameznikov iz skupine Exitus, se med hospitalizacijo ni bistveno spremenila in je ostala stalno nizka do smrtnega izida (slika 3). Ta citotoksična aktivnost se ni bistveno povečala, ko so bile te celice 48 ur stimulirane z IL-15. V skupini za preživetje se je citotoksična aktivnost PBMC povečala 2.69--krat (p=0.0234; Cohenov d=1.12) v bazalnem vzorcu (t {{17} }) v primerjavi s skupino Exitus in se je stalno povečevala do 6. tedna hospitalizacije. To povečanje je pokazalo statistično pomembnost v primerjavi med skupinami v 4. tednu (5.58-krat; p=0.0290; Cohenov d=1.28). Od 6. tedna dalje se je citotoksična aktivnost zmanjšala v skupini za preživetje do odpusta iz bolnišnice, kar je bilo v skladu z upadom števila limfocitov v istem tednu hospitalizacije (glejte sliko 2). Zdravljenje z IL-15 je v povprečju povečalo 2.30-krat citotoksično aktivnost PBMC posameznikov iz skupine za preživetje v vseh vzorcih med spremljanjem. Po 4 tednih hospitalizacije se je citotoksična aktivnost, ki jo povzroča IL-15-, povečala za 6.18--krat (p=0.0303; Cohenov d=1.05) v PBMC-jih posamezniki iz skupine Survival.

Slika 3. Neposredna celična citotoksičnost PBMC, izoliranih pri hospitaliziranih bolnikih s kritičnim COVID-19. Citotoksično zmogljivost PBMC posameznikov iz skupin Exitus (zapolnjene pike) in Survival (prazne pike) so izmerili s kvantificiranjem aktivnosti kaspaze-3 v enosloju celic Vero E6, okuženih s psevdotipiziranim SARS-CoV-2 po sokulturi (1:1) 1 uro v bazalnih pogojih (sive črte) ali po zdravljenju z IL-15 48 ur (črne črte). Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistično značilnost med skupinami smo izračunali z Mann–Whitneyevim U-testom, znotraj skupin pa z Wilcoxonovim U-testom.

3.5. Ravni NK in NKT celic

Ravni celic s citotoksičnimi fenotipi so bile analizirane v matičnih celicah krvnega obtoka, ki so bile gojene sočasno s celicami Vero E6, okuženimi s psevdotipiziranim SARS-CoV-2. Nismo našli pomembnih razlik med nivoji celic s fenotipom NK (CD3-CD56+) med obema skupinama posameznikov, niti po zdravljenju z IL-15 (slika 4A). Izražanje degranulacijskega markerja CD107a na površini teh celic je pri posameznikih iz skupine Exitus ostalo nespremenjeno. Čeprav se je ta izraz enakomerno povečeval od 4. tedna do odpusta iz bolnišnice v skupini za preživetje, ta razlika ni dosegla statistične pomembnosti v primerjavi s skupino Exitus (slika 4B). Zdravljenje z IL-15 ni bistveno spremenilo izražanja CD107a v teh celicah. Od 4. tedna so PBMC posameznikov iz obeh skupin pokazale povečanje ravni celic s fenotipom NKT (CD3+CD56+), ki je bilo 4.17-krat višje v PBMC iz posamezniki iz skupine Exitus v 6. tednu, čeprav ta razlika ni dosegla signifikantnosti (p=0.0571; Cohenov d=3.15) (slika 5A). To povečanje je bilo nekoliko večje, ko so bile celice zdravljene z IL-15 v obeh skupinah, čeprav tudi podatki niso dosegli statistične pomembnosti (slika 5A). Izražanje CD107a se med obema skupinama ali po zdravljenju z IL-15 ni bistveno spremenilo (slika 5B).

Slika 4. Ravni NK celic v matičnih celicah krvi posameznikov, hospitaliziranih s kritičnim COVID-19. (A) Celotne ravni NK celic (CD3-CD56+) in (B) izražanje degranulacijskega markerja CD107a v teh celicah so ocenili v PBMC v bazalnih pogojih (sive črte) ali po zdravljenju z IL-15 48 h (črne črte) po sokulturi (1:1) s celicami Vero E6, okuženimi s psevdotipiziranim SARS-CoV-2 1 uro. Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistično značilnost med skupinami smo izračunali z Mann–Whitneyevim U-testom, znotraj skupin pa z Wilcoxonovim U-testom.

Slika 5. Ravni celic NKT v matičnih celicah krvi posameznikov, hospitaliziranih s kritičnim COVID-19. Celotne ravni NKT celic (CD3+CD56+) (A) in izražanje degranulacijskega markerja CD107a v teh celicah (B) so bile ocenjene v bazalnih pogojih (sive črte) ali po zdravljenju z IL{ {5}} 48 h (črne črte) po sokulturi (1:1) 1 h s celicami Vero E6, okuženimi s psevdotipiziranim SARS-CoV-2. Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistično značilnost med skupinami smo izračunali z Mann–Whitneyevim U-testom, znotraj skupin pa z Wilcoxonovim U-testom.

3.6. Ravni celic CD8+ T

Število CD8 se je povečalo 2.07--krat (p=0.0409; Cohenov d=0.94) v bazalnem vzorcu (t=0) skupine Exitus v primerjavi s skupino za preživetje in te ravni so ostale nespremenjene do smrtnega izida (slika 6A). IL-15 ni imel pomembnega ugodnega učinka na ravni te celične populacije. V skupini za preživetje se je število celic CD8+ T zmanjšalo v povprečju za 1.51-krat v primerjavi s skupino Exitus (slika 6A). Izražanje CD107a se je zmanjšalo 1.53-krat (p=0.0313) v 4. tednu v celicah CD8+ T pri posameznikih iz skupine Exitus in je ostalo nespremenjeno do smrtnega izida izid. Zdravljenje z IL-15 je pokazalo rahlo izboljšanje izražanja tega markerja degranulacije, vendar ta razlika ni bila pomembna (slika 6B). V skupini za preživetje je prišlo tudi do zmanjšanja izražanja CD107a v celicah CD8+ T v 4. tednu, nato pa je prišlo do povečanja, vendar ni bilo doseženega pomena pred ali po zdravljenju z IL{{26 }} (slika 6B).

Slika 6. Ravni celic CD8+ T v matičnih celicah krvi pri posameznikih, hospitaliziranih s kritičnim COVID-19. (A) Celotne ravni celic CD8+ T (CD3+CD8+) in (B) izražanje degranulacijskega markerja CD107a v teh celicah je bilo ocenjeno v PBMC v bazalnih pogojih (sivo črte) ali po 48-urnem zdravljenju z IL-15 (črne črte) po sokulturi (1:1) s celicami Vero E6, okuženimi s psevdotipiziranim SARS-CoV-2, 1 uro. Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistično značilnost med skupinami smo izračunali z Mann–Whitneyevim U-testom, znotraj skupin pa z Wilcoxonovim U-testom.

3.7. Označevalci ravni izčrpanosti

Stopnje izražanja označevalcev imunske izčrpanosti PD-1 (protein programirane celične smrti) in TIGIT (T-celični imunoreceptor z domenami Ig in ITIM) so analizirali s pretočno citometrijo v celicah CD4+ T in citotoksičnih celicah iz vsi udeleženci. Vzorci, pridobljeni ob sprejemu v bolnišnico (t=0) do 6. tedna hospitalizacije, so bili analizirani zaradi pomanjkanja vzorcev po tem času. CD4+ in CD8+ T-celice posameznikov iz skupine Exitus so pokazale ravni PD-1, ki so bile znatno povečane za 1,72 (p=0.0095; Cohenov d {{ 11}}.87)- oziroma 2.92-krat (p=0.0317; Cohenov d=2.07) po 4 tednih hospitalizacije v primerjavi s posamezniki iz Skupina za preživetje (slika 7A, B, levi grafi). V celicah NKT so se ravni TIGIT pomembno povečale od trenutka sprejema v bolnišnico do 6 tednov hospitalizacije pri posameznikih iz skupine Exitus in te ravni so bile povečane 1.76-krat (p=0.0357 ; Cohenov d=0.33) po 2 tednih hospitalizacije v primerjavi s skupino za preživetje (slika 7C, desni graf).

Med skupinami niso opazili pomembnih razlik v stopnjah izražanja teh markerjev izčrpanosti v celicah NK (slika 7D).

Slika 7. Stopnje izražanja označevalcev izčrpanosti v matičnih krvnih celicah posameznikov, hospitaliziranih s kritičnim COVID-19. Stopnje izražanja PD-1 in TIGIT v CD4+ T celicah (A), CD8+ T celicah (B), NKT celicah (C) in NK celicah (D). Vsaka pika ustreza povprečju podatkov, navpične črte pa predstavljajo SEM. Statistična značilnost med skupinami je bila izračunana z Mann–Whitneyjevim U-testom, znotraj skupin pa je bila uporabljena ANOVA.

3.8. Kvantifikacija RNAemije SARS-CoV-2 v plazmi

Prisotnost RNA iz SARS-CoV-2 je bila analizirana v plazmi vseh posameznikov v bazalnem vzorcu (t=0) in pri nobenem udeležencu ni bilo pozitivnih rezultatov, z vrednostmi Cq pod mejo pozitivne detekcije 45 ciklov.

4. Razprava

Okužba s SARS-CoV-2 lahko povzroči več kliničnih predstavitev COVID-19, ki segajo od asimptomatske okužbe do hude, kritične ali celo smrtne bolezni [4]. Čeprav je splošno cepljenje prebivalstva močno zmanjšalo hude oblike bolezni, pojav novih različic SARS-CoV-2 povečuje število posameznikov, pri katerih se razvije kritični COVID-19 in jih je treba hospitaliziran zaradi vdora okužb [47,48]. Zato je še vedno prednostna naloga razviti preventivne in terapevtske strategije, s katerimi bi se lahko izognili razvoju kritičnih oblik COVID-19 in smrtnim izidom pri hospitaliziranih bolnikih. Opisano je, da starejši ljudje s komorbidnostmi predstavljajo večje tveganje za razvoj hude in kritične bolezni COVID{{1{{30}}}} [49]. V Španiji so najpomembnejši neodvisni napovedovalci smrti zaradi COVID-19 moški, starejši od 50 let, s povezanimi komorbidnostmi, kot sta hipertenzija in sladkorna bolezen [36]. V naši raziskavi je večina udeležencev obeh skupin predstavila te značilnosti, brez pomembnih razlik med njimi v sociodemografskih, kliničnih ali biokemičnih podatkih, ki bi lahko vplivali na resnost bolezni ali smrtni izid. Pravzaprav sta obe skupini pokazali povečane ravni biokemičnih parametrov, ki so bili povezani z večjim tveganjem za slab izid COVID-19, kot sta C-reaktivni protein (CRP) in laktat dehidrogenaza (LDH) [50–56 ]. Po drugi strani pa čeprav so poročali, da imajo lahko posamezniki s hudo obliko bolezni COVID-19 zaznavno RNAnemijo SARS-CoV-2 [54], kar je povezano s povečanim tveganjem umrljivosti [55], nobeden od udeležencev v naši študiji ni predstavil zaznavne RNA v serumu, zato nismo mogli ugotoviti povezave med zaznavno viremijo in smrtnim izidom. Nazadnje, COVID-19 kaže višjo dolžino bivanja v bolnišnici in stopnjo umrljivosti v primerjavi z drugimi nalezljivimi boleznimi, ki zahtevajo sprejem v enoto intenzivne nege, kot je zunajbolnišnična pljučnica (CAP) ali sepsa [56], ocenjeno pa je bilo v 35 dni v povprečju za tiste posameznike, ki so bili hospitalizirani v Španiji med prvimi valovi pandemije [36]. V naši študiji je bila povprečna dolžina bivanja v bolnišnici podobna med skupinama Exitus in Survival (59,0 oziroma 73,0 dni), 50 % vseh udeležencev pa je ostalo več kot 40 dni na ICU. Zato je treba upoštevati druge diferencialne dejavnike, da bi pojasnili smrtni izid v skupini Exitus in okrevanje v skupini Survival.

Prednosti cistanche tubulosa- okrepiti imunski sistem

Limfopenija velja tudi za dejavnik tveganja za resnost bolezni, ki je povezana z daljšo dolžino bivanja v bolnišnici [57]. V naši raziskavi je 73,9 % udeležencev obeh skupin Exitus in Survival pokazalo nizko število limfocitov. Vendar je bila raven skupnih limfocitov v povprečju višja pri udeležencih skupine Survival v primerjavi s skupino Exitus. To je v skladu s prejšnjim opažanjem, da tisti posamezniki, ki so umrli zaradi COVID-19, sčasoma razvijejo hujšo limfopenijo v primerjavi s tistimi, ki preživijo [58] in da ti limfociti običajno kažejo izčrpan fenotip, kar povzroči postopna imunska pomanjkljivost [15,16]. Ker je učinkovit citotoksični protivirusni odziv bistvenega pomena za nadzor virusnih okužb, vključno s SARS-CoV-2 [17], je obnovitev imunskega sistema ključnega pomena za okrevanje po COVID-19. Pospeševanje te imunske rekonstitucije je močno odvisno od homeostatskega perifernega širjenja limfocitov, kar bi lahko bila dobra strategija za izboljšanje izida posameznikov, hospitaliziranih zaradi hudega COVID-19 [58]. IL-15 je citokin, potreben za delovanje in homeostazo celic CD8+ T, celic NK in NKT [29], in je bil predlagan kot novo imunomodulatorno zdravljenje več bolezni, kot je rak. in okužbo s HIV [26,30,35,59]. Zato smo v tej študiji ocenili, ali lahko zdravljenje in vitro z IL-15 izboljša citotoksični odziv v PBMC hospitaliziranih posameznikov s hudim in kritičnim COVID-19, ko je okužba napredovala, da bi ugotovili njegovo veljavnost kot kandidat za spodbujanje obnovitve imunskega sistema med COVID-19. S preizkušenim odmerkom smo opazili splošno povečanje citotoksičnega odziva proti ciljnim celicam, okuženim s psevdotipiziranim SARS-CoV-2 v matičnih celicah krvnega obtoka tistih posameznikov, ki so preživeli COVID-19 po povprečno 44 dneh hospitalizacije pri ICU. Ta citotoksični odziv se je po zdravljenju z IL-15 v povprečju dejansko povečal 23-krat v vseh vzorcih, zbranih med spremljanjem, pri čemer je bil 6. teden hospitalizacije prelomnica, od katere se je število limfocitov povečalo in citotoksična aktivnost se je začela zmanjševati do odpusta iz bolnišnice. Kljub podobnim sociodemografskim, kliničnim in biokemičnim značilnostim ter skoraj enakemu času hospitalizacije (skupno 59 dni, od tega 49 dni na oddelku za intenzivno nego), skupina posameznikov, ki ni preživela COVID-a{{34} } so pokazale PBMC, ki se niso odzivale v prisotnosti okuženih ciljnih celic, tudi če so bile stimulirane z IL-15. Celotne ravni limfocitov so bile pri posameznikih iz te skupine nad pragom limfopenije od 2. tedna hospitalizacije. Vendar pa se te ravni med hospitalizacijo niso bistveno povečale in učinkovitega protivirusnega odziva ni bilo zaznati, niti v prisotnosti IL-15 v testiranem odmerku. Odsotnost odziva na IL-15 je bila opisana pri drugih kroničnih okužbah, kot so virus humane imunske pomanjkljivosti (HIV), virus hepatitisa C (HCV), virus hepatitisa B (HBV) in humani T limfotropni virus (HTLV), pri kateri lahko imunska izčrpanost vpliva na izražanje specifičnega receptorja IL-15, CD122, v celicah CD8+ T [60], zaradi česar se ne odzivajo na ta homeostatski dražljaj. Imunska izčrpanost, ki je značilna za COVID-19, ni bila opažena le pri CD8+ T celicah, temveč tudi pri drugih vrstah citotoksičnih celic, kot so celice NK in NKT [15,16]. Zato je lahko odsotnost odziva na IL-15 v PBMC iz skupine Exitus povezana s povečano imunsko izčrpanostjo, ki je ni bilo mogoče premagati samo z zdravljenjem z IL-15 v testiranem odmerku. To so opazili tudi v kliničnih preskušanjih faze I, v katerih je bila monoterapija z IL-15 neučinkovita kljub velikemu širjenju citotoksičnih celic [31,32]. Posledično bi bila potrebna druga kostimulacijska zdravljenja za induciranje učinkovitega odziva pri teh posameznikih, kot so zaviralci imunoloških kontrolnih točk ali monoklonska protitelesa, ki ciljajo na okužene celice, da bi povečali od protiteles odvisno celično citotoksičnost (ADCC).

Določili smo tudi vrste celic, ki so bile v glavnem vključene v razvoj tega okrepljenega citotoksičnega odziva v skupini posameznikov, ki so preživeli COVID-19. Dokazano je bilo, da je prisotnost funkcionalnih celic CD8+ T bistvena za zaščito živalskih modelov pred razvojem hudega COVID-19 [61,62]. Poleg tega je bila odsotnost učinkovitega CD8-posredovanega citotoksičnega odziva določena kot bistveni dejavnik za večjo dovzetnost starejših za razvoj hudega ali kritičnega COVID-19 [63]. Presenetljivo so bile ravni CD8+ T celic 2.07-krat (p=0.0409) višje v skupini Exitus v času hospitalizacije (t=0). , in so ostali povečani do usodnega izida v primerjavi s skupino Survival. Čeprav so posamezniki iz skupine Exitus pokazali število limfocitov nekoliko nad pragom limfopenije, so te ravni ostale skoraj nespremenjene ves čas, ko so bili hospitalizirani. Poleg tega je bilo opisano, da lahko limfopenija vodi do vzorca sočasne supresije in aktivacije, v katerem pride do periferne izgube T-celic sočasno z intenzivno proliferacijo CD{14}} celic T-celice [64,65]. To bi lahko pojasnilo nekoliko povečane ravni CD8+ celic T, opaženih v matičnih celicah krvnega tkiva udeležencev iz skupine Exitus od 6. tedna hospitalizacije naprej, kljub temu, da so skupne ravni limfocitov ostale nespremenjene in nad pragom limfopenije, kar kaže tudi na potencialno zmanjšanje CD{19}} T celic. Vendar so te celice CD8+ T pokazale nizko citotoksično aktivnost, kar je bilo ugotovljeno z nizko izraženostjo degranulacijskega markerja CD107a na celični površini, medtem ko se je izražanje tega markerja povečalo v celicah CD8+ T od udeleženci skupine Survival od 4. tedna dalje. Izražanje CD107a velja za biomarker za oceno citotoksične zmogljivosti [66] in opisano je, da je zmanjšano na površini celic, izoliranih od posameznikov s COVID-19, v primerjavi z neokuženimi, zdravimi darovalci [15]. ].

Zato lahko povečana ekspresija CD107a na površini celic T CD8+ vsaj delno pojasni prispevek teh celic k povečani citotoksični aktivnosti, opaženi v PBMC udeležencev iz skupine za preživetje. Poleg tega smo opazili povečano izražanje markerja izčrpanosti PD-1 v celicah CD4+ in CD8+ T pri posameznikih iz skupine Exitus, kar lahko prav tako prispeva k zmanjšani citotoksičnosti aktivnost in odziv na IL-15 teh celic. Druge celične populacije so lahko vključene v citotoksično aktivnost proti celicam, okuženim s psevdotipom SARS-CoV-2-, kot so celice NK in NKT. Kot se dogaja pri drugih hudih akutnih okužbah, se lahko celice NK rekrutirajo na mesto okužbe s SARS-CoV-2 [67], kar bi pojasnilo zmanjšano število krožečih celic NK, ki so jih opazili pri vseh udeležencih. Poleg tega lahko citokinska nevihta, ki se razvije med hudim in kritičnim COVID-19, povzroči disfunkcionalno stanje celic NK, ki bi izražale visoke ravni zaviralnih receptorjev kontrolnih točk, kot sta NKG2A ali PD-1 [68]. V naši študiji so bile ravni NK celic podobne med obema skupinama do 6. tedna, v katerem so udeleženci skupine za preživetje pokazali progresivno povečanje do odpusta iz bolnišnice. To je bilo v korelaciji s povečano ekspresijo CD107a, ki je bila v celicah NK povezana s povečanim izločanjem citokinov in izboljšano lizo ciljnih celic [7,69], čeprav je bil odstotek celic NK, ki izražajo aktivacijske markerje, kot je CD107a, opisan kot nižji pri posameznikih s COVID-19 v primerjavi z zdravimi kontrolnimi osebami [70]. Nasprotno, čeprav so bile ravni celic NKT močno povečane v skupini za preživetje od 6. tedna naprej, je izražanje CD107a ostalo skoraj nespremenjeno, medtem ko so pokazali povečane ravni markerja izčrpanosti TIGIT na celični površini, ki se je stalno povečevala do 6. tedna hospitalizacije. . Ena najpomembnejših omejitev naše študije je bila zmanjšana velikost vzorca. Kljub temu je bila med skupinami dosežena statistična značilnost pri več bistvenih parametrih, ki so prav tako pokazali veliko ali zelo veliko velikost učinka, ko so bile izračunane združene razlike med skupinami.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

5. Sklepi

Skratka, najpomembnejši prispevek te študije k boju proti imunopatologiji, ki jo povzroča okužba s SARS-CoV-2, je potrditev, da se zdi, da je oslabljena protivirusna zmogljivost PBMC ključni dejavnik pri napredovanju do smrtnega COVID-a{ {2}}, celo nad drugimi sociodemografskimi, kliničnimi in biokemičnimi dejavniki. Zato lahko uporaba imunomodulatornih zdravljenj, ki lahko povečajo citotoksičnost, prispeva k pozitivnemu izidu med hospitalizacijo zaradi kritične bolezni COVID-19. Povečana citotoksična aktivnost, ki jo posreduje IL-15 pri posameznikih iz skupine za preživetje, verjetno ni bila odvisna od povečanih ravni citotoksičnih celic, ampak od imunske sposobnosti teh celic, da se odzovejo na tak dražljaj. Zato bi bilo lahko spremljanje izražanja markerjev izčrpanosti in odzivnosti na homeostatske dražljaje, kot je IL-15 teh celičnih populacij pri hospitaliziranih posameznikih, koristno kot napovedovalni marker smrtnega izida, da bi sprožili dodatne ukrepe za preprečevanje to. Posledično je ta opazovalna študija dokaz koncepta, da bi uporaba IL-15 pri posameznikih, hospitaliziranih s COVID-19, lahko izboljšala protivirusni imunski odziv, čeprav samo ta dražljaj ne bi bil učinkovit pri tistih posameznikih z neodzivnostjo celic zaradi imunske izčrpanosti ali okvarjene signalne poti IL-15R, kar je bistvenega pomena pri preprečevanju izčrpanosti [71], tudi če kažejo število limfocitov nad pragom limfopenije. Potrebnih je več študij z večjo populacijo za ovrednotenje kombinacij naraščajočih odmerkov IL-15 z drugimi imunomodulatorji, kot so zaviralci imunskih kontrolnih točk ali monoklonska protitelesa, ki ciljajo na okužene celice, da pomagajo obnoviti in povečati protivirusni odziv med kritičnimi oblikami COVID-a. -19.

Reference

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, HE; Clements, TP A Guide to COVID-19: Globalna pandemija, ki jo povzroča novi koronavirus SARS-CoV-2. FEBS J. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]

2. Nadzorna plošča WHO Coronavirus (COVID-19). Dostopno na spletu: https://covid19.who.int/ (dostop 18. 10. 2022).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Roko, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Roko, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; et al. Eksponentna faza pandemije COVID-19 v osrednji Italiji: integrirana pot oskrbe. Int. J. Okolje. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Fan, G.; Xu, J.; Gu, X.; et al. Klinične značilnosti bolnikov, okuženih z novim koronavirusom 2019 v Wuhanu na Kitajskem. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Osnovna kronična bolezen in okužba s COVID-19: najsodobnejši pregled. Jundishapur J. Chronic Dis. Care 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM Globalna dinamika klasov SARS-CoV-2 in njihova povezava z epidemiologijo COVID-19. Sci. Rep. 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. Hematološke manifestacije in zapleti COVID-19. Adv. Clin. Exp. med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. Citokinska nevihta in COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Hemofagocitni sindrom odraslih. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Brown, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; v imenu HLH Across Specialty Collaboration, Združeno kraljestvo. Preko specialnosti. COVID-19: razmislite o sindromih citokinske nevihte in imunosupresiji. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. Ekspresija gena ACE2 celičnega receptorja SARS-CoV-2 v najrazličnejših človeških tkivih. Okužiti. Dis. Revščina 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Cytokine storm in COVID-19: Od virusne okužbe do imunskih odzivov, diagnoze in terapije. Int. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Življenje in smrt aktiviranih T celic: Kako se razlikujejo od naivnih T celic? Spredaj. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Limfopenija pri hudi koronavirusni bolezni-2019 (COVID-19): Sistematični pregled in metaanaliza. J. Intenzivna nega 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Pesem, G.; Liu, S.; Sonce, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Funkcionalna izčrpanost protivirusnih limfocitov pri bolnikih s COVID-19. Celica. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; et al. PD-1-izražanje SARS-CoV-2-specifične CD8+ celice T niso izčrpane, ampak funkcionalne pri bolnikih s COVID-19. Imuniteta 2021, 54, 44–52. [CrossRef]

17. Vigón, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Corona, M.; Saez-Marín, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; et al. Oslabljen citotoksični odziv v PBMC pri bolnikih s COVID-19, sprejetih na intenzivno nego: Biomarkerji za napovedovanje resnosti bolezni. Spredaj. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. KDO. Začasna izjava o premislekih pri odločanju za uporabo različic posodobljenih cepiv proti COVID-19. Na voljo na spletu: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{{15} }cepiva (dostopano 15. avgusta 2022).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Enoletna posodobitev pandemije COVID-19: kje smo zdaj? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Molekularna imunska patogeneza in diagnoza COVID-19. J. Pharm. Analno 2020, 10, 102–108. [CrossRef]

21. Skupina TRC. Deksametazon pri hospitaliziranih bolnikih s COVID-19. N. angl. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Li, P.; Wang, J.; Sonce, S.-C. Deubikvitinaza Otub1 nadzoruje aktivacijo celic T CD8+ in celic NK z uravnavanjem priprave, ki jo posreduje IL-15-. Nat. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]

23. Parums, DV Trenutno stanje zdravljenja s peroralnimi protivirusnimi zdravili za okužbo s SARS-CoV-2 pri nehospitaliziranih bolnikih. med. Sci. Monit. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. Protivirusne tablete bi lahko spremenile potek pandemije. Am. Izr. Adv. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Usmerjanje kontrolnih točk NK celic za imunoterapijo raka. Curr. Opin. Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interlevkin 15: ključni citokin za imunoterapijo. Cytokine Growth Factor Rev. 2016, 31, 49–59. [CrossRef]

27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokič, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Mehanizem mutageneze SARS-CoV-2, ki jo povzroča molnupiravir. Nat. Struct. Mol. Biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]

28. Hung, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Peroralna terapija z nirmatrelvirjem/ritonavirjem za COVID-19: Zora v temi? Antibiotiki 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Imunobiologija kompleksa IL-15/IL-15R kot protitumorskega in protivirusnega sredstva. Citokinski rastni faktor Rev. 2017, 38, 10–21. [CrossRef]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Biološki učinki IL-15 na imunske celice in njegov potencial za zdravljenje raka. Int. Imunofarmakol. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovič, dr.med.; Conlon, KC IL-15 v kombinirani imunoterapiji raka. Spredaj. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]

32. Dubois, SP; Miljkovič, dr.med.; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Müller, JR; Shih, JH; et al. Kratkotrajni IL-15, dan kot neprekinjena infuzija, je privedel do velikega širjenja učinkovitih NK celic: Posledice za kombinirano terapijo s protitumorskimi protitelesi. J. Immunother. Rak 2021, 9, e002193. [CrossRef]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovič, dr.med.; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; et al. IL15 z neprekinjeno intravensko infuzijo odraslim bolnikom s solidnimi tumorji v preskušanju faze I, povzročenih z dramatično podskupino NK-celic. Clin. Cancer Res. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; et al. Prva klinična študija faze 1 pri ljudeh IL-15 superagonističnega kompleksa ALT-803 za zdravljenje ponovitve bolezni po presaditvi. Kri Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; et al. Varnost in virološki vpliv superagonista IL-15 N-803 pri ljudeh, ki živijo s HIV: preskušanje 1. faze. Nat. med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; et al. Značilnosti in napovedniki smrti med 4035 zaporedoma hospitaliziranimi bolniki s COVID-19 v Španiji. Clin. Microbiol. Okužiti. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. Nova strategija, ki temelji na rekombinantnih virusih kot orodju za ocenjevanje občutljivosti virusa humane imunske pomanjkljivosti tipa 1 na zdravila. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Li, P.; Mi, D.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; et al. Karakterizacija koničastega glikoproteina SARS-CoV-2 ob vstopu virusa in njegove imunske navzkrižne reaktivnosti s SARS-CoV. Nat. Komun. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

39. Volz, E.; Hill, V.; McCrone, JT; Cena, A.; Jorgensen, D.; O'Toole, A.; Southgate, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; et al. Vrednotenje učinkov SARS-CoV-2 konične mutacije D614G na prenosljivost in patogenost. Celica 2021, 184, 64–75. [CrossRef]

41. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; et al. Sledenje spremembam v skoku SARS-CoV-2: Dokazi, da D614G poveča nalezljivost virusa COVID-19. Celica 2020, 182, 812–827. [CrossRef]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Kritična vloga poti IL-15–PI3K–mTOR pri efektorskih funkcijah naravnih celic ubijalk. Spredaj. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Bracci, L.; Adamina, M.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; et al. Diferencialna odzivnost na IL-2, IL-7 in IL-15 skupne citokine receptorske verige s strani antigen specifičnih naivnih ali spominskih citotoksičnih CD8+ T celic periferne krvi zdravih darovalcev in Bolniki z melanomom. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; et al. Odkrivanje novega koronavirusa 2019 (2019-nCoV) z RT-PCR v realnem času. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. KDO. Diagnostično testiranje za SARS-CoV-2: začasne smernice, 11. september 2020; Svetovna zdravstvena organizacija: Ženeva, Švica, 2020.

45. Becker, LA Effect Size (ES); Univerza Colorado Colorado Springs: Colorado Springs, CO, ZDA, 2000.

46. ​​Cohen, J. Statistična analiza moči za vedenjske vede; Routledge: Abingdon, Združeno kraljestvo, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Ribes, I.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Hospitalizirani bolniki s prebojno boleznijo COVID-19: Klinične značilnosti in slabi napovedovalci izida. Int. J. Infect. Dis. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Park, WB; Choe, PG; Song, K.-H.; Kim, ES; Park, S.-W. Prebojna okužba s COVID-19 med prevladujočim obdobjem različice Delta: potrebna je individualna oskrba na podlagi statusa cepljenja. J. Korean Med. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdalla, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 in komorbidnosti: škodljiv vpliv na okužene bolnike. J. Infect. Javno zdravje 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 in srčno-žilni sistem: celovit pregled. J. Hum. hipertenzije. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]

51. Zhang, JJ; Lee, KS; Ang, LW; Leo, YS; Young, BE Dejavniki tveganja za hudo bolezen in učinkovitost zdravljenja pri bolnikih, okuženih s COVID-19: sistematični pregled, metaanaliza in metaregresijska analiza. Clin. Okužiti. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]

53. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. Vloga biomarkerjev pri diagnosticiranju COVID-19–sistematični pregled. Life Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrilove, JL; Sacks, H. Biomarkerji in izidi hospitalizacij zaradi COVID-19: sistematični pregled in metaanaliza. BMJ Evid. Na podlagi Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]

54. Li, Y.; Schneider, AM; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Gentili, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gušterova, I.; Khanna, HK; et al. Viremija SARS-CoV-2 je povezana z različnimi proteomskimi potmi in napoveduje izide COVID-19. J. Clin. Raziskati. 2021, 131, e148635. [CrossRef]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; et al. Zaznavanje RNA SARS-CoV-2 v serumu je povezano s povečanim tveganjem umrljivosti pri hospitaliziranih bolnikih s COVID-19. Sci. Rep. 2021, 11, 13134. [CrossRef]

57. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI Klinični potek in rezultati kritično bolnih bolnikov z okužbo s COVID-19: Sistematični pregled. Clin. Microbiol. Okužiti. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; et al. Dejavniki tveganja, povezani z resnostjo bolezni in dolžino bivanja v bolnišnici pri bolnikih s COVID{1}}. J. Infect. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, RC T-celična imunobiologija in citokinska nevihta COVID-19. Scand. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Terapevtski potencial IL-15 in N-803 pri okužbi s HIV/SIV. Virusi 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, EJ CD8 T-celična disfunkcija med kronično virusno okužbo. Curr. Opin. Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Peter, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; et al. Korelati zaščite pred SARS-CoV-2 pri rezus makakih. Narava 2021, 590, 630–634. [CrossRef]

62. Zhuang, Z.; Lai, X.; Sonce, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; et al. Preslikava in vloga odziva celic T pri miših, okuženih s SARS-CoV-2. J. Exp. med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; et al. Okvarjen citotoksični odziv CD{1}} celic T pri starejših bolnikih s COVID-19. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Riba, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; et al. Dinamični imunski podpis COVID-19 vključuje povezave s slabo prognozo. Nat. med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Matej, D.; Baxter, AE; Vella, LA; et al. Izčrpno kartiranje imunskih motenj, povezanih s hudo boleznijo COVID-19. Sci. Immunol. 2020, 5, eabd7114. [CrossRef]

66. Aktaš, E.; Kucuksezer, UC; Bilgič, S.; Erten, G.; Deniz, G. Razmerje med izražanjem CD107a in citotoksično aktivnostjo. Celica. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]

68. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Naravne celice ubijalke v protivirusni imunosti. Nat. Rev. Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]

68. Bi, J. Disfunkcija NK celic pri bolnikih s COVID-19. Celica. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]

69. Alter, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a kot funkcionalni marker za identifikacijo aktivnosti naravnih celic ubijalk. J. Immunol. Metode 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]

70. Guštin, JN; Jones, D. Imunopatologija hipervnetja pri COVID-19. Am. J. Clin. Pathol. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]

71. On, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, I.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; et al. Sočasno izražanje IL-7 izboljša celično terapijo CAR T na raku prostate na osnovi NKG2D s pospeševanjem širjenja in zaviranjem apoptoze in izčrpanosti. Raki 2020, 12, 1969. [CrossRef]