Prvo klinično preskušanje učinkovitosti glicinamid hidroklorida pri depigmentaciji kože na ljudeh
Mar 18, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Povzetek:Prejšnja študija je odkrila določene nizkomolekularne antimelanogene peptide, ki imajo skupno zaporedje s -melanocite stimulirajočim hormonom (MSH) in se končajo z glicinamidnim delom. Sam glicinamid je prav tako pokazal antimelanogeno aktivnost v celičnih testih, vendar niti glicin noracetil glicinamid je bil aktiven, kar je kazalo na posebno strukturo in dejavnostno razmerje. Cilj te študije je bil preučiti učinkovitost glicinamidijevega klorida pri depigmentaciji kože pri ljudeh. Potencial primarnega draženja kože glicinamidijevega klorida je bil ovrednoten s testiranjem na 30 ljudeh. Učinkovitost glicinamidijevega klorida pri depigmentaciji kože je bila ocenjena v dvojno slepem kliničnem testu pri 21 ljudeh. Testni izdelek in kontrolni izdelek sta bila nanesena na določena mesta na desni ali levi strani obraza dvakrat na dan osem tednov. Z instrumenti so bili izmerjeni parametri barve kože, to so melaninski indeks, vrednost L* (ki predstavlja svetlobo kože), vrednost a* (pordelost) in vrednost b* (porumenelost). Individualni topološki kot (ITAo, ki predstavlja barvo kože) je bil izračunan iz vrednosti L* in b. Stopnja kožepigmentacijasta vizualno ocenila dva preizkuševalca. Primarni test draženja kože je pokazal, da raztopina, ki je vsebovala do 10 odstotkov glicinamidijevega klorida, ni povzročila neželenih kožnih odzivov. V testu učinkovitosti je preskusni izdelek znatno zmanjšal indeks melanina in povečal vrednost L* in ITAo po dveh tednih uporabe glede na izhodiščno vrednost na začetku preskusa. Prav tako je znatno znižal stopnjopigmentacijapo 6 tednih uporabe glede na izhodiščno vrednost. Razlike v indeksu melanina, vrednosti L*, ITAo in stopnjipigmentacijamed testno in kontrolno skupino je postalo statistično značilno po šestih ali osmih tednih uporabe. Med testom učinkovitosti niso opazili nobenih znakov draženja kože. Ta študija kaže, da ima glicinamid hidroklorid velik potencial za uporabo pri nadzoru hiperpigmentacije kože.
Ključne besede:melanin; glicinamid hidroklorid; depigmentacija;pigmentacija; posvetlitev kože;beljenje; peptid
1. Uvod
Barva človeške kože je v glavnem odvisna od vsebnosti in porazdelitve različnih pigmentnih snovi, kot so melanin, hemoglobin in karotenoidi [1]. Genetski dejavniki določajo predvsem barvo kože, močno pa nanjo vplivajo tudi pridobljeni dejavniki. Melanin se proizvaja s postopkom, v katerem se aminokislina, imenovana L-tirozin, presnavlja v nizu encimskih reakcij v melanosomih, ki so organeli melanocitov. Obstajajo različne vrste melanina, kot sta eumelanin in feomelanin, ki dajeta različne barve [2]. Melanosomi dobavljajo melanin okoliškim keratinocitom in posledično se melanin porazdeli po koži in se izraža, da proizvede različne barve kože [3]. Poleg učinkov na videz kože ima melanin pomembno vlogo pri zaščiti telesa pred toksičnostjo ultravijoličnih (UV) žarkov [4]. Zato je presnova melanina v koži postala pomembna raziskovalna tema tako s fiziološkega kot estetskega vidika [5,6].
Nenormalna presnova melanina lahko povzroči različne vrste pigmentnih bolezni kože, ki jih delimo na hiperpigmentacijo in hipopigmentacijo [7,8]. Hiperpigmentacija se pojavi, ko se melanin čezmerno ali neenakomerno kopiči zaradi vnetja, staranja, UV-žarkov, telesne poškodbe in drugih notranjih/zunanjih stimulativnih dejavnikov [9,10]. Medtem pa lahko genetske ali epigenetske okvare pri proizvodnji melanina povzročijo hipopigmentacijo, kot je albinizem ali vitiligo [11,12].
Strategije preprečevanja in zdravljenja hiperpigmentacije vključujejo fotoprotekcijo, farmakoterapijo, kirurško zdravljenje (kemični piling in lasersko zdravljenje) in kozmetično kamuflažo [13–15]. Kemični piling in lasersko zdravljenje se pogosto izvajata, vendar imata stranske učinke, kot sta dermatitis in ponavljajoče sepigmentacija[16,17]. Hidrokinon se primarno uporablja kot farmakoterapevtik, vendar lahko potencialno povzroči draženje kože, alergije, mutacije in raka [18]. Na kozmetičnem področju,posvetlitev kožePrevladuje funkcionalna kozmetika, ki vsebuje arbutin, niacinamid in derivate vitamina C, vendar je zadovoljstvo potrošnikov glede njihove varnosti in učinkovitosti posvetljevanja kože nizko [19]. Ta raziskovalna skupina je iskalaposvetlitev kožesredstva iz različnih naravnih virov in identificirali številne naravne spojine, kot so p-kumarinska kislina, resveratrol in luteolin 7-sulfat, ki zavirajo celično sintezo melanina prek različnih mehanizmov [20–23].
Peptidi se vedno bolj uporabljajo kot aktivne sestavine v dermatoloških izdelkih in izdelkih za nego kože [24, 25]. Manjši kot je peptid, cenejša je njegova proizvodnja, večja je njegova stabilnost in koža ga lažje absorbira.
Naše nedavne študije so identificirale določene nizkomolekularne antimelanogene peptide [26, 27]. V teh študijah je bil uporabljen poseben algoritem za napovedovanje zaporedij aktivnih peptidov z uporabo knjižnice kombinacij sintetičnih peptidov za pozicijsko skeniranje [28, 29]. S to metodo je bilo mogoče identificirati antimelanogene peptide z ocenjevanjem aktivnosti 80 tetrapeptidnih skupin namesto ocenjevanja aktivnosti vseh 160 000 možnih tipov tetrapeptidov [27]. Antimelanogeno delovanje peptidov je bilo predhodno ovrednoteno v celicah melanoma B16-F10, zdravljenih z -melanocite stimulirajočim hormonom (MSH). Zaporedje aktivnega tetrapeptida je bilo predvideno kot R-(F/L)-(C/W)-(G/R)-NH2. Od posameznih testiranih tetrapeptidov sta RFWG-NH2 in RLWG-NH2 pokazala visoko antimelanogeno aktivnost. Podobno aktivnost je pokazal tudi tetrapeptid FRWG-NH2, ki ima enako zaporedje kot -MSH (acetil-SYSMEHFRWGKPV-NH2). Med tritestiranimi peptidi so bili relativno aktivni FWG-NH2, LWG-NH2 in RWG-NH2. Di-peptid WG-NH2 in G-NH2 (glicinamid) sta ohranila svojo antimelanogeno aktivnost, medtem ko niti acety-G-NH2 niti G (glicin) nista bila aktivna. Ti nizkomolekularni antimelanogeni peptidi naj bi ciljali na receptor temelanokortina 1 (MC1R), ker imajo podobno zaporedje kot -MSH. Ti nizkomolekularni antimelanogeni peptidi so lahko zelo uporabni pri preučevanju od MC1R odvisnih fizioloških funkcij melanocitov [30].
Pokazalo se je, da glicinamid zelo učinkovito zavira nastajanje celičnega melanina z zmanjšanjem aktivacije cAMP-odzivnega proteina, ki veže elemente (CREB) in genske ekspresije z mikroftalmijo povezanega transkripcijskega faktorja (MITF) in tirozinaze (TYR) kot odgovor na -MSH [27] V tej študiji poročamo o rezultatih prvega preskusa nanosa glicinamida (v obliki hidrokloridne soli) na človeško kožo, ki je najmanjši nizkomolekularni antimelanogeni peptid.
2. Materiali in metode
2.1. Materiali
Glicinamid hidroklorid je bil kupljen pri Sigma–Aldrich (St. Louis, MO, ZDA), HangzhouDayangchem Co., Ltd. (Hangzhou, Kitajska) in Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Tokio, Japonska). Testni izdelek (Melapep) ), ki vsebuje 10 odstotkov glicinamid hidroklorida kot aktivno sestavino, je zagotovil Ruby Crown. Co., Ltd. (www.rubycrown.com, Daegu, Koreja). Kontrolni produkt je obsegal isto formulacijo brez glicinamid hidroklorida.
2.2. Tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC)
Kromatografsko analizo produktov smo izvedli s sistemom Waters Alliance HPLC (Waters, Milford, MA, ZDA), ki ga sestavljata Waters e2695 Separation Module in Waters 2996Photodiode Array Detector. Stacionarna faza je bila 5 µm, 4,6 mm × 25{{10}} mm kolona Hector-M C18 (RS Tech Co., Daejeon, Koreja), mobilna faza pa 20 mM fosforne kisline, ki vsebuje 5.0 mM natrijev 1-oktan sulfonat (pH 3,0). Hitrost pretoka mobilne faze je bila 0,6 mL min-1. Valovna dolžina detekcije je bila 210 nm. Produkt smo 10-krat razredčili z mobilno fazo in pred injiciranjem spustili skozi filter za brizgo (0,2 µm, kat. št. 431219, Corning, Inc. NY, ZDA). Injekcijski volumen vzorca je bil 10 µL.
2.3. Primarni test draženja kože
Primarni test draženja kože je bil izveden v skladu s smernicami sveta izdelkov za osebno nego (PCPC) (2014) in standardnimi operativnimi postopki (SOP) družbe Dermapro Co., Ltd. (www.dermapro.co.KR, Seul, Koreja), da bi ugotovili, ali testni izdelki so dražili človeško kožo. Testni projekt (št. 1-220777-AN-02-DICN19165) je 1. avgusta 2019 odobril odbor za bioetiko Dermapro Co., Ltd. in je bil izveden v skladu z etičnimi načeli, ki temeljijo o Helsinški deklaraciji.
Preiskovanci so bili izbrani izmed zdravih prostovoljcev, ki izpolnjujejo vključitvene in izključitvene kriterije. Pridobili smo pisno informirano soglasje subjektov.
2.3.1. Kriteriji vključitve
(1) Zdravi prosilci, stari 20–60 let, brez kožnih bolezni. (2) Kandidati, ki so pred testom prostovoljno podpisali pisno soglasje, potem ko so bili seznanjeni z namenom in vsebino testa. (3) Kandidati, ki so bili pripravljeni sodelovati z zahtevami testa in takoj poročati, če bi prišlo do nepričakovanih učinkov. (4) Prosilci, ki bi jih lahko spremljali celotno preizkusno obdobje.
2.3.2. Merila za izključitev
(1) Ženske, ki so bile noseče, doječe ali bi lahko zanosile. (2) Kandidati z anamnezo kožnih bolezni, vključno z atopijskim dermatitisom, psoriazo, ekcemom in sezonskimi alergijami v zadnjem mesecu pred testom. (3) Kandidati z nenormalnimipigmentacija, lahko moti točkovanje na testnem mestu. (4) Kandidati, ki jemljejo protivnetna, antihistaminika ali imunosupresivna zdravila. (5) Kandidati, ki so v zadnjih dveh tednih pred testom na poligonu uporabljali lokalna protivnetna zdravila. (6) Kandidati s kožnimi boleznimi, ki bi lahko vplivale na namen testa. (7) Kandidati z anamnezo avtoimunskih bolezni ali motenj imunske pomanjkljivosti. (8) Kandidati, ki so prejeli imunoterapijo v zadnjem tednu pred testom ali so bili načrtovani za zdravljenje v testnem obdobju. (9) Prosilci, ki so se zdravili zaradi kroničnih bolezni, kot sta astma in sladkorna bolezen. (10) Kandidati, ki so sodelovali v drugih testih ali so sodelovali v podobnem testu zadnje štiri tedne pred testom. (11) Kandidati, ki so imeli draženje kože ali alergije kot odziv na pritrdilni trak.
2.3.3. Pogoji za sodelovanje
(1) Preiskovanci med pritrjevanjem obliža niso smeli imeti vode na testnem mestu. (2) Če je bilo od subjekta zahtevano jemanje ali uporaba zdravil, je bilo treba o tem obvestiti uradnika za testiranje. (3) Zadeva je bila skladnost z urnikom inšpekcijskih pregledov. (4) Subjekti so morali preizkuševalca obvestiti o vseh nenormalnih kožnih simptomih, ki so se pojavili med preskusnim obdobjem.
2.3.4. Merila za izključitev subjektov med preskusnim obdobjem
(1) Če je preiskovanec prostovoljno odstopil od testiranja zaradi nenadne nesreče, bolezni, nosečnosti ipd. (2) Če je prišlo do resne neželene kožne reakcije, ki jo je povzročil preskusni material. (3) Če subjekt ni upošteval testnega protokola. (4) Če testa ni bilo mogoče izvesti pravilno zaradi posebnih okoliščin, npr. če ni bilo mogoče vzpostaviti stika s preiskovancem.
2.3.5. Testiranje popravkov
Testne materiale (150 µL) smo nanesli na Finn Chambers® (Smart Practice, Hillerød, Danska) z uporabo pipete Microman M250 (Gilson, Villiers le bel, Francija). Komore so bile pritrjene na hrbet subjektov in zaščitene s trakom Micropore (3M, St. Paul, MN, ZDA) za 24 ur. Preizkuševalci so kožne reakcije pri preiskovancih ocenili dvakrat, prvi 20 min. po odstranitvi obliža in nato 24 ur kasneje z uporabo sistema za razvrščanje kožnih reakcij, ki sta ga opisala Frosch in Kligman [31] z manjšimi spremembami, kot sledi: 0, brez vidne reakcije; 1, rahel madež ali difuzni eritem; 2, zmerno enoten eritem; 3, intenziven eritem z edemom; in 4, intenziven eritem z edemom in vezikli. Rezultat odziva (R v odstotkih) je bil izračunan kot R=(Σ (opazovana stopnja reakcije × pogostost odziva)/(skupaj štirih stopenj × skupno dvakratnih opazovanj × skupno število oseb)) × 100 ( odstotkov). Potencial primarnega draženja kože preskusnih materialov je bil opisan na podlagi R, kot sledi: R < 0,87="" odstotka,="" ne="" draži/rahlo="" draži;="" 0,87="" odstotka="" manj="" ali="" enako="" r="">< 2,42="" odstotka,="" rahlo="" draži;="" 2,42="" odstotka="" manj="" ali="" enako="" r="">< 3,44="" odstotka,="" zmerno="" draži;="" in="" r="" večji="" ali="" enak="" 3,44="" odstotka,="" močno="">
2.4. Test učinkovitosti depigmentacije kože
Izveden je bil test za oceno učinkovitosti depigmentacije kože s testnim izdelkom. Testni projekt (št. 1-220777-AN-02-DICN19168) je 16. avgusta 2019 odobril odbor za bioetiko družbe Dermapro Co., Ltd. in je bil izveden v skladu z etičnimi načeli, ki temeljijo na Helsinški deklaraciji. Preiskovanci so bili izbrani izmed zdravih prostovoljcev, ki izpolnjujejo vključitvene in izključitvene kriterije. Pridobili smo pisno soglasje bolnika (testirancev).
2.4.1. Kriteriji vključitve
(1) Moški ali ženske, stari 20–60 let, s hiperpigmentacijo, kot je melazma ali lentigo, na obrazu. (2) Zdravi ljudje brez akutnih ali kroničnih telesnih bolezni, vključno s kožnimi boleznimi. (3) Tisti, ki spadajo pod tip II, III in IV Fitzpatrickove klasifikacije tipov kože. (4) Kandidati, ki so bili obveščeni o namenu, vsebini ipd. preizkusa in so prostovoljno podpisali pogodbo o preizkusu. (5) Kandidati, ki jim je bilo možno slediti med preizkusom.
2.4.2. Merila za izključitev
(1) Tisti, ki so bili noseči, dojijo ali bi lahko zanosili. (2) Tisti z anamnezo fotoalergije ali fotosenzitivnosti. (3) Tisti, ki so za zdravljenje kožnih bolezni več kot en mesec uporabljali zunanje pripravke, ki vsebujejo steroide. (4) Tisti, ki so sodelovali v podobnih testih v 6 mesecih pred testom. (5) Tisti z občutljivo in razdražljivo kožo. (6) Tisti z nepravilnostmi na koži, kot so lise, akne, eritem, kapilarna dilatacija itd. na testnem mestu. (7) Tisti, ki so v treh mesecih od začetka testiranja na poligonu uporabljali enako ali podobno kozmetiko ali zdravila. (8) Tisti, ki so uživali zdravila ali hrano zaposvetlitev kožeučinki. (9) Tisti z atopijskim dermatitisom ali drugimi nalezljivimi kožnimi boleznimi. (10) Tisti, ki so prejeli zdravljenje (piling kože, botoks, druga nega kože itd.) na testnem mestu v 6 mesecih pred testom. (11) Tisti, ki so v treh mesecih pred testom prejeli imunizacije, antihistaminike, protivnetna zdravila itd. (12) Tisti, ki so v enem mesecu pred testom prejeli sistemske steroide, hormonsko terapijo ali terapijo z žarki. (13) Osebe s kroničnimi živilskimi boleznimi (astma, sladkorna bolezen, visok krvni tlak itd.). (14) Osebe z dolgotrajno izpostavljenostjo sončni svetlobi na delovnem mestu. (15) Tisti, ki so jemali zdravila, ki povzročajo fotosenzitivnost. (16) Tisti, ki jih je tester ocenil kot nesposobne za sodelovanje pri preizkusu.
2.4.3. Pogoji za sodelovanje
(1) Preiskovanci med preskusnim obdobjem niso smeli uporabljati kozmetike ali zdravil, ki trdijo, da so funkcionalna. (2) Preiskovanci so se morali izogibati izpostavljanju sončni svetlobi, ki je večja od običajne, v vsakdanjem življenju med preskusnim obdobjem in uporabljati zaščito pred soncem, ko gredo ven. (3) Preiskovanci niso smeli zamenjati testnih izdelkov in so jih morali uporabiti, kot je predpisano. (4) Razen testnih izdelkov subjekti niso smeli zamenjati kozmetičnih izdelkov, ki so jih uporabljali med testnim obdobjem. (5) Subjekti so morali testerju poročati o vseh nenormalnih simptomih. (6) Subjekti so morali zvesto upoštevati navodila glede uporabe in omejitev izdelkov. (7) Preiskovanci so morali upoštevati urnik inšpekcijskih pregledov in preizkuševalcu potrditi uporabo izdelkov.
2.4.4. Merila za izključitev subjektov med preskusnim obdobjem
(1) Če je preiskovanec prostovoljno odstopil od testiranja zaradi nenadne nesreče, bolezni, nosečnosti ipd. (2) Če je prišlo do resne neželene reakcije, ki jo je povzročil preskusni material. (3) Če preiskovanec ni ravnal v skladu s testnim protokolom. (4) Če so preizkus ovirale posebne okoliščine, npr. če preiskovanca ni bilo mogoče slediti. (5) Če je subjekt čezmerno pil ali kadil ali je bil čezmerno izpostavljen UV-žarkom.
2.4.5. Uporaba testnih izdelkov
Testni in kontrolni produkti (0,6 mL) so bili namočeni v 4 × 3 cm2 listov netkanega blaga (ime izdelka, vrsta kožnega tkiva bombaž), kupljenega pri Blue and Pink (Gimpo-si, Koreja), ki so bili nato posamično zapakirani za uporabo subjektov.
Test je bil dvojno slep; niti preizkuševalcem niti preiskovancem ni bilo povedano, kateri izdelek je kateri. Po prejemu testnih izdelkov v isti embalaži od ponudnika je vodja testnih izdelkov pakete označil s testnimi kodami v ločenem prostoru, ki ni bil dostopen preizkuševalcem ali subjektom. Preizkuševalci so prejeli testne izdelke od vodje testnega produkta v slepem stanju in preiskovanci so prav tako prejeli izdelke od preizkuševalca v slepem stanju.
Metoda blokovne randomizacije je bila uporabljena za dodelitev testnih izdelkov subjektom. Osebi je bila zagotovljena tabela blokovne naključne dodelitve (SSPP, SPSP, SPPS, PPSS, PSPS in PSSP), da se določi vrstni red testnih izdelkov, S ali P, ki naj jih uporabita sama in trije drugi subjekti v vrstnem redu.
Preiskovanci so testirane izdelke uporabljali po umivanju obraza in pred uporabo katerekoli druge kozmetike dvakrat na dan, zjutraj in zvečer, osem tednov. Preiskovanci so testne in kontrolne izdelke pritrdili na določena mesta na levi oziroma desni strani obraza (ali obratno) za 30 minut, v skladu s priporočilom izvajalca.
2.4.6. Ocene barve kože
Preiskovanci so vsaka dva tedna obiskali raziskovalni center za oceno njihove kože. Po umivanju obraza so subjekti počivali 20 minut. pred oceno kože v laboratoriju vzdržujemo 22 ± 2 °C in 50 ± 5 odstotkov relativne vlažnosti.
Indeks melanina in indeks eritema sta bila izmerjena z uporabo Mexameter® MX18 (Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Nemčija). Sonda meksametra oddaja tri specifične valovne dolžine svetlobe (zeleno, λ=568 nm; rdečo, λ=660 nm; in infrardečo, λ=880 nm), sprejemnik pa meri svetlobo, ki jo odbija koža . Meritve smo ponovili trikrat in izračunali povprečje.
Barva kože je izražena z uporabo barvnega prostora Commission Internationale de l'Eclairage Lab na podlagi stopnje svetline (L*), stopnje zelene do rdeče (a*) in stopnje modre do rumene (b*) [32]. Parametri barve kože L*, a* in b* so bili izmerjeni s spektrofotometrom® CM-2500d (Minolta, Tokio, Japonska) [32]. Posamezni tipološki kot (ITA◦), ki predstavlja barvo kože, je bil izračunan z uporabo enačbe: ITA◦=(arktangens [(L*−50)/b*])(180/3,14159) [33].
Vizualno oceno sta opravila dva preizkuševalca. Neodvisno sta ocenila stopnjo pigmentacije kože na lestvici od {{0}} do 9 (0, svetlo; 9, temno; koraki, 0,5). Če je bila vrednost korelacijskega koeficienta znotraj razreda med dvema preizkuševalcema večja od 0,8, so bili podatki sprejeti in uporabljene povprečne vrednosti. Fotografije kože so bile posnete med uporabo VISIA® (Canfield Scientific, Inc., Fairfield, New Jersey, ZDA). Za oceno varnosti kože so preizkuševalci pregledali draženje kože, preiskovanci pa so izvedli samooceno draženja kože na vsaki časovni točki ocenjevanja.
2.4.7. Vrednotenje neželenih učinkov kože
V osemtedenskem poskusnem obdobju so preiskovanci inštitut obiskali vsaka dva tedna. Ob vsakem obisku so preizkuševalci ocenili subjektivne simptome z vprašanjem, ali so preiskovanci v zadnjih dveh tednih doživeli neželene kožne reakcije, kot so srbenje, ščemenje, žgečkanje, pekoč občutek, zbadanje, okorelost in zategovanje. Osebe so morale nemudoma poročati, če so se med intervali obiskov pojavile neželene kožne reakcije. Preizkuševalci so pregledali tudi vse neželene kožne reakcije, kot so aseritem, edem, velikost in papule, da bi ocenili objektivne simptome.
2.5. Statistična analiza
Podatki so bili analizirani s programskim paketom SPSS (IBM, Chicago, IL, ZDA). Podatki so izraženi kot povprečje ± standardni odklon (SD). Normalna porazdelitev podatkov je bila preverjena s Shapiro-Wilksovim testom, normalnost pa je bila sprejeta, če sta Kurtosis in Asimetrija znotraj ± Predhomogenost testa, kontrolne skupine pred testom pa so bile preverjene z uporabo parnega testa. Od časa odvisne spremembe v primerjavi z izhodiščno vrednostjo ter razlike med testno in kontrolno skupino na vsaki časovni točki so bile analizirane z uporabo ANOVA ponavljajočih se meritev za parametrične vrednosti in Post-hoc Wilcoxonovega testa predznaka za neparametrične vrednosti. Stopnja spremembe (v odstotkih) od osnovne vrednosti je bila izračunana na naslednji način; stopnja spremembe=[vrednost po zdravljenju–izhodiščna vrednost pred zdravljenjem)/izhodiščna vrednost pred zdravljenjem] × 100 (odstotki).
3. Rezultati
3.1. Testni izdelki
V tej študiji sta bila uporabljena testni produkt, ki je vseboval 10 odstotkov glicinamid hidroklorida, in kontrolni produkt iste formulacije brez glicinamid hidroklorida. Izdelki so poleg glavne sestavine vsebovali glicerin, 1,2-heksandiol in vodo. Tabela 1 prikazuje sestavo testnega in kontrolnega produkta.
Tipični kromatogrami HPLC testnih in kontrolnih produktov so prikazani na sliki 1. Testni produkt je vseboval glicinamid hidroklorid, vendar ne kontrolni produkt. Vrh glicinamid hidroklorida v kromatogramu HPLC je označen s puščico. Poleg tega slika 1 prikazuje kemijsko strukturo.
Pri HPLC je bil natrijev 1-oktansulfonat vključen v mobilno fazo kot sredstvo za spajanje ionov, da bi povečali zadrževanje protonirane oblike glicinamida, ki je bil sicer zelo hitro eluiran iz kolone oktadecil silicijevega dioksida z reverzno fazo. Prisotnost amidne vezi, ki absorbira UV, v glicinamid hidrokloridu je omogočila detekcijo pri 210 nm.
3.2. Primarni test draženja kože
v tem testu je v začetnih fazah testa sodelovalo 31 osebk, ki so ustrezale kriterijem vključitve in izključitve; vendar je en subjekt izpadel (DSA-19046-10; prostovoljni umik), tako da je skupno 30 subjektov opravilo celoten test. Povprečna starost preiskovancev je bila 40,43 ± 7,13 let, najstarejši udeleženec je bil star 50 let, najmlajši pa 21 let.
Testiranje okluzivnih obližev je bilo izvedeno z namenom ocene varnosti izdelkov za kožo. Kot je prikazano v tabeli 2, subjekti, ki so bili zdravljeni s testom, kontrolnim izdelkom in referenčnim izdelkom, niso pokazali neželenih kožnih reakcij v dveh različnih časih opazovanja. Rezultat odziva v vseh primerih je bil torej nič, kar je nakazovalo, da so potenciali primarnega draženja kože teh izdelkov zelo nizki in jih je mogoče razvrstiti kot "ne dražijo/rahlo dražijo".
3.3. Test učinkovitosti depigmentacije kože
Test se je začel s 23 ženskami, čeprav sta bili dve kasneje izločeni (št. 16, prostovoljni odstop; št. 18, neupoštevanje protokola), tako da je bilo končno število udeleženk 21. Podatki o subjektih so bili zbrani v anketi na podlagi vprašalnika. Povprečna starost preiskovancev je bila 48,43 ± 4,14 let; najstarejši udeleženec je bil star 55 let; in najmlajši je bil star 41 let. Tabela 3 prikazuje značilnosti kože anketiranih subjektov.
Izveden je bil dvojno slepi test, da bi ocenili učinkovitost depigmentacije testnega izdelka. Niti preizkuševalec niti preiskovanec nista mogla razlikovati med testnim in kontrolnim izdelkom, klinično preskušanje pa je potekalo po predpisani metodi. Preiskovanci so osem tednov dvakrat na dan nanašali testni izdelek in kontrolni izdelek na levo ali desno stran obraza in vsaka dva tedna obiskali inštitut za oceno kože.
Za instrumentalno oceno barvnih parametrov kože smo uporabili dve vrsti naprav. Najprej smo s heksametrom izmerili melaninski indeks in eritemski indeks. Kot je prikazano v tabeli 4 in sliki 2a, so v dveh, štirih, šestih in osmih tednih opazili pomembna zmanjšanja melaninskega indeksa v testni in kontrolni skupini v primerjavi z osnovnimi vrednostmi pred začetkom testa. Ko je bil testni izdelek uporabljen za dveh, štirih, šestih in osmih tednih je prišlo do pomembnega zmanjšanja indeksa melanina v primerjavi z izhodiščno vrednostjo. Stopnje znižanja melaninskega indeksa so bile po dveh tednih 1,48 odstotka, po štirih tednih 2,87 odstotka, po šestih tednih 3,92 odstotka in po osmih tednih 5,88 odstotka. Pomembne razlike so bile ugotovljene med preskusno in kontrolno skupino šest in osem tednov po začetku testa. Po drugi strani pa ni bilo sprememb v indeksu eritema niti v testni niti v kontrolni skupini v primerjavi z izhodiščnimi vrednostmi, izmerjenimi pred testom. začetek preskusa (tabela 5 in slika 2b).
Uporabili smo tudi spektrofotometer za merjenje vrednosti L*, a* in b*, ki so predstavljale svetlobo kože, rdečino oziroma rumenost. Kot je prikazano v tabeli 6 in sliki 2c, so opazili znatno povečanje svetline kože (vrednost L*) po dveh, štirih, šestih in osmih tednih v testni in kontrolni skupini v primerjavi z osnovnimi vrednostmi pred začetkom testa. V primerjavi z osnovnimi vrednostmi je testni izdelek povečal vrednost L* za 0,88 odstotka po dveh tednih, 0,85 odstotka po štirih tednih, 1,16 odstotka po šestih tednih in 1,40 odstotka po osmih tednih . Pomembne razlike so bile ugotovljene med preskusnim izdelkom in kontrolnim izdelkom šest in osem tednov po začetku preskusa. Po drugi strani, čeprav je prišlo do nekaterih sprememb v vrednosti* in b* tako v testni skupini kot v kontrolni skupini v primerjavi s pred začetkom testa, te spremembe niso bile dosledne (tabeli 7 in 8, slika 2d,e). Vrednost* se je začasno znižala v drugem tednu v kontrolni skupini ter v drugem in osmem tednu v testni skupini. Vrednost* testne skupine je bila v osmem tednu nižja kot pri kontrolni skupini. Vrednost b* se je v osmem tednu znižala le pri kontrolni skupini, med kontrolno in testno skupino pa ni opaziti razlike v vrednosti b*.
ITA◦, izračunan iz vrednosti L* in b*, je bil uporabljen za izražanje barve kože. Višji kot je ITA◦, svetlejša je barva kože. Kot je prikazano v tabeli 9 in sliki 2f, so opazili pomembne spremembe v barvi kože po dveh tednih, štirih tednih, šestih tednih in osmih tednih v testni skupini in kontrolni skupini v primerjavi z osnovnimi vrednostmi pred začetkom testa. V primerjavi z osnovnimi vrednostmi je testni izdelek povečal ITA◦ za 3,28 odstotka po dveh tednih, 4,43 odstotka po štirih tednih, 6,48 odstotka po šestih tednih in 8,07 odstotka po osmih tednih. Pomembna razlika v ITA◦ je bila ugotovljena tudi med preskusnim izdelkom in kontrolnimi izdelki osem tednov po začetku preskusa.
Kot je prikazano v tabeli 10 in sliki 3a, se mesto na koži, na katerem je bil nanesen kontrolni izdelek, ni bistveno spremenilo v smislu stopnjepigmentacijaosem tednov, vendar se je stopnja pigmentacije na mestu kože, na katero je bil nanesen testni izdelek, znatno zmanjšala po šestih in osmih tednih. Ko je bil testni izdelek uporabljen šest oziroma osem tednov, se je stopnja pigmentacije zmanjšala za 1,42 odstotka oziroma 3,45 odstotka glede na osnovno vrednost pred začetkom testa. V osmem tednu po začetku testiranja je bila tudi pomembna razlika v stopnjipigmentacijamed preskusnim izdelkom in kontrolnim izdelkom. Slika 3b prikazuje slike dveh reprezentativnih človeških subjektov.
V osmih tednih ni bilo neželenih učinkov na testne in kontrolne izdelke, o katerih so poročali subjekti ali so jih zaznali preizkuševalci.
4. Razprava
Ta študija je prva, ki poroča o varnosti in učinkovitosti depigmentacije glicinamid hidroklorida, nanesenega na človeško kožo obraza. Pri primarnem testu draženja kože testni izdelek, ki je vseboval 10 odstotkov glicinamidhidroklorida, ni povzročil neželenih učinkov pri 30 ljudeh. V dvojno slepem testu učinkovitosti je bil preskusni izdelek in kontrolni izdelek uporabljen na levi oziroma desni strani obraza pri 21 subjektih, naključno razporejenih v različne skupine. Med osemtedenskim testnim obdobjem so mesta na koži, na katerih je bil nanesen testni izdelek, postala svetlejša od mest, na katerih je bil nanesen kontrolni izdelek. Tako vizualna ocena stopnjepigmentacija, in instrumentalno vrednotenje melaninskega indeksa, napetosti kože in barve kože je podprlo učinkovitost depigmentacije testnega izdelka, ki je vseboval glicinamid hidroklorid.
Učinkovitost izdelka pri depigmentaciji človeške kože je mogoče oceniti z uporabo modelov umetne strojitve in naravne hiperpigmentacije [34–36]. V tej študiji z uporabo naravnegapigmentacijamodela so bile spremembe parametrov barve kože v testni in kontrolni skupini v osmih tednih testa spremljane v dvotedenskih intervalih. Kontrolni produkt, ki ni vseboval glicinamid hidroklorida, je prav tako povzročil pomembne spremembe v indeksu melanina, vrednosti L* in ITA od dveh tednov po začetku testa. Natančen vzrok za to trenutno ni jasen in k spremembam je lahko prispevalo več dejavnikov. Sestavine v kontrolnem izdelku, kot sta glicerin in 1,2-heksandiol, so lahko spremenile stanje površine kože, izboljšale čistost, lesk in svetlost. Kljub temu pa dodatne spremembe zgoraj omenjenih parametrov po dveh tednih v kontrolni skupini niso bile pomembne. Poleg tega stopnjapigmentacija(vizualno ovrednoteno) kontrolni izdelek ni bistveno zmanjšal v primerjavi s pred začetkom preskusa. Zato velja, da ima izdelek zelo šibek nadzorposvetlitev kožeučinek, če obstaja.
V primeru preskusnega izdelka je poleg znatne spremembe indeksa melanina, vrednosti L* in ITAo dva tedna po začetku preskusa sprememba postopno naraščala. Poleg tega je stopnjapigmentacijadosegel znatno nižjo raven od osnovne vrednosti. To nakazuje, da lahko uporaba preskusnega izdelka izboljša barvo kože v primerjavi z uporabo nobenega izdelka.
Od šestega tedna od začetka testa je bila med testno in kontrolno skupino pomembna razlika v melaninskem indeksu in vrednosti L*, po osmih tednih pa je bila tudi razlika v ITAo in stopnjipigmentacija. Ti rezultati podpirajo sklep, da je bila razlika v učinkovitosti med testnimi in kontrolnimi izdelki posledica prisotnosti ali odsotnosti glicinamid hidroklorida; zato je bila učinkovitost preskusnega izdelka pri depigmentaciji kože posledica njegove glavne sestavine, glicinamid hidroklorida.
V tej študiji je bila raztopina glicinamid hidroklorida, namočena v liste netkanega blaga, nanesena na obraz in pridobljeni so bili pozitivni rezultati glede njene učinkovitosti pri depigmentaciji kože. Ta metoda nanašanja se je izkazala za učinkovito, vendar je vredno raziskati, ali je treba spremeniti formulacijo in metodo nanašanja. bi izboljšali učinkovitost izdelka. Poleg lokalnega nanosa na kožo je treba preučiti peroralno dajanje in metode injiciranja, da se v prihodnjih študijah določi njihova klinična učinkovitost.
Statistična analiza razlik med testno in kontrolno skupino je bila izvedena z uporabo ANOVA ponovljenih meritev s parnimi primerjavami. Poleg tega so medskupinske razlike indeksa melanina, vrednosti L*, ITAo inpigmentacijastopnje so bile vse statistično pomembne po 8-tedenskem zdravljenju. V trenutni študiji so bile stopnje znižanja melaninskega indeksa s testnim izdelkom, ki je vseboval 10 odstotkov glicinamid hidroklorida, 5,88 odstotka (izhodišče 184,03 ± 22,70; osmi teden 173,30 ± 20,79). Watanabe et al. poročalibeljenje kožeučinki lokalnega oksidiranega glutationa v dvojno slepem in s placebom nadzorovanem kliničnem preskušanju pri tridesetih zdravih ženskah [36]. Lokalno zdravljenje s testnim izdelkom, ki je vseboval 2 odstotka oksidiranega glutationa za 10 tednov, je zmanjšalo indeks melanina za 10,7 odstotka (izhodišče, 272,77 ± 26,17; 10. teden, 243,47 ± 26,31) [36]. Čeprav se testni pogoji, kot so izhodiščni melaninski indeks, testni odmerek in trajanje testa, med seboj razlikujejo, posredna primerjava teh dveh študij kaže, da ima glicinamidijev klorid potencial za uporabo kot hipopigmentirano sredstvo. Nadaljnje študije so potrebno optimizirati odmerek, formulacijo in način uporabe, da bi dosegli boljšo učinkovitost pri depigmentaciji kože.
Barva kože v stanju dinamičnega ravnovesja odraža relativno razmerje med količino melanina, dobavljenega iz melanocitov, in količino melanina, izgubljenega zaradi luščenja kožnega keratina. Zato sta zaviranje sinteze melanina ali povečanje izgube melanina dve možni strategiji za zdravljenje hiperpigmentacije. Glicinamid hidroklorid je uporabna snov za prvo strategijo, ker lahko zavira sintezo melanina z zmanjšanjem ravni TYR in drugih encimov, ki so vključeni v sintezo melanina v melanocitih [27]. Če je tako, lahko kombiniranje glicinamid hidroklorida s sredstvi za luščenje kože, kot je glikolna kislina [37,38], povzroči nadaljnje povečanje učinkovitosti depigmentacije zaradi sinergizma med snovmi z različnimi mehanizmi delovanja.
Številna obstoječa sredstva za depigmentacijo zmanjšajo sintezo melanina tako, da zavirajo proces transdukcije znotrajceličnega signala, ki je odgovoren za ekspresijo gena TYR, ali neposredno zavirajo aktivnost TYR [39, 40]. Vendar lahko glicinamidijev klorid prepreči vezavo hormona na njegove receptorje in blokira začetek procesov prenosa znotrajceličnega signala, s čimer zavira izražanje TYR [27]. V skladu s tem lahko glicinamidijev klorid deluje prek drugačnega mehanizma kot mnoga obstoječa sredstva za depigmentacijo, zato se pričakujejo sinergistični učinki, če se uporablja v kombinaciji z drugimi sredstvi za depigmentacijo.
Peptidni hormoni, pridobljeni iz proopiomelanokortina, kot so -MSH, -MSH in adrenokortikotroformon (ACTH), uravnavajo kožopigmentacija, vnetje in fibroza [8,30,41]. Pri vezavi teh agonistov na MC1R in zaporednih aktivacijah adenilat ciklaze (AC) in protein kinaze A (PKA) fosforilira transkripcijski faktor CREB, ta pa inducira ekspresijo MITF [42]. Ekspresijo MITF inducirajo tudi druge signalne poti, ki vključujejo kaskado Wnt/Frizzled/glikogensintaze kinaze 3/katenina in kaskado faktorja izvornih celic/c-Kit/mitogen-aktivirane proteinske kinaze [43,44]. MITF usmerja ne samo gensko ekspresijo melanogenih encimov, ampak tudi biogenezo melanosomov [2,45].
Nizkomolekularni antimelanogeni peptidi, identificirani v prejšnji študiji, vključujejo FRWG-NH2, RWG-NH2, WG-NH2 in G-NH2 (glicinamid), ki imajo skupne sekvence z -MSH(acetil-SYSMEHFRWGKPV-NH2) [27] . Domnevali so, da bi lahko ti nizkomolekularni antimelanogeni peptidi motili vezavo -MSH na receptor na konkurenčen način in tako blokirali začetek procesov prenosa znotrajceličnega signala (slika 4). Če nizkomolekularni antimelanogeni peptidi delujejo kot antagonisti MC1R, lahko zavirajo aktivacijo MC1R z drugimi agonisti, kot sta -MSH in ACTH, ter vplivajo na druge fiziološke dogodke, povezane z vnetjem in fibrozo terpigmentacija [30].
Čeprav so potrebni bolj neposredni dokazi za mehanizem delovanja, ta študija dokazuje, da je oblika hidrokloridne soli glicinamida, najmanjšega bistvenega dela antimelanogenih peptidov, pokazala učinkovitost depigmentacije kože, ne da bi povzročila draženje kože pri ljudeh. Potrebne so nadaljnje študije, da bi preučili učinkovitost depigmentacije drugih antimelanogenih tetra-peptidov, tri-peptidov in di-peptida, omenjenih zgoraj.
Skratka, ta študija kaže, da ima glicinamid hidroklorid velik potencial za uporabo pri nadzoru hiperpigmentacije kože.
Reference
1. Costin, GE; Sluh, VJ Pigmentacija človeške kože: melanociti spreminjajo barvo kože kot odziv na stres. FASEB J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef] [PubMed]
2. Schiaffino, MV Signalne poti v biogenezi in patologiji melanosoma. Int. J. Biochem. Cell Biol. 2010, 42, 1094–1104. [CrossRef] [PubMed]
3. Cardinali, G.; Ceccarelli, S.; Kovač, D.; Aspite, N.; Lotti, LV; Torrisi, MR; Picardo, M. Rastni faktor keratinocitov spodbuja prenos melanosoma v keratinocite. J. Raziskovanje. Derm. 2005, 125, 1190–1199. [CrossRef] [PubMed]
4. Epstein, JH Fotokarcinogeneza, kožni rak in staranje. J. Am. Akad. Derm. 1983, 9, 487–502. [CrossRef]
5. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetović, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.; Seagroves, TN Vloga melanogeneze pri uravnavanju vedenja melanoma: Melanogeneza vodi do stimulacije izražanja HIF-1alfa in od HIF odvisnih spremljajočih poti. Arh. Biochem. Biophys. 2014,563, 79–93. [CrossRef]
6. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Vloga pigmenta melanina pri melanomu. Exp. Derm.2015, 24, 258–259. [CrossRef]
7. Fistarol, SK; Lin, PH Motnje pigmentacije. J. Dtsch. Dermatol. Ges. 2010, 8, 187–201. [CrossRef]
8. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Pigmentacija melanina v koži sesalcev in njena hormonska regulacija. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef]
9. Rose, PT Pigmentne motnje. Med. Clin. N. Am. 2009, 93, 1225–1239. [CrossRef]
10. Callender, VD; St Surin-Lord, S.; Davis, EC; Maclin, M. Postinflamatorna hiperpigmentacija: etiološki in terapevtski vidiki. Am. J. Clin. Derm. 2011, 12, 87–99. [CrossRef]
11. Ganju, P.; Nagpal, S.; Mohamed, MH; Nishal Kumar, P.; Pandey, R.; Natarajan, VT; Mande, SS; Gokhale, RS Profiliranje mikrobne skupnosti kaže disbiozo v kožnih lezijah oseb z vitiligom. Sci. Rep.2016, 6, 18761. [CrossRef] [PubMed]
12. Spritz, RA; Andersen, GH Genetika vitiliga. Derm. Clin. 2017, 35, 245–255. [CrossRef] [PubMed]
13. Pavlič, V.; Brkič, Z.; Marin, S.; Cicmil, S.; Gojkov-Vukelič, M.; Aoki, A. Depigmentacija melanina v dlesni Er: YAG laser: pregled literature. J. Cosmet. Laser Ther. 2018, 20, 85–90. [CrossRef] [PubMed]
14. Saxena, S.; Andersen, RM; Maibach, HI Pasti v kliničnih preskušanjih razkrivajo potrebo po sredstvih za depigmentacijo, ki jih dobro prenašajo. J. Dermatol. Zdravilo. 2015, 26, 440–450. [CrossRef] [PubMed]
15. Levy, LL; Emer, JJ Čustvena korist kozmetične kamuflaže pri zdravljenju kožnih bolezni obraza: Osebna izkušnja in pregled. Clin. Cosmet. Raziskati. Derm. 2012, 5, 173–182.
16. Chu, CH; Chou, CY; Cheng, YP Takojšnja pigmentacija po laserskem zdravljenju. JAMA Derm. 2015, 151, 1021–1022. [CrossRef]
17. Borelli, C.; Ursin, F.; Steger, F. Vzpon kemičnega pilinga v evropski dermatologiji 19. stoletja: Pojav sredstev, formulacij in zdravljenj. J. Eur. Akad. Derm. Venereol. 2020. [CrossRef]
18. Jow, T.; Hantash, BM Depigmentacija, ki jo povzroča hidrokinon: poročilo o primeru in pregled literature. Dermatitis 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]
19. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Pregled sredstev za beljenje kože z vpogledom v nezakonit kozmetični trg v Evropi. J. Eur. Akad. Derm. Venereol.2016, 30, 943–950. [CrossRef]
20. Kim, M.; Park, J.; Pesem, K.; Kim, HG; Koh, JS; Boo, YC Preverjanje rastlinskih izvlečkov za učinke inhibiranja človeške tirozinaze. Int. J. Cosmet. Sci. 2012, 34, 202–208. [CrossRef]
21. Park, J.; Boo, YC Izolacija resveratrola iz Viti's vinifera caulis in njegova močna inhibicija humantirozinaze. Evid. Na osnovi dopolnila. Altern. Med. 2013, 2013, 645257. [CrossRef] [PubMed]
22. Kwak, JY; Seok, JK; Suh, HJ; Choi, YH; Hong, SS; Kim, DS; Boo, YC Antimelanogeni učinki luteolin7-sulfata, izoliranega iz phyllospadix iwatensis makino. Br. J. Derm. 2016, 175, 501–511. [CrossRef] [PubMed]
23. Lee, JZ; Kim, JH; Pesem, H.; Seok, JK; Hong, SS; Boo, YC Luteolin 7-Sulfat oslabi sintezo melanina z inhibicijo izražanja tirozinaze, posredovanega s CREB in MITF. Antioksidanti 2019, 8, 87. [CrossRef] [PubMed]
24. Malerič, S.; Berson, D. Kozmecevtika naslednje generacije: najnovejše na področju peptidov, rastnih faktorjev, citokinov in matičnih celic. Derm. Clin. 2014, 32, 13–21. [CrossRef]
25. Zhang, L.; Falla, TJ Kozmecevtika in peptidi. Clin. Derm. 2009, 27, 485–494. [CrossRef]
26. Seok, JK; Lee, JZ; Choi, J.; Kim, YM; Boo, YC Identifikacija novih antimelanogenih heksapeptidov s pomočjo pozicijskega skeniranja kombinatorne knjižnice sintetičnih peptidov. Exp. Derm. 2017, 26, 742–744. [CrossRef]
27. Kim, JH; Seok, JK; Kim, YM; Boo, YC Identifikacija majhnih peptidov in glicinamida, ki zavirajo sintezo melanina z uporabo sintetične peptidne kombinatorne knjižnice za skeniranje položaja. Br. J. Derm. 2019, 181,128–137. [CrossRef]
28. Pinilla, C.; Appel, JR; Blanc, P.; Houghten, RA Hitra identifikacija peptidnih ligandov z visoko afiniteto z uporabo kombinatoričnih knjižnic sintetičnih peptidov s pozicijsko skeniranjem. Biotehnika 1992, 13, 901–905.
29. Rano, TA; Timkey, T.; Peterson, EP; Rotonda, J.; Nicholson, DW; Becker, JW; Chapman, KT; Thornberry, NAA kombinatorni pristop za določanje specifičnosti proteaz: uporaba na encimu za pretvorbo interlevkina-1beta (ICE). Chem. Biol. 1997, 4, 149–155. [CrossRef]
30. Slominski, AT; Slominski, RM; Zmijewski, MA Usmerjanje na receptor melanokortina tipa 1 z majhnimi peptidi. Br. J. Derm. 2019, 181, 17–18. [CrossRef]
31. Frosch, PJ; Kligman, AM Preskus komore za milo. Nova metoda za ocenjevanje dražilnosti mil. J. Am.Acad. Derm. 1979, 1, 35–41. [CrossRef]
32. Pierard, GE EEMCO smernice za oceno barve kože. J. Eur. Akad. Derm. Venereol. 1998, 10, 1–11.[CrossRef]
33. Wilkes, M.; Wright, CY; du Plessis, JL; Reeder, A. Fitzpatrick tip kože, individualni kot tipologije in indeks melanina v afriški populaciji: Koraki k univerzalno uporabnim ocenam fotoobčutljivosti kože. JAMA Derm. 2015, 151, 902–903. [CrossRef] [PubMed]
34. Boo, YC p-kumarinska kislina kot aktivna sestavina v kozmetiki: pregled, ki se osredotoča na njene antimelanogene učinke. Antioksidanti 2019, 8, 275. [CrossRef] [PubMed]
35. Boo, YC Učinkovitost osvetljevanja človeške kože resveratrola in njegovih analogov: od študij in vitro do kozmetičnih aplikacij. Antioksidanti 2019, 8, 332. [CrossRef] [PubMed]
36. Watanabe, F.; Hashizume, E.; Chan, GP; Kamimura, A. Učinki lokalnega oksidiranega glutationa na beljenje kože in izboljšanje stanja kože: dvojno slepo in s placebom nadzorovano klinično preskušanje pri zdravih ženskah. Clin. Cosmet. Raziskati. Derm. 2014, 7, 267–274. [CrossRef]
37. de Villiers, MM; Narsai, K.; van der Watt, JG Fizikalno-kemijska stabilnost sestavljenih krem, ki vsebujejo a-hidroksi kisline. Int. J. Pharm. Compd. 2000, 4, 72–75.
38. Sharad, J. Terapija z lupino z glikolno kislino - trenutni pregled. Clin. Cosmet. Raziskati. Derm. 2013, 6, 281–288. [CrossRef]
39. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Sredstva za beljenje kože: vidik medicinske kemije inhibitorjev tirozinaze. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]
40. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khan, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AAA celovit pregled zaviralcev tirozinaze. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef]
41. Steinhoff, M.; Štander, S.; Seeliger, S.; Ansel, JC; Schmelz, M.; Luger, T. Sodobni vidiki kožnega nevrogenega vnetja. Arh. Derm. 2003, 139, 1479–1488. [CrossRef] [PubMed]
42. Bušča, R.; Ballotti, R. Ciklični AMP ključni glasnik pri uravnavanju pigmentacije kože. Pigment Cell Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]
43. Tachibana, M. MITF: Potok, ki teče za pigmentne celice. Pigment Cell Res. 2000, 13, 230–240. [CrossRef][PubMed]44. Ebanks, JP; Wickett, RR; Boissy, RE Mehanizmi, ki uravnavajo pigmentacijo kože: dvig in padec obarvanosti polti. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 4066–4087. [CrossRef]
45. Simon, JD; Peleš, D.; Wakamatsu, K.; Ito, S. Trenutni izzivi pri razumevanju melanogeneze: premostitvena kemija, biološki nadzor, morfologija in funkcija. Melanom pigmentnih celic Res. 2009, 22, 563–579. [CrossRef]
