Terapevtski učinek Cistanche Deserticola na defekacijo pri modelu podgan s senilnim zaprtjem
Mar 27, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang
Povzetek
OZADJE
Zaprtje je ena od kroničnih funkcionalnih bolezni prebavil. Resno vpliva na kakovost življenja. Cistanche deserticola (C. deserticola) lahko očitno zdravi zaprtje, vendar njegov mehanizem ni pojasnjen. Domnevali smo, da njegov mehanizem izboljša črevesno gibljivost s stimulacijo intersticijskih Cajalovih celic (ICC). Aktivacija receptorja C-kit na površini ICC je tesno povezana z delovanjem ICC in signalne poti faktorja matičnih celic (SCF)/C-kit igrajo pri tem pomembno vlogo. Da bi raziskali mehanizem, kako C. deserticola zdravi zaprtje, je ta študija želela vzpostaviti model zaprtja pri podganah in raziskati vlogo signalne poti SCF/C-kit pri zdravljenju.
MERITI
Raziskati signalne poti SCF/C-kit v vlogi C. deserticola za zdravljenje zaprtja z modelom zaprtja podgane.
METODE
Oseminštirideset 8-mesecev starih podgan Sprague–Dawley je bilo razdeljenih v 4 skupine z metodo naključne teže: normalna skupina (n=12), modelna skupina (n=12), skupina C. deserticola (n=12) in blokirna skupina (n=12). Normalna skupina je prejela normalno fiziološko raztopino z gavažo; modelna skupina je prejela loperamid z gavažo; skupina blokatorjev je prejela loperamid in C. deserticola z gavažo, STI571 pa je bil injiciran intraperitonealno. Med zdravljenjem so bili vsakih 10 dni zabeleženi teža, fekalna zrnca in kakovost blata. 20. dan po indukciji modela so bila tkiva debelega črevesa vsaki skupini odstranjena. Za opazovanje patoloških sprememb smo uporabili barvanje s hematoksilinom in eozinom. Stopnje ekspresije genov SCF, C-kit in akvaporina so bile odkrite z imunohistokemijo, western blotom in kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo v realnem času. Epitelijske mitohondrije debelega črevesa in vrčaste celice so opazovali s transmisijsko elektronsko mikroskopijo.
REZULTATI
V primerjavi z običajno skupino se je z napredovanjem zdravljenja teža podgan v modelni skupini in skupini blokatorjev znatno zmanjšala, teža blata se je zmanjšala, kakovost blata pa je bila suha (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" je="" obrnila="" zmanjšanje="" telesne="" teže="" in="" teže="" blata="" ter="" izboljšala="" kakovost="" blata.="" histopatološka="" analiza="" je="" pokazala,="" da="" je="" bil="" epitelij="" sluznice="" debelega="" črevesa="" v="" modelni="" skupini="" nepopoln="" in="" da="" je="" bila="" razporeditev="" žlez="" nepravilna="" ali="" poškodovana.="" zdravljenje="" s="" c.="" deserticola="" je="" izboljšalo="" celovitost="" in="" kontinuiteto="" epitelijskih="" celic="" ter="" pravilno="" razporeditev="" žlez.="" blokirna="" sredstva="" so="" zavirala="" učinke="" c.="" deserticola.="" imunohistokemija="" in="" kvantitativna="" verižna="" reakcija="" s="" polimerazo="" v="" realnem="" času="" sta="" pokazali,="" da="" je="" bila="" ekspresija="" scf="" in="" c-kitproteina="" ali="" genov="" v="" tkivu="" debelega="" črevesa="" modelne="" skupine="" zmanjšana="" (p=""><0,05), medtem="" ko="" je="" bilo="" zdravljenje="" s="" c.="" deserticola="" je="" povečala="" ekspresijo="" beljakovin="" ali="" genov="" (p=""><0,05). western="" blot="" je="" pokazal,="" da="" je="" bila="" ekspresija="" akvaporina="" apq3="" povečana,="" medtem="" ko="" se="" je="" ekspresija="" cx43="" zmanjšala="" v="" modelni="" skupini.="" zdravljenje="" s="" c.="" deserticola="" je="" zaviralo="" izražanje="" apq3="" in="" spodbujalo="" izražanje="" cx43.="" transmisijska="" elektronska="" mikroskopija="" je="" pokazala,="" da="" so="" mitohondriji="" epitelija="" debelega="" črevesa="" v="" modelni="" skupini="" nabrekli="" in="" razporejeni="" neurejeno,="" mikrovili="" pa="" redki.="" stanje="" je="" bilo="" boljše="" v="" skupini="" c.="" deserticola.="" miši,="" zdravljene="" z="" zaviralcem="" sti571,="" so="" potrdile,="" da="" je="" blokiranje="" poti="" scf/c-kit="" zaviralo="" izboljšanje="" zaprtja="" s="" c.="">
ZAKLJUČEK
C. deserticola je izboljšala defekacijo pri podganah z zaprtjem, pomembno vlogo pri zdravljenju pa je imela signalna pot SCF/C-kit, ki je ključni člen delovanja ICC.
Ključne besede:Cistanche deserticola; Senilno zaprtje; Dejavniki izvornih celic; C-kit
sveže surovine cistanche
UVOD
Senilno zaprtje (SC) je ena od pogostih kroničnih funkcionalnih bolezni prebavil pri geriatričnih bolnikih, ki povzroči ali poslabša cerebrovaskularne dogodke in druge bolezni ter resno vpliva na kakovost življenja starejše populacije [1,2]. Po tradicionalni kitajski medicini je glavni etiologija in patogeneza SC sta gastrointestinalna vročina, pomanjkanje Yin in Jin ter črevesno razmočenje [3,4], medtem ko lahko Cistanche deserticola (C. deserticola) ogreje ledvice in sprosti črevesje. Raziskovalci so poročali, da je učinek črevesne izboljšanje gibljivosti in zdravljenje SC je jasno, vendar njegov mehanizem ni pojasnjen [5,6]. Intersticijske celice Cajal (ICC) so posebna vrsta mezenhimskih celic v prebavnem traktu. Aktivacija receptorja C-kit na površini ICC je tesno povezana s celično proliferacijo, diferenciacijo in delovanjem. ICC sodelujejo pri patogenezi številnih gastrointestinalnih motoričnih disfunkcij [7,8]. Aktivacija C-kita je odvisna od vezave njegovega liganda faktorja izvornih celic (SCF)[9]. Da bi raziskali učinek in mehanizem delovanja C. deserticola na SC, je bila ta študija namenjena vzpostavitvi modela SC pri podganah, induciranih z loperidolom, da bi raziskali vlogo signalne poti SCF/C-kit pri zdravljenju zaprtja s C. deserticola.
MATERIALI IN METODE
Eksperimentalni materiali
Poskusne živali:Poskusne živali je bilo 48 samcev 8-mesecev starih podgan Sprague Dawley, težkih 500-550 g; vse kupljeno pri Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Podgane so bile vzgojene v živalskem laboratoriju Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd., ob običajni dnevni in nočni svetlobi, hrani in pijači. Vsi postopki so bili v skladu s smernicami upravljanja, ki jih je izdal odbor za etiko bolnišnice tradicionalne kitajske medicine Chongqing.
Primarni reagenti:Primarni reagenti so vključevali loperamid (Sigma, St. Louis, MO, Združene države), C. deserticola iz Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 kitajskega Selleck Co. Ltd., in SCF, C-kit, protitelesa koneksin 43 (Cx43), akvaporin 3 (AQP3) in -aktin (Abcam, Cambridge, MA, Združene države), cDNA 1. verige PrimeScript II Komplet za sintezo in premiks Taq™ (Ex Taq™ različica 2.0) (Takara Co. Ltd., Japonska).
dopolnila z izvlečki zelišč cistanche
Metode
Priprava in združevanje modela SC:Da bi se izognili vplivu motečih dejavnikov, kot je telesna teža, na eksperimentalne rezultate, so podgane naključno razvrstili v skupine z metodo blokovnega naključnega združevanja. Oseminštirideset podgan so hranili prilagojeno 1 teden in podgane so bile oštevilčene po teži od lahke do težke. Glede na vrstni red telesne teže smo podgane razdelili v 12 con (teža podgan v vsaki coni je bila podobna), v vsaki coni so bile 4 podgane. 12 con je bilo razdeljenih v 4 skupine po 12 (normalno, model, C. deserticola in blokator). Podgane v modelni skupini so dobile loperamid (0.0625/100 g, 10 ml/kg) z gavažo. Prvi odmerek z gavažo so podvojili in zdravilo dajali ob 10:00 vsak dan, enkrat na dan 20 zaporednih dni. Normalni skupini so z gavažo dali enako količino fiziološke raztopine. Poleg tega je bila modelna skupina obdelana s C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) z gavažo. Skupini blokatorjev so dali C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) z gavažo in STI571 (25 mg/ml, 1 ml/kg) z intraperitonealno injekcijo. Med poskusom so telesno težo, težo blata in stanje blata beležili vsakih 10 dni. Pri nobeni od podgan ni prišlo do nenamernega pogina. Dvajset dni kasneje so podgane ubili in tkivo debelega črevesa odstranili za pregled in konzerviranje s tekočim dušikom. Preostali deli so bili pritrjeni in vdelani.
Histopatološka analiza:Podgane, ki so postile čez noč, so naslednji dan anestezirali z intraperitonealno injekcijo 7-odstotnega kloralhidrata (5 ml/kg). Trebuh so odprli, da so ločili tkivo debelega črevesa, in odstranili 8-10 mm debelega črevesa. Črevesno vsebino smo odstranili z nežnim stresanjem v predhodno ohlajenem polibutilensukcinatu in fiksirali 24 ur v 4-odstotni raztopini fiksativa paraformaldehida. Izvedena je bila običajna parafinska vdelava. Odrezke tkiva (5 μm) smo odstranili za barvanje s hematoksilinom in eozinom in pod mikroskopom opazovali histopatološko morfologijo.
Odkrivanje ekspresije SCF in C-kit z imunohistokemičnim barvanjem:Parafinska tkiva, pregledana z zgoraj navedeno histopatologijo, so bila razrezana, rehidrirana z razdeljenim ksilenom, razvoskanim gradientnim etanolom, antigen popravljen s toploto in zaprta za 1 uro s kozjim serumom pri sobni temperaturi. Primarna protitelesa SCF in C-kit smo dodali po kapljicah in tkiva hranili čez noč pri 4 stopinjah. Po izpiranju s polibutilensukcinatom smo dodali hrenovo peroksidazo za označevanje sekundarnega protitelesa, spirali s polibutilen sukcinatom 5 minut, spustili 2,4-kromogensko raztopino diaminomaslene kisline, ponovno obarvali s hematoksilinom, reverzno gradientno alkoholno dehidracijo, transparentizirali s ksilenom in nevtralnim tesnilo iz smole. Mikroskopsko so bila jedra vijoličasto modra, pozitivni rezultati pa so bili rjavkasto rumeni ali rumeni delci.
Odkrivanje izražanja mRNA C-kit v tkivu debelega črevesa s kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo v realnem času (RT-qPCR):Zamrznjeno tkivo debelega črevesa podgane smo zmleli s homogenizatorjem in dodali 1 ml RNAiso Plus. Celotno RNA tkiva debelega črevesa smo ekstrahirali z metodo kloroform/izopropanol, kakovost RNA pa smo odkrili z gelsko elektroforezo. Po identifikaciji z gelskim slikovnikom Bio-Rad je bil 1 ug RNA reverzno transkribiran v cDNA s Takara PrimeScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit. V skladu z bazo podatkov NCBI Gene ID: 64030 je bila regija CDS gena C-kit najdena in kombinirana z NCBI Primer-Blast design Primer zaporedje, ki ga je sintetiziral Sangon Biotech Co. Ltd, C-kit primer zaporedje zaznavna veriga 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', protismiselna veriga 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - aktin smiselna veriga 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', protismiselna veriga 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. Pomnoževanje PCR je bilo izvedeno na instrumentu Bio-RadCFX90 Real-Time PCR. Pogoji za PCR test so bili začetna denaturacija pri 95 stopinjah 5 minut, 30 ciklov 95 stopinj 30 sekund, 60 stopinj 30 sekund in 72 stopinj 1 minuto, čemur je sledilo končno podaljšanje pri 72 stopinjah 10 minut. 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct vrednost - -aktinska Ctvrednost) smo vzeli za analizo relativne genske ekspresije.
Odkrivanje ravni ekspresije proteina Cx43 in AQP3 v tkivu debelega črevesa z Western blottingom:Približno 1 cm zamrznjenega tkiva debelega črevesa smo zbrali in lizirali z močno pirolizno tekočino RIPA (100 μL). Tkivo smo 20-krat homogenizirali s steklenim homogenizatorjem in prenesli v 1,5 ml centrifugirno epruveto. Supernatant smo ekstrahirali po centrifugiranju pri 12000 obratih na minuto pri 4 stopinjah 5 minut in določili koncentracijo celotnega proteina v supernatantu z metodo BCA. Odstranili smo 25 ug denaturiranega proteina, da smo izvedli elektroforezo v natrijevem dodecil sulfatu in poliakrilamidnem gelu, nato pa proteine v gelu prenesli v poliviniliden fluoridembrano pri konstantnem toku 200 mA, nato pa zaprli s 5-odstotno tekočino za zaprtje posnetega mleka 2 uri pri sobni temperaturi. Ustrezna primarna protitelesa smo razredčili s tesnilno tekočino, inkubirali pri 4 stopinjah čez noč, nato sprali odpornost membrane in dodali druga protitelesa. Po dodajanju ECL tekočine so jih postavili pod ekspozimeter za preizkus z analizo optične gostote.
Transmisijska elektronska mikroskopija:Vzeli smo približno 1 cm proksimalnega debelega črevesa, ga fiksirali v 2,5-odstotnem glutaraldehidu za 24 ur, ga dehidrirali z razvrščenim acetonom, vdelali v Epon812 in na ultramikrotomu izrezali 50 nm ultratanke dele. Sekcije so bile obarvane z uranovim dioksid acetatom in tekočino za barvanje svinčevega citrata pri sobni temperaturi 10 minut. Pod transmisijskim elektronskim mikroskopom Philips Tecnai-10 smo opazovali resice debelega črevesa, mitohondrije epitelijskih celic in vrčaste celice.
Statistična analiza
Za analizo podatkov je bila uporabljena programska oprema SPSS 19.0, za risanje rezultatov pa programska oprema GraphPad Prism8.4. Za testiranje normalnosti je bil uporabljen Shapiro-Wilkov test. Podatki z normalno porazdelitvijo so bili predstavljeni s povprečjem ± SD. Elementi napak so bili uporabljeni za predstavitev povprečja ± SD hemoglobina po zdravljenju. Študentov t-test je bil uporabljen za primerjavo med dvema skupinama. Za primerjavo med več skupinami smo uporabili analizo variance. Metoda Student-Newman-Keuls je bila uporabljena za primerjavo med več skupinami v parih, Dunnettov test pa je bil uporabljen za merjenje razlik med vsako eksperimentalno skupino in kontrolno skupino v zaporedju. Povezani podatki so bili izmerjeni na več časovnih točkah in analiza variance ponovljenih meritev izvedeno. Če je test sferičnosti pokazal P > 0.{{10}}5, je bila uporabljena analiza variance ponovljenih meritev. Če je P < 0,05,="" je="" bila="" uporabljena="" posplošena="" ocenjevalna="" enačba.="" podatki,="" ki="" niso="" bili="" v="" skladu="" z="" normalno="" porazdelitvijo,="" so="" bili="" predstavljeni="" z="" m="" (p25,="" p75),="" za="" primerjavo="" med="" skupinami="" pa="" je="" bil="" uporabljen="" kruskal-wallisov="" h="" test="" vsote="" rangov.="" test="" χ2="" je="" bil="" uporabljen="" za="" primerjavo="" med="" skupinami,="" ko="" so="" bili="" podatki="" neurejeni="" podatki,="" pearsonov="" test="" χ2="" pa="" je="" bil="" uporabljen,="" če="" je="" bil="" delež="" celic="" s="" teoretično="" frekvenco="">< 5="">< 20="" odstotkov.="" če="" je="" bil="" delež="" celic="" s="" teoretično="" frekvenco="">< 5="" večji="" ali="" enak="" 20="" odstotkom,="" je="" bil="" uporabljen="" fisherjev="" natančen="" test.="" p=""><0,05 je="" bil="" uporabljen="" za="" določitev,="" da="" je="" razlika="" statistično="">
Slika 1 Histopatološke spremembe debelega črevesa.
REZULTATI
Splošni pogoji
En dan po gavaži loperamida v primerjavi z normalno skupino sta se telesna teža in masa blata v modelni skupini znatno zmanjšali (P < {{0}}.05),="" vendar="" ni="" bilo="" pomembne="" razlike="" v="" kakovosti="" blata="" rezultat="" (p=""> 0,05). Zdravljenje s C. deserticola v modelni skupini je upočasnilo zmanjšanje telesne teže in teže blata (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Histopatologija debelega črevesa
Barvanje tkiva debelega črevesa podgan s hematoksilinom in eozinom je prikazano na sliki 1. V normalni skupini so bile črevesne resice nepoškodovane, črevesna sluznica je bila nepoškodovana in neprekinjena, celice in žleze so bile pravilno razporejene. Sluznica in submukoza nista bili infiltrirani z vnetnimi celicami, struktura tkiva je bila normalna. V modelni skupini so bile črevesne resice in sluznica v veliki meri uničene, lokalne resice so bile odpadle in ohlapno razporejene, del žlezne strukture pa je izginil. V skupini C. deserticola je bilo histopatološko obarvanje manjše kot pri modelni skupini, vendar je prišlo do nekroze v nekaterih vrčastih celicah. Po intraperitonealni injekciji je v skupini z zaviralci v primerjavi s skupino s C. deserticola še vedno prišlo do lokalne izgube črevesnih resic ter do zloma in izgube črevesne sluznice.
Slika 2 Izražanje faktorja matičnih celic in razmerja relativne optične gostote v tkivu debelega črevesa z imunohistokemičnim odkrivanjem.
Odkrivanje izražanja faktorja matičnih celic in proteina C-kit z imunohistokemičnim barvanjem
Imunohistokemično barvanje je pokazalo, da sta bila SCF in C-kit izražena v debelem črevesu kontrolne skupine. V primerjavi s kontrolno skupino je bilo izražanje SCF in C-kit v modelni skupini znatno zmanjšano (P < 0.05).="" v="" primerjavi="" z="" modelno="" skupino="" se="" je="" izražanje="" scf="" in="" c-kit="" v="" skupini="" c.="" deserticola="" znatno="" povečalo="" (p="">< 0.05).="" v="" izražanju="" scf="" in="" c-kit="" ni="" bilo="" nobene="" razlike="" med="" blokatorskimi="" in="" modelnimi="" skupinami="" (p="">< 0,05,="" sliki="" 2="" in="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Ti rezultati so pokazali, da je ekspresija C-kita, prilagojena s C. deserticola, sodelovala pri izboljšanju zaprtja, blokatorji pa so zavirali učinkovitost C. deserticola.
koristi cistanche salsa
Western blotting
Western blot je pokazal, da je bil protein AQP3 izražen na nizki ravni v normalni kontrolni skupini, medtem ko je bil v modelni skupini znatno povečan v primerjavi s kontrolno skupino (slika 5) (P < 0.05).="" .="" ekspresija="" proteina="" aqp3="" se="" je="" zmanjšala="" po="" zdravljenju="" s="" c.="" deserticola,="" inhibitorni="" učinek="" c.="" deserticola="" na="" ekspresijo="" aqp3="" pa="" je="" zaviral="" zdravljenje="" z="" blokatorjem="" (p="">< 0,05).="" ekspresija="" cx43="" je="" bila="" nasprotna="" ekspresiji="" aqp3.="" ti="" rezultati="" kažejo,="" da="" je="" bil="" farmakološki="" učinek="" c.="" deserticola="" na="" podganah="" s="" sc="" dosežen="" s="" pospeševanjem="" izražanja="" cx43="" in="" zaviranjem="" izražanja="" aqp3="" (slike="">
Transmisijska elektronska mikroskopija
Po indukciji z loperamidom je prišlo do mitohondrijske otekline in avtofagije v nekaterih epitelijskih celicah sluznice debelega črevesa v modelni skupini. Število in dolžina črevesnih mikrovil se je zmanjšala in pojavila se je piknoza vrčastih celic (slika 8). Po obdelavi s C. deserticola se je povečalo število črevesnih mikrovil. Mikrovili so bili lepo razporejeni in struktura je bila dokončana. Vrčaste celice so krajše, nepravilna morfologija mitohondrijev in huda piknoza vrčastih celic.
Slika 3 Ekspresija C-kit in razmerje relativne optične gostote v tkivu debelega črevesa z imunohistokemičnim odkrivanjem.
DISKUSIJA
Zaprtje je pogosto pri starejši populaciji in je eden izmed pogostih simptomov, ki vpliva na zdravstveno stanje in kakovost življenja starejših [10,11]. V okviru tradicionalne kitajske medicine so Bai et al[12] verjeli, da je osnovna patogeneza SC disfunkcija prevodne funkcije debelega črevesa, senilna telesna odpoved, postopna izguba delovanja jeter in ledvic, pomanjkanje qija in krvi ter izguba telesne tekočine. , kar je povzročilo suho blato, kar je povzročilo zaprtje[13]. SC pritiska na bolnike in njihove družine v mnogih pogledih, zato je pomembno raziskati njegovo patogenezo.
C. deserticola ima funkcije toniziranja ledvičnega janga, koristi krvi in uravnavanja telesne imunosti[14]. C. deserticola in kitajski zeliščni decoction, ki vsebuje C. deserticola so pogosto uporabljali pri zdravljenju zaprtja in klinični učinek je izjemen. Du et al [15] so pri podganjem modelu pomanjkanja janga in zaprtja ugotovili, da je C. deserticola izboljšala amplitudo krčenja izoliranega debelega črevesa, okrepila kontraktilnost črevesnega trakta in vrnila raven gastrointestinalnih hormonov na normalno vrednost. Poleg tega prehranske vlaknine C. deserticola, predelovalni stranski produkt C. deserticola, izboljšajo sposobnost zadrževanja vode v blatu in imajo prednost majhnega odmerka in dobrega učinka pri hranjenju črevesja in izboljšanju defekacije [16]. Naša študija je pokazala, da je zdravljenje s C. deserticola izboljšalo fekalno vlago in histopatologijo debelega črevesa pri podganah z zaprtjem.
ICC-je najdemo v celotnem črevesnem traktu in igrajo ključno vlogo pri živčnem nadzoru črevesnega gibanja kot srčni spodbujevalnik in prenos črevesnih živcev[17]. Protoonkogensko kodirajočo receptorsko tirozin-kinazo, C-kit, izražajo ICC-ji, SCFi pa je ligand C-komplet [18]. Sistem SCF/C-kit je ključen pri razvoju ICC. Signalna pot SCF/C-kit je bila analizirana med zdravljenjem počasnega prenosa zaprtja pri podganah z akupunkturo[19]. Elektroakupunktura na točki Tianshu je povečala število ICC debelega črevesa pri miših, zdravljenih z ACK2-, povečala ekspresijo SCF in proteinov C-kit ter obrnila fenotip ICC. Predpisovanje za poživitev qi in vranice lahko poveča izražanje ICC v tkivu debelega črevesa in uravnava izražanje C-kit in SCF mRNA, s čimer se izboljšajo simptomi zaprtja [20]. V naši študiji je imunohistokemija pokazala, da je C. deserticola znatno povečala izražanje SCF in proteina C-kit v modelu SC pri podganah, RT-qPCR pa je pokazala, da je C. deserticola znatno povečala izražanje C-kitmRNA. Blokator C-kit je zaviral povečano ekspresijo SCF in C-kit, ki jo povzroča C. deserticola.
Vsebnost fekalne vode in transport vode v debelem črevesu sta tesno povezana z AQP, ki igrajo pomembno vlogo pri presnovi črevesne vode [21]. V študiji pri podganah z zaprtjem pri počasnem transportu je dekokcija defekacije znatno izboljšala simptome zaprtja z uravnavanjem črevesne absorpcije vode z znižanjem AQP3 in AQP4[22]. Pri podganjem modelu funkcionalnega zaprtja se lahko mehanizem zdravljenja s peroralno tekočino Xiaofu Tongjie za funkcionalno zaprtje izvede z uravnavanjem izražanja vazoaktivnega intestinalnega polipeptida in AQP3 v debelem črevesu [23]. Vrzeli igrajo bistveno vlogo pri posredovanju sinhronega krčenja celic gladkih mišic. Cx43 je najpomembnejši protein v tem procesu[24]. Izguba izražanja Cx43 je lahko delno odgovorna za motorično disfunkcijo gladkih mišic [25]. Popravilo mrežne strukture črevesnega živčnega sistema pri podganah s počasnim tranzitnim zaprtjem lahko izboljša izražanje Cx43 itd. in simptome zaprtja [26]. Ti rezultati kažejo, da je povečano izražanje AQP3 zmanjša vsebnost fekalne vode, kar povzroči zaprtje, ki je lahko pomemben mehanizem zaprtja. Izražanje Cx43 je lahko povezano s krčenjem črevesnih gladkih mišic in zmanjšanjem pojava zaprtja. V naši študiji je western blotting pokazal, da je bila ekspresija Cx43 povečana in ekspresija AQP3 zavirana z zdravljenjem s C. deserticola, kar je povzročilo povečano kontrakcijo gladkih mišic in zmanjšano absorpcijo vode, zdravljenje z blokatorjem pa je te učinke odpravilo.
Za več informacij kliknite tukaj.
ZAKLJUČEK
Skratka, C. deserticola lahko zavira ekspresijo AQP3 in spodbuja ekspresijo Cx43 po poti SCF/C-kit, s čimer izboljša zaprtje, ki ga povzroča loperamin, in zmanjša poškodbe tkiva debelega črevesa pri starih podganah. Ta študija je zagotovila dobro teoretično podlago za klinično uporabo C. deserticola.
