Terapevtski učinek cistanozida A na kostni metabolizem miši z ovariektomijo

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Povzetek

Cistanosid A (Cis A) je aktivni feniletanoidni glikozid, izoliran izCistanche deserticola YC Maje bil deležen naše pozornosti zaradi njegove možne vloge pri zdravljenjuosteoporoza. V tej študiji smo ovrednotili učinke Cis A na model miši z ovariektomijo (OVX) in raziskali njegove osnovne molekularne mehanizme delovanja. Po 12 tednih oralno dajanega posega je Cis A (20, 40 in 80 mg/kg telesne teže/dan) pokazal znatne antiosteoporotične učinke na miših OVX, kar je dokazano s povečano trdnostjo kosti, mineralno gostoto kosti in izboljšano mikroarhitekturo trabekularne kosti. Medtem so se zmanjšale aktivnosti markerjev za resorpcijo kosti, vključno s kislo fosfatazo, odporno na tartrat (TRAP), deoksipiridinolinom (DPD) in katepsinom K, povečana pa je bila bioaktivnost alkalne fosfataze (ALP) markerja za tvorbo kosti. Mehansko gledano je Cis A zaviral izražanje faktorja 6, povezanega z receptorjem TNF (TRAF6), molekule navzgor, ki si jo deli tako ojačevalec lahke verige jedrskega faktorja kapa aktiviranih celic B (NF-κB) kot fosfatidilinozitol 3-kinaza ( PI3K)/Akt poti in nato zaviral nivoje receptorskih aktivatorjev liganda jedrskega faktorja kapaB (RANKL), znižal ekspresijo NF-κB in povečal osteoprotegerin (OPG), PI3K in Akt, kar pomeni, da ima Cis A antiosteoporotično aktivnost pri ovariektomiranih miših prek TRAF6-posredovane inaktivacije NF-kappaB in aktivacije PI3K/Akt. Skupaj predstavljamo nove ugotovitve, da Cis A z znižanjem TRAF6 usklajuje inhibicijo NF-κB in stimulacijo poti PI3K/Akt za spodbujanje tvorbe kosti in preprečevanje resorpcije kosti. Ti podatki so pokazali potencial Cis A kot obetajočega sredstva za zdravljenjeosteoporozabolezen.

Ključne besede: cistanozid A; miši z ovariektomijo; antiosteoporotik; TRAF6; RANKL

Uvod

Osteoporoza, sistemski skeletni "tihi morilec", je v zadnjih letih postal velika nevarnost za zdravje, ki prizadene več kot 2000 milijonov ljudi po vsem svetu [1]. Zanjo je značilna nizka gostota kostne mase (BMD) in poslabšanje mikroarhitekture, ki izhajata iz prekomerne resorpcije kosti nad tvorbo kosti in na koncu povzročita osteoporotični zlom [2,3]. Dandanes je identifikacija sredstev za blokiranje diferenciacije in resorpcije osteoklastov pogosta in uspešna strategija za razvoj terapevtskih zdravil zaosteoporoza[4] in dejansko obstaja veliko sintetičnih učinkovin, vključno z estradiolvaleratom in natrijevim alendronatom, ki lahko preprečujejo in zdravijoosteoporoza. Vendar pa zdravila za bolezni še zdaleč niso idealna; nekatera od teh zdravil lahko povečajo tveganje za raka endometrija in dojke ter imajo tudi določeno stopnjo stranskih učinkov, kot so hiperkalcemija, hiperkalciurija itd. [5], ki omejujejo njihovo klinično uporabo. Zato se tradicionalna kitajska zdravila (TKM), zlasti užitna TKM z izoliranimi bioaktivnimi spojinami in frakcijami, že več kot tisočletje v veliki meri varno in učinkovito uporabljajo v azijskih državah za preprečevanje in zdravljenje različnih bolezni, vključno zosteoporoza[6,7].

Osteoporozaje označen kot povečana resorpcija kosti zaradi povečane osteoklastogeneze in ta proces vključuje vključitev hematopoetskih monocitov v prekurzorje osteoklastov, ki se zlijejo v večjedrne osteoklaste, ki ciljajo na mesta kosti, ki so podvržena preoblikovanju [4]. Aktivator receptorja za ligand jedrnega faktorja κB (RANKL), ključni faktor, ki se izloča iz osteoblastov, stimulira diferenciacijo monocitov v osteoklaste [8, 9]. Interakcija RANKL z njegovim receptorjem RANK ima za posledico kaskado znotrajceličnih dogodkov, vključno z NF-κB, PI3K/Akt, od kalcija/kalmodulina odvisno kinazo z rekrutiranjem faktorja, povezanega z receptorjem receptorja adapterskega signalnega proteina TNF (TRAF6). Posledično je več markerskih genov, povezanih z osteoklasti, vključno s TRAP, katepsin K in DPD, reguliranih navzgor, proces resorpcije kosti pa se pospeši.

Za feniletanoidne glikozide so značilni deli cimetove kisline in hidroksi fenil etil, ki so pritrjeni na a -glukopiranozo (apioza, galaktoza, ramnoza, ksiloza itd.) preko glikozidne vezi, ki so široko razširjene v zdravilnih rastlinah [10]. Cistanozid A (Cis A) je aktivni feniletanoidni glikozid vCistanche deserticola YC Ma. Po podatkih kitajske farmakopeje se je C. deserticola tradicionalno uporabljala za zdravljenje pomanjkanja ledvičnega jina, mišične oslabelosti, ledvene oslabelosti itd., feniletanoidni glikozidi pa so glavne bioaktivne sestavine v tej rastlini [11]. Na podlagi teorije o 'ledvicah' TKM bi lahko ledvice upravljale kostni sistem, kar pomeni, da sta razvoj in funkcije kosti odvisna od ledvičnega bistva, to ledvično bistvo pa se lahko preoblikuje v kostni mozeg, da nahrani kosti, spodbujajo rast in obnovo okostja ter krepijo okostje [12]. Ker lahko C. deserticola krepi ledvice, smo domnevali, da lahko Cis A preprečuje in zdraviosteoporoza. Ta študija je bila zato zasnovana za potrditev potenciala Cis A pri preprečevanjuosteoporozaz uporabo modela miši z ovariektomijo in označevalci tvorbe kosti in resorpcije ter s tem povezani možni mehanizmi so bili določeni za oceno antiosteoporotične bioaktivnosti tega sredstva.

Rezultati

Učinki Cis A na tritočkovno testiranje kosti

Da bi analizirali, ali zdravljenje s Cis A naredi kost močnejšo, smo stegnenice podvrgli testu tritočkovnega upogibanja. Kot je prikazano na sliki 1, je bila največja obremenitev, uporabljena ob zlomu kosti, 21,5 odstotka in 22.0 odstotkov večja pri živalih, zdravljenih z 20 mg/kg in 80 mg/ kg Cis A v primerjavi z živalmi v skupini z ovariektomijo (OVX) (p < 0.05).="" medtem="" je="" zdravljenje="" s="" cis="" a="" povečalo="" tudi="" togost="" kosti;="" vse="" miši,="" zdravljene="" s="" cis="" a,="" so="" pokazale="" znatno="" povečano="" okorelost="" s="" podatki="" 121.0="" ±="" 12,1="" (p="">< 0,05),="" 124,1="" ±="" 16,2="" (p="">< 0,05)="" oziroma="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p="">< 0,01).="" ,="" v="" primerjavi="" s="" 102,2="" ±="" 10,7="" miši="" ovx.="" rezultati="" kažejo,="" da="" je="" bila="" povečana="" trdnost="" kosti="" pri="" miših="" ovx,="" zdravljenih="" s="" cis="" a,="" posledica="" povečane="" količine="" kosti="" in="" izboljšanja="" kakovosti="">

Učinki Cis A na mikroarhitekturo kosti

Tridimenzionalna trabekularna kostna mikroarhitektura miši, izmerjena z mikro-CT (slika 2 in tabela 1), intuitivno kaže, da so miši v skupini OVX pokazale opazno zmanjšanje trabekularne površine in trabekularnega števila v primerjavi z navidezno skupino, kar kaže, da je ovariektomija lahko povzroči opazno zmanjšanje gostote kostne mase (BMD, -46 odstotkov), vsebnosti mineralov v kosteh (BMC, -66 odstotkov), vsebnosti mineralov v tkivih (TMC, -85 odstotkov), volumskega deleža kosti (BVF, -82 odstotkov), trabekularno število (Tb. N, -76 odstotkov) in povečanje trabekularne separacije (Tb. Sp, plus 80 odstotkov) brez kakršnih koli sprememb v skupni tkivni mineralni gostoti (TMD) in trabekularni debelini (Tb. Th) po operaciji 12 tedne.

Vendar so miši OVX, zdravljene s Cis A, povzročile od odmerka odvisno povečano BMD (plus 43 odstotkov ~57 odstotkov), BMC (plus 65 odstotkov ~73 odstotkov), TMC (plus 83 odstotkov ~90 odstotkov), BVF (plus 80 odstotkov). ~88 odstotkov), večje zmanjšanje Tb. Sp (-79 odstotkov ~ 88 odstotkov) in dodatno povečan Tb. N (plus 73 odstotkov ~82 odstotkov) v primerjavi s skupino OVX. Zdi se, da na TMD ni vplivala ovariektomija, vendar se je znatno povečala z zdravljenjem z estradiolvaleratom (EV).

Učinki Cis A na markerje za tvorbo kosti in resorpcijo

Učinki Cis A na markerje kostne resorpcije, vključno s TRAP, DPD, katepsinom K in indeksom tvorbe kosti ALP in kostnim Gla-proteinom (BGP), so prikazani na sliki 3. Po 12 tednih operacije ovariektomije so aktivnosti TRAP, DPD , in katepsin K v skupini OVX sta se znatno povečala, zlasti DPD, ki se je povečal za skoraj 55,6 odstotka; TRAP in katepsin K sta bila povečana za 43,5 odstotka oziroma 38,1 odstotka v primerjavi z lažno skupino. Cis A, ki so ga dajali peroralno 12 tednov, je pokazal izjemen potencial pri preprečevanju vseh zgoraj omenjenih označevalcev kostne resorpcije, zlasti visok odmerek (80 mg/kg), ki kaže pomemben učinek na zatiranje aktivnosti DPD za 45.0 odstotkov, TRAP za 49.0 odstotkov in katepsin K za 44.0 odstotkov (p < 0.01)="" v="" primerjavi="" z="" skupina="" ovx="" (slika="" 3).="" čeprav="" je="" bil="" v="" skupini="" ovx="" dokazan="" naraščajoči="" trend="" aktivnosti="" alp="" in="" bgp,="" niso="" opazili="" nobenih="" statistično="" pomembnih="" sprememb.="" vendar="" pa="" so="" opazili="" znatno="" izboljšanje="" aktivnosti="" alp="" v="" skupinah,="" zdravljenih="" z="" nizkim="" in="" visokim="" cis="" a,="" v="" primerjavi="" z="" lažno="" skupino="" (p=""><>

Učinki Cis A na ravni izražanja proteinov TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG in RANKL

Western blot analiza je pokazala, da so bile v primerjavi s skupino lažnih beljakovin ravni TRAF6, NF-κB in RANKL v skupini OVX znatno povečane (p < 0.05),="" medtem="" ko="" je="" opg,="" pi3k="" in="" akt="" sta="" se="" znatno="" zmanjšala="" (slika="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" ali="" 80="" mg/kg)="" je="" bistveno="" znižal="" ekspresijo="" traf6="" (p="">< 0.05),="" čemur="" je="" sledila="" ekspresija="" rankl="" zmanjšal="" in="" opg="" povečal,="" kar="" pomeni,="" da="" je="" bilo="" razmerje="" opg/rankl="" regulirano="" navzgor.="" posledično="" so="" bile="" signalne="" kaskade="" nf-κb="" znižane="" in="" pi3k/akt="" je="" bil="" reguliran="" navzgor="" z="" zdravljenjem="" s="" cis="" a="" (p=""><0,05). molecules="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" od="" 11="" 2.1.4.="" učinki="" cis="" a="" na="" ravni="" proteinske="" ekspresije="" traf6,="" nf-κb="" pi3k,="" akt,="" opg="" in="" rankl="" western="" blot="" analiza="" je="" pokazala,="" da="" so="" bile="" v="" primerjavi="" z="" lažno="" skupino="" ravni="" beljakovin="" traf6,="" nf-κb="" in="" rankl="" v="" skupini="" ovx="" pomembno="" povečali="" (p="">< 0,05),="" medtem="" ko="" so="" bili="" opg,="" pi3k="" in="" akt="" značilno="" znižani="" (slika="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" ali="" 80="" mg/kg)="" je="" značilno="" znižal="" ekspresijo="" traf6="" (p="">< 0,05),="" čemur="" je="" sledilo="" zmanjšanje="" ekspresije="" rankl="" in="" povečanje="" opg,="" kar="" pomeni,="" da="" je="" bilo="" razmerje="" opg/rankl="" regulirano="" navzgor.="" posledično="" so="" bile="" signalne="" kaskade="" nf-κb="" znižane,="" pi3k/akt="" pa="" regulirane="" navzgor="" z="" zdravljenjem="" s="" cis="" a="" (p=""><>

Diskusija

Glede na omejitve trenutnih terapevtskih možnosti zaosteoporozabolezni, obstaja potreba po alternativah iz hrane ali naravnih užitnih zdravilnih rastlin. Kot del našega nenehnega prizadevanja za odkrivanje učinkovitih antiosteoporotičnih učinkovin iz TKM smo našli vrsto izvlečkov, frakcij in spojin, ki imajo učinek antiosteoporotičnih lastnosti [13,14].Cistanche deserticolaje pomembna klasična TKM, za katero je bilo ugotovljeno, da ima ugoden varnostni profil [15] in široke medicinske funkcije za zdravljenje ledvične odpovedi itd. [16]. Po teoriji TKM so TKM, ki imajo učinek poživljanja ledvic, običajno uporabljali za zdravljenjeosteoporoza; feniletanoidni glikozidi so glavne bioaktivne sestavine v tem zelišču, kar pomeni, da imajo feniletanoidni glikozidi, ki jih vsebuje C. deserticola, lahko antiosteoporotične lastnosti. Dokazano je bilo, da lahko izvleček C. deserticola znatno zavira zmanjšanje BMD in prepreči poslabšanje trabekularne mikroarhitekture, ki jo povzroča OVX [17]. V poskusu in vitro je tudi znatno povečal ALP, kostni morfogenetski protein -2 in mRNA osteopontina ter mineralizacijo kosti kultiviranih osteoblastov [18]. Ehinakozid, glavna bioaktivna sestavina v C. deserticola, ki je uradno zabeležena v kitajski farmakopeji [11], je pokazal antiosteoporotično delovanje z visokim odmerkom 30–270 mg/kg telesne teže/dan [19], nadaljnji rezultati in vitro pa so pokazali, da lahko spodbuja regeneracijo kosti s povečanjem razmerja OPG/RANKL v celicah MC3T3-E1 subklona 14 [20]. Cis A je bil eden od feniletanoidnih glikozidov, izoliranih iz C. deserticola, in več poročil je pokazalo, da ima ta spojina antioksidativno aktivnost [21] in protivnetne lastnosti [22, 23]. Nedavno objavljen članek je odkril, da ima Cis A zaščitno delovanje tako na CCl4 kot na hepatotoksičnost, ki jo povzroča alkohol, pri miših, prav tako pa je pokazal zaščitno lastnost na poškodbe, ki jih povzroča etanol, v primarno gojenih mišjih hepatocitih in vitro [24]. V naši sedanji študiji so rezultati pokazali, da ima Cis A antiosteoporotično delovanje pri nizkih odmerkih (20–80 mg/kg telesne teže/dan) z uporabo modela miši z ovariektomijo, ta bioaktivnost pa je bila izražena z znižanjem ravni TRAF6, zatiranjem izražanje RANKL in NF-κB ter stimuliranje OPG, PI3K in Akt, kar pomeni, da je bil terapevtski učinek Cis A pri miših OVX prek mehanizma TRAF6-posredovane inaktivacije NF-kappaB in aktivacije PI3K/Akt.

Dobro je znano, da lahko ovariektomija povzročiosteoporozaz očitnim zmanjšanjem MKG, biomehanske trdnosti, kakovosti kosti in mikroarhitekture trabekularne kosti, zgornje spremembe pa so deloma posledica pomanjkanja estrogena [25]. Zdaj, v tem poskusu in vivo, naša študija dokazuje, da je ovariektomija povzročenaosteoporozaje povzročilo znatno zmanjšanje biomehanske trdnosti in trabekularnih strukturnih parametrov, vključno z BMD, BMC, TMC in Tb. N in naraščajoči Tb. Sp; in zdravljenje s Cis A sta znatno izboljšala mehanske lastnosti kosti, vključno z največjo obremenitvijo in togostjo, povečala BMD in izboljšala večino strukturnih parametrov kostne trabekularne mikroarhitekture v primerjavi z mišmi v skupini OVX, kar kaže, da je bil Cis A učinkovit pri izboljšanju kakovosti kosti in trabekularna mikroarhitektura pri miših OVX.

Poleg skupne MKG lahko s tritočkovnim upogibnim testom in meritvijo trabekularne kostne mikroarhitekture neposredno diagnosticiramoosteoporoza, označevalci tvorbe kosti, vključno z ALP in BGP, ter indeks resorpcije kosti, vključno s TRAP, DPD in katepsin K, so bili prav tako uporabljeni za pojasnitev povezanih antiosteoporotičnih mehanizmov Cis A. V naši študiji je aktivnost ALP pri miših skupine OVX je pokazal nepomemben trend naraščanja, kar kaže na povečano stopnjo kostne premene [26, 27] v pomenopavzi.osteoporoza; zdravljenje z visokim (80 mg/kg telesne teže/dan) in nizkim (20 mg/kg telesne teže/dan) odmerjanjem Cis A je pokazalo znatno izboljšanje aktivnosti ALP v primerjavi s skupino za lažno zdravljenje, medtem ko se zdi, da na aktivnost BGP ne vpliva ovariektomija v vseh zdravljenih skupinah; TRAP, DPD in katepsin K so bili znatno povečani v skupini OVX, uporaba Cis A pa je opazno zmanjšala vse tri markerje kostne resorpcije. Zgornji podatki kažejo, da ima Cis A potencialno antiosteoporotično delovanje, ta učinek pa je bil dosežen z regulacijo presnove kosti, vključno z zaviranjem resorpcije kosti in povečanjem tvorbe kosti.

Usklajevanje med osteoblastom in osteoklastom je kritičen dejavnik pri ohranjanju celovitosti skeleta. Osteoklasti, ki izražajo TRAP, se pritrdijo na površino kosti s tvorbo na aktin vezanih tesnilnih območij, znotraj katerih se sproščajo proteolitični encimi, kot je katepsin K, kar povzroči nastanek resorpcijskih jam. Modulacijo osteoklastogeneze z nezrelimi celicami osteoblastične linije posredujeta RANKL in OPG [28]. OPG je receptor za vabo, ki zavira aktivacijo osteoklastogeneze RANKL in s tem zmanjša resorpcijo kosti. RANKL, ki zagotavlja pomemben signal potomcem osteoklastov, je na membrano vezana molekula družine ligandov faktorja tumorske nekroze, ki spodbuja tvorbo osteoklastov. Verjame se, da je razmerje izražanja OPG/RANKL ključni parameter osteoklastogene aktivnosti, signalne kaskade, ki jih aktivira RANKL, pa vključujejo poti NF-κB in PI3K [29]. Pomen poti NF-κB za osteoklastogenezo dokazuje dejstvo, da je delecija NF-κB pri miših povzročila odsotnost zrelih osteoklastov [30]. TRAF6 se je izkazal kot obetavna tarča za nova zdravila proti osteoporozi. Miši s pomanjkanjem TRAF6-, ki kažejo pomanjkljivo osteoklastogenezo in hudo osteopetrozo, so tako pokazale pomembnost TRAF6 pri presnovi kosti. Nastajajoči dokazi kažejo na kritično regulacijsko funkcijo za TRAF6 v signalnih kaskadah, ki jih posreduje RANKL/RANK [4, 31]. Podatki trenutne študije so pokazali, da je zdravljenje s Cis A na miših OVX povzročilo znižano regulacijo ravni izražanja proteina TRAF6, zmanjšan RANKL in povečano izražanje OPG ter s tem preprečilo aktivacijo RANKL spodnjega NF-κB in aktiviranje signalnih poti PI3K/Akt , kar kaže, da Cis A zavira diferenciacijo osteoklastov s TRAF6-inaktivacijo NF-kappaB in aktivacijo PI3K/Akt ter poveča razmerje OPG/RANKL, posledično zavira osteoklastogenezo in spodbuja tvorbo kosti.

Reference

1. Lane, NE Epidemiologija, etiologija in diagnozaosteoporoza. Am. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (dodatek S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, WD Intervencijski pragovi in ​​diagnozaOsteoporoza. J. Kostni rudar. Res. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Antiosteoporotična aktivnost centralnega ikaridina (CIT) na presnovo kosti pri podganah z ovariektomijo. Molekule 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Inhibicija osteoklastogeneze in resorpcije kosti in vitro in in vivo s prenil flavonoidom ksantohumolom iz hmelja. Sci. Rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, ZDA Estrogeni pri preprečevanju in zdravljenju postmenopavzeosteoporoza: Ocena. Am. J. Med. 1988, 85, 847–850. [CrossRef]

6. Žu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Antiosteoporotični učinki in proteomska karakterizacija tarče in mehanizma decokcije Er-Xian na osteoblastičnem UMR-106 in osteoklaste, inducirane z RAW264.7. Molekule 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Sonce, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Antiosteoporotična aktivnost antrakinonov iz Morinda Officinalis na osteoblaste in osteoklaste. Molekule 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Čudoviti osteocit. J. Kostni rudar. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Molekularni markerji za rak dojke: napoved obnašanja tumorja. Dis. Markerji 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipijeva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside - Pregled njegovega pojavljanja, (bio)sinteze in farmakološkega pomena. Biotehnologija. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Farmakopeja, uredniški odbor kitajske farmakopeje. Farmakopeja Ljudske republike Kitajske; China Medical Science and Technology Press: Peking, Kitajska, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Žu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Učinki tradicionalnega kitajskega zeliščnega pripravka na osteoblaste in osteoklaste. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Antiosteoporotični flavonoidi iz Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Ye, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Antiosteoporotična aktivnost in sestavine Podocarpium podocarpus. Fitomedicina 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; On, L.; Yao, S.; Zhao, P. Ocena varnosti prahuCistanche deserticola YCMas 90-dnevnim testom hranjenja pri podganah Sprague-Dawley. Drug Chem. Toxicol. 2016, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Študija o toksičnostiCistanche Deserticola. brada. J. Health Lab. Technol. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Anti-osteoporozni učinekIzvleček Cistanche deserticola Mapri podganah z ovariektomijo. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Ho, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHIzvleček Cistanche deserticolapoveča tvorbo kosti v osteoblastih. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Antiosteoporotična aktivnost ehinakozida pri ovariektomiziranih podganah. Fitomedicina 2013,

20, 549–557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Ši, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinacoside spodbuja regeneracijo kosti s povečanjem razmerja OPG/RANKL v celicah MC3T3-E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Antioksidativni učinki feniletanoidov izCistanche deserticola. Biol. Pharm. Bik. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Ši, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Feniletanoidni glikozidi s protivnetnim delovanjem iz stebelCistanche deserticolagojen v puščavi Tarim. Fitoterapia 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Inhibicija dušikovega oksida s feniletanoidi v aktiviranih makrofagih. EUR. J. Pharmacol. 2000, 400, 137–144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Zaščitni učinek Cistanchis A na poškodbe, ki jih povzroča etanol, v primarno kultiviranih mišjih hepatocitih. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Antiosteoporotična aktivnost ikariina pri podganah z ovariektomijo. Fitomedicina 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Biokemični označevalci presnove kosti. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Preventivni učinki izvlečka lubja Eleutherococcus senticosus pri OVX povzročenihosteoporozapri podganah. Molekule 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Irska, DC; Beavan, SR; Compston, JE Učinki estrogena na izražanje osteoprotegerina, RANKL in estrogenskega receptorja v človeških osteoblastih. Kost 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimunologija: skupni mehanizmi in preslušavanje med imunskim in kostnim sistemom. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Zahteva za NF-kappaB pri razvoju osteoklastov in B-celic. Gene Dev. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 posreduje pri zatiranju osteoklastogeneze in preprečevanju izgube kosti, ki jo povzroči ovariektomija, z novim prenil flavonoidom. J. Kostni rudar. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Žu, Z.; Yan, F. Antiosteoporotična aktivnost fenolnih spojin iz Curculigo orchioides. Fitomedicina 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]