Odvarek Tongluo Digui zdravi ledvične poškodbe pri diabetičnih podganah s spodbujanjem avtofagije podocitov

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Povzetek

CILJ:

Raziskati učinke decokcije Tongluo Digui na poškodbo ledvic in avtofagijo podocitov, ki jo povzroča streptozotocin, pri diabetičnih podganah.

METODE:

Samci podgan Sprague-Dawley so bili naključno razdeljeni v šest skupin: normalne, modelne, decoction Tongluo Digui (visok, srednji in nizek odmerek) in valsartan. Streptozotocin je bil injiciran intraperitonealno za ponovitev diabetičnega živalskega modela. Po 8 tednih so ovrednotili proteinurijo, da bi določili model diabetične nefropatije. Zdravljenja smo dajali dnevno po intragastrični poti. 16 tednov po gavaži smo določili 24-urno koncentracijo beljakovin v urinu, glukozo v krvi, serumski kreatinin in koncentracije sečninskega dušika. Nato so bile podgane žrtvovane, ledvice pa pobrane in obarvane s periodično kislino-Schiff, da bi ocenili patološke spremembe v glomerulih, vključno z glomerulnimi podociti s transmisijsko elektronsko mikroskopijo. Western blot analiza je bila uporabljena za določitev ekspresije nefrina, podocina, p62, beclin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ in p-mTOR/mTOR beljakovin v tkivih ledvic.

REZULTATI:

V primerjavi z modelno skupino je bil decoction Tongluo Digui povezan z zmanjšanjem koncentracije beljakovin v 24-urnem urinu, glukoze v krvi, hemoglobina A1c, serumskega kreatinina, koncentracije dušika sečnine, celotne serumske beljakovine in albumina. Hkrati se je zmanjšalo mezangialno mezenterično širjenje in zlitje stopalnih procesov, glomerularna bazalna membrana ni bila bistveno odebeljena, število podocitov in število avtofagosomov v podocitih pa se je povečalo. Nadalje je bila ekspresija nefrina, podocina, LC3Ⅱ in beclin-1 proteina v ledvičnem tkivu regulirana navzgor, medtem ko je bila ekspresija proteina p62 znižana in fosforilacija mTOR je bila inhibirana.

ZAKLJUČEK:

Odvarek Tongluo Digui lahko zavira napredovanje diabetične nefropatije z zaviranjem fosforilacije mTOR, s čimer poveča avtofagijo za zaščito podocitov in zmanjša proteinurijo.

Ključne besede:Diabetične nefropatije; avtofagija; podocit; Odvar Tongluo Digui

koristi stebla cistanchezadelovanje ledvic

UVOD

Diabetična nefropatija (DN) je eden od hudih mikrovaskularnih zapletov sladkorne bolezni, saj ima 30 odstotkov -40 odstotkov bolnikov s sladkorno boleznijo ledvično bolezen. Z naraščajočo pojavnostjo sladkorne bolezni je DN postala glavni vzrok končne ledvične odpovedi po vsem svetu.1 To je veliko gospodarsko breme za družine in družbo.

Poškodba podocitov je pomemben vzrok za napredovanje DN. Kot končno diferencirana celica ima avtofagija pomembno vlogo pri ohranjanju fiziološke funkcije podocitov. 2, 3 V normalnem fiziološkem stanju je znotraj podocitov visoka stopnja avtofagije, ki odstrani poškodovane beljakovine in organele. 4 Vendar pa pri sladkorni bolezni okolju je zavirana avtofagija podocitov, kar nakazuje, da ima avtofagija podocitov pomembno vlogo v patogenezi DN.5 DN spada v kategorije "Xiao Ke", "Guan Ge" in "edem" v tradicionalni kitajski medicini. Teorija tradicionalne kitajske medicine pravi, da zastajanje krvi inJin pomanjkanjeso najpomembnejši vzroki za DN.6 Zato mora zdravljenje DN spodbujati krvni obtok in hraniti yin, zato je bil za to uveden decoction Tongluo Digui. Prej smo ugotovili, da ima decokcija Tongluo Digui ugoden učinek zdravljenja pri DN. V tej študiji smo želeli uporabiti podganji model tipa 1 DN, ki ga povzroča streptozotocin (STZ), da bi ocenili učinek decokcije Tongluo Digui na poškodbo ledvic, avtofagijo in signalno pot mTOR. Raziskali smo tudi osnovni molekularni mehanizem decokcije Tongluo Digui pri upočasnitvi napredovanja DN in zagotovili dokaze za klinično preprečevanje in zdravljenje DN.

MATERIALI IN METODE

Živali

Podgane Sprague-Dawley brez specifičnih patogenov (SPF) [n=60, samci, (150 ± 10) g; številka potrdila o kvalifikaciji: SCXK (Yu) 2017-0001] so bili kupljeni pri Henan Experimental Animal Center (Zhengzhou, Kitajska). Standardni svetlobni cikel (14 ur svetlobe, 10 ur ponoči), notranja temperatura (23 ± 2) stopinje, vlažnost (40 odstotkov -50 odstotkov), namestitev (tri živali na kletko) in hranjenje (sterilizirana krma in pitna voda). Poskus je bil zaključen v laboratoriju Cell Imaging Center bolnišnice tradicionalne kitajske medicine Henan (Zhengzhou, Kitajska). Vsi poskusi so bili izvedeni v skladu s priročnikom za nego in uporabo laboratorijskih živali, ki ga je objavil Nacionalni inštitut za zdravje.

Droge

Kapsule valsartana (Val) so bile kupljene pri Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b, Peking, Kitajska). Odvarek Tongluo Digui je sestavljen iz Shuichi (Hirudo) 12 g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Angelicae Sinensis) 30 g, Zexie (Rhizoma) Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. Kitajska zelišča so bila kupljena v bolnišnici tradicionalne kitajske medicine Henan (Zhengzhou, Kitajska).

Eksperimentalna zasnova

Podgane so bile naključno razdeljene v šest skupin, od katerih je vsako sestavljalo 10 podgan: kontrolna skupina (Ctrl), skupina modela DN (STZ), model DN s skupino zdravljenja z Val (Val), model DN z skupino zdravljenja z visokim odmerkom decoction Tongluo Digui (HTL) , model DN s skupino za zdravljenje s srednjimi odmerki decoction Tongluo Digui (MTL) in model DN s skupino za zdravljenje z nizkimi odmerki decoction Tongluo Digui (LTL). Šest skupin podgan je bilo žrtvovanih 16 tednov po gavaži in odvzemu ledvic.

Val (10 mg·kg－1·d－1) in decoction Tongluo Digui v treh različnih odmerkih so dajali z gavažo enkrat na dan 16 tednov. Aplicirani odmerki so temeljili na pretvorbeni enačbi za odmerke zdravil med živalmi in ljudmi. Odmerek za podgane (mg/kg)=odmerek za odraslega človeka (mg/kg) × pretvorbeni faktor (6,25). Skupinam z velikimi, srednjimi in nizkimi odmerki decokcije Tongluo Digui so dajali želodčno sondo 5,4, 2,7 oziroma 1,35 g·kg － 1·d － 1. Podgane so stehtali tedensko. 24--urni urin je bil zbran z uporabo presnovnih kletk ob koncu 0, 12 in 24 tednov. Po koncu zdravljenja (po 24 tednih) so podgane anestezirali s subkutano injekcijo kloralhidrata, vzorce ledvičnega in krvnega tkiva pa pobrali in shranili pri -80 stopinjah. Podgane so imele prost dostop do običajne prehrane laboratorijskih živali in čiste vode (razen kot je opisano spodaj).

rastlina cistanča

Vzpostavitev modela DN

STZ (Sigma, St. Louis, MO, ZDA) je bil uporabljen za induciranje sladkorne bolezni, kot je opisano prej.7 Vseh 60 podgan je imelo omejen dostop do vode 12 ur pred poskusi. Od teh je 50 podgan dobilo eno intraperitonealno injekcijo STZ 60 mg/kg, raztopljenega v citratnem pufru (0,1 mol/L, pH 4,5). Sladkorno bolezen so potrdili z merjenjem koncentracije glukoze v krvi 72 ur po injiciranju STZ. Živali s koncentracijo glukoze večjo ali enako 16,7 mmol/L tri zaporedne dni so bile obravnavane kot diabetične. Po 8 tednih so podgane namestili v ločene presnovne kletke in 24 ur zbirali urin za merjenje mikroalbumina v urinu (UAE). Model DN je bil potrjen ob pridobitvi UAE, večjega ali enakega 30 mg/24 h.

Biokemijski indikatorji

Ocene seruma in urina so bile uporabljene za oceno delovanja ledvic živali. Podganji urin je bil ocenjen z uporabo presnovne kletke. Vzorci podganje krvi so bili pridobljeni z metodo odreza repa.8 Vzorci seruma in urina so bili do uporabe zamrznjeni pri -80 stopinjah. Serumski kreatinin, dušik sečnine v krvi, albumin in koncentracije beljakovin v urinu so bile izmerjene z radioimunološkim testom. Ravni hemoglobina A1c (HbA1c), C-peptida in insulina so bile izmerjene s kompletom HbA1c ELISA (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, ZDA), kompletom C-peptid Elisa (Kainuo Bio Ltd., Peking, Kitajska) in insulinom Komplet Elisa (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, ZDA) po navodilih proizvajalca. Sečna kislina, skupni serumski protein (TP), albumin (ALB), alanin aminotransferaza (ALT) in aspartat aminotransferaza (AST) pri podganah so bili določeni z avtomatskim biokemičnim analizatorjem.

Histopatološki pregled

Ledvično tkivo, fiksirano s formalinom, je bilo vstavljeno v parafin, narezano na rezine debeline 3-4 μm in obarvano s periodično kislino-Schiff (PAS). Morfološke spremembe v ledvičnem tkivu, vključno s proliferacijo mezangialnih celic, celično infiltracijo in spremembami mezangialnega matriksa, so pregledali za vsak obarvan odsek s svetlobno mikroskopijo (NIKON D3100) (× 400).

Transmisijski elektronski mikroskop

TEM je bil uporabljen za opazovanje morfologije podocitov in mezangialnih celic v ledvičnem tkivu. Sveže ledvično tkivo smo razdelili na bloke (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analiza

Skupni protein je bil ekstrahiran iz ledvičnega tkiva s pufrom za lizo beljakovin (Solarbio Biotech, Peking, Kitajska). Koncentracije beljakovin v supernatantu so bile testirane s kompletom za testiranje BCA (Solarbio Biotech, Peking, Kitajska, PC0020). Vzorci, ki so vsebovali 40 ug beljakovin, so bili ločeni z elektroforezo v 12-odstotnem SDS-poliakrilamidnem gelu (SDS PAGE) (Applygen, Peking, Kitajska, B1004) in nato preneseni na nitrocelulozno filtrirno membrano (Solar bio Biotech, Peking, Kitajska). Po 2-urnem blokiranju s 5-odstotnim posnetim mlekom pri sobni temperaturi, -aktin (Proteintech, številka artikla: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, številka artikla: ab48394), P62 (Proteintech, številka artikla: 18420-1-AP), beclin-1 (protein tech, številka artikla: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, številka artikla: #5536), mTOR (CST, številka artikla: # 2983), nefrin (Abcam, številka artikla: ab58968) in podocin (vsak protein, številka artikla: 20384 -1-AP) smo dodali in inkubirali pri 4 stopinjah čez noč. To zmes smo nato petkrat sprali s TBS in 0,05 % Tween-20 (Solar bio Biotech, Peking, Kitajska) (TBS-T) 5 minut, preden smo dodali sekundarno protitelo (1∶2000) pred inkubacijo pri sobni temperaturi 1 uro, petkratno pranje s TBST po 5 minut, izpostavljanje razvijanju barve z izboljšano kemiluminiscenco (ECL, Millipore, Billerica, MA, ZDA) in izpostavljanje z uporabo programske opreme ImageJ za analizo trakov sivine.

Statistična analiza

Podatki so bili analizirani s programsko opremo SPSS (IBM SPSS Statistics for Windows, različica 23.0. 2014, Armonk, NY, ZDA). Razlike med skupinami so testirali z enosmerno analizo variance, ki ji je sledil Tukeyjev test. Podatki so bili izraženi kot povprečje ± standardni odklon. P <0,05 je="" veljalo="" za="">

luteolin

REZULTATI

Zaščitni učinek decokcije Tongluo Digui na ledvice podgan DN

Biokemični kazalniki, kot so glukoza v krvi, glikirani hemoglobin, serumski kreatinin, koncentracija dušika sečnine v krvi in ​​{{0}}-urna koncentracija beljakovin v urinu, so bili izmerjeni 16 tednov po gavaži. (Tabela 1). Rezultati so pokazali, da so bili v primerjavi z normalno skupino glukoza v krvi, glikirani hemoglobin, serumski kreatinin, koncentracija dušika sečnine v krvi, 24-urna koncentracija beljakovin v urinu, TP in ALB bistveno višji v modelni skupini (P < {{="" 7}}.01),="" kar="" kaže,="" da="" je="" imela="" modelna="" skupina="" okvarjeno="" delovanje="" ledvic.="" v="" skupini="" val="" sta="" se="" zmanjšali="" tako="" koncentracija="" kreatinina="" v="" serumu="" kot="" koncentracija="" beljakovin="" v="" 24-urnem="" urinu="" (p=""><0,05). poleg="" tega="" so="" v="" skupini="" z="" velikimi="" odmerki="" decoctiona="" tongluo="" digui="" opazili="" znatno="" zmanjšanje="" koncentracije="" glukoze="" v="" krvi,="" hba1c,="" serumskega="" kreatinina="" in="" dušika="" iz="" sečnine="" ter="" 24-urno="" izločanje="" urina="" (p=""><0,01). ti="" učinki="" so="" bili="" odvisni="" od="" odmerka.="" v="" vsaki="" skupini="" podgan="" ni="" bilo="" pomembnih="" razlik="" v="" ravneh="" sečne="" kisline,="" insulina,="" alt="" in="" ast.="" skupaj="" so="" naše="" ugotovitve="" pokazale,="" da="" je="" decokcija="" tongluo="" digui="" ublažila="" poškodbe="" ledvic="" in="" izboljšala="" delovanje="" ledvic="" pri="" podganah="" z="" dn="" na="" način,="" ki="" je="" odvisen="" od="">

Spremembe ledvične patologije DN pri podganah so bile ocenjene z barvanjem s PAS po zdravljenju z decokcijo Tongluo Digui (slika 1). V primerjavi z normalno skupino so v modelni skupini opazili znatno povečanje glomerularnih mezangialnih celic in mezangialne strome skupaj s širitvijo mezangialnega območja. Glomerularno mezangialno območje se je povečalo v vsaki od treh ravni odmerka decokcije Tongluo Digui in v skupini Val. Poleg tega so te štiri skupine zdravljenja zmanjšale širino mezangialnega matriksa v primerjavi z modelno skupino, glomerularno mezangialno območje v skupini z visokim odmerkom Tongluo Digui decoction pa je bilo manjše kot v skupini Val. Te ugotovitve so pokazale, da je decokcija Tongluo Digui upočasnila napredovanje glomerularnih lezij DN.

Vpliv decokcije Tongluo Digui na poškodbo glomerulnih podocitov pri podganah DN

Western blot analiza je bila uporabljena za določitev izražanja podocitnih markerskih proteinov nefrina in podocina (slika 2). V primerjavi z normalno skupino je bila ekspresija obeh proteinov v modelni skupini znatno zmanjšana (P < 0.01),="" kar="" kaže="" na="" poškodbo="" podocitov.="" poleg="" tega="" je="" bilo="" izražanje="" nefrina="" in="" podocina="" povečano="" v="" skupinah,="" ki="" so="" jemale="" decokcijo="" tongluo="" digui,="" v="" primerjavi="" z="" modelno="" skupino="" (p=""><>

Učinek decokcije Tongluo Digui na avtofagijo glomerularnih podocitov pri podganah DN

Pod TEM so opazili spremembe v avtofagosomih v glomerularnih podocitih (slika 3). Rezultati so pokazali avtofagosome v glomerularnih podocitih normalne skupine. V modelni skupini ni bilo avtofagosomov podocitov, prav tako so izginili procesi stopal podocitov. V treh skupinah odmerkov decokcije Tongluo Digui in skupini z valsartanom smo opazili avtofagosome glomerularnih podocitov, kar je nakazovalo, da je decokcija Tongluo Digui okrepila avtofagijo podocitov pri podganah DN. Western blot je bil uporabljen za odkrivanje izražanja z avtofagijo povezanih proteinov P62, beclin-1 in LC3 Ⅱ (slika 4). V primerjavi z normalno skupino je bila ekspresija beclin-1 in LC3Ⅱ v modelni skupini znatno zmanjšana (P < 0.01),="" medtem="" ko="" je="" bila="" ekspresija="" p62="" znatno="" povečana="" (p="">< 0.01).="" te="" ugotovitve="" so="" pokazale,="" da="" je="" bila="" avtofagija="" pri="" podganah="" dn="" oslabljena.="" v="" primerjavi="" z="" modelno="" skupino="" je="" imela="" skupina="" z="" visokim="" odmerkom="" decoction="" tongluo="" digui="" navzgor="" regulirano="" izražanje="" beclin-1="" in="" lc3ⅱ="" (p="">< 0,05),="" skupaj="" z="" znižanim="" izražanjem="" p62.="" skupaj="" so="" ti="" rezultati="" pokazali,="" da="" je="" lahko="" zaščitni="" učinek="" decokcije="" tongluo="" digui="" na="" ledvice="" pri="" podganah="" z="" dn="" povezan="" z="" okrepljeno="" avtofagijo="" v="" ledvičnih="">

Odvarek Tongluo Digui poveča avtofagijo glomerularnih podocitov pri podganah DN z zaviranjem fosforilacije mTOR

Zaviranje fosforilacije mTOR poveča avtofagijo (slika 5). V primerjavi z običajno skupino je bila fosforilacija mTOR v modelni skupini povečana (P < 0.01),="" medtem="" ko="" je="" bila="" v="" skupinah="" z="" decokcijo="" tongluo="" digui="" inhibirana="" (p="">< 0,05).="" to="" je="" nakazovalo,="" da="" je="" decokcija="" tongluo="" digui="" povečala="" avtofagijo="" podocitov="" z="" zaviranjem="" aktivacije="" signalne="" poti="" mtor.="" prejšnje="" študije="" so="" pokazale,="" da="" avtofagija="" ščiti="" podocite="" in="" izboljša="" delovanje="">

DISKUSIJA

Za DN so značilni predvsem znaki in simptomi, kot so prisotnost beljakovin v urinu, visoka raven glukoze v krvi, polidipsija, polifagija in poliurija. Simptomi so podobni tistim v tradicionalni kitajski medicini, kot so "Xiao Ke", "Guan Ge" in "edem". Pojav in razvoj DN sta neločljiva od patološke osnove pomanjkanja yina in zastoja krvi.6 Z razvojem pomanjkanja yina in zastoja krvi pride do postopoma okvarjenih ledvic, s čimer se kaže izguba beljakovin v urinu, kar nadalje vodi do tvorbe mikrotrombov in fibroza ledvic. Bolniki z DN neizogibno trpijo zaradi končne ledvične odpovedi.11

Zvarek Tongluo Digui je ustanovil Zhang Binghou, slavni zdravnik kitajske tradicionalne medicine, in na podlagi njegovih dolgoletnih izkušenj pri zdravljenju DN.12, 13 Zvarek Tougluo Digui je sestavljen iz Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Med njimi sta Shuizhi (Hirudo) in Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) monarhovi zdravili, za katera menimo, da imata vlogo pri hranjenju Yina in spodbujanju krvnega obtoka v DN. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) izboljša imunost in sekretorno stanje telesa ter upočasni staranje.14 Shuizhi (Hirudo) ima med drugimi farmakološkimi učinki antikoagulantne, protitumorske, protivnetne in antifibrotične učinke ter lahko izboljša delovanje ledvic patološke spremembe v DN, da bistveno zmanjšajo serumski kreatinin in koncentracije dušika sečnine v krvi ter zmanjšajo izločanje beljakovin z urinom.15,16 Pri DN igra poškodba podocitov pomembno vlogo pri filtracijski pregradi glomerularne bazalne membrane in pri nastanku proteinurije.17 Nefrin in podocin sta proteina porne membrane na površini podocitov. Proteina medsebojno delujeta in tvorita kompleks, ki ima ključno vlogo pri delovanju pregrade za glomerularno filtracijo.18 Nenormalna porazdelitev izražanja proteina vodi do različnih stopenj proteinurije.19 V tej študiji so podgane tipa 1 DN, ki jih povzroča STZ, pokazale povečanje pri izločanju beljakovin z urinom in okvarjenem delovanju ledvic v 24 urah. Poleg tega je barvanje s PAS pokazalo, da se je število mezangialnih celic in mezangialnega matriksa povečalo v modelni skupini, kar kaže, da je bil model uspešno vzpostavljen. Različni odmerki decokcije Tongluo Digui so zmanjšali 24-urne koncentracije beljakovin v urinu in serumskega kreatinina ter izboljšali ledvično patologijo podgan z DN z zmanjšanimi mezangialnimi celicami in matriksom. Western blot analiza je pokazala, da je bila ekspresija nefrina in podocina v skupini z decokcijo Tongluo Digui višja v primerjavi s tisto v modelni skupini, kar kaže, da ta formula upočasni napredovanje DN pri podganah z zaščito podocitov.

Avtofagija je pot za razgradnjo lizosomskih proteinov v celicah in ima ključno vlogo pri očistku poškodovanih ali prekomerno izraženih proteinov, ki vzdržujejo celično homeostazo in celovitost.20 Avtofagija je sestavni del lizosomske homeostaze podocitov pri sladkorni bolezni in okrepljena avtofagija lahko zmanjša poškodbe podocitov .5 Po specifičnem izločitvi z avtofagijo povezanega gena Atg5 v podocitih so miši postopoma pokazale vseprisotno agregacijo beljakovin, mitohondrijsko poškodbo in aktivnost avtofagije v podocitih; podociti so se poškodovali in nožni procesi so izginili in se združili, kar je pokazalo, da se je avtofagija ohranila. Ohranjanje normalne funkcije podocitov je pomembno. 21, 22 V tej študiji smo raziskali učinek decokcije Tongluo Digui na avtofagijo v glomerularnih podocitih z uporabo TEM in Western blot analize. TEM je pokazala, da se je število avtofagosomov podocitov v vsaki skupini odmerkov decokcije Tongluo Digui povečalo v primerjavi z modelno skupino. Poleg tega je Western blot pokazal izražanje z avtofagijo povezanih proteinov LC3, beclin-1 in p62. V primerjavi z modelno skupino je bila ekspresija LC3Ⅱ in beclin-1 znatno povečana v skupini z decokcijo Tongluo Digui, medtem ko se je ekspresija proteina p62 znatno zmanjšala. Te ugotovitve so pokazale, da je decokcija Tongluo Digui povečala stopnjo avtofagije v glomerularnih podocitih.

Rapamycin target protein (mTOR) je eden glavnih regulatorjev avtofagije. 23 Široko je porazdeljen v ledvični skorji in meduli ter igra vlogo pri razvoju poškodbe podocitov DN. 24, 25 V situacijah visoke glukoze in stresa je mTOR se aktivira in fosforilira, kar vodi do fosforilacije njegovih spodnjih ciljev in zaviranja avtofagije. Liu in drugi 26 so pokazali, da se zaviralec mTOR, rapamicin, specifično veže na mTOR kinazo in zavira aktivnost mTOR, poveča avtofagijo podocitov in zaščiti delovanje ledvic. Ugotovili smo, da je bila fosforilacija mTOR povečana v modelni skupini in da je decokcija Tongluo Digui zavirala ta proces, kar je nakazovalo, da je dekokcija Tongluo Digui povečala avtofagijo v podocitih in lahko zavira aktivacijo signalne poti mTOR.

Če povzamemo, decokcija Tongluo Digui lahko zavre avtofagijo v podocitih, zaščiti glomerularne podocite, ohrani celovitost glomerularne filtracijske membrane, zmanjša 24-urno izločanje beljakovin v urinu in upočasni napredovanje DN z zaviranjem aktivacije mTOR. Te ugotovitve zagotavljajo vpogled v nadaljnje razumevanje zaščitnega učinka decokcije Tongluo Digui pri DN, vendar je treba osnovni mehanizem še pojasniti.

kaj je cistancheza bolezni ledvic

REFERENCE
1 Tesch GH. Diabetična nefropatija - ali je to imunska motnja? Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS, et al. Biologija podocitov pri diabetični nefropatiji. Kidney Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Avtofagija podocitov: potencialna terapevtska tarča za preprečevanje napredovanja diabetične nefropatije. J Diabetes Res 2017; 2017(4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Avtofagija: obnova celic in tkiv. Celica 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S, et al. Oslabljena avtofagija podocitov poslabša proteinurijo pri diabetični nefropatiji. Sladkorna bolezen 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Študija o zakonu porazdelitve TKM sindroma diabetične nefropatije. Peking Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Mehanizem delovanja aloksana in streptozotocina v celicah B pankreasa podgan. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Učinkovitost decokcije Qingre Lishi Yishen na glomerularno fibrozo imunoglobulinske nefropatije v modelu podgan. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR pri delovanju podocitov: ali je rapamicin dober za diabetično nefropatijo? Celični cikel 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. Avtofagija vpliva na dovzetnost za glomerularno bolezen in vzdržuje homeostazo podocitov pri starajočih se miših. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP et al. Pregled zeliščne tradicionalne kitajske medicine za zdravljenje diabetične nefropatije. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y, et al. Uporaba Zhang Binghoujeve hranljive ledvične Yin metode pri zdravljenju kronične ledvične bolezni. Peking Zhong Yi Yao 2016; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Predstavitev aplikacijskih izkušenj profesorja Zhang Binghouja. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Pregled raziskav o farmakodinamiki kornjače "Ziyin Bushen". Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Napredek raziskav pijavke in njenih izvlečkov pri zdravljenju diabetične nefropatije. Guang Ming Zhong Yi 2019; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Napredek raziskav pijavke in njenih učinkovin pri zdravljenju diabetične nefropatije Zhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Napredek raziskav o mehanizmu izčrpavanja podocitov pri diabetični nefropatiji. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nefrinsko signaliziranje v podocitu: posodobljen pogled na regulacijo signala na režni diafragmi in zunaj nje. Front Endocrinol (Lausanne) 2018; 9: 302.
19 Jaakko P, Karl T. Molekularna sestava glomerularne filtracijske pregrade. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Avtofagija se bori proti bolezni s pomočjo celične samoprebave. Narava 2008; 451 (7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. Endotelna celica
in avtofagija podocitov sinergistično ščitijo pred glomerulosklerozo, ki jo povzroča sladkorna bolezen. Avtofagija 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Poškodba podocitov pri diabetični nefropatiji: posledice aktivacije TRPC kanalov, odvisne od angiotenzina Ⅱ. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 kot glavni prehod v avtofagijo. Eseji Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: farmakološka tarča za regulacijo avtofagije. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z, et al. Triptolid obnovi avtofagijo za ublažitev diabetične ledvične fibroze po poti miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Zaščitni učinki rapamicina na celično avtofagijo v ledvičnih tkivih podgan z diabetično nefropatijo prek signalne poti mTORS6K1-LC3 Ⅱ. Ren Fail 2018; 40(1): 492-497.