Antioksidativni učinki feniletanoidov iz Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 in Tsuneo Namba"

Izvleček aceton-H2O (9:1) iz stebla Cistanche deserticola je pokazal močno aktivnost lovljenja prostih radikalov. Iz tega izvlečka je bilo izoliranih devet glavnih feniletanoidnih spojin. Z NMR so jih identificirali kot akteozid, izoakteozid, l^acetilakteozid, tubulozid B, ehinakozid, tubulozid A, siringalid A, 3z-a-ramno-piranozid, cistanozid A in cistanozid F. Vse te spojine so pokazale močnejše aktivnosti lovljenja prostih radikalov kot a -tokoferol na radikalu 1,1 -difenil-2-pikrilhidrazi 1 (DPPH) in superoksidni anionski radikal (Oj), ki ga generira ksantin/ksantin oksidaza (XOD). Med devetimi spojinami sta izoakteozid in tubulozid B, katerih kafeoilni del je na d'-položaju glukoze, pokazala zaviralni učinek na XOD. Nadalje smo proučevali učinke teh feniletanoidov na peroksidacijo lipidov v mikrosomih jeter podgan, inducirano z encimskimi in neencimskimi metodami. Kot je bilo pričakovano, je vsak od njih pokazal pomembno inhibicijo peroksidacije lipidov, povzročene z askorbinsko kislino/Fe2 plus in ADP/NADPH/Fe3 plus v mikrosomih jeter podgan, ki sta bili močnejši od a-tokoferola ali kofeinske kisline. Ugotovljeno je bilo, da se antioksidativni učinek potencira s povečanjem števila fenolnih hidroksilnih skupin v molekuli.

Ključne besede: Cistanche deserticola; feniletanoidi;antioksidant; DPPH (1,1 -difenil-2-pikrilhidrazil) radikal; superoksidni anionski radikal; lipidna peroksidacija

steblo Cistanche deserticola

Steblo Cistanche spp. (Cistanche Herba, družina Orobanchaceae) je tonik v tradicionalni kitajski medicini, ki se uporablja pri okvari ledvic, za katero so značilni impotenca, občutek mraza v ledjih in kolenih, ženska neplodnost in zaprtje zaradi suhega črevesja v senilni dobi.Iz teh rastlin so izolirali številne sestavine, vključno s feniletmoidi (včasih imenovanimi fenilpropanoidi),2) iridoidi3* in polisaharidi4). Sato et al5} so poročali, da so nekateri feniletanoidi iz te surove droge pokazali zaščitni učinek proti zmanjšanju spolnega in učnega vedenja pri visečih miših, obremenjenih s stresom. Feniletanoidi so glavne sestavine teh rastlin in velja, da prispevajo k različnim učinkom tega zdravila.6)

Feniletanoidi so zelo razširjeni v rastlinskem kraljestvu in za nekatere je bilo ugotovljeno, da delujejo proti anoksiji,7) proti neoplazmi,8) zavirajo encime,9* protivnetno,10) delujejo proti nefritisu,1 n proti mikroorganizmom in imunomodulacija.12) Poročali so tudi o študijah o antioksidativnem delovanju nekaterih feniletanoidov iz vrste Pedicularis, 13 -15), vendar ni bilo nobenega poročila, ki bi obravnavalo antioksidativno delovanje feniletanoidov iz vrste Cistanche.

Dobro je znano, da so prosti radikali kritično vpleteni v različne patogeneze, kot so rak, kardiovaskularne motnje, artritis, vnetja, kot tudi v degenerativnih procesih, povezanih s staranjem.16™18) V našem pregledu za sredstva proti staranju iz naravnih virov smo ugotovili, da je vsak od CHC13 (C), EtOAc (E), acetona (A), aceton-H2O (9:1) (AH) in vodnega (H) ekstrakta stebla Cistanche deserticola pokazal močan DPPH aktivnost lovljenja radikalov (slika 1), med katerimi je najmočnejšo izkazoval aceton-H2.(9:1) ekstrakt (AH). Ekstrakt aceton-H2O (9:1) je vseboval visoko razmerje feniletanoidov, ki so bili verjetno aktivne sestavine učinkov lovljenja prostih radikalov. Izolirali smo glavne feniletanoide iz tega izvlečka in preučevali antioksidativne učinke z njihovim lovljenjem na radikal DPPH in superoksidni anionski radikal, ki ga ustvari ksantin/XOD, ter njihovo inhibicijo peroksidacije lipidov, ki jo povzroča askorbinska kislina/Fe2 plus in ADP/NADPH/Fe3 plus v jetrih podgan. mikrosomi.

Cistanche deserticola

MATERIALI IN METODE

Reagenti Poliamid C-200 (75一150/zm) in silikagel (Wakogel C-200, 75—150^m) prašek za kolonsko kromatografijo, DPPH (1,1 -difenil{{ 8}}pikrilhidrazil), ksantin, XOD (ksantin oksidaza), NBT (nitromodri tetrazolij), ADP, g-NADPH, kofeinska kislina in a-tokoferol so bili kupljeni pri Wako Pure Chemicals, Osaka, Japonska. Malonaldehid bis(dimetilacetal) je bil iz Tokio Kasei, Tokio, Japonska. BSA (goveji serumski albumin) in alopurinol sta bila iz sigme, St. Louis, ZDA Druge kemikalije so bile analitske stopnje.

Instrumenti UV absorbanco smo izmerili na aSnemalni spektrofotometer Shimadzu UV-2200, NMR spektri so bili posneti na JEOL GX-400 ali JEOL JNM-LA 400WB FT NMR sistemu.

Rastlinski material Komercialno surovo zdravilo (proizvedeno v Nei Monggol, kupljeno na trgu surovih zdravil Bozhou, provinca Anhui, Kitajska, 1995; vzorci kupona, TMPW št. 15479, deponirani v Muzeju Materije Medice, Analitični raziskovalni center za etnomedicino, Raziskave Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) je bil identificiran kot stebla Cistanche deserticola YC Ma s primerjavo njegovih morfoloških in anatomskih lastnosti z avtentičnim vzorcem, ki ga je zagotovil profesor Dawen Shi, Oddelek za farmakognozijo, Šanghajska medicinska univerza, Kitajska.

Ekstrakcija in izolacija Surovo zdravilo v prahu (5,87 kg) smo zaporedoma ekstrahirali s CHC13 (12, 9 1x2) in EtOAc (9 1 x 3) pri sobni temperaturi in refluktirali z acetonom (9 1 x 3), aceton-玦0 (9:1,91x3) in H2O (7.5 1x4), da dobimo ekstrakte CHC13 (C) (28,7 g), EtOAc (E) ( 13,4 g), aceton (A) (95 g), aceton-H2O (9:1) (AH) (175 g) oziroma H2O (H) (2,51 kg). Del 100g ekstrakta aceton-H2O (9:1) smo izpostavili poliamidni C-200 (4{{50}}0 g) koloni in eluirali s H2O ({{41 }}) in nato MeOH (5 1). Eluent MeOH (20 g) smo napolnili v kolono s silikagelom (600 g) in eluirali s CHCl3-MeOH-H2O (8:3:0,3) (5 1), da smo dobili 10 frakcij. Vsako frakcijo smo izpostavili Sephadex LH-20 koloni in eluirali z različnimi razmerji MeOH-H2O (0 一50 odstotkov); devet glavnih feniletanoidov 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) Dobili smo 9 (75 mg).

Živali Samci Std: Uporabljene so bile podgane Wistar (stare 8 tednov, 230 一 250 g). Živali so bile kupljene pri Shizuoka Laboratory Animal Center in so jih hranili z laboratorijsko hrano na pelete (Clea Japan) in jim dali vodo ad libitum.

Priprava mikrosomske suspenzije podganjih jeter Frakcijo mikrosomov jeter podgan smo pripravili po metodi Kiso et al.19), vendar brez predhodne obdelave s fenobarbitalom. Po 24-urnem postu živali so bila jetra perfundirana z ledeno 0.9-odstotno raztopino NaCl in situ, nato narezana na tanke kose in homogenizirana v hladni 1,15-odstotni raztopini KC1 (1.{{9} } ml/g teže mokrih jeter). Homogenat smo štirikrat razredčili z 1,15-odstotno raztopino KC1 in centrifugirali pri 8000 g 20 minut pri 4 stopinjah. Frakcijo supernatanta smo nato zbrali in ultracentrifugirali pri 105000 g 60 minut. Dobljeno peleto resuspendiramo v istem volumnu 1,15-odstotne raztopine KC1. Vsebnost beljakovin je bila določena z metodo Lowry et al z uporabo albumina kot standarda.

Priprava vzorcev Testirane vzorce smo raztopili v vodi ali etanolu in razredčili z vodo do različnih koncentracij. Končne koncentracije etanola so bile pod 1 odstotkom v vseh testnih sistemih, razen pri testu odstranjevanja radikalov DPPH. Etanol pri končni koncentraciji pod 1 odstotkom ni pokazal nobenega učinka na te testne sisteme.

Učinek čiščenja radikalov DPPH Učinek čiščenja je ustrezal intenzivnosti dušenja radikala DPPH, kot so opisali Hatano et al.21) Petsto /A 60 µm DPPH v EtOH smo dodali 500 /zl raztopine vzorca in pustili reagirati za 30 minut pri sobni temperaturi, nato smo izmerili optično gostoto pri 520 nm. Za slepo smo namesto raztopine DPPH uporabili EtOH, za kontrolo pa namesto raztopine vzorca H2O. Vrednosti IC50 so bile izračunane iz regresijskih črt, kjer je abscisa predstavljala koncentracijo testirane spojine, ordinata pa povprečni odstotek zmanjšanja radikala DPPH iz štirih ločenih testov.

Učinki na generiranje superoksidnih anionskih radikalov Proizvodnja superoksidnih anionov v sistemu ksantin/XOD je bila določena z uporabo polovične velikosti metode Imanarija et al.22) Mešanica, sestavljena iz 900/zl 0.05 m Na2CO3 (pH 10,2), 50 /il vsakega od 3 mM ksantina, 3 mM EDTA, 1,5 mg/ml BSA, 0,75 mM NBT in testiranemu vzorcu smo dodali 50 /il 0,1 mg/ml XOD za začetek reakcija. Po 30-minutni inkubaciji smo reakcijo zaustavili s 50 ul 6 mM CuCl2 in izmerili absorbanco pri 560 nm. Kontrolno raztopino smo pripravili na enak način, le da smo namesto raztopine vzorca uporabili 50 /il H2O. V slepi raztopini smo namesto raztopine XOD uporabili 50 /il H2O. Vrednosti IC50 so bile izračunane iz regresijskih črt, kjer je abscisa predstavljala logaritem koncentracije testirane spojine, ordinata pa srednji odstotek inhibicije zmanjšanja NBT štiri v odvisnih testih.

Inhibitorni učinki na aktivnost XOD Inhibitorni učinki na aktivnost XOD so bili ocenjeni z metodo Hatano et al.* z nekaterimi modifikacijami. Mešanica, sestavljena iz 600/11 pufra (0.1 m raztopina fosfata, pH 7,5), 50 以 raztopine XOD (0,068 U/ml v pufru) in 50 卩 1 raztopine vzorca smo predhodno inkubirali 10 minut pri 25 stopinjah. Nato smo mešanici dodali 300 ul raztopine ksantina (0,1 mM v pufru) in nastalo raztopino inkubirali 30 minut pri 25 stopinjah. Encimsko reakcijo smo zaključili z dodatkom 1 n HCl (100 /zl) in izmerili absorbanco reakcijske mešanice pri 295 nm. Koncentracijo sečne kisline, nastale v zmesi, smo izračunali iz absorbance po odštevanju absorbance slepe raztopine, ki je bila pripravljena, kot je opisano zgoraj, razen da je bila raztopina XOD nadomeščena s 50 /zl pufra. Zaviralni učinki na XOD so bili izraženi z odstotkom inhibicije (odstotek) tvorbe sečne kisline v primerjavi s tistim pri kontroli, pri kateri je bila namesto raztopine vzorca uporabljena voda. Kot pozitivno kontrolo smo uporabili dobro znani zaviralec XOD, alopurinol.

Inhibitorni učinki na peroksidacijo lipidov v mikrosomih jeter podgan Peroksidacijo lipidov v mikrosomih jeter podgan, neencimsko inducirano z askorbinsko kislino/Fe2 plus in encimsko inducirano z ADP/NADPH/Fe3 plus, smo izmerili z metodo Kiso et al. 19) z nekaterimi modifikacijami. .

a) Askorbinska kislina/Fe2 in povzročena peroksidacija lipidov v mikrosomih jeter podgan: Reakcijska mešanica je bila sestavljena iz 390/11 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 pl mikrosomske frakcije v 1,15 odstotkih KC1 (20 mg beljakovin/ml) in 50 以 raztopine vzorca. Po dodajanju 10/11 10 mM askorbinske kisline/0,5 mM FeSO4 in nato inkubaciji pri 37 stopinjah 20 minut smo reakcijsko zmes ohladili na ledu, da smo zaustavili reakcijo. Peroksidacijo lipidov smo izmerili z metodo tiobarbiturne kisline24) in jo izrazili kot proizvodnjo MDA (malondialdehida). to

b) ADP/NADPH/Fe3 plus inducirana peroksidacija lipidov v mikrosomih jeter podgan: Reakcijska mešanica je vsebovala 290贝 100 mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il mikrosomske suspenzije v 1,15 odstotku KC1 (20 mg beljakovin/ml) in 50 µv vzorca v vodi. Dodali smo 50 sveže pripravljenih 20 mM ADP, 50 mL 1 mM NADPH in 10 2 mM FeCl3 in nato inkubirali pri 37 stopinjah 30 minut. Izmerili smo peroksidacijo lipidov in izračunali IC50 po zgornji metodi.

koristi cistanche: ščiti jetra

REZULTATI

Določanje strukture Z neposredno primerjavo podatkov ^H-NMR in 13C-NMR z literaturo2* je bilo devet feniletanoidov identificiranih kot 2,-acetilakteozid (1), cistanozid A (2), tubulozid A (3), ehinakozid ( 4), akteozid (5), siringalid A 3'-a-ramnopiranozid (6), tubulozid B (7), izoakteozid (8) oziroma cistanozid F (9) (slika 2). Vendar pa je za akteozid, reprezentativno spojino feniletanoidov, dodelitev 13C-NMR signalov C-3 in C-4 v aglikonskem delu, C-3, C-4 , C-5 in C-6 v kofeinskem delu v prejšnjih poročilih25) so bili zmedeni. Z metodo 2D-NMR, kot sta HMBC in HMQC, smo nedvoumno dodelili podatke 13C-NMR za akteozid kot aglikonski del Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144.62, C-5: 116.34, C-6: 121.29, Ca: 72.33, C# 36.54; kofeoilni del Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; glukozni del C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; in del ramnoze: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C-6 : 18,46.

Razmerja med strukturo in aktivnostjo so proučevali za teh devet feniletanoidov z njihovimi aktivnostmi odstranjevanja radikalov DPPH in superoksidnih anionskih radikalov, ki jih je ustvaril ksantin/XOD, peroksidacijo lipidov, povzročeno z askorbinsko kislino/Fe2 plus in ADP/NADPH/Fe3 plus v mikrosomih jeter podgan. Kofeinska kislina in a-tokoferol, ki sta dobro znana lovilca prostih radikalov in antioksidanta, sta bila uporabljena kot snovi pozitivne kontrole.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>siringalid A S'-a-ramnopiranozid (6) (IC5O=5,52 /zm) > cistanozid F (9) (IC50=6,29 /im) > a-tokoferol (IC{{10 }}.2//m). Tubulozid B ⑺, ehinakozid (4), 2/-acetilacetozid (1), tubulozid A (3), akteozid (5) in izoakteozid (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), od katerih vsak ima štiri fenolne hidroksilne skupine v molekuli, je podobno pokazal močnejšo aktivnost kot cistanozid A (2), katerega 3-OH aglikonskega dela je bil metiliran. Siringalid A 3z-a-ramnopiranozid (6), ki ima samo eno OH skupino v aglikonskem delu, je pokazal relativno šibko aktivnost. Cistanozid F (9), ki ima samo dve hidroksilni skupini, ki se nahajata na kofeoilnem delu, vendar nima feniletanol aglikona, je pokazal najšibkejšo aktivnost.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanozid A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 〃m).

Inhibitorni učinki na aktivnost XOD Samo izoakteozid (8) in tubulozid B (7), katerih kafeoilni del je na 6z-položaju glukoze, sta imela zaviralne učinke na aktivnost XOD in drugi feniletanoidi, ki imajo kafeoilni del na ^- položaja glukoze, niso pokazale učinkov pri testiranih koncentracijah (25 一200 m) (tabela 1). izolirali devet glavnih feniletanoidnih spojin iz tega ekstrakta in določili njihove strukture z NMR. sistem kot tubulozid B (7)M2'-acetilakteozid (1) izoakteozid (8) ehinakozid (4) tubulozid A (3) M akteo stran (5) > siringalid A 3'-a-ramnopiranozid (6) > cistanozid A (2) > cistanozid F (9); v sistemu ADP/NADPH/Fe3 plus kot tubulozid B (7)2,-acetilakteozid (^^iso akteozid (8) akteozid (5) > tubulozid A (3) > ehinako stran (4) > siringalid A 3z-a-ramnopiranozid (6) > cistanozid A (2) > cistanozid F (9). Oba vrstna reda sta bila podobna tistemu v zgornjih testih za lovljenje prostih radikalov, zlasti v testu za lovljenje radikalov DPPH. Kljub temu je število fenolnih hidroksilnih skupin v molekuli je imel najpomembnejšo vlogo pri zaviranju peroksidacije lipidov v mikrosomih jeter podgan.

učinki cistanche

DISKUSIJA

Preizkusili smo aktivnost lovljenja prostih radikalov različnih topilnih ekstraktov stebla Cistanche deserticola na radikal DPPH in ugotovili, da je izvleček aceton-H2O (9:1) pokazal najmočnejšo aktivnost. Da bi našli aktivne sestavine aktivnosti lovljenja prostih radikalov, smo iz tega ekstrakta izolirali devet glavnih feniletanoidnih spojin in določili njihove strukture z NMR.

Antioksidativne učinke teh feniletanoidov so ovrednotili z njihovo aktivnostjo lovljenja prostih radikalov in aktivnostjo proti lipidni peroksidaciji. Splošno znani a-tokoferol je bil uporabljen kot pozitivna kontrolna snov. Kot jelipofilnost a-tokoferola lahko vpliva na njegove aktivnosti v sedanjih testnih sistemih, razen pri testu odstranjevanja radikalov DPPH, ko smo kot drugo pozitivno kontrolno snov vzeli kofeinsko kislino.

Najprej smo izvedli teste aktivnosti lovljenja prostih radikalov. Vseh 9 testiranih feniletanoidov je nedvomno pokazalo močnejše lovilne aktivnosti radikalov DPPH in radikalov superoksidnih anionov kot a-tokoferol, vendar so bili nekateri močnejši, drugi pa šibkejši od kofeinske kisline. Aktivnost lovljenja radikalov se je povečala s povečanjem števila fenolnih hidroksilnih skupin. Verjamemo, da je nepopolna vzporednost aktivnosti odstranjevanja radikalov DPPH in superoksidnih anionov posledica različnih lastnosti med vrstami radikalov in nekaterih drugih dejavnikov, vključenih v ta dva reakcijska sistema, 21, 26), ker je radikal DPPH kemično induciran radikal, ki reagira z lovilci radikalov na preprost kemični način, medtem ko superoksidni anionski radikal nastane s ksantinom/XOD, encimsko reakcijo.

Če feniletanoidi inhibirajo superoksidni anionski radikal, ki ga ustvari ksantin/XOD, lahko zaviranje štejemo za rezultat njihove aktivnosti lovljenja superoksidnih anionskih radikalov ali (in) njihove inhibicije encima XOD,23), zato smo izvedli test njihovega zaviralne učinke ksantin oksidaze. Zanimivo je, da sta selektivno inhibicijo pokazala le izoakteozid (8) in tubulozid B (7), katerih kafeoilni del je na 6/-položaju glukoze. Pokazali so učinek pri koncentraciji 25—200 jtiM na 3,4xlO^3U/ml (10jug/ml) XOD, čeprav je bila aktivnost šibkejša od alopurinola; druge spojine, katerih kafeoilni del je na《-položaju glukoze, niso pokazale zaviralnih učinkov. Ta rezultat je zagotovil prvo poročilo o zaviralnem učinku feniletanoidov na encim XOD. Chan et al21) so poročali, da so imeli kofeinska kislina in nekateri njeni analogi zaviralne učinke na aktivnost XOD, vendar nismo našli takšnega učinka kofeinske kisline v sedanjih reakcijskih pogojih. Pri tem testu je bila koncentracija XOD podobna kot pri testu vpliva na nastajanje superoksidnega anionskega radikala (4,3 /zg/ml), vendar je bila koncentracija spojin veliko višja kot pri slednjem. Zato je zaviranje nastajanja Oj s temi feniletanoidi posledica njihove aktivnosti lovljenja radikalov, ne pa njihove inhibitorne aktivnosti encima XOD.

Da verižna reakcija prostih radikalov končno vodi do peroksidacije lipidov, je dobro znano. 28, 29) Te feniletanoidne spojine smo zato proučevali glede njihovih učinkov na peroksidacijo lipidov v mikrosomih jeter podgan, ki jo inducira encimski sistem ADP/NADPH/Fe3 plus in tisto, ki jo inducira neencimski sistem askorbinska kislina/Fe2 plus . Vse te spojine so pokazale močnejše učinke proti lipidni peroksidaciji kot kofeinska kislina in a-tokoferol v obeh sistemih. Splošno sprejeto je, da oba sistema katalizirajo železovi ioni, bodisi Fe2 plus ali Fe3 plus, ki sodelujejo z lipidnimi peroksilnimi radikali,30,31) in da ima hidroksilni radikal OH najpomembnejšo vlogo pri peroksidaciji lipidov,32 _34) čeprav je bila iniciacija OH v nekaterih poročilih postavljena pod vprašaj.35祁6) Po drugi strani pa je superoksidni anionski radikal OJ, ki je primarni produkt napada e_ na O2 v verigi radikalov, precej slab reaktiven radikal in ne povzroči same peroksidacije lipidov. Čeprav so ti feniletanoidi pokazali šibkejšo lovilno aktivnost na superoksidnem anionskem radikalu kot kofeinska kislina, so pokazali veliko močnejše delovanje proti lipidni peroksidaciji kot slednja. Zato menimo, da lahko, tako kot nekateri drugi aromatski polifenoli, ki prekinjajo verige, zavirajo zgornjo peroksidacijo lipidov v mikrosomih jeter podgan s keliranjem ionov Fe2 plus ali Fe3 plus in tudi z lovljenjem superoksidnega radikala Oj, da razgradijo radikalno verižno reakcijo .37,38) Poleg tega lahko lovijo tudi bolj strupene vrste radikalov, kot so hidroksilni radikali in lipidni peroksilni radikali, da neposredno prekinejo peroksidacijo lipidov z večjo močjo kot kofeinska kislina.38,39)

Li et al. proučevali nekatere feniletanoidne glikozide, vključno z akteozidom (verbaskozidom) (5), izoakteozidom (izoverbaskozidom) (1) in ehinakozidom (4) iz Pedicularis za njihovo zaviranje avtooksidacije linolne kisline v micelih, nebiološkem sistemu,13) za njihovo zaščito pred oksidativno hemolizo in vitro,14''1 in tudi za njihove čistilne učinke na NBT/PMS/NADH ustvarjeni superoksid in inhibicijo peroksidacije lipidov, ki jo inducira askorbinska kislina/Fe2 plus v mikrosomih mišjih jeter.15) Podobna aktivnost -strukturno razmerje je bilo opaženo v poročilih Li et al. in naši rezultati. To pomeni, da so aktivnosti feniletanoidov za zaviranje peroksidacije lipidov odvisne predvsem od števila in sterične lege fenolnih hidroksilnih skupin.15) Na podlagi njihove stereo kemije so fenolne hidroksilne skupine kafeoilnega dela na akteozidu (5), tubulozid A ( 3) in ehinakozid (4), ki imata kafeoil na 4z-položaju glukoze, bi lažje tvorila vodikovo vez s hidroksilnimi skupinami ramnozila kot tista na izoakteozidu (8) in tubulozid B (7), ki imajo kafeoil na 6'- položaju glukoze. Tako je slednji rezerviral več prostih fenolnih hidroksilnih skupin kot prvi in ​​je zato pokazal močnejšo aktivnost proti lipidni peroksidaciji. Opazili smo tudi, da je 2z-acetilacija teh feniletanoidov, čeprav rahlo, povečala njihove antioksidativne učinke. Na primer, akteozid (5) in izoakteozid (8), ko sta bila 2'-acetilirana v 2/-acetilakteozid (1) oziroma tubulozid B (7), sta pokazala močnejše aktivnosti v vseh štirih testnih sistemih. Zaradi superiornosti stereokemije in 2'-acetilacije je tubulozid B (7) pokazal najmočnejšo antioksidativno aktivnost med testiranimi vzorci. Morda zaradi zamenjave tretjega sladkornega dela na položaju 6'~ ta ​​korelacija ni ustrezala dobro v primeru tubulozida A (3) ali ehinakozida (4); vendar je v sistemu ADP/NADPH/Fe3 plus tubulozid A ⑶ še vedno pokazal močnejšo aktivnost proti lipidni peroksidaciji kot ehinakozid (4).

Poleg tega je vrstni red aktivnosti odstranjevanja radikalov DPPH pokazal boljšo vzporednost z aktivnostjo proti lipidni peroksidaciji kot vrstni red aktivnosti odstranjevanja radikalov superoksidnega aniona. To je znova dokazalo, da je analiza čiščenja radikalov DPPH priročna in zanesljiva metoda za analizo antioksidantov, 26), čeprav je radikal DPPH kemično induciran radikal, medtem ko je lahko superoksidni anionski radikal biološko endogeni radikal.

Skratka, vseh devet feniletanoidov je v tej študiji pokazalo pomembne aktivnosti lovljenja prostih radikalov in učinke proti peroksidaciji lipidov. Antioksidativni učinek je bil potenciran s povečanjem števila fenolnih hidroksilnih skupin v molekuli. Kot si lahko predstavljamo, imajo lahko tukaj dokazani antioksidativni učinki teh feniletanoidov pomembno vlogo pri delovanju zdravila Cistanchis Herba in lahko delno pojasnijo mehanizme delovanja nekaterih fenil etanoidov proti neoplazmi,8* vnetju10) in nefritisu, 1 n, v kateri so resno vpleteni prosti radikali.

Cistsanche Echinacoside: Antioksidacija

REFERENCE

1) Namba T., "Enciklopedija Wakan-Yaku (tradicionalna kitajsko-japonska medicina) z barvnimi slikami, 5, Zv. II, Hoikusha, Tokio, 1994, str. 16-17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. BulL, 32, 3009—3014 (1984); b) Idem, ibid., 32, 3880—3885 (1984); c) Idem, ibid., 33, 1452—1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562-566 (1986); e) Idem, ibid., 106, 721—724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729—1734 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709—715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131-1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・, Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456—58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4 Glikozidni estri kofeinske kisline in farmakologija/ ed. avtor Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, izdaje INRA, Pariz, 1993, str. 237-245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Phys. Lipidi. 65, 151—154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, American Pharmacy. 34, 26一35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949—956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265-275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496-497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T., Yoshihara R., Agata L., Noro T., Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 38, 1224—1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351一358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481-85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Fitokemija. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid,, 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (London), 181, 1199-1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Buettner GR, arh. Biochem. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Matične celice, 12, 289–303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Methods Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biophys. Res, Commun., 108, 1025一1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 945一951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241—251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biophys. Res, Commun., Ill, 777—784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Pharm. Bull.. 19, 779—782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch LA, Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837-841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・, Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695一702 (1995)