Imunski odziv gostitelja na površinske proteine ​​S-plasti (SLP) Clostridioides Difficile

Povzetek:

Clostridioides difficile, nozokomialni patogen, je nastajajoči črevesni patobiont, ki povzroča drisko, povezano z antibiotiki. Okužba s C. difficile vključuje črevesno kolonizacijo in prekinitev črevesne epitelijske pregrade, kar povzroči indukcijo vnetnih/imunskih odzivov. Izražanje dveh glavnih eksotoksinov, TcdA in TcdB, je glavni vzrok za patogenost C. difficile. Za virulentnost je ključnega pomena vezava bakterijskih proteinov celične stene v izobilju ali površinskih proteinov S-plasti (SLP), kot je SlpA, na gostiteljske epitelijske celice. Poleg tega, da so te površinske komponente toksini, se je izkazalo, da so tudi zelo imunogene. Nedavne študije kažejo, da imajo C. difficile SLP pomembno vlogo pri adheziji bakterij na črevesne epitelne celice, motnjah tesnih stikov in modulaciji imunskega odziva gostiteljskih celic. Ti proteini bi lahko služili kot nove tarče za cepiva in nova terapevtska sredstva. Ta pregled povzema naše trenutno razumevanje imunološke vloge SLP pri spodbujanju imunosti gostitelja in njihove uporabe pri razvoju cepiv in novih terapevtikov za boj proti okužbi s C. difficile.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

Ključne besede:

driska, povezana z jemanjem antibiotikov; proteini celične stene; terapevtiki; proteini S-plasti; cepivo

1. Uvod

Clostridioides difficile, anaerobna bakterija, ki proizvaja toksine, je pomemben oportunistični in bolnišnični patobiont v črevesju, ki povzroča simptome bolezni kot posledico motenj v zdravem mikrobiomu zaradi množice dejavnikov, vključno z uporabo antibiotikov, genetskimi, izpostavljenimi, mikrobnimi, in drugi dejavniki gostitelja [1]. Selekcija in proliferacija C. difficile sproži življenjsko nevarno stanje psevdomembranskega kolitisa [2,3]. Po zadnjih ocenah iz poročila Centra za nadzor in preprečevanje bolezni iz leta 2019 je C. difficile povzročil 223.900 okužb in 12.800 smrti v letu 2017 z izgubo v višini 1 milijarde USD samo v Združenih državah [4]. Zdravljenje prve epizode okužbe s C. difficile (CDI) se doseže z antibiotiki. Vendar ima bolezen visoko stopnjo ponovitve - 20–30 % po prvem zdravljenju začetnega CDI in več kot 50 % po prvi ponovitvi [5]. Zato je za boj proti CDI po vsem svetu potrebna nujna terapevtska intervencija. Eden od glavnih molekularnih dejavnikov za patogenezo C. difficile je izražanje in izločanje dveh glavnih toksinov, TcdA in TcdB, ki ju kodirajo geni, ki se nahajajo v 19.6-kb lokusu patogenosti (PaLoc) v C. difficile genom [6]. Uravnavanje proizvodnje toksinov in različne transkripcijske faktorje, ki sodelujejo pri proizvodnji toksinov, so obsežno pregledali Chandra et al. drugje [6].

Patogeneza CDI se začne z zaužitjem/kalitvijo spor C. difficile v vegetativne celice, ki kalijo v črevesju, kjer se razmnožujejo in kolonizirajo črevesno sluznico [1,6]. Bariera črevesne sluznice (IMB) je prva linija prirojene obrambe pred patobionti. Gostiteljski IMB je sestavljen iz različnih vrst epitelijskih celic, ki so med seboj trdno povezane s tesnimi spoji in prekrite z debelo zaščitno plastjo sluzi, ki jo izločajo vrčaste celice [1]. Prekinitev IMB omogoča, da se C. difficile pritrdi na površino epitelijskih celic, kjer izdelava njegovih virulentnih dejavnikov povzroči poškodbe in manifestacijo patogenosti C. difficile [1,6]. Celična stena bakterij pri številnih po Gramu pozitivnih in negativnih vrstah, vključno s C. difficile, je povezana z obilno površinsko izpostavljeno plastjo beljakovinskih molekul, imenovanih proteini površinske plasti (proteini S-plasti ali SLP), ki so pretežno sestavljeni iz obilne protein SlpA, sestavljen iz domene z nizko in visoko molekulsko maso, ki sta urejeni kot parakristalni pravilni dvodimenzionalni niz, kot ga vidimo z elektronsko mikroskopijo [7]. Druge komponente proteina celične stene (Cwp) plasti SLP so manj bogate in slabo označene, vendar imajo tudi pomembno vlogo pri patogenosti CD. V zadnjih letih so raziskave o SLP pridobile večjo pozornost, saj se je izkazalo, da imajo ti proteini ključno vlogo pri površinski adheziji, aktivaciji Toll podobnih receptorjev, indukciji proizvodnje citokinov in aktivaciji vnetja kot del imunskega odziva gostitelja. vlogo pri rasti in preživetju bakterije [7–9].

V tem pregledu razpravljamo o gostiteljevem imunskem odzivu na glavne komponente SlpA in druge manj obilne Cwps v luči nedavnega znanja o C. difficile SLP in poudarjamo njihov potencial za uporabo kot novo cepivo in terapevtski cilj, ki je zelo pomemben pri patogenezi CDI.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

2. Prirojeni imunski odziv gostitelja proti CDI

Dokazano je bilo, da netoksični sevi C. difficile (NTCD) po kolonizaciji v živalskih modelih zagotavljajo zaščito pred patogenimi sevi C. difficile. V zgodnjih osemdesetih sta Wilson in Sheagren poročala, da so bili hrčki, kolonizirani s sevom NTCD po sterilizaciji z antibiotikom cefoksitinom, zaščiteni pred izzivom s toksigenim sevom C. difficile (TCD) [10]. Vendar zdravljenje z drugimi vrstami, kot so C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes in toplotno uničen netoksogeni sev C. difficile NTCD, ni zaščitilo pred CDI. Poleg tega je bila zaščita izgubljena, ko je bila kolonizirajoča NTCD pred izzivom sterilizirana z zdravljenjem z vankomicinom [11]. Spodbujeni s temi ugotovitvami so spore seva NTCD-M1 uporabili pri omejenem številu kliničnih bolnikov s ponavljajočim se CDI (rCDI) s precejšnjim uspehom (približno 50 %) [12]. Trenutno so možnosti zdravljenja CDI omejene in so močno odvisne od uporabe antibiotikov, kot so vankomicin, fidaksomicin in metronidazol [13,14]. Prekomerna uporaba antibiotikov vodi do disbioze zdravega mikrobioma in dodatno pomaga pri izbiri patobiontov, kot je C. difficile, ki se lahko kasneje ponovi [1,15]. Da bi se učinkovito izognili tem izzivom, je treba takoj posvetiti pozornost alternativnim metodam zdravljenja. Nekatere od teh možnosti zdravljenja vključujejo nevtralizacijo toksinov C. difficile z uporabo monoklonskih protiteles proti TcdB, kot je infuzija bezlotoksumaba, ki preprečuje s toksini posredovano poškodbo črevesnega epitelija [16]. Druga fascinantna metoda je ponovna vzpostavitev zdravega mikrobioma s presaditvijo fekalne mikrobiote (FMT) od zdravega darovalca med ožjimi družinskimi člani. FMT je pokazal obetavne rezultate proti ponavljajočim se CDI s stopnjo uspešnosti do 90 % [17, 18]. Na žalost te študije niso obravnavale vloge imunskega odziva gostitelja pri zaščiti teh bolnikov. Zato je mogoče trditi, da živi NTCD izloča nekatere antigene/komponente celične stene, ki inducirajo močan imunski odziv proti toksigenemu TCD. Podobno je zaščita FMT slabo opredeljena. Zato lahko razumevanje, kako uvedba FMT inducira odzive gostitelja, pomaga pri identifikaciji ključnih antigenov, kar lahko pomaga pri boljšem razumevanju imunskega odziva in razvoju novih cepiv proti CDI.

V črevesju je gostiteljev prirojeni imunski sistem prva obrambna linija pred vsiljivim patogenom, ki igra ključno vlogo pri oblikovanju in vzpostavljanju robustnega prilagodljivega imunskega odziva gostitelja [1]. Prirojeni odziv je sestavljen predvsem iz treh delov: (i) črevesni epitelij in plast sluznice (fizična pregrada), (ii) protimikrobni peptidi, ki so izločevalni produkt epitelijskih celic, Panethovih celic in nekaterih članov črevesne mikrobiote (kemični pregrada) in (iii) celični odzivi z rekrutiranjem prirojenih imunskih celic, kot so nevtrofilci, eozinofili, makrofagi, prirojene limfoidne celice (ILC) in dendritične celice (DC), ki jih orkestrira več prirojenih signalnih poti za boj proti vsiljivemu patogenu [ 1]. Gostiteljske celice na svoji površini nosijo receptorje za prepoznavanje vzorcev (PRR), kot so TLR, ki prepoznajo določene ohranjene bakterijske podpise na mikrobih, imenovane s patogeni povezani molekularni vzorci (PAMP). Ti PRR so znani tudi kot Toll-like Receptors (TLR). Ko TLR-ji prepoznajo te signale nevarnosti (PAMP), gostiteljska celica sproži imunski odziv. V zvezi s tem se je pokazalo, da Toll-like Receptor 4 (TLR4) prepozna signale nevarnosti C. difficile, dejanje, ki sodeluje pri sprožitvi vnetnega odziva gostitelja. V tem kontekstu je bilo dokazano, da SLP-ji C. difficile interagirajo z gostiteljevim TLR-4, medtem ko flagele C. difficile interagirajo prek TLR5 [19,20].

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

3. Proteini S-plasti (SLP) pri C. difficile

V zadnjem desetletju so proteini površinske plasti (S-plast) C. difficile prejeli veliko pozornosti. SLP so prvi identificirali Kawata et al. leta 1984 in predstavljajo približno 15% celotne celične mase [21,22]. SLP najdemo v številnih različnih prokariontskih vrstah. Večina SLP je razporejenih na najbolj zunanji površini celic kot en sam protein v dvodimenzionalnem parakristalnem nizu [7]. Pri C. difficile je S-plast sestavljena predvsem iz heterodimernih proteinov SlpA. SlpA je heterodimer, sestavljen iz proteina z visoko molekulsko maso (HMW) in proteina z nizko molekulsko maso (LMW), ki ju kodira en sam gen slpA; LMW SLP tvori izpostavljeno zgornjo plast, medtem ko HMW SLP tvori spodnjo plast. LMW SLP je edinstven pri C. difficile. V sevu C. difficile 630 je lokus slpA 36,6 kb regija, ki vsebuje 11 paralogov slpA. Poleg tega obstaja dodatnih 17 paralogov, ki so raztreseni po celotnem genomu [23, 24]. Ti paralogni geni se zdaj imenujejo proteini klostridijske celične stene (CwpX), kjer X označuje identificirano paralogno število (X=1–29) in so opisani v tabeli 1. Vendar pa so štirje predhodno označeni Cwps, znani kot SlpA, Cwp66, Cwp84 in CwpV sta bila poimenovana, preden je bila sprejeta ta nova konvencija o poimenovanju [23]. Vsi Cwps so tipični proteini, ki vsebujejo N-terminalni signalni peptid in tri domnevne vezne domene celične stene s pomembno podobnostjo s HMW SLP [25, 26]. Različni sevi C. difficile so pokazali variacije v lokusu slpA in dokumentiranih je bilo približno 12 različnih tipov kaset S-plasti. Ostalih 28 Cwps deluje kot pomožne komponente, ki so zasidrane v polimerizirani parakristalni plasti, ki predstavlja ~5–20 % S-plasti [7].

Tabela 1. Domnevne funkcije 29 cup genov, najdenih v genomih Clostridium difficile 630.

Tabela 1. Nadaljevanje

4. Ekspresija in variacija seva proteinov celične stene

V sevu C. difficile 630 so poročali, da je izraženih približno devet genov, ki kodirajo Cwps [25]. Medtem ko so geni cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 in cwp25 izraženi na površini celice pod normalnimi pogoji rasti [44], so bili geni cwp66 in cwp5 izraženi, vendar jih ni bilo mogoče najti v izvlečkih celične površine. V ločeni študiji so Biazzo et al. analizirali skodelice, ki so razpršene po celotnem genomu C. difficile. Opazili so, da so geni cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 in cwp25 izraženi in imajo dobro ohranjena zaporedja, medtem ko so imeli geni cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 in cwp29 pomembne razlike v stopnjah izražanja med ribotipov in so bili manj ohranjeni [45]. Številni geni lokusa slpA kažejo znatne razlike med sevi, zlasti površinsko izpostavljene regije. Na primer, pokazalo se je, da imajo slpA, cwp66, secA2 in cwp2 visoko variacijo znotraj lokusa slpA (ki tvori 10-kb kaseto); do sedaj je bilo najdenih 12 divergentnih variant te kasete kot rezultat homologne rekombinacije med različnimi genotipi [46]. Po mnenju Karjalainen et al., cwp66 kaže samo 33% identiteto med sevi [26]. Različica cwp2 je bila nadomeščena s 23,8 kb predvideno skupino genov za glikozilacijo S-plasti v lokusu slpA [46]. SlpA je najpogostejši SLP, ki ga najdemo v ekstraktih celične površine C. difficile, in je glavna sestavina SLP C. difficile. Zreli protein se po izločanju razcepi na HMW in LMW proteinske oblike z delovanjem proteaze Cwp84, da nastane heterodimerni kompleks H/L kompleks, ki polimerizira in tvori S-plast [47] (slika 1). Inaktivacija gena cwp84 v C. difficile 630∆erm je povzročila S-plast, sestavljeno le iz nezrele enoverižne SlpA s spremenjeno morfologijo kolonije, kar kaže na pomembno vlogo Cwp84 pri tvorbi zrele S-plasti [32]. Prisotnost gena secA2 v lokusu slpA je pomembna za transport SlpA in drugih Cwps skozi citoplazmatsko membrano [48].

Slika 1. SLP-ji C. difficile posredujejo pri adheziji in aktivaciji imunskih celic. Nastajajoči peptid SlpA se razcepi s proteazo Cwp84 v podenoto LMW in HMW, ki tvori zrel kompleks SlpA plasti SLP celične stene [31–33]. SLP-ji posredujejo adhezijo prek TLR4, prekinejo tesno povezavo črevesnih epitelijskih celic in dodatno aktivirajo dendritične celice/makrofage, ki nato proizvajajo različne citokine in kemokine, kar vodi do indukcije Th1/Th2 in humoralnega odziva [9,27]. Interlevkin (IL), dendritične celice (DC), nizka molekulska masa (LMW), visoka molekulska masa (HMW), Tollu podoben receptor 4 (TLR4).

5. Funkcije proteinov S-plasti

SLP so vključeni v različne funkcije v biologiji C. difficile (glej tabelo 1), kot so celovitost celice, transport, oblikovanje por in sidrišč, razgradnja, adhezija/invazija gostiteljskih celic, izogibanje imunskemu sistemu in zaščita pred konkurenčnimi mikroorganizmi [22] . Pechineet al. odkrili protitelesa proti N-terminalni in C-terminalni domeni antigena Cwp66 v serumih bolnikov z boleznijo, povezano s Clostridium difficile (CDAD) [49]. V drugi študiji so Wright et al. ločil Cwps z uporabo 2D-PAGE in identificiral več Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), ki so reagirali s serumi bolnikov, okuženih s sevom C. difficile ribotipa 017, kar kaže na indukcijo močnega imunskega odziva proti SLP [50]. Pred kratkim sta Kirk et al. identificirali dva seva C. difficile, ki nimata S-sloja in ki nista bila dovzetna za bakteriocin, ki tvori pore in depolarizira konkurenčne bakterijske celice. Vendar so ti sevi C. difficile pokazali znatno povečano občutljivost za lizocim in protimikrobni peptid LL-37 in niso povzročili simptomov bolezni CDI v modelu okužbe hrčka [51]. Nedavna študija je raziskovala učinke SlpA, izoliranega iz treh toksikogenih sevov (RT126, RT001, RT084), na izražanje proteinov tesnega stika (TJ) in indukcijo protivnetnih citokinov v celični liniji človeškega karcinoma debelega črevesa HT-29 . Zdravljenje s SlpA je bistveno zmanjšalo ravni izražanja družine claudinov in JAM-A tesno spojenih proteinov (slika 1) [9]. Poleg tega je protein SlpA povečal ravni ekspresije TLR-4 in induciral izločanje TNF-, IL-1 in IL-8. Ti rezultati kažejo, da je protein SlpA posredoval patogenezo in povzročil vnetne odzive v črevesju [9]. Zato je razumno trditi, da so SLP bistveni za patogenost in imunske odzive C. difficile.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

6. Imunski odziv na SLP

Nedavne raziskave so pokazale pomembno vlogo SlpA ne le pri preživetju in rasti bakterij, temveč tudi pri oblikovanju imunskega odziva gostitelja. Imunoproteomski pristopi so pokazali prisotnost protiteles proti SLP v serumih šestih bolnikov, okuženih s C. difficile ribotip 017, kar kaže, da so proteini SLP imunodominantni in izraženi med okužbo [50]. Študija, ki so jo vodili Bruxelles et al. je pokazala povišano raven protiteles proti SlpA pri bolnikih s CDI v primerjavi z zdravimi bolniki [52]. V drugi študiji so Negm et al. odkrili protitelesa IgG v serumih skupno 327 posameznikov s CDI proti izvlečkom SLP iz različnih sevov C. difficile [53]. Poleg SlpA je izpostavljena C-terminalna domena drugega najpogostejšega proteina Cwp66 zelo variabilna, medtem ko je N-terminalna domena dobro ohranjena. Izkazalo se je, da sta variabilni C-terminalni domeni Cwp66 in Cwp84 pri ljudeh imunogeni [49, 54]. Poleg tega so bile pri bolnikih s CDI povprečne skupne ravni anti-Cwp66 in anti-Cwp84 nižje kot pri zdravi kontrolni skupini, kar kaže na zaščitno naravo protiteles. Zato imajo SLP, posebej SlpA, in druge komponente pomembno vlogo pri imunski obrambi in so potencialne tarče za imunoterapevtski razvoj in razvoj cepiv, kot je opisano v naslednjih razdelkih.

7. SLP-ji posredujejo adhezijo C. difficile

C. difficile sproži okužbo tako, da se oprime črevesnih epitelijskih celic, kar povzroči kolonizacijo. V zvezi s tem imajo bakterijski SLP, kot sta SlpA in Cwp66, ključno vlogo pri adheziji. Poročali so, da so variacije SLP-jev, posebej SlpA v izoliranih sevih C. difficile, pokazale spremembe v adherenci [55]. Pokazalo se je, da SLP vežejo različne celične linije, kot so človeške gastrointestinalne celične linije celic Hep-2 in Vero ter številne beljakovine zunajceličnega matriksa. Poleg tega je zdravljenje s protitelesi proti HMW-SLP zaviralo adherenco C. difficile. Poleg tega je predhodno zdravljenje gostiteljskih celic s prečiščenimi podenotami SlpA ali protitelesi proti SlpA prav tako preprečilo adherenco C. difficile [55]. Največji homolog član družine proteinov SlpA je protein CwpV, ki se izraža na fazno spremenljiv način. V ločeni študiji je bilo dokazano, da C-terminalna ponavljajoča se domena proteina CwpV posreduje pri agregaciji C. difficile. Poleg tega se ta domena razlikuje med sevi in ​​identificiranih je bilo pet antigensko različnih tipov ponovitev [40].

Za drug imunogeni protein, imenovan Cwp66, je bilo dokazano, da ima adhezijske lastnosti. Očiščen Cwp66 in protitelesa proti N-terminalni in C-terminalni domeni so zavirali adherenco C. difficile na kultivirane celice Vero, kar kaže na adhezijske lastnosti Cwp66 [29].

8. Indukcija vnetnih odzivov

Bianco et al. dokazal vlogo SLP v procesu vnetja. V tej študiji so SLP iz hipervirulentnih in epidemičnih (H/E) ali ne-H/E sevov C. difficile očistili in proučevali v človeških monocitih in iz monocitov pridobljenih dendritičnih celicah (MDDC) v smislu indukcije imunomodulatornih citokinov [interlevkin (IL)-1 , IL-6 in IL- 10] [56]. Študija je pokazala, da SLP niso le inducirali zorenja MDDC z okrepljeno aktivnostjo predstavljanja antigena, ampak so inducirali tudi izločanje visokih ravni IL-10. Vendar pa niso bile ugotovljene pomembne razlike v aktivaciji monocitov in MDDC s pripravki SLP iz sevov H/E in ne-H/E, kar kaže na to, da SLP ne prispevajo k povečani resnosti bolezni [56]. V drugi študiji so Ausiello et al. ekstrahirali SLP-je iz kliničnega izolata C253 in pokazali, da SLP-ji inducirajo izločanje povečanih ravni provnetnih citokinov IL-1 in IL-6 v monocitih v mirovanju in povzročijo zorenje človeških MDDC ter povečano proliferacijo T celice [57]. Poleg tega so ti zdravljeni MDDC sproščali tudi povišane količine IL-10 in IL-12p70 ter inducirali mešani Th1/Th2 imunski odziv. TLR-4 je imel pomembno vlogo pri aktivaciji DC-jev, ki jo posreduje SLP. Dokazano je bilo, da SLP-ji ne morejo aktivirati DC-jev, izoliranih iz TLR4-mutantnih miši C3H/HeJ, in jim ni uspelo inducirati poznejšega imunskega odziva Th, kar nakazuje, da SLP-ji aktivirajo prirojeno in adaptivno imunost, ki jo posreduje receptor TLR4 [19]. V drugi študiji je bilo na makrofagih dokazano, da so SLP iz C. difficile inducirali očistek v smislu izločanja vnetnih citokinov in kemokinov s povečano migracijo makrofagov in fagocitotično aktivnostjo [58]. Zdravljenje z zaviralcem p38 je obrnilo te odzive, kar kaže na vlogo signalnih molekul pri odzivih, ki jih posreduje SLP [58]. Zelo nedavna študija je poročala o aktivaciji inflamasoma s C. difficile SLP na način, ki je odvisen od odmerka. Nadalje je bilo dokazano, da s holesterolom bogate mikrodomene (lipidni splavi) na celičnih membranah pomagajo pri vezavi SLP na celično membrano. To je temeljilo na fluorescenčni mikroskopiji, kjer je bilo dokazano, da zdravljenje z metil- -ciklodekstrinom (M CD), ki zmanjša membranski holesterol, zmanjša vezavo SLP, kar nakazuje, da SLP rekrutirajo lipidne splave, ki so kritični za kolonizacijo C. difficile in aktivacijo inflamasoma [59]. ]. Te študije trdijo, da lahko SLP-ji C. difficile aktivirajo prirojene in adaptivne imunske odzive, ki jih deloma posreduje TLR4, kar kaže na pomembno vlogo SLP-jev pri induciranju imunskega odziva. Zato ti rezultati kažejo tudi na potencial SLP kot kandidatov za cepivo proti CDI.

9. Odziv protiteles proti CDI

Več imunoloških študij kaže, da sta okužba s C. difficile in izid odvisna od intenzivnosti imunskega odziva gostitelja, ki je ključni dejavnik pri patogenosti CDI. Tako je lahko nezmožnost razvoja močnega protitelesnega odziva napoved za resnost in ponovitev bolezni [60]. V zvezi s tem so bile ravni protiteles proti glavnim toksinom povezane s ponovitvijo in resnostjo bolezni [61,62]. Tudi v prejšnjih študijah so v serumu bolnikov s CDI poročali o protitelesih proti površinskim komponentam C. difficile [63]. Drudy et al. ocenili humoralne imunske odzive na izvlečke SLP C. difficile v kohorti 146 bolnikov, ki je vključevala 55 bolnikov z drisko, povezano s C. difficile (CDAD), 34 bolnikov z asimptomatskimi nosilci in 57 kontrolnih oseb [64]. Študija je izolirala frakcije z visoko in nizko MW ekstrakcijo SLP, ki je vsebovala predvsem obilno beljakovino SlpA. V tej kohorti so izmerili serumska protitelesa z uporabo encimsko vezanega imunskega testa (ELISA) in niso našli pomembnih razlik v serumskih ravneh protiteles IgM, IgA ali IgG. Zanimivo je, da so imeli bolniki s ponavljajočimi se epizodami CDAD bistveno nižje ravni IgM-anti-SLP kot bolniki z enkratnimi epizodami. Študija je zaključila, da je treba opraviti nadaljnje študije za določitev specifičnih odzivov protiteles proti SLP in študij zaščite z uporabo SLP C. difficile [64].

Pasivna in aktivna imunizacija z uporabo izoliranih izvlečkov HMW in LMW SLPs sta pokazali spodbudne rezultate z izboljšanimi stopnjami preživetja pri smrtonosnih izzivalnih modelih hrčkov. O'Brien et al. so dokazali zaščitni odziv protiteles proti SLP na okužbo s C. difficile pri hrčkih, kjer je bilo preživetje v skupinah, zdravljenih z anti-SLP, znatno podaljšano v primerjavi s kontrolnimi skupinami [65]. Pokazalo se je, da je zaščitni učinek antiseruma posledica povečanja fagocitoze C. difficile [65]. Eidhin et al. je z uporabo aktivne imunizacije testiral surovi ekstrakt SLP, ki je vseboval ekvimolarne količine komponent LMW in HMW peptidov SlpA, kot cepivo z različnimi sistemskimi in mukoznimi adjuvansi na zlatih sirskih hrčkih in modelih miši BALB/c. Študija je poročala o skromni do slabi stimulaciji protiteles znotraj različnih režimov in mišji modeli so pokazali močnejše odzive protiteles na SLP v primerjavi s hrčki [66]. V drugi študiji je Brunet sod. preučili in vivo adjuvantno aktivnost dveh peptidov, ki sestojita iz receptorsko vezavne domene toksina A (TxA (C314)) in fragmenta SLP-36 kDa iz C. difficile seva C253 proti proteinu A, ki veže fibronektin (FnbpA). ), zaščitni antigen cepiva proti Staphylococcus aureus [67]. Ocenili so odziv z uporabo intranazalnih in subkutanih poti in ugotovili, da sta oba fragmenta povečala proizvodnjo krožečih anti-FnbpA IgG in IgA. Ugotovili so, da ti fragmenti, kadar se uporabljajo kot adjuvansi, različno vplivajo na imunski sistem in ga polarizirajo [67]. V drugi študiji so Shirvan et al. ustvarili in izrazili specifična rekombinantna protitelesa proti SLP-jem, kot sta Cwp66 in SlpA, iz proteinov C. difficile 630 z uporabo fagnega prikaza in pokazali, da so ta rekombinantna protitelesa reagirala na SLP-je in njihove komponente na sev-specifičen način z visoko specifičnostjo [68].

Imunski odziv in zaščita v modelu hrčka z uporabo proteaze Cwp84 kot antigena sta bila ovrednotena z več načini imunizacije [69]. Študija je odkrila različne titre protiteles na podlagi poti imunizacije. Najboljšo zaščito so opazili pri rektalni poti imunizacije. Poleg tega so imunizirane skupine hrčkov povzročile 26 % šibkejšo in počasnejšo črevesno kolonizacijo s C. difficile po izzivu s C. difficile z bistveno višjo stopnjo preživetja (33 % več) kot neimunizirane skupine [69].

rastlina cistanche krepi imunski sistem

10. Anti-C na osnovi SLP. difficile Therapeutics

Specifična terapija na osnovi protiteles za nevtralizacijo C. difficile je lahko učinkovita strategija. Kandalaft et al. uporabili protitelesa z eno domeno za ciljanje na SLP [70]. Skupina je pripravila ploščo SLP-specifičnih enodomenskih protiteles (VHH) iz hipervirulentnega seva C. difficile QCD-32g58 (027 ribotip). Njihovi rezultati so pokazali številne VHH, vezane na epitope QCD-32g58, ki se nahajajo na podenoti LMW SLP z visoko afiniteto. Nadalje so poročali, da imajo ti VHH specifičnost vezave na ribotipe 001 in 027, podmnožica teh protiteles VHH pa je na splošno navzkrižno reaktivna na ribotipe 012, 017, 023 in 078. Pokazalo se je tudi, da ti VHH zavirajo gibljivost C. difficile QCD-32g58 in vitro [70].

Razvoj drugega natančnega antibakterijskega sredstva Av-CD291.2 Kirk et al. poročali so, da posebej ubije C. difficile in preprečuje kolonizacijo pri miših [51]. Pokazalo se je, da Av-CD291.2 ubija različne izolate C. difficile na podlagi prisotnosti sekvenc SLP v sevih C. difficile. Avtorji trdijo, da so identificirali ničelne mutante SLP, ki vsebujejo točkovno mutacijo v genu slpA in so odporni na sredstva Av-CD291.2. Ti mutanti so imeli tudi okvare sporulacije, vendar so lahko kolonizirali črevesni trakt kljub zmanjšanju virulence v modelu hrčka [51]. Poleg tega so izdelali skupino Avidocin-CD, ki ubija različne seve C. difficile na način, ki je odvisen od zaporedja SLP, kar kaže na pomembno vlogo teh antibakterijskih sredstev, ki temeljijo na SLP, pri preprečevanju CDI [51].

11. Sklepne opombe in kritična neodgovorjena vprašanja

Gostitelj razvije močan specifičen imunski odziv proti toksinom C. difficile in površinskim komponentam. Pokazalo se je, da imajo SLP vlogo pri celični adheziji, indukciji različnih citokinov z aktivacijo TLR4 in aktivaciji tako prirojenega kot humoralnega imunskega odziva. Vendar pa so potrebne študije o aktivaciji odzivov T-celic s SLP-ji za nadaljnjo razčlenitev vloge celic CD4 in CD8. Na podlagi aktivacije humoralnega odziva lahko ta nevtralizirajoča protitelesa proti toksinom in površinskim komponentam preprečijo klinične znake CDI. Študije z uporabo aktivne ali pasivne imunizacije proti SLP so pokazale obetavne rezultate, kar kaže, da je strategijo mogoče nadalje razviti v nove terapevtike proti patogenosti CDI. Veliko pozornosti je bilo namenjene SlpA kot kandidatu za cepivo; vendar pa zaradi velike variabilnosti zaporedja SlpA med sevi cepivo morda ne bo učinkovito proti vsem ribotipom. Zato bodo morda potrebna cepiva na osnovi epitopov, da bi se izognili tej težavi. V zvezi s tem so enodomenska protitelesa (VHH) proti SLP izvedljive možnosti, ki vežejo podenoto LMW-SLP C. difficile z visoko specifičnostjo in dokazano zavirajo gibljivost sevov C. difficile. Trenutno je razumevanje mehanične vloge SLP in njihovih paralogov v CDI patogenezi, adheziji in T-celičnem odzivu še vedno v začetnih fazah in večinoma ostaja neraziskano. Potrebne so nadaljnje študije za razčlenitev molekularnih funkcij in specifičnih imunskih odzivov SLP, da bi spodbudili hiter razvoj novih tarč cepiv/zdravil in terapevtikov za boj proti okužbam s C. difficile.

Reference

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Sonce, X.; Shukla, P. Pathobionts: Mehanizmi preživetja, širjenja in interakcije z gostiteljem s poudarkom na Clostridioides difficile. Črevesni mikrobi 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Prerazvrstitev Clostridium difficile v Clostridioides difficile (Hall in O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Obvestilo o spremembah taksonomskega mnenja, ki je bilo predhodno objavljeno zunaj IJSEM. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Centri za nadzor in preprečevanje bolezni. Grožnje zaradi odpornosti proti antibiotikom v Združenih državah, 2019. 2019. Dostopno na spletu: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (dostopano 8. 9. 2022).

5. Shields, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Ponavljajoča se okužba s Clostridium difficile: Od kolonizacije do ozdravitve. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. Regulativni transkripcijski faktorji patogeneze Clostridioides difficile s poudarkom na regulaciji toksinov. Crit. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; et al. Struktura in sestava S-plasti pri C. difficile. Nat. Komun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Značilnosti in imunološke vloge proteinov površinske plasti pri Clostridium difficile. Ann. Lab. med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Protein A površinske plasti iz hipervirulentnih ribotipov Clostridioides difficile inducira znatne spremembe v izražanju genov tesnih stikov in vnetnega odziva v človeških črevesnih epitelijskih celicah. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Antagonizem toksigenega Clostridium difficile z netoksičnim C. difficile. J. Infect. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Zaščita hrčkov pred ileokolitisom Clostridium difficile s predhodno kolonizacijo z nepatogenimi sevi. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Pečat, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Zdravljenje ponavljajoče se driske Clostridium difficile z dajanjem netoksigenega seva. EUR. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Smernice za klinično prakso Ameriškega združenja za nalezljive bolezni (IDSA) in Ameriškega združenja za epidemiologijo zdravstvenega varstva (SHEA): Usmerjene posodobitve smernic za leto 2021 o obvladovanju okužbe s Clostridioides difficile pri odraslih. Clin. Okužiti. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Evropsko združenje za klinično mikrobiologijo in infekcijske bolezni: posodobitev dokumenta z navodili za zdravljenje okužbe s Clostridioides difficile pri odraslih za leto 2021. Clin. Microbiol. Okužiti. 2021, 27 (Dodatek 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Neuspeh zdravljenja in ponovitev okužbe s Clostridium difficile po zdravljenju z vankomicinom ali metronidazolom: sistematični pregled dokazov. Int. J. Antimicrob. Agenti 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoksumab: Nastajajoča terapija z monoklonskimi protitelesi za preprečevanje ponavljajoče se okužbe s Clostridium difficile. Biologija 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Sistematični pregled z metaanalizo: dolgoročni rezultati presaditve fekalne mikrobiote za okužbo s Clostridium difficile. Aliment. Pharmacol. Ther. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Cena, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Sistematični pregled z meta-analizo: Učinkovitost presaditve fekalne mikrobiote za zdravljenje ponavljajoče se in neodzivne okužbe s Clostridium difficile. Aliment. Pharmacol. Ther. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. Vloga TLR4 pri okužbi s Clostridium difficile in prepoznavanje proteinov površinske plasti. Patog PLoS. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagella pretežno aktivira TLR5-povezano pot NF-κB v epitelijskih celicah. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Predstavitev in predhodna karakterizacija pravilnega niza v celični steni Clostridium difficile. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB proteini S-plasti. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Predlagana nomenklatura za proteine ​​celične stene Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Reanotacija zaporedja genoma seva Clostridium difficile 630. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Molekularna karakterizacija proteinov površinske plasti iz Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Molekularna in genomska analiza genov, ki kodirajo površinsko zasidrane proteine ​​iz Clostridium difficile. Okužiti. Imun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Willing, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; Fairweather, površinski proteini NF Clostridium difficile so zasidrani na celično steno z uporabo motivov CWB2, ki prepoznajo anionski polimer PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Šone, CC; Acharya, KR Cwp2 iz Clostridium difficile kaže razširjeno gubo treh domen in celično adhezijo in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Karakterizacija proteina celične površine Clostridium difficile z adhezivnimi lastnostmi. Okužiti. Imun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Zdravo.; Yu, W.; Cui, G.; et al. Gen cwp66 vpliva na celično adhezijo, toleranco na stres in odpornost na antibiotike pri Clostridioides difficile. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Storck, EM; Heal, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Kemične sonde biogeneze površinske plasti pri Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, s površino povezana cisteinska proteaza, igra vlogo pri zorenju površinske plasti Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, površinsko povezan protein Clostridium difficile, je cisteinska proteaza z degradacijskim delovanjem na proteine ​​zunajceličnega matriksa. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Mihelic, M.; Lindič, N.; Borišek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. Modul za sidranje celične stene CWB2 je razkrit s kristalnimi strukturami proteinov celične stene Clostridium difficile Cwp8 in Cwp6. Struktura 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Verjetnotni model lokalne poravnave zaporedja, ki poenostavi oceno statistične pomembnosti. Računalnik PLoS. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Kristalna struktura enteropatogenega intimin-receptorskega kompleksa Escherichia coli. Narava 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Willing, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Vloge cisteinskih proteaz Cwp84 in Cwp13 v biogenezi celične stene Clostridium difficile. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ Domene SH3: Kompleksnost v zmernosti. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

40. Šipeki, S.; Koprivanac, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Nove vloge domen SH2 in SH3 pri vezavi lipidov. Celice 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF Protein celične stene Clostridium difficile CwpV je antigensko spremenljiv med sevi, vendar kaže ohranjeno funkcijo pospeševanja agregacije. Patog PLoS. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Šone, CC; Acharya, KR Molekularna struktura domene glikozidne hidrolaze Cwp19 iz Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Žu, D.; Bullock, J.; Zdravo.; Sun, X. Cwp22, nov encim za navzkrižno povezovanje peptidoglikana, igra pleiotropno vlogo pri Clostridioides difficile. Okolje. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; et al. Podatkovna baza beljakovinskih družin Pfam: Proti bolj trajnostni prihodnosti. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Počakaj, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Proteomska analiza proteinov celične površine iz Clostridium difficile. Proteomika 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Raznolikost cwp lokusov v kliničnih izolatih Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubčik, T.; Bowden, R.; et al. Rekombinacijsko preklapljanje S-plasti Clostridium difficile in nova skupina genov za glikozilacijo, razkrita z obsežnim sekvenciranjem celotnega genoma. J. Infect. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Strukturni vpogled v molekularno organizacijo S-plasti iz Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile ima dva vzporedna in bistvena sistema izločanja Sec. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, M.; Collignon, A. Imunološke lastnosti površinskih proteinov Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Imunoreaktivne beljakovine celične stene Clostridium difficile, identificirane s človeškimi serumi. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Nov razred natančnih protimikrobnih zdravil na novo opredeljuje vlogo S-plasti Clostridium difficile pri virulenci in sposobnosti preživetja. Sci. prevod med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hojs, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Imunogene lastnosti prekurzorja površinske plasti Clostridium difficile in testi cepljenja na živalskih modelih. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Šone, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. Profiliranje humoralnih imunskih odzivov na antigene, specifične za Clostridium difficile, z analizo beljakovinskih mikromrež. Clin. Cepivo Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Variabilnost površinskih proteinov Clostridium difficile in odziv specifičnih serumskih protiteles pri bolnikih z boleznijo, povezano s Clostridium difficile. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Protein površinske plasti A (SlpA) pomembno prispeva k oprijemu Clostridium difficile na gostiteljske celice. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Imunomodulatorne aktivnosti proteinov površinske plasti, pridobljenih iz epidemičnih in hipervirulentnih sevov Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Proteini površinske plasti iz Clostridium difficile inducirajo vnetne in regulativne citokine v človeških monocitih in dendritičnih celicah. Mikrobi okužijo. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Proteini površinske plasti, izolirani iz Clostridium difficile, inducirajo odzive očistka v makrofagih. Mikrobi okužijo. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ Membranski holesterol je ključen za Clostridium difficile, ki se veže na beljakovine površinske plasti in sproži aktivacijo vnetja. Spredaj. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Ali lahko prepoznamo bolnike z visokim tveganjem za ponovitev okužbe s Clostridium difficile? Clin. Microbiol. Okužiti. 2012, 18 (Suppl. 6), 21–27. [CrossRef]

61. Wultt, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. Odziv protiteles IgG na toksine A in B pri bolnikih z okužbo s Clostridium difficile. Clin. Cepivo Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; et al. Serumska protitelesa proti toksinu B so povezana z zaščito pred ponavljajočo se okužbo s Clostridium difficile (CDI). Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Imunoblot analiza odziva serumskega imunoglobulina G na površinske proteine ​​Clostridium difficile pri bolnikih z drisko, povezano z antibiotiki. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Odziv človeških protiteles na proteine ​​površinske plasti pri okužbi s Clostridium difficile. FEMS Immunol. med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, SV; Kelleher, DP Pasivna imunizacija hrčkov proti okužbi s Clostridium difficile z uporabo protiteles proti proteinom površinske plasti. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktivna imunizacija hrčkov proti okužbi s Clostridium difficile z uporabo beljakovin površinske plasti. FEMS Immunol. med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Škarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 in SLP-36kDa okrepita imunski odziv proti sočasno uporabljenemu antigenu. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Izolacija rekombinantnih protiteles, usmerjenih proti površinskim proteinom Clostridium difficile. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hojs, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Imunizacija hrčkov proti okužbi s Clostridium difficile z uporabo proteaze Cwp84 kot antigena. FEMS Immunol. med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Ciljanje na beljakovine površinske plasti s protitelesi z eno domeno: potencialni terapevtski pristop proti bolezni, povezani s Clostridium difficile. Appl. Microbiol. Biotehnologija. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]