Vpliv bakterij rdečega kompleksa in ravni TNF na diabetično in ledvično stanje bolnikov s kronično ledvično boleznijo v prisotnosti in odsotnosti parodontitisa

Preprost povzetek:Parodontoza, imenovana bolezen dlesni, je resna bakterijska okužba, ki poškoduje okoliške strukture zob, vključno s kostmi, kar povzročiizguba zobbreztakojšnje zdravljenje. Bolezen se pojavi predvsem kot posledica nepravilnega vzdrževanja ustne votline, sčasoma povzroči okužbe dlesni in zobe, ki so napolnjeni s hrano, zobnim kamnom in bakterijskimi oblogami. Te škodljive bakterije pod vplivom različnih okoljskih in genetskih dejavnikov tveganja lahko migrirajo v krvne žile in dosežejo različne druge organe, vključno z ledvicami, ter tako sprožijo okužbo in povzročijonapredovanje sistemskih bolezni. V tej študiji smo se osredotočili na ugotavljanje ravni bakterij, ki povzročajo bolezni dlesni, in njihovih stranskih produktov, namreč TNF alfa, pri bolnikih z ali brezkronična ledvična bolezen. Študija je vključevala 120 udeležencev, razvrščenih v 4 skupine na podlagi pacientov z boleznijo dlesni in boleznijo ledvic. Zabeleženi so bili dlesni, ledvični in diabetični parametri. Bakterije in njihove produkte so ocenili in ugotovili, da so višje pri bolnikih z boleznijo dlesni inCKD motnja. Ta študija kaže, da so bolniki s hudo boleznijo dlesni in slabim oralnim zdravjem izpostavljeni tveganju za nastanek težav z ledvicami. Tako lahko zgodnje preprečevanje bolezni dlesni zmanjšatveganje za prihodnje bolezni ledvic. 

Podporna storitev Wecistanche-največjega izvoznika cistanche na Kitajskem:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Trgovina za več podrobnosti o specifikacijah:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIKNITE TUKAJ ZA NARAVNI ORGANSKI IZVLEČEK CISTANCHE S 25 % EHINAKOZIDA IN 9 % AKTEOZIDA ZA OKUŽBO LEDVIC

Povzetek:Znanstveni dokazi kažejo pozitivno povezavo v etiopatogenezi parodontitisa inkronična ledvična bolezen(CKD). Različni moteči dejavniki, kot so debelost, sladkorna bolezen in vnetje, prav tako igrajo pomembno vlogo pri napredovanju kronične ledvične bolezni, kar ostaja neraziskano. Predvidevamo vlogo rdečih kompleksnih bakterij z različnimi zmedenimi dejavniki, povezanimi s kronično ledvično boleznijo. Študija je vključevala skupno 120 udeležencev, razvrščenih v 4 skupine: kontrolna skupina (C), osebe s parodontitisom brez kronične ledvične bolezni (P), parodontalnozdrava kronična ledvična bolezenpreiskovanci (CKD) in preiskovanci s parodontitisom in kronično ledvično boleznijo (P + KLB), s 30 preiskovanci v vsaki skupini.

Zabeležene so bile demografske spremenljivke ter periodontalni, ledvični in diabetični parametri. Ocenjeni so bili nivoji faktorja tumorske nekroze (TNF) in rdečih kompleksnih bakterij, kot so Prophyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td) in Tonerella forsythia (Tf), dobljeni rezultati pa so bili statistično analizirani. Med različnimi demografskimi spremenljivkami je starost pokazala stopnjo pomembnosti. Povprečni PI, GI, CAL in PPD (delež mest s PPD večjim ali enakim 5 mm in CAL večjim ali enakim 3 mm) so bili povišani v skupini P + CKD. Diabetični parametri, kot sta krvni sladkor na tešče (FBS) in ravni HbA1c, so bili prav tako višji v skupini P + CKD. Ledvični parametri, kot sta eGFR in serumski kreatinin, so bili večji pri bolnikih s kronično ledvično boleznijo. Ocena parodontalnih patogenov rdečega kompleksa, kot so ravni Pg, Td in Tf, je bila bistveno višja v skupinah P in P + CKD. Pearsonova korelacijska analiza je pokazala pomembno korelacijo rdečih kompleksnih bakterij z vsemi spremenljivkami. Višje vrednosti Pg, Td in Tf so bile ugotovljene v skupinah P, kar kaže na njihovo pomembno vlogo pri začetku in napredovanju vnetja parodontitisa in kronične ledvične bolezni, pri čemer je sladkorna bolezen eden od motečih dejavnikov. Študija je potrdila tudi log-linearno razmerje med ravnmi TNF in rdečimi kompleksnimi bakterijami, s čimer je dokazala vlogo biomarkerjev vnetja pri napredovanju parodontalne bolezni, ki bi lahko prispevala k razvoju sistemskega vnetja, kot je kronična ledvična bolezen.

1. Uvod

Kronična ledvična bolezen(CKD) vpliva na kakovost življenja prizadetih posameznikov. Lahko zlahka napreduje v napredovale faze in s tem vodi do večjegastopnje obolevnosti in umrljivosti. CKDje bolj razširjena v azijskem prebivalstvu v primerjavi z drugimi etničnimi skupinami. [1]. Bolezen prizadene 8 % do 13 % celotne svetovne populacije [2]. Glavna etiologija umrljivosti pri posameznikihki trpijo zaradi kronične ledvične boleznije resnost stanja s povečanim vnetjem, ki vodi do srčnih zapletov [3].

Parodontitis pa jevnetno stanjeki jih povzročajo po Gramu negativne bakterije, povezane z obemalokalni in sistemski imunski odzivki vodijo do uničenja parodonta [4].Parodontalna bolezennastane zaradi obilice mehanizmov, povezanih z navzkrižno povezavo med gostiteljskimi faktorji in mikrobi [5,6]. Napredovanje parodontitisa vodi do intenzivne lokalne sinteze proinflamatornih citokinov, ki lahko vstopijo v krvni obtok, kar povzroči povišane ravni biomarkerjev vnetja tako v tkivu dlesni kot v serumu [7,8]. Tako je parodontalna bolezen glavni infekcijski oder, ki bi lahko okrepil sistemske vnetne ravni in povečal obolevnost bolnikov [9]. Za pravočasno diagnosticiranje in zdravljenje parodontalnih bolezni je njihova klasifikacija obvezna, saj pomaga pri organizaciji zdravstvene oskrbe pacientov in pomaga znanstvenikom in raziskovalcem pri razumevanju etiopatogeneze in zdravljenja tovrstnih bolezni v zaporednem natančnem vzorcu. Za kategorizacijo teh parodontalnih bolezni so predlagani različni klasifikacijski sistemi, od katerih je na novo sprejeta AAP klasifikacija parodontalnih in periimplantatnih bolezni iz leta 2017 uporabna za kategorizacijo bolezni tako na podlagi njene resnosti kot glede na prisotnost ali odsotnost tveganja. dejavniki in kompleksnost [5].

Parodontitis je pogost in spremenljiv dejavnik tveganja za kronično ledvično boleznijo, kjer domnevajo, da povzroča ledvično okvaro zaradi vnetne poti [10]. Vnetje spodbuja vdor parodontalnih mikroorganizmov v tkivo gostitelja in neposredno ali posredno vstopi v cirkulacijski sistem [11]. Povečano število vnetnih mediatorjev spremeni ledvične parametre, kar posledično vpliva na delovanje ledvic in s tem vodi v napredovanje kronične ledvične bolezni. Višje ravni serumskih protiteles proti parodontalnim patogenom odražajo njihovo sistemsko razširjanje, kar povzroči njihovo žilno in jetrno aktivacijo [12]. Obstajajo različne študije, ki razpravljajo o vlogi parodontitisa pri kronični ledvični bolezni, vendar njegov vpliv ob prisotnosti različnih motečih dejavnikov pri napredovanju bolezni še vedno ostaja neraziskan [13,14].

Ta raziskava je bila izvedena za oceno vloge demografskih in parodontalnih parametrov, TNF- in rdečih kompleksnih bakterij, kot so Pg, Td in Tf, v povezavi z motečimi dejavniki, kot so GFR, serumski kreatinin, FBS in ravni HbA1c, na kronične ledvice bolezni posameznikov v prisotnosti ali odsotnosti periodontitisa. Prva ničelna hipoteza trenutne študije je, da ni bistvenih razlik pri primerjavi ravni bakterij TNF in rdečih kompleksov pri bolnikih s kroničnim periodontitisom s kronično ledvično boleznijo ali brez nje. Druga ničelna hipoteza te študije je, da pri teh bolnikih s periodontitisom s kronično ledvično boleznijo ali brez nje ni vpliva statusa sladkorne bolezni.

2. Materiali in metode

2.1. Študija Designn 

Za poročanje o opazovanjih je bila izvedena presečna študija po smernicah STROBEštudije. Velikost vzorca je bila izračunana s programsko opremo G-Power120 predmetovz močjo 95%. Trenutna študija je bila izvedena med januarjem 2019 infebruar 2020v Thrissurju v Kerali v Indiji, kamor so bili bolniki vpisani s kolidža PSMof Dental Science and Research, Thrissur, in Thrissur Dialysis Center, Indija. Med180 pregledanih oseb, 30 prostovoljcev je prišlo na glavni zdravstveni pregled v splošnibolnišnici PSM College of Dental Science and Research, Thrissur, sta bila oba parodonasistemsko zdravi in ​​so bili kategorizirani kot kontrolna skupina (C). Vpisali smo se40 bolnikov s parodontitisom brez kronične ledvične bolezni s PSM Dental College of Sciences, Kerala,Indija, od katere je bilo 10 bolnikov izključenih, ker so imeli druga sistemska stanja. nazadnje,Izbranih je bilo 30 bolnikov s hitrostjo glomerularne filtracije > 90 ml/min, določeno v skladu zs klasifikacijo CKD_EPI 2009 in so bili zato razvrščeni v skupino P.Zaposlili smo 43 parodontalno zdravih bolnikov z diagnozo kronične ledvične bolezni (stopnje 2–4) izDializni center Thrissur, Indija. Med njimi jih je bilo 13 izključenih zaradi drugih sistemskihstanja in škodljive navade, kot je kajenje. Tako je bilo izbranih 30 bolnikov zaSkupina CKD. Zaposlili smo 47 parodontitisov s kronično ledvično boleznijo iz dializnega centra Thrissur,Indija in 17 bolnikov je bilo izključenih, ker niso privolili v sodelovanje v študiji,kar je vodilo do skupnega števila 30 bolnikov v skupini s kronično ledvično boleznijo + P (slika 2).1). Sledimpodrobno razlago raziskovalnega protokola udeležencem študije, smo pridobili obveščenisoglasje pred izvedbo študije. Institucionalni odbor za etično presojoPSM College of Dental Science and Research (Thrissur, Indija) odobril raziskavopredlog s protokolom št. PSMDC/IEC/01/2015. Vsi postopki so bili izvedeni v nadaljevanjuHelsinška deklaracija iz leta 1975, kot je bila revidirana leta 2013. Intervali zaupanja so biliizračunano z pridobljenimi zapisi iz bolnišnice, ki so bili 95 % in 80 %, s končnimvzorec 120 posameznikov.

Lastly, the study comprised four groups: C group: 30 systemically and periodontally healthy subjects; P group: 30 systemically healthy periodontitis subjects; CKD group: 30 periodontally healthy subjects with CKD; P + CKD group: 30 CKD patients with periodontitis. Inclusion criteria: (a) willingness to participate; (b) age range: 35–65 years; (c) individuals with at least 12 natural teeth in the oral cavity; (d) in the case of CKD and C groups, subjects with intact periodontal health were recruited; (f) in the case of the P and CKD + P groups, individuals with periodontitis in accordance to the American Academy of Periodontology and European Federation of Periodontology 2017 classification were recruited, where interdental CAL was detectable at >2 nonadjacent teeth with CAL ≥ 3 mm and probing pocket depth >3 mm present in >2 zoba [15].

Kronično ledvično bolezen smo glede na klasifikacijo razdelili na pet stopenjBolezni ledvic: Izboljšanje globalnih izidov (KDIGO) 2009, kjer so bili preddializni bolniki vključeni v študijo na podlagi ugotovljene hitrosti glomerularne filtracije (eGFR). Udeleženci z GFR večjo ali enako 90 ml/min/1,73 m2 so bili vključeni v skupino C. Skupina CKD je vključevala posameznike s klinično diagnozo ledvične odpovedi z GFR od 89 do 15 ml/min in pri konzervativnem zdravljenju pred dializo [16].

Slika 1. Diagram poteka študije. Merila za izključitev: (a) posamezniki, ki so bili v šestih mesecih pred študijo podvrženi parodontalnemu zdravljenju; (b) osebe z navadami kajenja, tobaka in alkohola; (c) osebe z drugimi sistemskimi boleznimi, kot so bolezni srca in ožilja, hipertenzija, sarkoidoza, tuberkuloza, karcinom, revmatoidni artritis in imunosupresivna stanja, ter osebe z drugimi vnetnimi stanji; (g) posamezniki z eGFR < 15 ml/min/1,73 m2 (obstajala je možnost, da bi bili tako bolni, da ne bi mogli sodelovati v študiji ali da bi začeli z dializo).

2.2. Zbirka vzorcev

2.2.1. Odvzem krvi

Vzorce venske krvi smo zbrali z venepunkcijo zjutraj po 12 urah na tešče v 5 ml centrifugalnih epruvetah brez antikoagulanta. Zbrane vzorce smo pustili strjevati 1 uro pri sobni temperaturi, nato pa smo serum centrifugirali 20 minut pri 3000 obratih na minuto 10 minut. Centrifugirane serume smo do analize hranili pri –70 ◦C.

2.2.2. Zbiranje vzorcev subgingivalnega plaka

Ob prvem obisku pacienta so med začetnim kliničnim pregledom zbrali vzorce plaka iz subgingivalnega področja s kiretami Gracey (Hu-Friedy, Chicago, IL, ZDA) iz najglobljih parodontalnih mest oseb s parodontitisom v prisotnosti in odsotnosti kronična ledvična bolezen. Zbrane vzorce plakov smo zmešali s kasnejšo raztopino RNA (Qiagen, Hilden, Nemčija) za preprečevanje razgradnje transkriptoma in shranili pri –80 ◦C do nadaljnjega eksperimentiranja. Po odvzemu subgingivalnega plaka so bili bolniki podvrženi postopku oralne profilakse za odstranitev lokalnih dejavnikov.

2.3. Ocenjeni parametri študije

2.3.1. Demografske spremenljivke

Demografski podatki, zbrani iz bolnišničnih kartotek bolnikov, so bili (1) starost, (2) spol, (3) indeks telesne mase in (4) socialno-ekonomski status.

2.3.2. Parodontalni parametri

En usposobljeni slepi raziskovalec je uporabil parodontalno sondo William za intraoralni pregled parodonta. Parodontalni parametri so bili PI [17], GI [17], PPD in CAL. Posnetki so bili zabeleženi na najbližji mm. Resnost parodontitisa je bila stopenjska in stopenjska. Parodontalna diagnostika izbranih preiskovancev je bila v skladu s smernicami, ki jih je leta 2017 predstavila Mednarodna delavnica za klasifikacijo parodontalnih bolezni in stanj Ameriške akademije za parodontologijo in Evropske zveze za parodontologijo [16].

2.3.3. Diabetična ocena

Za vse udeležence so bili zabeleženi diabetični parametri, kot so ravni HbA1C in ravni krvnega sladkorja na tešče.

2.3.4. Ledvični parametri

Vrednosti serumskega kreatinina so bile določene z avtomatizirano metodo iz odvzetih vzorcev krvi s polavtomatskim biokemičnim analizatorjem. Ocenjena hitrost glomerularne filtracije (eGFR) je bila izračunana z vrednostmi kreatinina v serumu z uporabo enačbe CKD-EPI iz leta 2009.

2.3.5. Faktor tumorske nekroze-

Koncentracijo vnetnega biomarkerja TNF- smo analizirali z metodo ELISA z analizo vzorcev venske krvi, odvzetih osebam vseh štirih skupin. Za določitev markerja smo uporabili komplet humanega TNF alfa ELISA (ab181421) ob upoštevanju navodil proizvajalca. Pred analizo smo izvedli standardizacijo in vzorce vzdrževali na sobni temperaturi. Koncentracija ravni TNF-ja je bila izmerjena v pikogramih na milimeter (pg/mL)

2.4. Molekularna analiza

Analiza RT-PCR Vzorce subgingivalnih oblog, zbranih pri preiskovancih, smo podvrgli RT-PCR za odkrivanje in kvantifikacijo rdečih kompleksnih bakterij (Pg, Td in Tf). Genomsko DNA smo izolirali iz vzorcev z uporabo kompleta za hitro DNA (QIAamp DNA Minikit (QIAGEN Inc., 9300 Germantown Road, Germantown, MD 20874, ZDA)) z upoštevanjem protokola proizvajalca. Te ekstrahirane vzorce DNK smo kvantificirali s spektrofotometrom, kjer smo izvedli nadaljnjo komplementarno sintezo DNK (c-DNK) in analizo RT-PCR z uporabo Stratagene MX3000P (Agilent Technologies, 5301 Stevens Creek Blvd., Santa Clara, CA, ZDA). Pomnoževanje vzorcev c-DNA je bilo izvedeno v treh izvodih, da se odpravijo napake, ob upoštevanju standardnega operativnega postopka, ki ga zagotavlja komplet Takara (TB Green TMP remix Ex Taq TMII PCR Kit; Takara Bio Inc., Shiga, Japonska).

Pri detekciji Prophyromoans gingivalis, Treponema denticola in Tonerella forsythia je bilo uporabljeno dvojno standardno DNA vezavno barvilo SYBR Green I (KAPA SYBR FAST qPCR Kit) z uporabo primerjev, specifičnih za vrsto, in optimizirana je bila učinkovitost reakcije. Analiza talilne krivulje je bila izvedena v vsakem vzorcu za identifikacijo kontaminantov, več pomnožev in nespecifičnih produktov.

Produkte PCR smo vizualizirali z elektroforezo v 2 % agaroznem gelu in 100 bp molekularno markersko DNA s kontrolo etidijevega bromida. Količino genov smo izračunali z metodo primerjalne mejne vrednosti cikla (CT). CT je bil uporabljen za izražanje števila rdečih kompleksnih bakterij, vrednosti CT pa so bile obratno sorazmerne s številom bakterij.

2.5. Statistična analiza

Za statistično analizo dobljenih podatkov je bil uporabljen Statistical Package for Social Science (SPSS, (IBM Corporation, Chicago, IL, USA) različica programa 17) za Microsoft Windows. Opažena je bila normalna porazdelitev podatkov. Opisna statistika je bila predstavljena s pomočjo številk in odstotkov. Za vsako skupino smo določili povprečje in standardni odklon za vsak parameter (demografski, ledvični in periodontalni) ter določili stopnjo pomembnosti. Za opazovanje pomembnih razlik med skupinami je bila uporabljena ANOVA. Analiza Pearsonovega korelacijskega koeficienta je bila izvedena za korelacijo rdečih kompleksnih bakterij z vsemi drugimi parametri. Šteje se, da je statistično pomembno, če je vrednost p manjša ali enaka 0,05.