Vpliv polisaharida astragalusa na status ledvic in indekse fibroze podganjega modela diabetične nefropatije, ki jo povzroča streptozotocin

Za več informacij:emily.li@wecistanche.com

Yue Ji, Xue-Rou Yang, Hong-Tao Yang, Kang Yang, Qing-Yun Zhao, Shou-Ci Hu, Qi-Hang Su

1 Tianjinska univerza tradicionalne kitajske medicine, Tianjin, Kitajska.

2 Prva učna bolnišnica Univerze tradicionalne kitajske medicine Tianjin, Tianjin, Kitajska

Poudarki

Čeprav niso opazili učinka uravnavanja krvnega sladkorja, bi lahko polisaharid astragalusa izboljšalledvičnacevastointersticijske poškodbe pri podganah z diabetično nefropatijo in zgodnjo fazoledvičnafunkcijopoškodbe, kar je lahko povezano z znižano regulacijo TGF- 1 in -SMA.

Povzetek

Cilj: Preučiti učinek astragalusovega polisaharida (APS) na stanje ledvic in indekse fibroze pri podganah z diabetično nefropatijo. Metode: 72 podganjih samcev je bilo naključno razdeljenih v tri skupine: negativna kontrolna skupina (NC, n=24); skupina modelov diabetične nefropatije (DNM, n=24); in model diabetične nefropatije s skupino APS (DNM plus APS, n=24). Podgane iz skupin DNM in DNM plus APS so bile podvržene enostranski nefrektomiji in injekciji streptozotocina (STZ) (65 mg/kg). Podganam v skupini DNM plus APS so dajali 50 ie/kg/dan APS s subkutano injekcijo od prvega tedna po operaciji do smrti. Podganam iz skupin NC in DNM so subkutano injicirali enak volumen fiziološke raztopine. V 3., 8. in 13. tednu po operaciji je bilo naključno žrtvovanih 6 podgan iz vsake skupine in zbrana kri za merjenje serumskega kreatinina in dušika sečnine v krvi. Na dan pred žrtvovanjem so podgane za 24 ur postavili v presnovno kletko za zbiranje urina. 14. teden po operaciji je bilo naključno izbranih 6 podgan iz vsake skupine za merjenje telesne teže in ledvičnega indeksa. Zbrana je bila kri za merjenje glukoze v krvi. Ledvice so bile pobrane za odkrivanje patoloških sprememb z barvanjem s hematoksilinom in eozinom. Rezultati: Histološka ocena podgan DNM je nakazovala simptome poškodbe, kot dokazujejo hiperplazija glomerularnega mezangialnega matriksa, atrofija ledvičnih tubulov in zadebelitev bazalne membrane. V nasprotju s tem so podgane s STZ-inducirano diabetično nefropatijo, zdravljene z APS (50 i.e./kg/dan), pokazale znatno izboljšane histološke rezultate, kar kaže, da ima APS ugoden učinek naledvičnatkivapri STZ-induciranih podganah DNM. Naši rezultati so tudi pokazali, da je APS lajšal poškodbo ledvic in učinkovito izboljšal telesno težo pri podganah DNM. Razmerje med težo ledvic in telesno težo se je po zdravljenju z APS zmanjšalo in zgodnja stopnja okvare ledvične funkcije se je izboljšala. V kasnejših fazah bolezni so se 24-urne beljakovine v urinu znatno zmanjšale. Poleg tega je APS zmanjšal izražanje TGF- 1 in -SMA v ledvicah. Zaključek: APS se je znatno izboljšalledvičnacevastointersticijska poškodba pri podganah DNM in zgodnja stopnja okvare ledvične funkcije. Mehanizem je morda povezan z znižano regulacijo izražanja TGF- 1 in -SMA, ki upočasnjujeta napredovanje ledvične intersticijske fibroze pri podganah DNM.

Ključne besede: DiabetikNefropatija, Astragalus polisaharid,ledvičnakazalo, Fibroza, TGF- 1, -SMA

Cistanche je dober za delovanje ledvic

Ozadje

Diabetična nefropatija (DN) je pogost lobanjski zaplet sladkorne bolezni z visoko obolevnostjo. Približno 25-50 odstotkov bolnikov s sladkorno boleznijo trpi za DN. Ti bolniki kažejo progresivno izguboledvičnafunkcijo, kar lahko povzroči končno odpoved ledvic, kot je odpoved ledvic [1]. Patogeneza in mehanizem DN nista povsem jasna. Nedavne študije so pokazale, da lahko disfunkcija energijske presnove in distrofija sprožita presnovni spomin, ki zavira razvoj in izločanje celic trebušne slinavke, kar končno povzroči DN [2].

Tradicionalna kitajska medicina (TCM) se pogosto uporablja za zdravljenje DN in je pokazala dobre učinke. Po teoriji TKM je etiološki dejavnik DN zastoj krvi, ki povzroča motnje v delovanju telesa, zavira nastajanje Qi-ja in krvi ter sproži pomanjkanje Qi-ja. Pomanjkanje Qi lahko povzroči napredovanje DN. Študije so pokazale, da injekcija Shuxuetong [izvleček Shuizhi (Hirudo) in Dilong (lumbricus)] dramatično izboljša raven glukoze v krvi inledvičnafunkcijobolnikov z DN [3]. Izvleček kapsule Huangkui Huangkui (abelmosk)] izboljša mikrovnetje pri bolnikih z DN [4]. Bailing Pills lajšajo mikrovnetje in oksidativni stres pri bolnikih s kronično DN, ki jo povzroča DN.ledvičnaneuspeh[5]. Poleg tega se tablete Tangweikang, vključno s Huangqi (Radix Astragali seu Hedsari), Shuizhi (Hirudo) in Wuweizhi (Fructus Schisandrae Chinensis), pogosto uporabljajo v klinični praksi [6, 7]. Raziskovalci so dokazali, da tablete Tangweikang povečajo izražanje matrične metaloproteaze-9 in zmanjšajo izražanje tkivnega inhibitorja metaloproteinaz-1 v ledvicah podgan z modelom diabetične nefropatije (DNM) [8, 9].

Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari), ki dopolnjuje Qi, aktivira cirkulacijo in zmanjšuje zastajanje krvi, je med najpomembnejšimi zelišči za zdravljenje DN v kliniki [10,11]. Kot je omenjeno v nekaterih klasičnih starodavnih knjigah TCM, vključno s Tang Ye Ben Cao, ki sta jo sestavila Wang Haogu [12] in Yi Zong. Jin Jian, ki ga je sestavil Wu Qian [13], so simptomi DN podobni simptomom "bolezni disperzije-žeje", "vodenega", "motnega urina" in "bolezni prehranjevanja" v kitajski medicini, glavna patogeneza DN pa je je posledica nenormalnosti Sanjiao (zgornji, srednji ali spodnji) [14]. Pomanjkanje Qi in Yin sta manifestaciji motenj v delovanju notranjih organov ali črevesja. Huangqi (Radix Astragali seu Hedysari) je bil uporabljen pri DN [15] za zdravljenje poškodb pljuč, vranice, jeter in ledvic ter za obogatitev Qi in Yin, povečanje krvnega pretoka in čiščenje mrežnih žil. Astragalus polisaharid (APS) (odobrena št. Z20040085) je ena glavnih zelo aktivnih sestavin v Huangqiju (Radix Astragali seu Hedysari). V zadnjih letih je bilo ugotovljeno, da ima APS širok spekter farmakoloških učinkov na izražanje inzulinskih signalnih molekul v ledvičnem tkivu podgan s sladkorno boleznijo tipa 2 [16]. Vendar pa je malo znanega o dejavnikih, ki vplivajo na mehanizme srednje in pozne faze DN. Namen te študije je bil raziskati vpliv APS na status ledvic in indekse fibroze podgan z DN.

Materiali in reagenti

Živali in zdravljenje

Laboratorijske živali in prehranjevalno okolje. Dvainsedemdeset zdravih podganjih samcev Sprague-Dawley s povprečno telesno težo 180 ± 20 g pri starosti 8 tednov je bilo nastanjenih pri sobni temperaturi (23 ± 1 stopinja) z 12-urnim ciklom svetlobe in 12-urno temo (sveti od 6:00 zjutraj do 6:00 popoldne). Hrana in voda sta bili na voljo ad libitum. Poskusi so bili izvedeni v skladu z institucionalnimi predpisi in nacionalnimi merili za poskuse na živalih. Institucijski odbor za etiko živali je pred izvedbo poskusov pregledal celoten protokol za živali. Eksperimentalni postopki so bili v skladu z direktivo 2010/63/EU Evropskega parlamenta in z vsemi živalmi so ravnali v skladu s smernicami Odbora za raziskave na živalih Univerze Tianjin TCM (TCMLAEC2014005).

Združevanje in modeliranje živali. DN je bil induciran z enostransko nefrektomijo in enkratnim intraperitonealnim dajanjem 65 mg/kg streptozotocina (STZ)[17. 21], ki smo ga raztopili v natrijevem citratnem pufru pri pH 4.2.4.5. Kontrolnim živalim so injicirali nosilce (natrijev citratni pufer, pH 4.2-4.5). Podgane so bile naključno razdeljene v tri skupine negativna kontrolna skupina (NC, n =24); DNM,n=24;in DNM s skupino APS (DNM plus APS,n =24). Podganam iz skupine DNM plus APS so dajali APS (50 ie/kg/dan) s subkutano injekcijo od prvega tedna po operaciji do smrti. Podgane iz skupin NC in DNM so bile subkutano injicirane z enakim volumnom fiziološke raztopine.

Indikatorji in metode odkrivanja

Splošna izjava. V 14. tednu po operaciji je bilo naključno izbranih 6 podgan iz vsake skupine za merjenje telesne teže, teže ledvic in ledvičnega indeksa. Kri je bila zbrana z metodo notranjega kantusa za biokemijsko testiranje glukoze v krvi (ACCU -CHEK, Indianapolis, IN, ZDA). Ledvični indeks je bil izračunan na naslednji način: ledvični indeks=teža ledvic/telesna teža × 100 odstotkov.

Delovanje ledvic in 24-h beljakovin v urinu. V 3., 8. in 13. tednu po operaciji je bilo naključno žrtvovanih 6 podgan iz vsake skupine in z abdominalno aortno metodo odvzeta kri za biokemično testiranje serumskega kreatinina (Scr) in dušika sečnine v krvi (BUN). Na dan pred žrtvovanjem so podgane za 24 ur postavili v presnovne kletke za zbiranje urina, ki je bil testiran z biuretno reakcijo na 24-urne beljakovine v urinu. Vzorce krvi smo centrifugirali pri 3000 obratih na minuto 15 minut, serum pa zbrali in shranili pri -80 stopinjah do analize, kot je opisano spodaj. Scr, BUN in skupne beljakovine v urinu v 24 urah so testirali na bralniku plošč z uporabo eksperimentalnega kompleta reagentov. Patološka in imunohistokemijska preiskava. Kot je opisano zgoraj, so bile po pridobitvi krvi in ​​urina vse živali žrtvovane z izpahom materničnega vratu. Ledvice so bile popolnoma izpostavljene in previdno ločene od perifernega tkiva in ledvične kapsule. Po vzdolžnem zarezu skupaj z ledvičnimi tkivi z ostrim rezilom in pobiranju je bila izvedena 10-odstotna fiksacija s formalinom za odkrivanje patoloških sprememb z barvanjem s hematoksilinom in eozinom (HE) in imunohistokemijo (IHC). Ledvična tkiva so bila nato vdelana v parafin in razrezana na 5 uM odseke za barvanje z HE, medtem ko je bila ekspresija TGF- 1 in -SMA odkrita z IHC z uporabo metode streptavidin-peroksidaze.

Statistična analiza

Podatki so bili analizirani s programsko opremo SPSS 13.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL, ZDA). Vsi podatki so bili v tabelah izraženi kot povprečje ± standardni odklon in prikazani z navpičnimi črtami na slikah. Razlike med skupinami smo ugotavljali z analizo variance. Vrednost verjetnosti P, manjša od 0,05, je veljala za pomembno.

Rezultat

Splošne značilnosti

Telesna teža v skupini DNM se je znatno zmanjšala v primerjavi s skupino (P=0.001, tabela 1). Telesna teža v skupini DNM plus APS je bila izrazito povečana v primerjavi s skupino DNM (P=0.017, tabela 1). Ledvični indeks je bil višji v skupini DNM kot v skupini NC (P=0.001, tabela 1). Poleg tega se je ledvični indeks zmanjšal v skupini DNM plus APS v primerjavi s skupino DNM (P= 0.026, tabela 1). Glukoza v krvi je bila povečana v skupini DNM v primerjavi s skupino NC (P=0.001, tabela 1), medtem ko v skupini DNM ni bilo očitne razlike med skupino ] in DNM plus APPS, kar kaže, da Samo APS za vzdrževanje stabilne ravni krvnega sladkorja v 14. tednu ni učinkovit.

Biokemijski indeksi

Ni bilo bistvene razlike v ravni Scr in BUN ali v ravni 24-urnih beljakovin v urinu v različnih časovnih točkah v vsaki skupini (tabela 2-3). V primerjavi s skupino NC so podgane iz skupine DNM pokazale očitno višje ravni BUN v različnih časovnih točkah (P=0.021, P=0.012, P=0.008, tabela 2). V primerjavi s skupino DNM so podgane DNM plus APS pokazale očitno nižje ravni BUN v 3. in 8. tednu (P=0.017 oziroma P= 0.015, tabela 2). V primerjavi s skupino NC so podgane iz skupine DNM pokazale očitno višje ravni Scr v različnih časovnih točkah (P=0.033, P=0.026, P=0.028, Tabela 3 ) V primerjavi s skupino DNM. Podgane DNM plus APS so pokazale očitno nižje ravni Scr v 8. tednu (P= 0.021, tabela 3), medtem ko v 3. in 13. tednu niso opazili nobene razlike. V primerjavi s skupino NC so podgane v skupini DNM pokazale bistveno višje 24 h ravni beljakovin v urinu (P=0.021, P= 0.037, P= 0.019, tabela 4) in po 8. tednu so se beljakovine v urinu močno povečale (P{{ 38}}.017, tabela 4). V primerjavi s skupino DNM so podgane DNM plus APS pokazale bistveno nižje ravni beljakovin v 24-urnem urinu v 13. tednu (P=0.011, tabela 4).

Patološke ugotovitve

Glomerularna struktura je bila v skupini NC jasna in očitne anomalije, mezenhimske hiperplazije ali zadebelitve bazalne membrane niso opazili. Kortikalni in medularniledvičnacevastostrukture so bile normalne, urejene v vrstnem redu, brez vnetja in fibroze (slika 1A), v primerjavi s skupino NC. Barvanje s HE v skupini DNM (slika 1B) je pokazalo hiperplazijo glomerularnega mezangialnega matriksa, atrofijo ledvičnih tubulov in zadebelitev bazalne membrane. Na nekaterih področjih so opazili žariščno glomerulosklerozo, zadebelitev Bowmanove kapsule in infiltracijo ledvičnih intersticijskih vnetnih celic ter fibrozno proliferacijo. Te patološke spremembe v primerjavi s skupino DNM so bile v skupini DNM plus APS olajšane v različni meri (slika 1C). Poleg tega je skupina DNM plus APS pokazala, da se je atrofija ledvičnih tubulov dramatično zmanjšala in ledvične intersticijske fibroze pri barvanju s HE ni bilo jasno opaziti.

Imunski obarvalni učinek TGF- 1 in -SMA v ledvičnem tkivu

Rezultat imunskega barvanja TGF- 1 v skupini NC (slika 2A) je razkril rahlo pozitivno izražanje v epitelijskih celicah ledvičnih tubulov, ki so se pojavljali kot razpršeni rjavo-rumeni ali rjavi delci, večina glomerulov pa je pokazala negativno izražanje. V primerjavi s skupino NC so opazili številne rjavo-rumene pozitivne granule v ledvičnih tubulih in ledvičnih intersticijskih regijah v skupini DNM (slika 2B), kar kaže na izražanje TGF- 1 vledvicaje bil višji od tistega v skupini NC. Poleg tega je v skupini DNM plus APS (slika 2C) raven rumenih zrnatih pozitivnih reaktantov pokazala rahlo izgubo barve in se je zmanjšala v primerjavi s tistimi v skupini DNM. V skupini NC (slika 2D) se je pozitivna ekspresija -SMA pojavila kot nekaj rjavo-rumenih ali rjavih delcev, ki so bili večinoma lokalizirani v gladkih mišičnih celicah ledvičnih arterij in občasno v ledvičnih tubulih in ledvičnem intersticiju. V primerjavi s skupino NC je bilo več ledvičnega intersticijskega območja pokrito z rjavo-rumenimi ali rjavimi delci, kar kaže, da je bila ekspresija a-SMA povečana v skupini DNM (slika 2E). Poleg tega je v skupini DNM plus APS (slika 2F) raven rumenih zrnatih pozitivnih reaktantov pokazala rahlo izgubo barve in se je zmanjšala v primerjavi s skupino DNM.

Diskusija

DN je resen diabetični zaplet s kliničnimi značilnostmi stopnje izločanja beljakovin v urinu, ki se sčasoma povečuje, in ledvične hipofunkcije, ki napreduje v nefrozo v terminalni fazi. Številni diabetični patološki produkti, vključno s kateholamini, endotelinom, inzulinu podobnim rastnim faktorjem-1, napredovalimi končnimi produkti glikacije in TGF- 1, so bili povezani s fibrozo organov. Prejšnje študije so pokazale, da ima TGF- 1-inducirana signalna pot pomembno participativno vlogo priledvičnafibrozapri določenih ledvičnih patoloških stanjih [22]. V tej študiji smo pripravili živalski model DN z uninefrektomijo in injekcijo streptozotocina [23]. Podgane v skupini DNM so bile hudeledvičnapoškodbavključno z zvišanimi ravnmi glukoze v krvi in ​​BUN v serumu ter zvišanimi ravnmi beljakovin v urinu po 24 urah, kot tudi znatnim zmanjšanjem telesne teže. Poleg tega so patološke študije v ledvicah pokazale hiperplazijo glomerularnega mezangialnega matriksa, atrofijo ledvičnih tubulov in infiltracijo vnetnih celic, kar kaže, da DN pri podganah povzroči velik volumen proteinurije. Rezultati trenutne študije so pokazali, da APS, sestavni del TKM, uravnava ekspresijo a-SMA in TGF- 1 v diabetičnih ledvicah in igra pomembno vlogo pri razvoju ledvične fibroze, povezane z DN pri miših. .

Kopičenje zunajceličnega matriksa je vzrok za glomerulosklerozo in tubulointersticijsko fibrozo v patološkem procesu DN, TGF- 1 pa ima pomembno vlogo pri tubulointersticijski fibrozi. TGF- 1 lahko inducira adhezijo in sedimentacijo medceličnega matriksa in zavira razgradnjo celičnega matriksa, kar prispeva k tubulointersticijski fibrozi [24, 25]. Tako lahko zaviranje TGF- 1 ublaži napredovanje DN. Jeremiah [26] je izvedel poskuse UUO pri podganah in pokazal, da se je po odstranitvi obstrukcije ledvična tubularna intersticijska fibroza olajšala in je bila ekspresija TGF- 1 znižana, kar potrjuje, da lahko zaviranje visoke ekspresije TGF- 1 olajša ali upočasni intersticijska fibroza ledvičnih tubulov.

V zadnjih letih je večina študij TGF- raziskala njegovo pot prenosa signala. TGF- lahko inducira aktivacijo različnih signalnih molekul, kot so proteini Smad, protein kinaze, aktivirane z mitogenom, in fosfatidilinozitol 3 kinaza/protein kinaza B itd., signalna pot TGF- 1/Smad pa je glavna induktor [27] ledvične fibroze. -SMA je protein citoskeleta v evkariontskih celicah, ki vpliva na strukturo mikrofilamentov celic [28]. V normalnem ledvičnem tkivu se -SMA izraža samo v sredini ledvične žile in se redko izraža v glomerulih in ledvičnem intersticiju. V patoloških pogojih v ledvicah se lahko -SMA izraža in razmnožuje okoli glomerularne mezenhimske regije, okolice glomerula, okolice fibroznega območja in okolice krvnih žil [29].

Fibroblasti se lahko pod določenimi pogoji preoblikujejo v miofibroblaste, spremembe v mikrookolju pa lahko vplivajo na preoblikovanje fibroblastov v miofibroblaste. Ne samo transdiferenciacija delovanja ledvičnih tubulnih epitelijskih celic, ampak tudi aktivacija ledvičnih intersticijskih fibroblastov vodi do ledvične intersticijske fibroze, kar ima za posledico proliferacijo mišičnih fibroblastov ali aktivacijo. Številne študije bolezni ledvic so potrdile, da so število mišičnih fibroblastov, raven izražanja -SMA in stopnja ledvične intersticijske fibroze pozitivno povezani z napredovanjem bolezni ledvic. Označevalni protein -SMA je pomemben pokazatelj napredovanja ledvične intersticijske fibroze [30].

Druge študije so poročale, da ima TKM koristne učinke pri zdravljenju DN. Chen in drugi [31] so navedli, da mešanica Gegena (Radix Puerariae) in Shanzha (Fructus Crataegi) zavira ledvično poškodbo pri sladkorni bolezni tipa 2 z znižanjem PI3K/Akt. Zhang in drugi [32] so pokazali, da zrnca Shenkang izboljšajo poškodbo ledvic pri podganjem modelu DN s preprečevanjem kopičenja zunajceličnega matriksa, zmanjšanjem izražanja kolagena I in III ter zaviranjem izražanja matričnih metaloproteinaz-2 in { {5}} v ledvičnem tkivu. Za to študijo so še posebej pomembne nedavne ugotovitve, da kombinacija APS in drugega izvlečka tradicionalne kitajske medicine, reina, lajša patologije kroničneledvičnaneuspeh, vključno s funkcionalno poškodbo glomerulov, intersticijskim vnetjem in apoptozo ledvičnih tubularnih celic [33].

V tej študiji smo ugotovili, da je APS zmanjšal izražanje -SMA in TGF- 1 in vivo in ublažil poškodbo ledvičnega tkiva. V primerjavi s prejšnjimi študijami TKM pri DN se je zaščitni učinek pojavil prek drugačnega mehanizma, kar kaže na to, da je lahko terapevtska strategija spojin TKM za DN učinkovita.

Vendar pa po zdravljenju z APS niso opazili učinka znižane regulacije krvnega sladkorja. Predvidevamo, da z napredovanjem bolezni (obdobje opazovanja: 13 tednov) uporaba samega APS za vzdrževanje stabilne ravni sladkorja v krvi skozi čas ni učinkovita. Prejšnji poskusi so pokazali podobne rezultate [34, 35], vendar je potrebna nadaljnja potrditev. V nekaterih kliničnih preskušanjih so zdravila TKM predpisana kot samostojna zdravila in za večino bolnikov bo morda potrebna sočasna uporaba dveh ali več zdravil (APS plus metformin ali APS plus insulin).

Zaključek

Za zaključek smo dokazali, da ima APS pomembne učinke na DN, APS ni le bistveno zmanjšal poškodbe ledvične funkcije v začetni fazi in albumina v urinu v srednji in pozni fazi, ampak je tudi izboljšal intersticijsko poškodbo ledvičnih tubulov pri podganah z DN. Mehanizem je lahko povezan z znižano regulacijo izražanja TGF- 1 in -SMA ter s tem zakasnitvijo napredovanja ledvične intersticijske fibroze pri podganah z DN.

Reference

1 Pang GM, Yan Y, Zhu P, et al. Klinični osnutek specifikacije tradicionalne kitajske medicine o diabetični periferni nevropatiji. Chin J Tradit Chin Med Pharm 2010,

2: 260-264. 2. Wang YZ, Zhang ZH. Mehanizem diabetične nefropatije. Chin Rem Clin 2008, 8: 58-60.

3. Xiang HD. Patologija pri diabetični nefropatiji. Int J Endocrinol 2004, 24: 125-136.

4. Najmanj XL, Lan LG. Vpliv injekcije Shu-Tong na diabetično nefropatijo. Shanxi J Tradit Chin Med 2008, 29: 407-409.

5. Gao ZT, Wang G. Učinek kapsule Huangkui na mikro vnetje pri bolnikih s sladkorno boleznijo. Chin J Integr Tradit West Nephrol 2011, 12: 1104-1105.

6. L Lin, Ni Q, Liu XM. Kapsula Tang-Wei-Kang odpravi diabetično nefropatijo pri 132 bolnikih. J Med Res 2008, 37: 46-50. 7. Wang HW, Qing N, Pang JL, et al. Študija pravila o kitajski medicini pri zdravljenju diabetične nefropatije. Chin Arch Tradit Chin Med 2008, 26: 2365-2368.

8. Lin L, Guo L. Vpliv TWK na izražanje MMP -9 v ledvični skorji pri podganah s sladkorno boleznijo, ki jih povzroča streptozotocin. J Shanxi Coll Tradit Chin Med 2003, 4: 8-18.

9. Lin L, Qing Q, Liu XM. Učinki in mehanizmi kapsule Tang-Wei-Kang, ki ščiti delovanje ledvic pri podganah s sladkorno boleznijo. Chin J Chin Mat Med 2003, 28: 62-66.

10. Wang W, Koka V, Lan HY. Preoblikovanje rastnega faktorja-beta in signalizacija Smad pri boleznih ledvic. Nephrol 2005, 10: 48-56.

11. Alexopoulos E, Gionanlis L, Papayianni E, et al. Napovedovalci izida pri idiopatskem hitro progresivnem glomerulonefritisu. BMC Nephrol 2006, 7: 1-13.

12. Wang HG. Decoction in Material Medica. Ljudska medicinska založba, 1986.

13. Wu Q. Zlato ogledalo medicine. Založba kitajske medicine, 2002.

14. Ji Y, Li JC, Meng JY, et al. Študija dvosmernega regulativnega učinka para zdravil Ban Xia (Pinellia ternata) in Huanglian (Coptis Chinensis) na gibanje prebavil miši. Tradit Med Res 2018, 3: 148-156.

15. Ji Y, Wang TR, Zhang KX, et al. Analiza literature o pravilnosti in neželenih učinkih cimeta in njegovih pripravkov na recept. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 163-168.

16. Zhou Y, Wu Y. Učinki polisaharida astragalusa na transdukcijo insulinskega signala v ledvičnem tkivu diabetičnih podgan tipa 2. J Hubei Med Univ 2005, 18: 242-247.

17. Xu Y, Zhou SW, Tang JL, et al. Optimalna izbira podganjih modelov eksperimentalne diabetične nefropatije. Acta Acad Med Milita 2006, 28: 2247-2249.

18. Li ZJ, Zhang Y. Napredek v raziskavah na živalskem modelu diabetične nefropatije. Chin B Life Sci 2011, 23: 90-95.

19. Yang F, Tang LQ, Wang FL, et al. Vplivni dejavniki na postavitev eksperimentalne diabetične nefropatije pri podganah. Anhui Med Pharma J 2012, 16: 735-738.

20. Yaribeygi H, Mohammadi MT, Rezaee R, et al. Fenofibrat izboljša delovanje ledvic z izboljšanjem ekspresije NOX-4, IL-18 in p53 v poskusnem modelu diabetične nefropatije. J Cell Biochem 2018.

21. Zhao Y, Huang W, Wang J, et al. Taksifolin zmanjša diabetično nefropatijo pri diabetičnih podganah, ki jih povzroča streptozotocin. Am J Transl Res 2018, 10: 1205-1210.

22. Boukhalfa G, Desmouliere A, Rondeau E, et al. Razmerje med izražanjem aktina alfa-gladkih mišic in fibrotičnimi spremembami v človeških ledvicah. Exp Nephrol 1996, 4: 241-247.

23. Hewitson TD, Becker GJ. Intersticijski miofibroblasti pri IgA glomerulonefritisu. Am J Nephrol 1995, 15: 111-117.

24. Tang WW, Van GY, Qi M. Miofibroblast in alfa 1 (III) kolagen pri eksperimentalnem tubulointersticijskem nefritisu. Kidney Int 1997, 51: 926-931.

25. Iwano M, Plieth D, Danoff TM, et al. Dokazi, da fibroblasti izhajajo iz epitelija med tkivno fibrozo. J Clin Invest 2002, 110: 341-350.

26. Grupp C, Lottermoser J, Cohen DI, et al. Transformacija podganjih notranjih medularnih fibroblastov v miofibroblaste in vitro. Kidney Int 1997, 52: 1279-1290.

27. Ina K, Kitamura H, Tatsukawa S, et al. Pomen -SMA pri pojavu miofibroblastov pri ledvični tubulointersticijski fibrozi. Histol Histopathol 2011, 26: 855-866.

28. Murphy JT, Duffy SL, Hybki DL, et al. S trombinom posredovana prepustnost človeških mikrovaskularnih pljučnih endotelijskih celic je odvisna od kalcija. J Trauma 2001, 50: 213-222.

29. Satpathy M, Gallagher P, Lizotte-Waniewski M, et al. S trombinom inducirana fosforilacija regulacijske lahke verige miozina II v govejih endotelijskih celicah roženice. Exp Eye Res 2004, 79: 477-486.

30. Birukova AA, Smurova K, Birukov KG, et al. Vloga Rho GT prehaja pri disfunkciji pregrade endotelijskih celic pljučnih žil, ki jo povzroči trombin. Microvasc Res 2004, 67: 64-77.

31. Z Chen, Y Yuan, X Zou, et al. Mešanica Radix Puerariae in Fructus Crataegi zavira poškodbo ledvic pri sladkorni bolezni tipa 2 z zmanjšanjem AKT/PI3K. Bmc komplementarna in alternativna medicina 2017, 17: 454-458.

32. Yu Zhang, N Zhou, H Wang, S Wang, et al. Vpliv zrnc Shenkang na napredovanje kronične odpovedi ledvic pri 5/6 nefrektomiranih podganah. Eksperimentalna in terapevtska medicina 2015, 9: 2034-2042.

33. Y Lian, L Xie, M Chen, et al. Učinki polisaharida astragalusa in kombinacije reina na apoptozo pri podganah s kronično odpovedjo ledvic [J]. Komplement na podlagi dokazov Alternat Med 2014, 27: 1862-1868.

34. Lai YN, Yu MH, Zhu QY, et al. Vpliv polisaharidov astragalusa na TGF- 1 v ledvičnem tkivu diabetičnih podgan. Fudan Univ J Med Sci 2002, 29: 255-257. 35. Li ZJ, Zhang Y, Liu YM, et al. Vpliv polisaharidov astragalusa na izražanje nefrina in podocina v podocitih podgan z zgodnjo diabetično nefropatijo. Chin J Pathophysiol 2011, 27: 1772-1776.