Cepivo proti COVID-u na osnovi MRNA-19: je novo, a ne neznano!

Povzetek:

Cepiva mRNA izkoriščajo mehanizem, ki ga naše celice uporabljajo za proizvodnjo beljakovin. Naše celice proizvajajo beljakovine na podlagi znanja, ki ga vsebuje naša DNK; vsak gen kodira edinstven protein. Genske informacije so bistvene, vendar jih celice ne morejo uporabiti, dokler jih molekule mRNA ne pretvorijo v navodila za proizvodnjo specifičnih proteinov. Cepljenja z mRNA zagotavljajo navodila za mRNA, ki so pripravljena za uporabo, za izdelavo specifičnega proteina. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) in mRNA-1273 (Moderna) sta na novo odobreni cepivi proti COVID-19 na osnovi mRNA, ki sta se izkazali za odlično zaščito in učinkovitost. Skupaj obstaja še pet kandidatov za cepivo proti COVID-19 na osnovi mRNA v različnih fazah kliničnega razvoja. Ta pregled je posebej osredotočen na cepiva proti COVID-19 na osnovi mRNA, ki zajemajo njihov razvoj, mehanizem in klinične vidike.

koristi cistanche za moške - krepitev imunskega sistema

Ključne besede:

cepivo proti COVID-19; mRNA cepiva; razvoj cepiva; vektorska cepiva

1. Uvod

Pandemija koronavirusne bolezni{{0}} (COVID-19), ki jo povzroča koronavirus s hudim akutnim respiratornim sindromom-2 (SARS-CoV-2), se je razširila po vsem svetu. Do zdaj je bilo po vsem svetu 662 milijonov potrjenih primerov COVID-19, vključno s 6,6 milijona smrti, o katerih je poročala Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) [1]. Virus prizadene več kot 200 držav po vsem svetu, večina primerov pa je bila zabeležena v Braziliji, Rusiji in Združenih državah [2]. Prvo poročilo o izbruhu COVID-19 je bilo 30. decembra 2019 iz mesta Wuhan v provinci Hubei na Kitajskem. V Wuhanu so zabeležili gruče primerov pljučnice. Pozneje, 7. januarja 2020, je bilo ugotovljeno, da je novi koronavirus (2019-nCoV) povzročitelj. WHO je bolezen sčasoma poimenovala COVID-19 [3,4]. Ocenjena stopnja smrtnosti se giblje od 0,5 do 1,5 %. SARS-CoV-2 spada v družinoCoronaviridaein redNidovirales. SARS-CoV-2 pripada Betacoronavirusu, ki ima tesno genomsko povezavo z dvema virusoma, SARS-CoV in koronavirusom bližnjevzhodnega respiratornega sindroma (MERS CoV). V primerjavi s SARS in MERS je SARS-CoV-2 zelo nalezljiv. COVID-19 je resna bolezen svetovnega pomena. Bolezni ni mogoče zdraviti s posebnim protivirusnim zdravilom, ključ do preprečevanja širjenja bolezni je prekinitev verige prenosa [5]. Za zmanjšanje razširjenosti in umrljivosti se uporablja množična imunizacija proti pandemiji [6,7]. Odkar je bilo 11. januarja 2020 objavljeno zaporedje genoma SARS-CoV-2, je bilo preučenih več kot 150 avtoritetnih projektov imunizacije. Glavni cilj cepljenja je sprožiti imunski odziv, ki zagotavlja dolgoročno zaščito pred resnostjo bolezni [8]. Kot so ocenili Paddy Ssentongo in sodelavci [9], je učinkovitost cepiva (VE) proti vsem okužbam s SARS-CoV-2 padla s 83 % v prvem mesecu po zaključku prve serije imunizacije na 22 % po 5 mesecih ali več . Podobno se je VE proti simptomatskemu COVID-19 zmanjšala s 94 % v prvem mesecu na 64 % v četrtem mesecu po imunizaciji. Na splošno je bila VE proti hudi bolezni COVID-19 močna pri vseh starostih, s stopnjo 90 % (95 % IZ, 87–92 %) pet mesecev ali več po popolnem cepljenju.

Koronavirus ima na svoji površini beljakovine (S) z bodicami; ta protein S bo medsebojno vplival na receptorsko vezavno domeno receptorja za angiotenzinsko konvertazo (ACE) [10,11]. Večina kandidatov za cepivo cilja na ta protein S virusa [12]. Cepivo Pfizer BioNTech COVID-19 Vaccine-BNT162b2 je prvo cepivo, ki ga je odobrila Uprava za hrano in zdravila (FDA). Temelji na messenger RNA (mRNA), ki ga je izdelal Pfizer, ki je prejel dovoljenje za nujno uporabo za osebe, stare 12–15 let ali več, za preprečevanje bolezni COVID-19. Ameriška agencija za hrano in zdravila (USFDA) je 23. avgusta 2021 odobrila cepivo Pfizer [13]. Različne študije so poročale, da ima imunizacija 89,1-odstotno učinkovitost pri preprečevanju okužbe s SARS-CoV-2; poleg tega so cepiva zmanjšala tudi hospitalizacijo, smrt-19-povezano s COVID-om, in preprečevanje sprejemov na intenzivno nego. Nadzorovano širjenje SARS-CoV-2 je mogoče doseči prej, ko je velik delež prebivalstva imuniziranega (npr. 70–80 %). Imunizacija znatno zmanjša pojavnost COVID-19. Cepivo zagotavlja močan in učinkovit imunski odziv za izkoreninjenje okužbe SARS-CoV-2 iz človeškega telesa. Ljudje, ki so bili okuženi, so imeli močan T-celični odziv na virus, kar lahko pomaga pri njihovi sposobnosti okrevanja po okužbi [14,15]. Nevtralizacija je ostala močno povezana z zaščito pred simptomatsko okužbo s skrb vzbujajočimi različicami SARS-CoV-2 [16]. Tako je cepljenje strategija za obvladovanje pandemije.

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Cepiva proti COVID-19 se razvijajo na različnih platformah. Živi oslabljeni virusi, inaktivirana cepiva, virusni vektorji, ki se ne razmnožujejo, RNK in DNK so primeri teh. Različne vrste cepiv s primeri so navedene na sliki 1. Strategija za razvoj cepiva je uporaba uničenega virusa SARS-CoV-2, ki se ne more razmnoževati, lahko pa ostane nedotaknjen v telesu. Imunski sistem bo sprožil svoj odziv proti virusu s tvorbo protiteles proti njemu. COVAXIN® (BBV152), ki ga proizvaja Bharat Biotech, Hyderabad, Indija, in CoronaVac, znan tudi kot sinovac®, ki ga je razvil Sinovac Biotech, Peking, Kitajska, sta za razvoj cepiva uporabila pristop inaktiviranega virusa [17]. Nerazmnoževalni virusni vektor je tudi tehnika, ki so jo sprejela podjetja za proizvodnjo cepiva. Adenovirus (Adenovirus) je široko uporabljan virusni vektor z dvoverižnim genomom, ki deluje kot povzročitelj prehlada. CanSino Biologics Tianjin, Kitajska je razvil Ad5-nCoV (Convidecia®), ki kodira celotno dolžino S-proteina virusa SARS-CoV-2. Virusni vektor nima lastnosti razmnoževanja in zato ne povzroča dejanske bolezni. Ko vstopi v telo, se virusna DNK predstavi na celicah, ki predstavljajo antigen, in proti njej se ustvari imunski odziv. Oxford/Astrazeneca je uporabil adenovirus iz šimpanza (ChAdOx1), ki ima potencial za zmanjšanje interakcije s prevladujočimi protitelesi proti adenovirusu. Cepivo se imenuje AZD122 (Vaxzevria™). Raziskovalni inštitut Gamaleya v Moskvi v Rusiji je razvil cepivo Sputnik V™, ki je prav tako virusni vektor z rekombinantnim človeškim serotipom Ad26. Cepivo Janssen je izdelalo podjetje Johnson and Johnson, New Jersey, ZDA, z uporabo enakega pristopa [18].

mRNA velja tudi za nov pristop k oblikovanju cepiva. Cepiva mRNA so v javnosti nova, vendar jih znanstveniki že dolgo raziskujejo. Ta mRNA cepiva so sintetizirana iz predloge DNA, ki kodira spike protein in je zapakirana v nosilec na osnovi lipoproteina, da pospeši vstop mRNA v telo in prepreči razgradnjo [19]. Ko se cepivo daje intramuskularno, se injicira v globlja tkiva in molekule mRNA bodo vstopile v celico, kar bo olajšalo proces prevajanja [20]. Ob vstopu v telo bo mRNA prepoznana kot antigen in aktiviran bo humoralni imunski odziv, ki bo spodbudil B celice, da se razvijejo v spominske B celice. S tem pri sekundarni izpostavljenosti antigenu; spominske celice B nevtralizirajo in blokirajo antigene [21]. FDA je odobrila cepiva na osnovi mRNA, eno od njih je BNT162b2 (Comirnaty®) Pfizer-BioNTech, New York, NY, ZDA, drugo pa Moderna™, Cambridge, MA, ZDA mRNA-1273, znano tudi kot Spikevax. FDA je odobrila mRNA-1273 za dovoljenje za uporabo v nujnih primerih (EUA) za uporabo pri ljudeh, starih 18 let in več. Trenutni pregled bo zagotovil podrobne informacije o vakcinologiji in dejstvih o COVID-19, razvoju cepiva na osnovi mRNA, delovanju cepiv mRNA, uporabljeni formulaciji in sestavinah, varnosti in učinkovitosti ter regulativnih izzivih za cepiva.

Slika 1. Različne vrste cepiva proti okužbi s COVID-19. (Ustvarjeno z BioRender.com dostopno 31. decembra 2022)

2. Vakcinologija in dejstva o COVID-19

Decembra 2019 so na Kitajskem poročali o skupini posameznikov, ki trpijo zaradi pljučnih bolezni iz neznanega razloga. Kitajski center za nadzor in preprečevanje bolezni (CDC) je nato raziskal negotovost v primerih, povezanih s pljučnico, in njihov izvor z zbiranjem vzorcev iz bolnikovega telesa, ki so bili odkriti z verižno reakcijo s polimerazo v realnem času [22]. Kasneje je bil znan vzrok pljučne bolezni in ugotovljeno je bilo, da jo povzroča koronavirus, ki je bil nadalje poimenovan SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome) ali COVID-19. Od takrat se je spremenila v svetovno pandemijo. Spada v skupino -koronavirusov. Strukturno je ovojnica, nesegmentirana, ki pripada podrodu Sarbecovirus in poddružini Orthocoronavirinae. Genomski material, ki je prisoten v njegovi strukturi, je zaporedje enoverižne pozitivne čutne RNA [23]. Najdemo jih predvsem v gostiteljih ptic in sesalcev. Genomska struktura koronavirusa je prikazana na sliki 2, ki predstavlja, da ima virusna struktura koničaste proteine, ki imajo podenoti S1 in S2 na zunanji membrani. Virusni genom RNA je inkapsuliran znotraj membrane skupaj z nukleokapsidom. Tako lahko rečemo, da obstajajo štirje strukturni proteini, in sicer spike protein (S), nukleokapsidni protein (N), membranski protein (M) in ovojni protein (E) [24]. Poleg tega so prisotni tudi nestrukturni proteini (Nsp), ki jih je skupaj šestnajst. Spike proteini so vidna mesta za vezavo receptorjev, kjer lahko proteini interagirajo z receptorji, prisotnimi v telesu [25]. Podenota S1 vključuje receptorsko vezavno domeno (RBD), kjer se angiotenzin-konvertaza II veže na spike protein. Sestavljen je tudi iz N-terminalne domene (NDT). Podenota S2 ima fuzijske proteine ​​(FP) in transmembranske proteine ​​(TM) [26]. Po vstopu virusa v gostiteljske celice povzroči fuzijo in razkritje virusne membrane, čemur sledi prepisovanje in prevajanje mRNA, ki je bistvenega pomena za tvorbo virusnega sklopa, ki nato eksodusira iz gostitelja preko eksocitoze in okuži druge celice. Vstop virusnih delcev v druge celice telesa povzroči stimulacijo imunskega odziva in tvorbo protiteles [27].

Slika 2. Genomska struktura koronavirusa. (Ustvarjeno z BioRender.com, dostopno 31. decembra 2022).

Po vsem svetu se cepljenja pogosto uporabljajo in so učinkovita pri zmanjševanju umrljivosti. Na podlagi zanesljive znanosti in znanja je mogoče izboljšati oceno varnosti in učinkovitosti cepiv ter oceno njihove uporabe [28]. Cepiva so se razvila iz tradicionalnih cepiv, kot so živa oslabljena ali ubita cepiva, do podenotnih cepiv in končno, homolognih ali heterolognih imunizacijskih strategij s prvim pospeševanjem [29]. Različne strategije cepljenja so prikazane na sliki 3. V antiki so se živa oslabljena cepiva izkazala za rešitelja pred različnimi patogenimi virusi in veljajo za varna proti milijonom populacij, vendar so pogosto zanemarjena. Številna cepiva, vključno s cepivi MMR (ošpice, mumps, rdečke) in noricami, so živa oslabljena cepiva [25, 30]. Oslabljene oblike virusa lahko dosežemo z njegovo izpostavljenostjo neugodnim razmeram ali z genskimi spremembami. To vrsto cepiva, zlasti peroralno cepivo proti otroški paralizi (OPV), je mogoče dajati po neinvazivnih poteh. Nasprotno pa imajo ubita cepiva, ki so inaktivirane različice virusov, omejeno uporabo v smislu imunološkega odziva, vendar trenutno uporabljeno indijsko cepivo COVAXIN®, ki ga proizvaja Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, Indija, uporablja inaktivirano različico virus v svoji formulaciji cepiva [31]. Inaktivirani virus je dovolj sposoben, da ohrani svojo epitomsko skladnost, ki pomaga pri modulaciji humoralnega imunskega odziva [32].

Slika 3. Interakcija cepiv z gostiteljskimi celicami in virusnim delcem. (Ustvarjeno z BioRender.com dostopno 31. decembra 2022)

Najnovejše tehnologije, kot so cepiva na osnovi mRNA ali vektorska cepiva, jih kar najbolje izkoristijo za varnost in učinkovitost cepiv proti COVID-19 [33]. Vektorska cepiva so znana tudi kot heterologno primarno okrepljeno cepljenje, ki pomaga pri induciranju celičnega in humoralnega imunskega odziva, medtem ko živa podenotna cepiva izzovejo samo humoralni odziv [34–39]. Študija je pokazala 5–10-kratno povečanje imunskega odziva, posredovanega s celicami T, v primeru cepiva na osnovi heterolognega vektorja v primerjavi z isto formulacijo, pripravljeno s homolognim pristopom [40]. Zato so cepiva na osnovi vektorjev, in sicer na osnovi DNK in RNK, bolj zaželena kot na osnovi podenot, pogosto veljajo za bolj robustna v primerjavi s cepivi RNK in učinkovita, saj kodirajo beljakovino konic v strukturi virusa. V primeru virusa Chikungunya je strategija koimunizacije z uporabo DNK in virusu podobnih delcev ustvarila boljši imunski odziv v študijah na živalih [41]. Včasih DNA cepiva zahtevajo specializirane sisteme za dostavo, kot so elektroforeza, nizi mikroigel in sisteme na osnovi nosilca, kot so liposomi, da povečajo prepustnost. Mikrosfere na osnovi polimlečne ko-glikolne kisline so bile oblikovane za dostavo DNK cepiva HIV-1 po intramuskularni poti [42]. Vendar pa cepiva na osnovi DNK povzročijo šibek imunski odziv in pogosto zahtevajo še en odmerek. To je mogoče premagati z uporabo cepiv na osnovi mRNA [25,43].

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

3. Razvoj cepiva na osnovi mRNA

Prej so bile za formulacijo cepiva uporabljene različne oblike RNA, vključno z in vitro prepisano mRNA, siRNA (majhna interferenčna RNA), aptameri na osnovi RNA, ribostikala, protismiselne molekule in kasneje mRNA. Zavedanje messenger ribonukleinske kisline, tj. mRNA, izvira iz njenega osnovnega, poleg tega ekonomičnega ustvarjanja, njenega prehodnega gibanja in počasnega razpada v ciljnih celicah ter njenih varnostnih koristi v nasprotju s terapevtiki DNK, saj ne usklajuje človeškega genoma in zavira vstavljanje mutagenezo in je takoj dostopen za interpretacijo v beljakovine v celični citoplazmi [44]. V zgodnjih devetdesetih letih prejšnjega stoletja so raziskovalci veliko delali, da bi uspeli razviti cepiva na osnovi mRNA. Izvedeni so bili različni poskusi in vitro in rezultati so pokazali kasnejšo proizvodnjo želenih proteinov; zato je bilo sklenjeno, da ker je mRNA dovolj sposobna proizvajati beljakovine, je to lahko verjeten terapevtski režim za zdravljenje bolezni [45]. Po mnenju Martinona et al. je bilo cepivo mRNA na osnovi nukleoproteina za zdravljenje gripe sintetizirano s transkripcijo in vitro in vgrajeno v liposomske vezikle. Rezultati so pokazali indukcijo citotoksičnih T-celic in protiteles in vivo [46]. Od takrat je prišlo do progresivnega razvoja pri uporabi mRNA kot terapevtskega orodja zaradi njene pomembne učinkovitosti, enostavnega povečanja in stroškovne učinkovitosti, kar je primarna zahteva za zdravljenje zelo nalezljivih bolezni in zdravljenje raka. Nedavne raziskave so pokazale, da so terapije, ki temeljijo na mRNA, znatno zaščitile miši pred simptomi Chikungunya in ohranile želene ravni protiteles po dveh odmerkih [47]. Cepiva na osnovi RNK ciljajo na imunske celice telesa tako, da spreminjajo njihove funkcije, ciljajo na ribosome za prevajanje in tako ustvarijo imunski odziv [19].

Imunizacije na osnovi mRNA obsegajo enoverižno mRNA, ki kodira želeni antigen. Prenesemo jih lahko kot golo mRNA ali inkapsuliramo v ustrezne nosilne sisteme, da olajšamo dostavo v celice. Ko mRNA enkrat vstopi v celico, se z naravnimi mehanizmi celice prevede v strukture na osnovi beljakovin. Nadalje je podvržen posttranslacijskim modifikacijam, da dobimo protein, ki nas zanima, in ustvari imunski odziv, kot ga določajo signalni peptidi [44,48]. Cepiva na osnovi mRNA se soočajo z najmanj dvema ovirama: jedrsko razgradnjo, ko se vbrizga živalim, in prirojeno imunogenostjo, podobno imunogenosti antigena [49]. Da bi presegli to težavo, je psevdo-uridin (Ψ) dobro znana modifikacija RNA. Ψ nadomestiti uridin z in vitro prepisano (IVT) mRNA, ki je zelo razširjen in naravno prisoten nukleotid v vseh celicah z RNA. Cepivo proti COVID-19, ki sta ga izdelala Moderna in Pfizer-BioNTech, je sestavljeno iz novega modificiranega Ψ z učinkovitostjo do 90 % proti simptomom [50]. Pri tem cepivu, ki ga je razvil CureVac NV, manjka Ψ-modificirana mRNA, klinična preskušanja pa so potrdila le 48-odstotno učinkovitost [51].

Med postopkom prevajanja obstajata predvsem dve različni kategoriji mRNA cepiv, in sicer nepomnoževalna mRNA (NMR) in samopomnoževalna mRNA (SMR). Delovni mehanizem mRNA brez pomnoževanja in mRNA s samopomnoževanjem je pojasnjen na sliki 4. Strukturno, kot je prikazano na sliki 5, imata obe strukturi CAP, 50 in 30 neprevedenih regij (UTR), odprti okvir (ORF), in skupni čop [52,53].

Slika 4. Kategorije mRNA. (Ustvarjeno z BioRender.com dostopno 31. decembra 2022)

Poleg tega ima SMR replikazo kot segment, ki pomaga pri pomnoževanju mRNA znotraj celice. Nadalje segmente prevedejo ribosomi, da proizvedejo zanimive beljakovine. Izločene beljakovine povzročijo nastanek imunskega odziva [54]. SMR so sorazmerno večji od NMR in anionskih molekul. Nedavne študije samopodvajajoče se RNA so pokazale boljšo ekspresijo subgenoma in vitro nestrukturnih proteinov replikona venezuelskega konjskega encefalitisa (VEE), ko so opazili različne mutacije. Podobna študija kliničnega preskušanja je bila izvedena za ciljanje na glikoprotein stekline z uporabo samopomnoževalne RNK virusa VEE-Sindbis, formulirane v nano-emulzije, ki trenutno poteka [55]. Glavni kritični atributi kakovosti (CQA), ki opredeljujejo učinkovitost terapij z mRNA, so povzeti v tabeli 1 [54].

Slika 5. Optimizacija zaporedja mRNA. (Prirejeno po [56] s pravicami in dovoljenji).

Tabela 1. CQA za cepiva mRNA.

Izdelava mRNA je dvostopenjski proces, ki vključuje proizvodnjo in čiščenje. V proizvodnih sistemih mRNA ni prisotnih nečistoč, saj ne vsebuje surovin živalskega ali celičnega izvora, proizvodnja je relativno varnejša [65]. Proizvodnja zaporedja mRNA je lahko enostopenjski encimski postopek ali dvostopenjski encimski postopek. Analog za zapiranje se uporablja v primeru enostopenjskega proizvodnega procesa, ki se običajno uporablja v laboratorijskem merilu. Postopek se nato izvede s čiščenjem, ki vključuje ločevanje z uporabo kromatografskih tehnik, kot je prikazano na sliki 6. Dvostopenjska encimska reakcija za proizvodnjo mRNA vključuje in vitro transkripcijo predloge DNA, da se tvori zaporedje polimeraze RNA [66]. Tako oblikovano predlogo mRNA je mogoče omejiti z uporabo encima za zapiranje vakcinije in metilnega darovalca. Proizvodnja mRNA je relativno visoka in v industrijskem obsegu je težko doseči ponovljivost [67].

Slika 6. Postopek izdelave zaporedja mRNA. (Ustvarjeno z BioRender.com dostopno 1. januarja 2023)

4. Kako delujejo mRNA cepiva?

mRNA je nestabilna negativno nabita molekula, ki je inkapsulirana v lipidnih nanodelcih. Z endocitozo ti lipidni nanodelci vstopajo v celice. Ko enkrat vstopijo v citoplazmo, so ti endosomi takoj usmerjeni v lizosome za razgradnjo. Študije razkrivajo, da imajo ionizirajoči lipidi pomembno vlogo pri uhajanju endosomov in sproščanju mRNA. Glavna skupina lipidov je protonirana v kislem okolju endosomov in to kationsko stanje je nato vezano na anionsko glavo fosfolipida v endosomski membrani. Hidrofobni rep kationskega lipida in fosfolipida se nato razširi, poruši dvoslojno fosfolipidno strukturo in omogoči mRNA, da uide v citoplazemski del. Ribosomi pretvorijo mRNA v beljakovine, ko se sprosti. Ta protein lahko aktivira imunski odziv na dva načina: (1) proteasom razgradi te proteine ​​v peptide, ki jih nato kot antigen na celični površini predstavijo molekule MHC (glavni histokompatibilni kompleks) razreda I, ki se vežejo na TCR (T celični receptor) za aktiviranje celic CD8+ T, ki ubijejo okužene celice; beljakovina sama lahko aktivira imunski odziv na dva načina. (2) Zunajcelično izločene beljakovine zajamejo APC (celice, ki predstavljajo antigen) in se razgradijo v peptide, ki jih MHC razreda II predstavi na celični površini in jih prepoznajo celice CD4+ T, ki izločajo citokine za proizvodnjo celičnega odziv in soaktivacijo celic B za ustvarjanje humoralnega imunskega odziva, kot je prikazano na sliki 7. Poleg tega so cepiva mRNA dostavila dvoverižno in enoverižno RNA, ki se veže na TLR (Toll-like receptor) v endosomu, kar povzroči stimulacija številnih genov, stimuliranih z IFN-1 (interferon tipa I), s čimer se aktivirajo protivirusni prirojeni imunski odzivi.

Slika 7. Mehanizem, prek katerega cepivo mRNA izzove imunost pri gostitelju. (Ustvarjeno z BioRender.com dostopno 1. januarja 2023)

5. Vidiki formulacije cepiv na osnovi mRNA

Ko je prepisana mRNA vbrizgana, bo izražala beljakovine v telesu. Imunološki odziv opazimo zaradi izraženega proteina iz mRNA. Ta proces je pretežno osnova za razvoj cepiva mRNA [68].

5.1. Predloga DNK

Identifikacija antigena iz ciljnega patogena je najpomembnejši korak. Za razvoj imunizacije z mRNA je potreben dodatek kodiranega antigena v šablono DNA, ki bo pomagal pri prevajanju mRNA in vitro. Specifični antigen bo proizveden in vivo s transkripcijo prepisane mRNA, ki bo dosegla le citoplazmo; to bo pomagalo pri izvabljanju imunskega odziva. Plazmidna DNA (pDNA) vsebuje promotorsko sekvenco z močno afiniteto do DNA-odvisne RNA polimeraze, kot je T7, SP6 ali T3, kot tudi ustrezno sekvenco za konstrukt mRNA. Encim bo šel vzdolž šablone in podaljšal transkript RNA, dokler ne doseže konca šablone [69].

5.2. Encim za omejevanje

Za učinkovito prevajanje mRNA iz predloge DNA je zapiranje na 50 koncu mRNA zelo pomembno. Poleg tega je za zaščito mRNA pred razgradnjo, izražanjem genov in rekrutiranjem ribosomov potrebna 50 omejitev v zreli mRNA. 5 0 -50 -trifosfatni most povezuje 50 kapic evkariontske mRNA z 7-metilgvanozinom (m7G) (m7GpppN). Nova ko-transkripcijska tehnika, ki je uporabila komplet čiste kapice za natančno dodajanje naravne strukture 50 cap1 na začetno mesto med reakcijami IVT, je naredila generiranje 50 capped mRNA s T7 polimerazo pogosto uporabljeno metodo zapiranja z dobrim prevodom in minimalno reaktogenostjo. V cepivih mRNA proti COVID-19 BNT162b1 so bile kapice 5 0 dodane z metodo čiste kapice [70]. Cap analogno transkribirana mRNA ima poli 1 rep in 30 (poli-A) rep je prisoten na 30 koncih evkariontske mRNA. Ta poli A rep opravlja funkcije transporta, prevajanja in stabilnosti mRNA. 30 poli A rep in 50 kapica bosta ustvarila stabilno strukturo zaprte zanke s kompleksom eIF4F za začetek procesa prevajanja. Zaradi svojih 120 nukleotidov (nt) v 30 poli(A) repu ima BioNTech mRNA cepivo vrhunsko stabilnost in učinkovitost prevajanja [71].

5.3. Nukleotidni trifosfatni substrati (NTP)

Ko so plazmidi DNA integrirani s polimerazo T7 in nukleotidnimi trifosfati, se mRNA prevaja učinkoviteje in proizvedejo se večji izkoristki. Po dajanju cepiva se pojavi zaskrbljenost glede imunogenosti. Ob aktivaciji spodnjega signaliziranja bo telo prepoznalo virusne RNA in se nanje odzvalo. To prepoznavanje enojne in dvoverižne RNA poteka s pomočjo endosomskih receptorjev, kot so Tollu podobni receptorji (TLR3), TLR7 in TLR8. Dvoverižno in 50 -trifosfatno modificirano RNA prepoznata gen-I, inducibilen z retinojsko kislino (RIG-1) citosolnega receptorja, in protein 5, povezan z diferenciacijo melanoma (MDA-5). Poročali so o alergijskih reakcijah in anafilaktičnem šoku, ko se je telesni imunski sistem aktiviral na nenadzorovan način. Ta prekomerna stimulacija imunskega sistema na molekularni ravni bo omejila prevajanje beljakovin, izražanje antigenov in učinkovitost cepiva. To omejitev je mogoče premagati z modifikacijami nukleobaz. N1-metil psevdouridin, modificirana nukleobaza, bo povečal proizvodnjo beljakovin in zmanjšal aktivacijo TLR3. Modificirani nukleotidi prek RIG-1 ne vplivajo samo na interakcijo protein-RNA, ampak tudi zmanjšajo sposobnost mRNA za širjenje imunoloških signalov. Učinkovitost prevajanja mRNA v beljakovine je izboljšana zaradi N1-metilpsevdouridina. Hiter začetek prevajanja bo usklajeno povečal razpolovni čas mRNA [50].

cistanche tubulosa - izboljšanje imunskega sistema

Kliknite tukaj za ogled izdelkov Cistanche Enhance Imunity

【Vprašajte za več】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com/Whats App: 0086 18599088692/Wechat: 18599088692

5.4. Komponente lipidnih nanodelcev za dostavo mRNA

V primerjavi z vsemi ostalimi cepivi so mRNA cepiva razvita razmeroma hitro in so bolj učinkovita. Največji izziv pri izdelavi mRNA cepiv pa je njihova slaba stabilnost. Stabilnost in zmogljivost cepiva za zdravljenje okužbe s COVID-19 sta zmanjšani, ker ribonukleaze po dostavi hitro razgradijo cepivo, pri čemer nastanejo razgrajene komponente, ki se izločijo skozi ledvice. Za reševanje tega izziva se lahko mRNA oblikuje z lipidnimi nanodelci (LNP). Cepivo mRNA-LNP bo zaščitilo mRNA pred prezgodnjo razgradnjo in bo olajšalo citoplazmatsko dostavo celicam, ki predstavljajo antigen [72]. Lipidi so odlična sredstva za dostavo mRNA na citosolno mesto, saj je njihova fuzija združljiva z lipidnimi celičnimi membranami; vodi do ciljanega in učinkovitega sproščanja mRNA. LNP so delci nano velikosti s premerom manj kot enega mikrona, ki vsebujejo dva ali več lipidov v različnih razmerjih. LNP se razlikujejo od liposomov zaradi prisotnosti lipidnih komponent v jedru kot diskontinuirani mešanici. LNP, ki so bili oblikovani, imajo večlamelarno vezikularno strukturo, homogeno jedrno lupino in nanostrukturirano jedro [73]. V jedru LNP-jev je prisotna voda, ki izpostavlja mRNA interakciji z vodnim medijem. Kot je prikazano na sliki 8, se mRNA nahaja znotraj LNP, ki jo ščiti pred zunanjim okoljem. Najpogostejša sestava, ki sestavlja sisteme mRNA LNP, je kationski/ionizabilni lipid, fosfolipid ("lipid pomočnik"), holesterol in polietilenglikol (PEG). Fizikalno-kemijske lastnosti znotraj sistema za dostavo LNP, kot so učinkovitost inkapsulacije, naboj zunanje površine, velikost delcev in oblika, je mogoče enostavno spremeniti s prilagoditvijo sestave lipidov. Razmerja komponent se prilagajajo glede na želeno ciljno tkivo [74].

Slika 8. Struktura lipidnih nanodelcev, ki se uporabljajo za učinkovito dostavo mRNA. (Ustvarjeno z BioRender. com dostopno 1. januarja 2023)

5.4.1. Kationski lipidi

Z aminsko skupino, ki daje neto pozitivni naboj, hidrofobno verigo in vezno skupino, ki omogoča pritrditev hidrofilnega dela na hidrofobno verigo, kationski lipidi kažejo amfifilne lastnosti. Imajo stalen pozitivni naboj na svoji polarni glavi, ki pomaga pri interakciji z negativno nabitimi nukleinskimi kislinami, kar poveča učinkovitost zajetja. Zaradi neto pozitivnega naboja se poveča tudi endosomski izhod iz sistema LNP in celični privzem. Za dajanje mRNA so raziskali kationske lipide, ionizirajoče lipide in druge vrste lipidov. V primerjavi z neionizirajočimi kationskimi lipidi so ionizirajoči lipidi, ki so pri nizkem pH pozitivno nabiti in pri fiziološkem pH ostanejo nevtralni, sorazmerno manj toksični zaradi nihanja pH. Znotraj celične membrane so nabiti pozitivno, v krvnem obtoku pa imajo nenaelektrene lastnosti. Cepivo BNT162b2 obsega kationski lipid ALC-0315, medtem ko mRNA-1273 obsega SM-102; pri nizkem pH sta oba lipida protonirana, kar zlahka tvori kompleks z mRNA. Tok mRNA v vodi se združi z mešanico lipidov v etanolu z uporabo mikrofluidne naprave. Da bi ujeli negativno nabito mRNA, se komponente teh dveh tokov hitro združijo in ustvarijo nanodelce [75]. Za cepivo BNT162b2 je molsko razmerje kationski lipid: PEG-lipid: holesterol: DSPC (46,3:1,6:42,7:9,4), za mRNA-1273 pa (50:1,5:38,5:10). Nanodelci imajo premer 80–100 nm in na en lipidni nanodelec je približno 100 molekul mRNA [73].

5.4.2. Lipidi iz polietilen glikola (PEG).

Za stabilnost koloidov in preprečevanje vezave beljakovin na nanodelce se uporabljajo polietilen glikol lipidi. Omogočajo daljšo sistemsko cirkulacijo z zmanjšanjem očistka nanodelcev. LNP-ji lahko povzročijo fizično agregacijo v raztopini, kar lahko poveča velikost delcev LNP-jev, lipidi PEG pa lahko premagajo morda celo prezgodnjo sprostitev inkapsulirane mRNA, problem. Poleg tega se bo povečala tudi stabilnost LNP pri shranjevanju [76].

5.4.3. holesterol

Za transfekcijo celic in stabilizacijo LNP-jev ima holesterol ključno vlogo. Nižja temperatura prehoda je dosežena, ko se poveča vsebnost holesterola v LNP, kar bo pomagalo pri sproščanju mRNA iz LNP in njeni translokaciji preko endosomske membrane [77]. V študiji, ki so jo izvedli Zhang et al., so bili modificirani liposomi oblikovani z uporabo s holesterolom modificiranega kationskega peptida DP7 skupaj z dioleoil-3- trimetilamonijevim propanom (DOTAP) kot nosilcem za dostavo mRNA. Liposome smo pripravili s tehniko filmske hidratacije in nato ovrednotili njihovo učinkovitost transfekcije. Študije transfekcije in vitro so pokazale povečanje učinkovitosti transfekcije s povečanjem koncentracije peptida DP7. Poleg tega so protitumorske študije in vivo pokazale, da ima kompleks boljšo učinkovitost proti tumorju [78].

5.4.4. Druge pomožne snovi

Cepiva mRNA so sestavljena iz stabilizatorjev, npr. Trometamin, ki deluje kot pufer za vzdrževanje pH 7–8, Soli: Pomaga uravnovesiti kislost v telesu, Sladkor, ki pomaga molekulam ohraniti svojo obliko med zamrzovanjem, deluje kot krioprotektant in ohranja dolgoročno stabilnost formulacije lipidnih nanodelcev-mRNA. [73]. Povzetek ključnih sestavin, uporabljenih v cepivih na osnovi mRNA, je naveden v tabelah 2 in 3.

Tabela 2. Ključne sestavine, uporabljene v cepivih na osnovi mRNA.

Tabela 3. Sestavine formulacije cepiv Pfizer in Moderna mRNA.

5.5. Drug sistem dostave za mRNA

5.5.1. Polimerni nanodelci

Polimerne nanodelce je mogoče sintetizirati iz sintetičnih ali naravnih polimerov, kot so PLGA [poli (mlečna ko-glikolna kislina)], hitozan, PLA (polimlečna kislina), polikaprolakton, želatina in poli-alkil-cianoakrilati. Ti polimerni nanodelci lahko inkapsulirajo hidrofobne in hidrofilne spojine in proteine, dolg rok trajanja; in lahko spremeni dostavo terapevtskih spojin. RNA se lahko inkapsulira v samosestavljene kationske polimere s hidrofobno modifikacijo [80,81].

5.5.2. Kationske nanoemulzije

Kationske nanoemulzije so se izkazale kot učinkovito dostavno sredstvo za dostavo nukleinskih kislin. Kationski lipidi, prisotni v nano-emulzijah, so pomembni za komplekse z nukleinsko kislino prek elektrostatičnih interakcij in izboljšajo učinkovitost transfekcije nukleinske kisline in njeno stabilnost. Študije razkrivajo, da sistem za dostavo kationskih nanoemulzij mRNA izboljša imunski odziv z rekrutiranjem imunskih celic in spodbujanjem celičnih odzivov na protitelesa in T-primate pri sorazmerno nizkih odmerkih [80,82].

5.5.3. Nanodelci silicijevega dioksida

Nanodelci mezoporoznega silicijevega dioksida so sestavljeni iz amorfne matrike silicijevega dioksida z dobro urejeno poroznostjo v mezoporoznem območju. Ti nanodelci imajo velike površine z velikimi volumni por in njihovo površino je mogoče zlahka spremeniti z nekaterimi pozitivno nabitimi deli za učinkovit transport negativno nabite RNA. Poleg tega je možna ciljna dostava RNA s pritrditvijo specifičnih ligandov na površino [81]. V skladu s študijo, ki so jo izvedli Adam et al., je bilo za COVID oblikovano nosno cepivo na osnovi modificiranih mikrodelcev poroznega silicija (mPSM)-19. Formulacija je povzročila povečanje T-celic pomočnic (Th1) in imunskih odzivov, mPSM pa je povzročil privzem antigenov po nosni poti. Ugotovljeno je bilo, da se je virusna obremenitev znatno zmanjšala [83].

5.5.4. Ogljikovi in ​​zlati nanomateriali

Ogljikove nanocevke, zlati nanodelci, nanografen oksid in kvantne pike so sintetizirane nanostrukture, ki imajo tudi potencial za dostavo RNK na ciljno mesto in jo tudi zaščitijo pred razgradnjo [81].

6. Izzivi pri shranjevanju cepiva

Zahteve glede stabilnosti in shranjevanja so glavna skrb za cepiva mRNA. Stabilnost je odvisna od dejavnikov, kot so pomožne snovi, pH in temperatura. Cepivo proti COVID-19 proizvajalcev BioNTech/Pfizer je treba shranjevati pri –80 ◦C in ima rok uporabnosti do 6 mesecev, medtem ko je treba cepivo proti COVID-19 proizvajalca Moderna shranjevati pri –20 ◦C in ima enak rok trajanja. Cepivo BioNTech/Pfizer med transportom zahteva pakiranje s suhim ledom. Distribucija obeh cepiv v revnih državah sveta je zahtevna, saj morajo biti cepiva mRNA shranjena pri ultra nizkih temperaturah. Te zahteve so drage in v regijah sveta z omejenimi viri je ureditev težavna. Eden od problemov je razvoj termostabilnega mRNA cepiva, ki je klinično učinkovito in ga je mogoče hraniti dlje časa brez velikih stroškov skladiščenja. V skladu s priporočili EMA o shranjevanju so mRNA cepiva proizvajalcev Moderna in BioNTech stabilna, če so zamrznjena do 6 mesecev pri –25 ◦C, do 30 dni pri temperaturi v hladilniku (4 ◦C) in do 6 ur pri sobni temperaturi [ 84].

7. Varnost in učinkovitost mRNA cepiv

7.1. Varnost cepiv na osnovi mRNA

Za cepiva mRNA je bila opravljena ocena rezultatov, povezanih z varnostjo. Odprta poskusna preskušanja mRNA-1273 stopnjevanja odmerka 1. faze so bila izvedena na udeležencih, starih od 18 do 70 let ali več [85]. Študijo so izvedli v dveh skupinah, v kateri so udeleženci, stari od 18 do 55 let, prejeli odmerek cepiva 250 µg, starejši pa 25 µg ali 100 µg odmerka. Po cepljenju so opazili zahtevane lokalne in sistemske neželene dogodke, neželene neželene dogodke, resne neželene dogodke in razvoj novih kroničnih zdravstvenih stanj. Rezultati niso pokazali razvoja resnih neželenih učinkov. Najpogostejši neželeni učinki, o katerih so poročali, so bili glavoboli, utrujenost, mialgija, mrzlica in bolečina na mestu injiciranja. Dokazano je, da ravni nevtralizirajočih protiteles korelirajo z obrambo pred različnimi virusi pri ljudeh in z obrambo proti SARS-CoV-2 pri izzivih živali. Cepivo mRNA-1273 pri starejših odraslih je povzročilo visoke ravni vezavnih in nevtralizirajočih protiteles, trendi, odvisni od časa in odmerka, pa so bili podobni odzivom pri mlajših odraslih. Odzivi po drugem cepljenju so bili primerljivi s tistimi, opaženimi pri bolnikih, ki so preboleli COVID-19 in so darovali okrevalni serum, vključno z nekaterimi, ki so bili kritično bolni. Starejši bolniki, ki so prejemali odmerek 100 µg, so pokazali višje odzive protiteles in celic T v primerjavi s tistimi, ki so prejeli 25 µg, odziv pa je bil enak reakciji pri udeležencih, starih od 18 do 55 let, ki so prejeli odmerek 100 µg. Bolniki, starejši od 56 let, morajo prejeti drugi odmerek cepiva, da dosežejo nevtralizirajoča protitelesa. Po prejemu poživitvenega odmerka se titri protiteles hitro povečajo. Ključni varnostni rezultati cepiv Moderna in Pfizer, opaženi med različnimi kliničnimi preskušanji, so navedeni v tabeli 4.

Tabela 4. Študije varnosti in učinkovitosti mRNA cepiv v kliničnih preskušanjih

Tabela 4. Nadaljevanje

Po drugem odmerku cepiva so se lokalni in sistemski dogodki reaktogenosti povečali in so bili predvsem zmerne resnosti. Incidenca eritema je bila ugotovljena pri treh udeležencih in je trajala 5 do 7 dni. Zahtevani sistemski neželeni učinki, kot sta zvišana telesna temperatura in utrujenost, so se v starejši podskupini izrazito pojavili. Vse te ugotovitve kažejo, da so bili zahtevani ali nenaročeni neželeni dogodki blagi do zmerno hudi. Tako je bila mRNA -1273 dodatno testirana za preskušanja faze 2/3, da bi ocenili varnost in učinkovitost pri večjih populacijah [95]. Klinično preskušanje faze 3 je bila randomizirana, stratificirana, z opazovalci zaslepljena in s placebom nadzorovana študija, ki je vključevala 30420 prostovoljcev, starih 18 let ali več, ki so bili naključno razporejeni za prejemanje cepiva (0,5 ml s 100 µg odmerek) ali placebo. Za oceno varnosti so spremljali lokalne reakcije 7 dni po imunizaciji, sistemske neželene dogodke, nepričakovane neželene učinke po 28 dneh dajanja odmerka in vse pomembne neželene dogodke. Zahtevani neželeni učinki so prevladovali pri mRNA- 1273 v primerjavi s skupino, ki je prejemala placebo (84,2 % v primerjavi z 19,8 %). Nekateri najbolj opaženi dogodki so bili bolečina na mestu injiciranja po cepljenju, eritem, občutljivost in zatrdlina. Ti dogodki so izzveneli v 4–5 dneh po cepljenju. Po drugem odmerku je skupina mRNA-1273 izzvala sistemske dogodke, ki so postali resnejši. Prisotnost preobčutljivostnih reakcij je bila prisotna pri 1,5 % oziroma 1,1 % udeležencev v skupini s cepivom oziroma placebo. Razen teh pritožb po dajanju cepiva ni bilo nobenih pomislekov glede varnosti [106].

Tretji odmerek cepiva je bil potreben zaradi zmanjšanja zaščite po dveh injekcijah mRNA SARS CoV-2 in uvedbi različic. Po dajanju tretjega odmerka cepiva mRNA ljudem, ki so predhodno prejeli primarno serijo mRNA-1273 v študiji 1. faze, sta bili ocenjeni njihova zgodnja varnost in imunogenost. Presečna študija, izvedena v Neaplju (Italija), je ocenila pripravljenost na poživitveno cepljenje proti COVID-19. V tej skupini je bilo sprejemanje poživitvenega odmerka skoraj 86 %. Poleg tega so bili starejši ljudje z boljšim zdravjem po glavni seriji cepiv, tisti, ki živijo s prijatelji ali družinskimi člani, ki so bili pozitivni na COVID-19, in tisti, ki so informacije o bolezni prejeli od uradnih javnih institucij, pripravljeni prejeti poživitveni odmerek odmerek [107].

Dvovalentno cepivo je vsebovalo 25 mcg vsake mRNA-1273 in mRNA-1273.351, medtem ko so formulacije poživitvenega cepiva vsebovale 100 mcg mRNA-1273 in 50 mcg mRNA-1273 .351, ki kodira Beta varianto spike proteina. Tretji odmerek mRNA cepiva je pokazal ustrezno reaktogenost in varnost. V primerjavi z najvišjimi odzivi po drugem odmerku so bila s cepljenjem povzročena povečanja titrov vezavnih in nevtralizirajočih protiteles proti različicam D614G, Beta in Delta podobna ali večja. Opazili so, da so se nevtralizirajoča in vezavna protitelesa nenehno zmanjševala. Vendar so protitelesa odkrili 10–11 mesecev (pred tretjim odmerkom) pri udeležencih, ne glede na starost in začetni odmerek primarne serije (npr. 25, 50, 100 in 250 µg). Bolečina na mestu injiciranja, utrujenost, mialgija in mrzlica so bili najpogosteje poročani neželeni učinki po tretjem odmerku cepiva mRNA, pogostnost teh dogodkov pa je bila primerljiva med tremi režimi poživitvenega cepiva (monovalentni prototip, monovalentna različica in dvovalentne skupine). ). Pri uporabi monovalentnih ali dvovalentnih cepiv z različico beta ni bilo opaziti nobene posebne prednosti ali slabosti v celičnih odzivih na epitope v beta mutiranih peptidih. Vse te ugotovitve podpirajo trenutni predlog, da se za zagotovitev obsežne imunološke navzkrižne zaščite med različicami uporabi monovalentni prototip mRNA-1273 [95]. Kot je razvidno iz raziskave, je dajanje heterolognega BNT162b2 (BNT) pri udeležencih, ki so prejeli ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT), pokazalo neinferiorno imunogenost kot homologno dajanje BNT (tako glavno kot obnovitveno cepivo sta bili BNT cepiva, BNT/BNT), s sprejemljivo reaktogenostjo in večji odziv celic T. V primerjavi s homolognim cepljenjem s ChA dOX1 (ChAd/ChAd) je heterologno cepljenje s ChAd/BNT izzvalo močnejšo imunogenost (ChAd/BNT v primerjavi s ChAd/ChAd, razmerje titra protiteles: 9,2) [108].

Faza 1 preskušanja za BNT162b2 je bila izvedena na 76 udeležencih; bili so randomizirani za prejemanje odmerkov cepiva 10 µg, 30 µg in 100 µg, druga skupina pa je prejela placebo. 58,3 % preiskovancev, ki so prejemali 10 µg in 100 % 30 µg in 100 µg, je po prvem odmerku doživelo lokalno reakcijsko bolečino na mestu injiciranja. Resnost vseh lokalnih reakcij je bila blaga do zmerna. Utrujenost in glavobol pri BNT162b2 sta bila pogosta sistemska dogodka. Poleg tega so opazili tudi mrzlico, bolečine v mišicah in sklepih. Pri naraščajočih odmerkih so po prejemu drugega odmerka pogosteje poročali o sistemskih dogodkih. Skupno 50,0 odstotka udeležencev, ki so prejeli 10 ali 30 g BNT162b1, 58,3 odstotka oseb, ki so prejele 100 g BNT162b1, in 11,1 odstotka prejemnikov placeba je poročalo o neželenih učinkih. O resnih neželenih učinkih niso poročali [109].

V kliničnem preskušanju cepiva Pfizer/BioNTech (BNT162b2), ki je bilo večnacionalno, s placebom nadzorovano, z opazovalci zaslepljeno, randomizirano in ključno preskušanje učinkovitosti, je bilo naključno razporejenih 43.548 udeležencev, starih 16 let ali več. Skupaj 21.720 prostovoljcev je prejelo 30 µg na odmerek BNT162b2, 21.728 pa placebo. Za določitev varnostnega profila BNT162b2 so bile ocenjene značilnosti, kot so bolečina na mestu injiciranja, ki je kratkotrajna, blaga do zmerna v primeru resnosti, utrujenost in glavobol. Vsi udeleženci so prejeli dve injekciji BNT162b2 ali placebo v deltoidno mišico [98] glede na randomizacijo v razmaku 21 dni. O lokalnih reakcijah pri tistih, ki so prejeli cepivo BNT162b2, so poročali več kot v skupini, ki je prejemala placebo. Blaga do zmerna bolečina na mestu injiciranja je bila najpogostejša pritožba, zabeležena med prejemniki BNT162b2 v enem tednu. O hudi bolečini so poročali pri manj kot 1 % populacije. Pri starejših udeležencih je bila bolečina manjša kot pri mlajših. Rdečina ali oteklina je bila manj opažena. Po dajanju drugega odmerka so o lokalnih reakcijah manj poročali [110].

Mlajši udeleženci, ki so prejeli cepivo, so imeli več sistemskih dogodkov kot starejši prejemniki. Utrujenost in glavobol (59 % in 52 %) sta bila najpogosteje poročana dogodka in zelo manj cepljenih oseb (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Učinkovitost mRNA cepiv

Za oceno učinkovitosti mRNA-1273 je bila primarna končna točka cepiva učinkovitost pri preprečevanju simptomatske okužbe s COVID-19 po 14 dneh drugega odmerka cepiva. Kot sekundarna končna točka je bilo uporabljeno preprečevanje hude okužbe s COVID-19 s trdovratnimi simptomi. Rezultati po cepljenju kažejo, da je bilo v cepljeni skupini 11 primerov COVID-19 in 185 primerov v skupini s placebom, kar kaže na 94,1-odstotno učinkovitost cepiva mRNA-1273 za zdravljenje simptomatskega COVID-19 . Za sekundarne končne točke učinkovitosti je bila izvedena ocena preprečevanja hude bolezni COVID-19. Rezultati so pokazali 100-odstotno učinkovitost cepiva, saj je bilo 30 udeležencev z virusno okužbo v placebo skupini. Študija, izvedena v Katarju, je pokazala učinkovitost cepiva (VE) mRNA-1273 95.7 % proti hudi, kritični ali smrtni okužbi s COVID-19. Po več kot ali enakih 14 dneh prvega odmerka je bila učinkovitost 88,1 % proti različici B.1.1.7 (alfa) in 100 % po drugem odmerku. Po prvem in drugem odmerku imunizacije proti sevu B.1.351 (beta) so poročali o 61,3 % in 96,4 % VE. Zato je cepivo precej uspešno tako proti sevu, bodisi simptomatskemu ali asimptomatskemu, ter proti morebitni hospitalizaciji in smrti zaradi COVID-19, tudi po enkratnem odmerku [112].

Učinkovitost (VE) cepiva BNT162b2 proti potrjeni bolezni COVID-19, ki se je pojavila vsaj 7 dni po drugem odmerku pri posameznikih, pri katerih ni bilo viroloških ali seroloških dokazov okužbe s SARS-CoV-2, je bila prva primarna končna točka. Druga primarna končna točka je merila učinkovitost pri udeležencih z in brez dokazov o predhodni okužbi ter preprečevanje hude okužbe s COVID-19. V raziskavi s skupno 36.523 ljudmi se je v skupini cepljenja pojavilo 8 primerov COVID-19 z začetkom 7 dni po drugem odmerku v primerjavi s 162 primeri v skupini s placebom. To kaže na 95% učinkovitost cepiva. Vendar pa je bila opažena VE proti virusni bolezni 52 % med prvim in drugim odmerkom in je bila 91 % v prvih 7 dneh po 2. odmerku, s čimer je bila dosežena popolna učinkovitost proti bolezni z nastopom vsaj 7 dni po 2. odmerku. Samo 1 od 10 hudih primerov COVID-19, ki so jih opazili po prvem odmerku, se je pojavil v skupini, ki je prejela cepivo. Ta ugotovitev je v skladu z odlično splošno učinkovitostjo pri vseh bolnikih s COVID-19. Dva primera okužbe sta bila pri prejemnikih cepiva med bolniki s hipertenzijo in 44 primerov v skupini s placebom. Ta primer poroča o 94,6 % učinkovitosti cepiva pri bolnikih s hipertenzijo. Tako cepivo BNT162b2 dosega tako primarne kot sekundarne končne točke učinkovitosti pri cepljenih udeležencih [113]. Razen okužbe s SARS-CoV-2 je bila z enkratnim odmerkom cepiva BNT162b2 predvidena učinkovitost cepljenja proti simptomatski bolezni z različico delta (B.1.617.2) približno 36 %. Po dveh odmerkih je bila VE približno 88 odstotkov [114].

rastlina cistanche krepi imunski sistem

8. Regulativni izzivi

Regulatorna znanost je temelj, na katerem se sprejemajo regulativne odločitve. Njegov glavni cilj je razviti nove metode, orodja in standarde za ocenjevanje varnosti, učinkovitosti, kakovosti in delovanja reguliranih proizvodov v vseh fazah njihovega življenjskega cikla [115]. Cepiva mRNA se soočajo z enakimi regulativnimi ovirami kot katera koli druga vrsta cepiv, vključno s potrebo po dokazovanju varnosti in učinkovitosti v predkliničnih študijah, kliničnih preskušanjih in nadzoru po trženju, pa tudi z ohranjanjem visokega standarda za surovine, uporabljene v proizvodnji, in doslednost izdelave. Testiranje cepiva je močno odvisno od zanesljivosti in ponovljivosti encimov, nukleotidov in linearnih predlog DNA [116]. Surove komponente, kot so lipidi, morajo biti strogo regulirane, njihova čistost pa mora biti dokazana. Pri ustvarjanju predloge linearne DNK je treba upoštevati trenutne dobre proizvodne prakse (cGMP). Da bi zagotovili najvišjo kakovost zdravilne učinkovine, je nujno paziti na odstotek zaprte in poliadenilirane mRNA, število kratkih transkriptov in prisotnost dvoverižne RNA. Poliadenilacija in zapiranje 50 konca mRNA zagotavljata stabilnost in učinkovito prevajanje [21]. Učinkovitost prevajanja je tesno povezana s poli (A) repom [114]. Kvantificiranje količine mRNA, inkapsulirane v delcu, in določanje porazdelitve velikosti delcev je ključnega pomena za zdravilo, saj omogoča proizvajalcu, da zagotovi enotnost proizvodnje. Spremljanje se običajno izvaja na podlagi številnih značilnosti, vključno s tistimi, ki se nanašajo na stabilnost, identiteto in sterilnost. Eno od vprašanj za razvijalce cepiv, regulatorje in uporabnike je toplotna stabilnost mRNA cepiv [115]. Običajna cepiva so podvržena stresnemu testiranju, vključno s podaljšano izpostavljenostjo povišanim temperaturam, da se določi njihova stabilnost v različnih okoliščinah shranjevanja. To je treba opraviti tudi pri cepivih mRNA, kjer je treba oceniti poleg stabilnosti molekule mRNA tudi ohranjenost strukture samega delca cepiva. Še vedno je treba razviti protokole testiranja integritete za posamezne komponente mRNA v večkomponentnih cepivih mRNA. Identifikacija cepiva z nukleinsko kislino je določena z njegovim zaporedjem. Na splošno zaporedje prvega plazmida DNA, uporabljenega kot matrica, zadostuje za mRNA cepljenja. To je zato, ker se DNK takoj prevede v RNK. Ni znano, da sekvenciranje mRNA, bodisi neposredno bodisi s pretvorbo v cDNA in nato sekvenciranjem te DNA, zagotovi dodatne informacije. Čeprav so stopnje napak pri RNA polimerazah bistveno večje kot pri DNA polimerazah, bi bilo navedene stopnje napak 1 napake na vsakih 104–105 nukleotidov težko zaznati v RNA zaradi naključne narave napak. Na podlagi trenutnih raziskav, ki kažejo, da cepiva mRNA zagotavljajo zaščitno imunost na živalskih modelih, se zdi, da ta stopnja napak ne spremeni tvorbe imunogenega antigena. Kvantifikacijo lipidov je mogoče izvesti z LC-MS/MS [116]. Če se beljakovina prevede prehitro, se morda ne bo ustrezno zvila v funkcionalni antigen, kar ima lahko neželeno posledico zmanjšanja učinkovitosti cepiva.

9. Razprava

Leta 2021 so cepiva mRNA pritegnila pozornost zaradi svojega kritičnega položaja v odzivu farmacevtske industrije na COVID-19. Za razliko od tradicionalnih virusnih cepiv, ki za prikaz antigenov in izzivanje imunskega odziva uporabljajo oslabljene kopije virusov, ki se ne razmnožujejo, strategija mRNA uporablja optimizirane enoverižne molekule mRNA, ki lahko zagotovijo biološko indukcijo. Ko dobite cepivo, ga bodo celice sprejele, 'prebrale' zaporedje mRNA in proizvedle spike protein. Ker vašemu telesu primanjkuje beljakovin, ki bi spominjale na konico, jo vaš imunski sistem razume kot škodljivo in jo napade. Poleg tega, če se pozneje okužite s koronavirusom, si imunski sistem zapomni konično beljakovino in jo celo prepozna. Izjemna hitrost, s katero sta bili razviti in javno dostopni prvi dve cepivi proti COVID-19 v ZDA, potrjuje domnevo, da sta cepivi mRNA proizvajalcev Pfizer in Moderna prejeli dovoljenje za nujno uporabo od FDA decembra 2020-manj kot leto po tem, ko so kitajski znanstveniki objavili gensko sestavo koronavirusa. Glavna prednost tehnologij cepiv, ki temeljijo na mRNA, je njihov potencial za hitro spreminjanje za različne bolezni, saj je obdelava tarčnega antigena 'oddana' gostiteljskim celicam, kar pomeni, da se za oblikovanje cepiva uporablja samo genetska koda antigena. kandidat. Čas med tem, ko je kitajska vlada zamenjala njihovo genetsko strukturo SARS-CoV-2, in tem, ko je Moderna prepeljala svojega kandidata za cepivo na Nacionalni inštitut za zdravje (NIH) v ZDA za študije prve faze, je minilo le 44 dni. Cepiva s cepivi mRNA v preteklosti niso pridobila regulativnega dovoljenja za uporabo v človeštvu zaradi zaznanega pomanjkanja kliničnih preskušanj za to metodo, pa tudi zaradi tehničnih izzivov, povezanih s stabilnostjo in distribucijo izdelka. S takšnim porastom cepiv mRNA na trgu so možni natančnejši nasveti za pomoč pri razvoju in oceni novih cepiv mRNA. Nadzor je še eno področje, kjer je znanost o cepivih mRNA v povojih. Trenutno ni uradnih smernic ameriške agencije za hrano in zdravila ali Evropske agencije za zdravila za cepiva mRNA, čeprav so zdravila dovolj varna za večja klinična preskušanja.

10. Sklepne opombe in obeti za prihodnost

Pred letom 2020 mRNA ni bila dobro znan znanstveni izraz v svetu cepiv. Več kot leto dni od začetka katastrofalne globalne pandemije COVID-19 so klinični programi, ki temeljijo na mRNA, doživeli znatno povečanje podpore, tako s strani splošne javnosti kot s strani velikih farmacevtskih podjetij. Več kot 80 milijonov Američanov je bilo cepljenih proti SARS CoV-2-virusu, ki povzroča COVID-19, z uporabo možnosti tehnologije mRNA, ki spreminjajo igro. »Področje cepiv se je za vedno spremenilo in za vedno napredovalo zaradi COVID-19,« pravi Dan Barouch, MD, Ph.D., direktor Centra za virologijo in raziskave cepiv na Harvard Medical School. Večinoma v primeru cepiva proti COVID-19 je veriga mRNA zasnovana tako, da proizvede edinstveno "protein konice" koronavirusa, ki povzroči imunski odziv, ki bi lahko zaščitil pred okužbo z dejanskim virusom. Cepivi, ki sta jih razvili Moderna in Pfizer/BioNTech, so edina cepiva na osnovi mRNA, ki so pridobila izredno odobritev ključnih regulatorjev, dokazi iz resničnega sveta iz globalne uvedbe COVID-19 pa bi bili ključnega pomena za utemeljitev njihove dolgoročne učinkovitosti in varnostne funkcije proti koronavirusu in nekaterim drugim virusnim povzročiteljem. Dostava mRNA na osnovi eksosomov bo tudi prihodnost terapevtike na osnovi mRNA [117,118]. Predvsem s posledicami tehnologije, ki temelji na mRNA, ki postajajo očitne, ko se ta prva generacija cepiv začne uporabljati po vsem svetu, je trenutno razmah kliničnih raziskav mRNA za nalezljive bolezni, industrijski raziskovalci pa pričakujejo povečanje zanimanja za platforme mRNA za druga terapevtska področja. , zlasti onkologija, pa tudi občasna avtoimunska stanja in geni nevrode.

Reference

1. KDO. Nadzorna plošča WHO Coronavirus (COVID-19) 2023. Dostopno na spletu: https://covid19.who.int/ (dostopano 17. januarja 2023).

2. Pal, R.; Yadav, U. Pandemija COVID-19 v Indiji: trenutni scenarij in strm vzpon pred nami. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Aleksander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Pojav, širjenje, možna zdravljenja in globalno breme. Spredaj. Javno zdravje 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Čavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Vpliv COVID-19 na oskrbo raka: posodobitev. Cepiva 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Jufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Koronavirusna bolezen 2019 (COVID-19): pregled literature. J. Infect. Javno zdravje 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Čavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Starejša populacija in bolniki z oslabelim imunskim sistemom: Vpliv na različice SARS-CoV-2 in rezultate zdravljenja. Biologija 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Čavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomika in druge imunološke študije. Cepiva 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO SARS-CoV-2 Strategije cepiv: Celovit pregled kandidatov za 3. fazo. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sonce, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Starš, LJ; Činčili, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Učinkovitost cepiva proti okužbi, simptomatski in hudi bolezni COVID-19: sistematični pregled in meta-analiza. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Čavda, VP; Vora, LK; Vihol, cepivo DR COVAX-19®: popolnoma blokira prenos virusa na neimune posameznike. Clin. Complement Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Čavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, VB Intranazalna cepiva za SARS-CoV-2: Od izzivov do potenciala pri obvladovanju COVID-19. Drug Discov. Danes 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. Cepivo proti COVID-19: celovito poročilo o stanju. Virus Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Pregled cepiv proti COVID{1}}, odobrenih v Združenih državah Amerike za nujno uporabo. J. Clin. med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Učinkovitost cepiv proti COVID-19 v resničnem svetu: pregled literature in metaanaliza. Int. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagož, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Čurpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. Vpliv cepljenja na obvladovanje bremena COVID-19 v Združenih državah: pristop simulacijskega modeliranja. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP. Titri nevtralizirajočih protiteles kot napovedovalci zaščite pred različicami SARS-CoV-2 in vpliv povečanja: meta-analiza. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; et al. COVID-19: posodobitve razvoja cepiva proti koronavirusu. Spredaj. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID-19 Vodilni v cepivih in njihova nanotehnološka zasnova. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Messenger RNA-Based Vaccines: Pretekle, sedanjosti in prihodnje smeri v kontekstu pandemije COVID-19. Adv. Zdravilo Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Araškija, A.; Jalilvand, S.; Mohajal, N.; Afchangi, A.; Azadmaneš, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; et al. Kandidati za cepivo proti resnemu akutnemu respiratornemu sindromu proti koronavirusu -2 Spike (S) na osnovi beljakovin: stanje tehnike in obeti za prihodnost. Rev. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA cepiva za COVID-19: kaj, zakaj in kako. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Žu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Pesem, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Ši, W.; Lu, R.; et al. Nov koronavirus pri bolnikih s pljučnico na Kitajskem, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MY; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Struktura, biologija in razvoj terapevtike na podlagi strukture. Spredaj. Celica. Okužiti. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Čavda, VP; Hossain, MK; Beladiya, J.; Apostolopoulos, V. Cepiva z nukleinsko kislino za COVID-19: sprememba paradigme v areni razvoja cepiv. Biologija 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Čavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. DNK cepiva za SARS-CoV-2: proti dobi cepljenja tretje generacije. Expert Rev. Vaccines 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Strukturna biologija SARS-CoV-2 in posledice za terapevtski razvoj. Nat. Rev. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK Imunski odziv gostitelja in imunobiologija okužbe s SARS-CoV-2 pri človeku. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Napredno izobraževanje o vakcinologiji: urejanje krajine njegove rasti in globalnega odtisa. Vaccine 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Strategija cepiva Prime-Boost proti virusnim okužbam: mehanizmi in koristi. Vaccine 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM. Ali bi moral svet nemudoma sodelovati pri razvoju zapostavljenih živih oslabljenih cepiv za COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

32. Čavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. Svet cepiv proti COVID-19: prispevek Indije. Cepiva 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ašraf, M.; Bae, YS COVID-19 Vaccines (Revisited) in Oral-Mucosal Vector System kot potencialna platforma za cepivo. Cepiva 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Cepljenje proti COVID-19: merila v javnem zdravju in prenosu virusa. Javno zdravje 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Čavda, VP; Apostolopoulos, V. Ali strategija poživitvenih odmerkov zadostuje za omikron različico SARS-CoV-2? Cepiva 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Čavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Replikacija cepiv za COVID na osnovi virusnih vektorjev-19: potencialna avenija v areni cepljenja. Virusi 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Čavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID{1}} Oblikovanje cepiva in strategija cepljenja za nastajajoče različice. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

38. Čavda, VP; Vuppu, S.; Mišra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Nedavni pregled obvladovanja bolezni COVID-19: diagnoza, zdravljenje in cepljenje. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Čavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 in cepljenje: miti proti znanosti. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Čavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Delta in Omicron različici SARS-CoV-2: kar vemo do zdaj. Cepiva 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. DNA cepiva: razvoj novih strategij proti raku. J. Biomed. Biotehnologija. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Pesem, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; et al. Sočasna imunizacija s cepivi CHIKV VLP in DNA povzroči obetaven humoralni odziv pri miših. Spredaj. Immunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Varnost in primerjalna imunogenost cepiva HIV-1 DNA v kombinaciji s plazmidnim interlevkinom 12 in vpliv intramuskularne elektroporacije na dostavo. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Čavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Dostavni sistemi za cepiva na osnovi nanodelcev. Cepiva 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. MRNA cepiva: preteklost, sedanjost, prihodnost. Asian J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Zapletena zgodovina cepiv MRNA. Narava 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. nedefinirano In vivo uporaba RNA vodi do indukcije specifičnih citotoksičnih limfocitov T in protiteles. EUR. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

48. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; et al. Z lipidi inkapsulirana MRNA, ki kodira močno nevtralizirajoče človeško monoklonsko protitelo, ščiti pred okužbo s Chikungunya. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutika na osnovi MRNA - razvoj novega razreda zdravil. Nat. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Imunski odziv celic T proti SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modifikacije v nujnih primerih: Vloga N1-metilpsevdouridina v cepivih proti COVID-19. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; et al. Učinkovitost in varnost kandidata za cepivo CVnCoV SARS-CoV-2 MRNA v desetih državah v Evropi in Latinski Ameriki (HERALD): randomizirano, s opazovalcem slepo, s placebom nadzorovano preskušanje faze 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ Posodobitev o razvoju samoojačevalnega cepiva MRNA. Cepiva 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Novi upi v tehnologiji cepiv: mRNA cepiva. Microbiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Obljuba cepiv MRNA: biotehnološka in industrijska perspektiva. Cepiva Npj 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Samoojačevalna RNA cepiva za nalezljive bolezni. Gene. Ther. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Načela za načrtovanje optimalnega cepiva z lipidnimi nanodelci MRNA. Curr. Opin. Biotehnologija. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Doboš, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In vitro evolucija izboljšanih replikonov RNA za imunoterapijo. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Prilagajanje MRNA cepiva za uravnoteženje prirojenega/prilagodljivega imunskega odziva. Trendi Mol. med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Sample, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnjak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Biotehnologija. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, TV Zaviranje prevajanja s strani članov družine IFIT je določeno z njihovo sposobnostjo selektivne interakcije s 50 -terminalnimi regijami Cap0-, Cap1-in 50 Ppp-MRNA. Nucleic Acids Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Gržela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; et al. Cap analogi, modificirani z 1,2-ditiodifosfatnim delom, ščitijo MRNA pred dekapiranjem in povečajo njen translacijski potencial. Nucleic Acids Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; et al. Analogi kapice MRNA, zamenjani v tetrafosfatni verigi s CX2: Identifikacija O-to-CCl2 kot prve premostitvene modifikacije, ki zagotavlja odpornost proti dekapingu brez poslabšanja prevoda. Nucleic Acids Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Zgodbe o podrobnih poli (A) repih. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. Organizacijska načela zaposlovanja evkariontskih ribosomov. Annu. Rev. Chem. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. Glasnikovo veliko sporočilo za cepljenje. Expert Rev. Vaccines 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC Proizvodnja cepiv MRNA: izzivi in ​​ozka grla. Cepivo 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: Poceni biofarmacevtik. J. Multidiscip. inž. Sci. Technol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Roman, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. Pokrajina razvoja cepiva proti COVID{1}}. Nat. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA kot transformativna tehnologija za razvoj cepiv za nadzor nalezljivih bolezni. Mol. Ther. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]